專利名稱：結(jié)合人白介素-18的抗體及制備和使用方法
結(jié)合人白介素-18的抗體及制備和使用方法本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮椤?1807735. 8”，發(fā)明名稱為“結(jié)合人白介素-18的抗體及制備和使用方法”的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求于2000年2月10日申請(qǐng)的、題目是“結(jié)合人白介素-18的抗體及制備和使用方法”的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)順序號(hào)60/181，608的非臨時(shí)專利申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)，該專利申請(qǐng)的內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。另外，整個(gè)本申請(qǐng)引用的包括參考文獻(xiàn)、授予的專利和公布的專利申請(qǐng)的所有引用參考文獻(xiàn)的內(nèi)容均通過引用結(jié)合到本文中。
背景技術(shù)：
白介素-18(IL-18)最早于1989年被描述為干擾素-γ誘導(dǎo)因子(IGIF)，它是除了能夠誘導(dǎo)干擾素Y外還具有各種功能的促炎細(xì)胞因子。這些生物學(xué)特性包括激活 NF-Kb, Fas配體表達(dá)、誘導(dǎo)CC趨化因子和CXC趨化因子以及增加產(chǎn)生感受態(tài)人免疫缺陷病毒。由于IL-18能夠誘導(dǎo)T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生干擾素Y，因此它在Thl型免疫應(yīng)答中起重要作用且參與先天性免疫和獲得性免疫。IL-18在結(jié)構(gòu)和功能上與IL-I家族有關(guān)。有關(guān)IL-18結(jié)構(gòu)、功能和生物活性的綜述，參見例如Dinarell0，C.等(1998) J. Leukoc. Biol. 63 :658-654 ；Dinarello, C. A. (1999)Methodsl^ :121-132 和 Dinarello, C. A. (1999) J. Allergy Clin. Immunol. 103 :11_24。特別需要調(diào)節(jié)各種各樣的人免疫應(yīng)答中的IL-18。具體來說，與IL-18結(jié)合并中和IL-18的抗體是特別理想的。此外，由于存在小鼠抗體給予人體的相關(guān)問題，例如血清半壽期短、不能觸發(fā)某些人類效應(yīng)子功能并且在人體內(nèi)誘發(fā)針對(duì)小鼠抗體不需要的免疫應(yīng)答 (“人抗小鼠抗體”(HAMA)反應(yīng))，因此小鼠IL-18抗體的體內(nèi)應(yīng)用受到限制。一般而言，嘗試克服與將完全小鼠抗體用于人類相關(guān)的問題，已經(jīng)涉及對(duì)所述抗體進(jìn)行基因工程改造以使其更“人樣化(human-like)”。例如，已經(jīng)制備出這樣的嵌合抗體其中所述抗體鏈的可變區(qū)來源于小鼠，而所述抗體鏈的恒定區(qū)來源于人(Junghans等 (1990)Cancer Res. 50 1495-1502 ；Brown 等(1991)Proc. Natl. Acad. Sci. 88 :2663-2667 ； Kettleborough 等(1991)Protein Engineering. 4 :773-783)。然而，因?yàn)檫@些嵌合人源化抗體仍保留某些小鼠序列，所以它們?nèi)钥赡苷T發(fā)不需要的免疫反應(yīng)、人抗嵌合抗體(HAMA) 反應(yīng)，當(dāng)長(zhǎng)期給予時(shí)情況尤其如此。針對(duì)小鼠抗體或其衍生物(例如嵌合抗體或人源化抗體)的優(yōu)選IL-18抑制劑將完全是人抗IL-18抗體，由于這樣的藥物不會(huì)誘發(fā)HAMA反應(yīng)，因此即使長(zhǎng)期應(yīng)用也不會(huì)誘發(fā)HAMA反應(yīng)。然而，這樣的抗體本領(lǐng)域尚未見介紹，因此仍然需要這樣的抗體。發(fā)明概述本發(fā)明涉及結(jié)合人IL-18的諸如抗體的化合物以及制備和應(yīng)用這類化合物或抗體的方法。一方面，本發(fā)明涉及能夠結(jié)合人IL-18氨基酸序列或其部分的化合物，其中所述氨基酸包含SEQ ID NO 70或SEQ ID NO 71提供的人IL-18的N末端部分或C末端部分。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物是一種小分子、肽、多肽、抗體或抗體片段，例如完全人抗體或片段。另一方面，本發(fā)明涉及能夠與人IL-18結(jié)合的人單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分。 在其它實(shí)施方案，根據(jù)表面等離子體共振(surface plasmon resonance)測(cè)定，所述抗體或其片段與人IL-18解離的koff速率常數(shù)為0. Is-I或以下、lxlOE-2s-l或以下、lxlOE-3s-l 或以下、lxlOE-4s-l或以下、lxlOE-5s-l或以下、lxlOE-6s_l或以下；或者抑制人IL-18活性的IC50為1χ10Ε-6或以下、1χ10Ε-7或以下、lxlOE-8或以下、lxlOE-9或以下、IxlOE-IO 或以下、或IxlOE-Il或以下。另一方面，本發(fā)明涉及這樣的分離抗體或其抗原結(jié)合部分它結(jié)合包含氨基酸 PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO 1) ,VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO :33)或二者任何一個(gè)的一部分的人IL-18表位。所述抗體最好是中和抗體。所述抗體最好是人抗體。在各種實(shí)施方案中，所述抗體是重組抗體(例如單鏈抗體(scFv))或單克隆抗體。在其它實(shí)施方案中，所述分離抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18表位或二者任何一個(gè)的一部分結(jié)合，其中根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定，所述抗體或其抗原結(jié)合部分與人 IL-18解離的k。ff速率常數(shù)為0. Is"1或以下；或者其抑制人IL-18活性的IC5tl為IxKTfiM或以下?；蛘?，根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定，所述抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18解離的 k。ff速率常數(shù)為Ix IO-2S-1或以下；或者抑制人IL-18活性的IC5tl為1χ1(ΓΜ或以下?；蛘撸?根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定，所述抗體或其抗原結(jié)合部分可以與人IL-18解離，其k。ff速率常數(shù)為IxKT3iT1或以下；或者可以抑制人IL-18活性，其IC5tl為1x10_8M或以下?；蛘撸鶕?jù)表面等離子體共振測(cè)定，所述抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18解離的k。ff速率常數(shù)為 IxlO-4S-1或以下；或者抑制人IL-18活性的IC5tl為IxKTi3M或以下?；蛘?，根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定，所述抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18解離的k。ff速率常數(shù)為IxlO-5S-1或以下；或者抑制人IL-18活性的IC5tl為IxlO-ltlM或以下?；蛘?，根據(jù)表面等離子體共振測(cè)定， 所述抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18解離的k。ff速率常數(shù)為IxlO-6S-1或以下；或者抑制人IL-18活性的IC50為IxlO-11M或以下。本發(fā)明的另一方面涉及含有能夠結(jié)合IL-18表位的至少一個(gè)可變區(qū)⑶R結(jié)構(gòu)域的分離的人抗體或其抗原結(jié)合部分。在相關(guān)實(shí)施方案中，所述分離抗體或其抗原結(jié)合部分的可變區(qū)含有如表6或表9所示的重鏈和/或輕鏈⑶Rl結(jié)構(gòu)域、⑶R2結(jié)構(gòu)域或⑶R3結(jié)構(gòu)域， 所述結(jié)構(gòu)域可以在表7-8和表10-11中所示的任一 Kabat位置上或鄰近所述位置具有例如一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代或插入。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述分離抗體或其抗原結(jié)合部分含有一個(gè)含氨基酸序列SEQ ID NO 29的輕鏈可變區(qū)(LCVR)和一個(gè)含氨基酸序列SEQ ID N0:26的重鏈可變區(qū)(HCVR)。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述分離抗體或其抗原結(jié)合部分含有一個(gè)具有氨基酸序列SEQ ID NO 29的輕鏈可變區(qū)(LCVR)和一個(gè)具有氨基酸序列SEQ ID NO 27的重鏈可變區(qū)(HCVR)。本發(fā)明的另一方面涉及包含本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分和藥學(xué)上可接受的載體的藥用組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥用組合物還包含至少一種另外的治療其中 IL-18活性是有害的疾病的治療藥物。本發(fā)明的另一方面涉及制備結(jié)合人白介素-18(IL_18)的抗體的方法。本發(fā)明提供的方法包括將抗體庫(kù)(antibody repertoire)暴露于包含含氨基酸PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO : 1)、VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO :33)或二者任何一個(gè)的一部分的人IL-18表位的抗原；并且從所述抗體庫(kù)選擇結(jié)合包含氨基酸PLFEDMTDSDCRDNA(SEQ ID NO :1)、VIRNLNDQVLFIDQ(SEQ ID NO :33)或者二者任何一個(gè)的一部分的人IL-18表位的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體庫(kù)是動(dòng)物體內(nèi)的體內(nèi)抗體庫(kù)，所述方法包括用包含以下組分的抗原免疫所述動(dòng)物包含氨基酸PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO :1)、 VIRNLNDQVLFIDQ(SEQ ID NO :33)的人IL-18表位、人IL-18的N末端部分或C末端部分(SEQ ID NO 70-71)或這些表位中任一表位的一部分。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗體庫(kù)是重組抗體文庫(kù)，所述方法包括用含有以下組分的抗原篩選所述文庫(kù)具有氨基酸 PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO 1)、VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO :33)的人 IL-18 表位、SEQ ID NO :31-32和SEQ ID NO :34-60表示的肽或任一前述組分的一部分。所述文庫(kù)最好是人抗體文庫(kù)。另一方面，本發(fā)明提供編碼任一上述方面的抗體(例如重鏈和/或輕鏈可變區(qū)) 或其部分的分離核酸。在相關(guān)實(shí)施方案中，所述編碼抗IL-18抗體或其部分的分離核酸位于重組表達(dá)載體中，例如在宿主細(xì)胞中表達(dá)。因此，另一方面，本發(fā)明涉及采用已經(jīng)導(dǎo)入所述重組表達(dá)載體中的前述宿主細(xì)胞合成結(jié)合人IL-18的抗體的方法，所述方法包括在培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述宿主細(xì)胞直到所述細(xì)胞合成結(jié)合人IL-18的抗體。本發(fā)明的另一方面涉及抑制人IL-18活性的方法，所述方法包括將人IL-18與本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分接觸，使得人IL-18活性被抑制。本發(fā)明的再一方面涉及抑制罹患其中人IL-18活性是有害的疾病的病人體內(nèi)的人IL-18活性的方法，所述方法包括給予所述病人本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分，使得所述病人體內(nèi)的人IL-18活性被抑制。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以例如在給予另外的藥物之前、同時(shí)或之后，給予所述抗IL-18抗體，所述另外的藥物例如抗IL-12抗體或其抗原結(jié)合片段、氨甲蝶呤、抗TNF抗體或其抗原結(jié)合片段、皮質(zhì)類固醇、環(huán)孢菌素、雷帕霉素、Π(506或非甾體消炎藥。附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示與IL-I β (左)和ILlRA(右)相比的IL_18(中間)的結(jié)構(gòu)模型。圖2顯示與IL-18受體復(fù)合的IL-18的結(jié)構(gòu)模型，其中IL-18的包含氨基酸 PLFEDMTDSDCRDNA (SEQ ID NO 1)的肽表位以深灰色表示。該肽表位被抗IL-18抗體2E1結(jié)
口 O圖3顯示與IL-18受體復(fù)合的IL-18的結(jié)構(gòu)模型，其中IL-18的包含氨基酸 VIRNLNDQVLFIDQ (SEQ ID NO 33)的肽表位以深灰色表示。該肽表位被抗IL-18抗體
纟口口。圖4顯示與IL-18受體復(fù)合的全長(zhǎng)IL-18的結(jié)構(gòu)模型。球形淺灰色和深灰色表位代表IL-18的N末端和C末端接觸表位(分別為SEQID NO :70和71)。圖5顯示三種不同的抗IL-18抗體中和IL-18的生物效應(yīng)的效價(jià)與抑制KGl細(xì)胞內(nèi)IFN-Y誘導(dǎo)作用的關(guān)系?？贵w125H(方框)和2ElIgG抗體(圓形)或2E1單鏈抗體 (三角形)的 IC50 值分別為 2. 1E-10、9· 0E-10 和 3. 3E-9。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及選擇能夠?qū)L-18介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)產(chǎn)生中和作用的抗體的肽表位、制備抗這些表位的抗體以及這些抗體的應(yīng)用，包括用來治療涉及IL-18的疾病。選擇表位的策略必須構(gòu)建IL-18蛋白及其相應(yīng)的受體的同源性模型。然后組合應(yīng)用目測(cè)和計(jì)算估計(jì)選擇用于合成和抗體產(chǎn)生的代表性肽區(qū)段。本文所示的氨基酸序列運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)單字母縮寫代碼。IL-18表位的詵擇運(yùn)用程序Modeler (Sali, Α.等，通過MODELLER評(píng)價(jià)比較性蛋白質(zhì)建模 (Evaluation of comparative protein modeling by MODELLER)。Proteins :Struct., Funct.，Genet. (1995)，23(3)，第 318-26 頁(yè)。CODEN =PSFGE Y ；ISSN :0887-3585)產(chǎn)生用于IL-18和IL-18受體兩者的同源性模型。IL-I β (Priestle, J.等，人白介素 的三維結(jié)構(gòu)精確到 2. 0. ANG.分辨率(The three-dimensional structure of human interleukin-1. beta, refined to 2. 0. ANG. resolution)。Prog. Cl in. Biol. Res. (1990) ,349 (Cytokines Lipocortins Inflammation Differ.),第 297—307 頁(yè))禾口 IL-IRA(Schreuder, H.等，白介素_1受體拮抗劑的精細(xì)晶體結(jié)構(gòu)二硫鍵和順式脯氨酸的存在(Refined crystal structure of the interleukin-1 receptor antagonist presence of a disulfide link and a cis_proline)。 Eur.J. Biochem. (1995),227(3), 第838-47頁(yè))的X射線晶體結(jié)構(gòu)是可得到的并且用作IL-18模型構(gòu)建的參考坐標(biāo)。應(yīng)用 IL-I受體結(jié)構(gòu)(Viger，G.等，與白介素_1 β復(fù)合的I型白介素_1受體的晶體結(jié)構(gòu)(Crystal structure of the type-1 interleukin-l-receptor complexed with interleukin-1. beta)。Nature (London) (1997)，386 (6621)，第 190-194 頁(yè))對(duì) IL-18 受體建模。下文進(jìn)一步描述IL-18和IL-18受體的結(jié)構(gòu)模型建立。IL-18模型建立與所述兩種蛋白質(zhì)(即IL-I β和IL-18)的總體序列同源性低，然而，令人信服的證據(jù)是IL-18是IL-I家族成員(參見Dinarello，C. A. IL-18 一種THl誘導(dǎo)型促炎細(xì)胞因子及 IL-I 家方矣新成員(IL-18 :aTHl-inducing, proinflammatory cytokine and new member of the IL-lfamily)。J.Allergy Clin. Immunol. (1999),103 (1, Pt.1),第 11- 頁(yè))，并且總體蛋白質(zhì)折疊非常相似。和IL-Ιβ —樣，IL-18最初以前體形式分泌出來。前體 IL-I β (pro-IL-1 β )和前體 IL-18 (pro_IL_18)兩者均被 IL-I β 轉(zhuǎn)化酶(ICE) 激活(Fantuzzi, G.和 Dinarello，C. Α.白介素-18 和白介素-1 β :ICE(caspase-1)的兩種細(xì)胞因子底物(Interleukin-18 and Interleukin-1 β -.two cytokine substrates for ICE (caspase-1))。J. Clin. Immunol. (1999)，19 (1)，第 1-11 頁(yè))。還知道 IL-1 受體和IL-18受體相似(Dinarello，C. Α.等，白介素-18的綜述不止是一種干擾素、誘導(dǎo)因子(Overview of interleukin-18 :more than an interferon- y inducing factor)。 J. Leukocyte Biol. (1998)，63 (6)，658-664)。IL-I β 能夠與 IL-18 受體結(jié)合。雖然這兩種蛋白質(zhì)間的總體序列同源性和IL-18的序列同源性相同，但是作為最終論證，IL-I β和 IL-IRA顯示出相同的折疊。對(duì)這三種蛋白質(zhì)(即IL-18、IL-li3和IL1-RA)間的序列比對(duì)運(yùn)用程序hsightll人工進(jìn)行。該序列比對(duì)可以參見表1 表1 JL-18與IL-I β和IL-IRA的序列比對(duì)
1權(quán)利要求
1.一種能夠結(jié)合人IL-18氨基酸序列或其部分的化合物，其中所述氨基酸包含選自 SEQ ID NO 67 和 SEQ ID NO 68 的序列。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物選自小分子、肽、多肽、抗體和抗體片段。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中所述抗體或抗體片段是完全人抗體或抗體片段。
4.一種人單克隆抗體或其抗原結(jié)合部分，它能夠與人IL-18結(jié)合。
5.權(quán)利要求4的抗體，其中根據(jù)表面胞質(zhì)團(tuán)共振測(cè)定，所述抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18解離的k。ff速率常數(shù)為0. Is"1或0. Is"1以下；或者它抑制人IL-18活性的IC5tl為 IxKT6M 或 IxKT6M 以下。
6.權(quán)利要求4的抗體，其中根據(jù)表面胞質(zhì)團(tuán)共振測(cè)定，所述抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18解離的k。ff速率常數(shù)為IxKT2iT1或IxKT2iT1以下；或者它抑制人IL-18活性的IC5tl 為 1χ1(ΓΜ 或 IxKT7M 以下。
7.權(quán)利要求4的抗體，其中根據(jù)表面胞質(zhì)團(tuán)共振測(cè)定，所述抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18解離的k。ff速率常數(shù)為IxKT3iT1或lxlO、—1以下；或者它抑制人IL-18活性的IC5tl 為 IxKT8M 或 IxKT8M 以下。
8.權(quán)利要求4的抗體，其中根據(jù)表面胞質(zhì)團(tuán)共振測(cè)定，所述抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18解離的k。ff速率常數(shù)為IxKT4iT1或lxlO、—1以下；或者它抑制人IL-18活性的IC5tl 為 IxKT9M 或 IxKT9M 以下。
9.權(quán)利要求4的抗體，其中根據(jù)表面胞質(zhì)團(tuán)共振測(cè)定，所述抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18解離的k。ff速率常數(shù)為IxKT5iT1或lxlO、—1以下；或者它抑制人IL-18活性的IC5tl 為 IxlO-iciM 或 ΙχΙΟ,Μ 以下。
10.權(quán)利要求4的抗體，其中根據(jù)表面胞質(zhì)團(tuán)共振測(cè)定，所述抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18解離的k。ff速率常數(shù)為IxKTfV1或IxKTfV1以下；或者它抑制人IL-18活性的IC5tl 為 IxKT11M 或 IxKT11M 以下。
11.一種分離抗體或其抗原結(jié)合部分，它結(jié)合包含選自SEQ ID NO :3和SEQ ID NO 33 的氨基酸序列的人IL-18表位或其部分。
12.權(quán)利要求11的抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述抗體是中和抗體。
13.權(quán)利要求11的抗體或其抗原結(jié)合部分，所述抗體是人抗體。
14.權(quán)利要求11的抗體或其抗原結(jié)合部分，所述抗體是重組抗體。
15.權(quán)利要求11的抗體或其抗原結(jié)合部分，所述抗體是單克隆抗體。
16.一種與人IL-18表位結(jié)合的分離抗體或其抗原結(jié)合部分，其中根據(jù)表面胞質(zhì)團(tuán)共振測(cè)定，所述分離抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18解離的k。ff速率常數(shù)為0. Is—1或0. Is"1 以下；或者它抑制人IL-18活性的IC50為IxlO-6M或IxlO^M以下。
17.權(quán)利要求16的分離抗體或其抗原結(jié)合部分，其中根據(jù)表面胞質(zhì)團(tuán)共振測(cè)定，所述分離抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18解離的k。ff速率常數(shù)為IxlO-2S-1或Ix ΙΟ、—1以下； 或者它抑制人IL-18活性的IC50為IxlO-7M或IxlO-7M以下。
18.權(quán)利要求16的分離抗體或其抗原結(jié)合部分，其中根據(jù)表面胞質(zhì)團(tuán)共振測(cè)定，所述分離抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18解離的k。ff速率常數(shù)為IxlO-3S-1或IxlO-3S-1以下； 或者它抑制人IL-18活性的IC50為IxlO-8M或IxKT8M以下。
19.權(quán)利要求16的分離抗體或其抗原結(jié)合部分，其中根據(jù)表面胞質(zhì)團(tuán)共振測(cè)定，所述分離抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18解離的k。ff速率常數(shù)為IxlO-4S-1或IxlO-4S-1以下； 或者它抑制人IL-18活性的IC50為IxlO-9M或Ix 1(Γ9Μ以下。
20.權(quán)利要求16的分離抗體或其抗原結(jié)合部分，其中根據(jù)表面胞質(zhì)團(tuán)共振測(cè)定，所述分離抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18解離的k。ff速率常數(shù)為Ix ΙΟ、—1或IxlO-5S-1以下； 或者它抑制人IL-18活性的IC50為IxlO-10M或Ix 1(Γ10Μ以下。
21.權(quán)利要求16的分離抗體或其抗原結(jié)合部分，其中根據(jù)表面胞質(zhì)團(tuán)共振測(cè)定，所述分離抗體或其抗原結(jié)合部分與人IL-18解離的k。ff速率常數(shù)為Ix IO-fV1或IxlO-6S-1以下； 或者它抑制人IL-18活性的IC50為IxlO-11M或Ix KT11M以下。
22.—種分離的人抗體或其抗原結(jié)合部分，所述抗體包含能夠結(jié)合人IL-18表位的至少一個(gè)可變區(qū)CDR結(jié)構(gòu)域。
23.權(quán)利要求22的分離抗體或其抗原結(jié)合部分，其中與未修飾抗體或其抗原結(jié)合部分相比，所述抗體或其抗原結(jié)合部分含有至少一個(gè)改進(jìn)結(jié)合IL-18的氨基酸取代或插入。
24.權(quán)利要求22的分離抗體或其抗原結(jié)合部分，其中與未修飾抗體或其抗原結(jié)合部分相比，所述抗體或其抗原結(jié)合部分含有至少一個(gè)改進(jìn)中和IL-18的氨基酸取代或插入。
25.權(quán)利要求22的分離抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述可變區(qū)包含一個(gè)選自以下的 CDR結(jié)構(gòu)域一個(gè)重鏈⑶Rl結(jié)構(gòu)域，它的氨基酸序列為SEQ ID NO :9或因?yàn)橹辽僖粋€(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ ID NO 9序列；一個(gè)重鏈⑶R2結(jié)構(gòu)域，它的氨基酸序列為SEQ ID NO 10或因?yàn)橹辽僖粋€(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ ID NO :10序列；一個(gè)重鏈⑶R3結(jié)構(gòu)域，它的氨基酸序列為SEQ ID NO 11或因?yàn)橹辽僖粋€(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ ID NO 11序列。
26.權(quán)利要求25的分離抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述可變區(qū)包含一個(gè)選自以下的 CDR結(jié)構(gòu)域一個(gè)重鏈⑶Rl結(jié)構(gòu)域，在位置H30、H31、H32、H33或H35上至少一個(gè)氨基酸取代而修飾的 SEQ ID NO 9 ；一個(gè)重鏈CDR2結(jié)構(gòu)域，在位置Η52、Η5^ι、Η53、!Β4、Η56或H58上至少一個(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ ID NO 10 ；一個(gè)重鏈⑶R3結(jié)構(gòu)域，在位置H95、H96、H97或H98上至少一個(gè)氨基酸取代而修飾的 SEQ ID NO :11。
27.權(quán)利要求22的分離抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述可變區(qū)包含一個(gè)選自以下的 CDR結(jié)構(gòu)域一個(gè)輕鏈⑶Rl結(jié)構(gòu)域，它的氨基酸序列為SEQ ID NO 12或因?yàn)橹辽僖粋€(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ ID NO 12序列；一個(gè)輕鏈⑶R2結(jié)構(gòu)域，它的氨基酸序列為SEQ ID NO 13或因?yàn)橹辽僖粋€(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ ID NO :13序列；一個(gè)輕鏈⑶R3結(jié)構(gòu)域，它的氨基酸序列為SEQ ID NO 14或因?yàn)橹辽僖粋€(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ ID NO 14序列。
28.權(quán)利要求27的分離抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述可變區(qū)包含一個(gè)選自以下的CDR結(jié)構(gòu)域一個(gè)輕鏈⑶Rl結(jié)構(gòu)域，在位置L30、L31、L32或L34上至少一個(gè)氨基酸取代而修飾的 SEQ ID NO 12 ；一個(gè)輕鏈⑶R2結(jié)構(gòu)域，在位置L50、L52、L53或L55上至少一個(gè)氨基酸取代而修飾的 SEQ ID NO 13 ；一個(gè)輕鏈 CDR3 結(jié)構(gòu)域，在位置 L89、L90、L91、L92、L93、L94、L95、L95a、L%b、L96 或 L97上至少一個(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ ID NO :14。
29.一種分離抗體或其抗原結(jié)合部分，所述抗體具有一個(gè)包含選自SEQ ID NO 15, SEQ ID NO 16和SEQ ID NO 17的氨基酸序列的可變區(qū)。
30.一種分離抗體或其抗原結(jié)合部分，所述抗體具有一個(gè)包含氨基酸序列SEQ ID NO 15的輕鏈可變區(qū)(LCVR)和一個(gè)包含氨基酸序列SEQ ID NO 16的重鏈可變區(qū)(HCVR)。
31.一種分離抗體或其抗原結(jié)合部分，所述抗體含有一個(gè)具有氨基酸序列SEQ ID NO 15的輕鏈可變區(qū)(LCVR)和一個(gè)具有氨基酸序列SEQ ID NO 17的重鏈可變區(qū)(HCVR)。
32.權(quán)利要求22的分離抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述可變區(qū)包含一個(gè)選自以下的 CDR結(jié)構(gòu)域一個(gè)重鏈⑶Rl結(jié)構(gòu)域，它的氨基酸序列為SEQ ID NO 20或因?yàn)橹辽僖粋€(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ ID NO 20序列；一個(gè)重鏈⑶R2結(jié)構(gòu)域，它的氨基酸序列為SEQ ID NO 21或因?yàn)橹辽僖粋€(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ ID NO 21序列；一個(gè)重鏈⑶R3結(jié)構(gòu)域，它的氨基酸序列為SEQ ID NO :22或因?yàn)橹辽僖粋€(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ ID NO 22序列。
33.權(quán)利要求32的分離抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述可變區(qū)包含一個(gè)選自以下的 CDR結(jié)構(gòu)域一個(gè)重鏈⑶Rl結(jié)構(gòu)域，在位置H30、H31、H32、H33或H35上至少一個(gè)氨基酸取代而修飾的 SEQ ID NO 20 ；一個(gè)重鏈CDR2結(jié)構(gòu)域，在位置Η50、Η51、Η52、Η5^ι、Η53、Η54、Η56或H58上至少一個(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ ID NO 21 ；一個(gè)重鏈 CDR3 結(jié)構(gòu)域，在位置 H96、H96、H97、H98、H99、H100、HlOOa, HlOl 或 H102 上至少一個(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ IDNO :22ο
34.權(quán)利要求32的分離抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述可變區(qū)包含一個(gè)選自以下的 CDR結(jié)構(gòu)域一個(gè)輕鏈⑶Rl結(jié)構(gòu)域，它的氨基酸序列為SEQ ID NO 23或因?yàn)橹辽僖粋€(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ ID NO 23序列；一個(gè)輕鏈⑶R2結(jié)構(gòu)域，它的氨基酸序列為SEQ ID NO 24或因?yàn)橹辽僖粋€(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ ID NO 24序列；一個(gè)輕鏈⑶R3結(jié)構(gòu)域，它的氨基酸序列為SEQ ID NO 25或因?yàn)橹辽僖粋€(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ ID NO 25序列。
35.權(quán)利要求34的分離抗體或其抗原結(jié)合部分，其中所述可變區(qū)包含一個(gè)選自以下的 CDR結(jié)構(gòu)域一個(gè)輕鏈⑶Rl結(jié)構(gòu)域，在位置L30、L31、L32或L34上至少一個(gè)氨基酸取代而修飾的 SEQ ID NO 23 ；一個(gè)輕鏈⑶R2結(jié)構(gòu)域，在位置L50、L52、L53或L55上至少一個(gè)氨基酸取代而修飾的 SEQ ID NO 24 ；一個(gè)輕鏈 CDR3 結(jié)構(gòu)域，在位置 L89、L90、L91、L92、L93、L94、L95、L95a、L95b, L96 或 L97上至少一個(gè)氨基酸取代而修飾的SEQ ID NO :25。
36.一種分離抗體或其抗原結(jié)合部分，所述抗體具有一個(gè)包含選自SEQ ID NO 26, SEQ ID NO 27和SEQ ID NO 29的氨基酸的可變區(qū)。
37.一種分離抗體或其抗原結(jié)合部分，所述抗體含有一個(gè)包含氨基酸序列SEQ ID NO 29的輕鏈可變區(qū)(LCVR)和一個(gè)包含氨基酸序列SEQ ID NO 26的重鏈可變區(qū)(HCVR)。
38.一種分離抗體或其抗原結(jié)合部分，所述抗體含有一個(gè)具有氨基酸序列SEQ ID NO 29的輕鏈可變區(qū)(LCVR)和一個(gè)具有氨基酸序列SEQ ID NO ,21的重鏈可變區(qū)(HCVR)。
39.一種分離的核酸，所述核酸編碼權(quán)利要求4-38中任一項(xiàng)的抗體CDR的氨基酸序列。
40.權(quán)利要求39的分離核酸，所述核酸位于重組表達(dá)載體內(nèi)。
41.一種宿主細(xì)胞，所述宿主細(xì)胞內(nèi)已經(jīng)導(dǎo)入了權(quán)利要求40的重組表達(dá)載體。
42.一種合成結(jié)合人IL-18的抗體的方法，所述方法包括在培養(yǎng)基中培養(yǎng)權(quán)利要求41 的宿主細(xì)胞，直到所述細(xì)胞合成結(jié)合人IL-18的抗體為止。
43.權(quán)利要求42的方法，其中所述抗體是人抗體。
44.一種藥用組合物，所述組合物包含權(quán)利要求4-38中任一項(xiàng)的抗體或其抗原結(jié)合部分和藥學(xué)上可接受的載體。
45.權(quán)利要求44的藥用組合物，所述組合物還包含至少一種另外的治療藥物，所述治療藥物用于治療其中IL-18活性是有害的疾病。
46.權(quán)利要求45的藥用組合物，所述另外的藥物選自能夠結(jié)合人IL-12的抗體或其片段、氨甲蝶呤、抗TNF、皮質(zhì)類固醇、環(huán)孢菌素、雷帕霉素、Π(506或非留體消炎藥。
47.一種制備結(jié)合人白介素-18(IL-18)的抗體的方法，所述方法包括將一種抗體庫(kù)暴露于包含人IL-18表位或其部分的抗原；從所述抗體庫(kù)選擇結(jié)合人IL-18表位或其部分的抗體。
48.權(quán)利要求47的方法，其中所述抗體庫(kù)是動(dòng)物體內(nèi)抗體庫(kù)，所述方法包括用包含人 IL-18表位或其部分的抗原免疫所述動(dòng)物。
49.權(quán)利要求46或47的方法，其中所述表位包含選自SEQID NO 3和SEQ ID NO 33 的氨基酸序列。
50.權(quán)利要求47的方法，其中所述體內(nèi)抗體庫(kù)是整合入所述動(dòng)物基因組中的完全人免疫球蛋白庫(kù)。
51.權(quán)利要求47的方法，其中所述抗體庫(kù)是重組抗體文庫(kù)，所述方法包括用包含人 IL-18表位或其部分的抗原篩選所述文庫(kù)。
52.權(quán)利要求47的方法，其中所述文庫(kù)是人抗體文庫(kù)。
53.一種抑制人IL-18活性的方法，所述方法包括將人IL-18與權(quán)利要求1的化合物接觸，使得人IL-18活性被抑制。
54.一種抑制人IL-18活性的方法，所述方法包括將人IL-18與權(quán)利要求4_38中任一項(xiàng)的抗體或其抗原結(jié)合部分接觸，使得人IL-18活性被抑制。
55.一種抑制罹患其中IL-18活性是有害的疾病的病人體內(nèi)的人IL-18活性的方法，所述方法包括給予所述病人權(quán)利要求1的化合物，使得所述病人體內(nèi)的人IL-18活性被抑制。
56.一種抑制罹患其中IL-18活性是有害的疾病的病人體內(nèi)的人IL-18活性的方法，所述方法包括給予所述病人權(quán)利要求4-38中任一項(xiàng)的抗體或其抗原結(jié)合部分，使得所述病人體內(nèi)的人IL-18活性被抑制。
57.一種治療罹患其中IL-18活性是有害的疾病的病人的方法，所述方法給予權(quán)利要求1的化合物，以便實(shí)現(xiàn)治療。
58.一種治療罹患其中IL-18活性是有害的疾病的病人的方法，所述方法給予權(quán)利要求4-38中任一項(xiàng)的抗體，以便實(shí)現(xiàn)治療。
59.權(quán)利要求57或58的方法，其中所述疾病選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、青少年慢性關(guān)節(jié)炎、萊姆關(guān)節(jié)炎、牛皮癬性關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、脊椎關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、節(jié)段性回腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、炎性腸病、胰島素依賴性糖尿病、甲狀腺炎、哮喘、變應(yīng)性疾病、 牛皮癬、皮炎性硬皮病、移植物抗宿主病、器官移植排斥、與器官移植有關(guān)的急性或慢性免疫性疾病、肉樣瘤病、動(dòng)脈粥樣硬化、播散性血管內(nèi)凝血、川崎病(Kawasaki's disease)、格雷夫斯病(Graves's disease)、腎病綜合征、慢性疲勞綜合征、韋格納肉芽腫病(Wegener's granulomatosis)、亨諾赫 _ 舍恩萊因紫癜(Henoch-Schoenlein purpurea)、顯微鏡可見的腎脈管炎、慢性活動(dòng)性肝炎、眼色素層炎、膿毒性休克、中毒性休克綜合征、膿毒病綜合征、惡病質(zhì)、感染性疾病、寄生蟲病、獲得性免疫缺陷綜合征、急性橫貫性脊髓炎、亨廷頓舞蹈病、帕金森氏病、早老性癡呆、中風(fēng)、原發(fā)性膽汁性肝硬化、溶血性貧血、惡性腫瘤、心力衰蝎、心肌硬塞、艾迪生病(Addison's disease)、I型散發(fā)性多腺體缺陷和II型多腺體缺陷、 施密特綜合征(khmidt’ s syndrome)、成人(急性)呼吸窘迫綜合征、脫發(fā)、斑形脫發(fā)、血清反應(yīng)陰性關(guān)節(jié)病、關(guān)節(jié)病、賴特病(Reiter’ s disease)、牛皮癬性關(guān)節(jié)病、潰瘍性結(jié)腸炎性關(guān)節(jié)病、腸病性滑膜炎、衣原體、耶爾森氏菌和沙門氏菌相關(guān)性關(guān)節(jié)病、脊椎關(guān)節(jié)病、動(dòng)脈粥樣硬化病/動(dòng)脈硬化、特應(yīng)性變態(tài)反應(yīng)、自身免疫性大皰病、尋常天皰瘡、落葉狀天皰瘡、 類天皰瘡、線性IgA病、自身免疫性溶血性貧血、庫(kù)姆斯(Coombs)陽性溶血性貧血、獲得性惡性貧血、青少年惡性貧血、肌痛性腦炎/Royal Free病、慢性粘膜皮膚念珠菌病、巨細(xì)胞性動(dòng)脈炎、原發(fā)性硬化性肝炎、隱原性自身免疫性肝炎、獲得性免疫缺陷病綜合征、獲得性免疫缺陷相關(guān)疾病、丙型肝炎、常見變異型免疫缺陷(常見可變型低丙種球蛋白血癥)、擴(kuò)張性心肌病、女性不育癥、卵巢功能衰竭、成熟前卵巢功能衰竭、纖維化肺病、隱原性纖維化肺泡炎、炎癥后間質(zhì)性肺病、間質(zhì)性肺炎、結(jié)締組織病相關(guān)性間質(zhì)性肺病、混合型結(jié)締組織病相關(guān)性間質(zhì)性肺病、全身性硬化相關(guān)性間質(zhì)性肺病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎相關(guān)性間質(zhì)性肺病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡相關(guān)性肺病、皮肌炎/多肌炎相關(guān)性肺病、斯耶格倫病(Sj6gren’s disease) 相關(guān)性肺病、關(guān)節(jié)強(qiáng)硬性脊椎炎相關(guān)性肺病、血管炎性彌漫性肺病、含鐵血黃素沉著病相關(guān)性肺病、藥源性間質(zhì)性肺病、放射性纖維變性、閉塞性支氣管炎、慢性嗜酸細(xì)胞性肺炎、淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)性肺病、感染后間質(zhì)性肺病、痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、自身免疫性肝炎、1型自身免疫性肝炎 (典型自身免疫性或狼瘡樣肝炎)、2型自身免疫性肝炎(抗LKM抗體肝炎)、自身免疫介導(dǎo)的低血糖、B型胰島素抵抗伴隨黑色棘皮癥、甲狀旁腺機(jī)能減退癥、與器官移植有關(guān)的急性免疫性疾病、與器官移植有關(guān)的慢性免疫性疾病、骨關(guān)節(jié)病、原發(fā)性硬化性膽管炎、1型牛皮癬、2型牛皮癬、特發(fā)性白細(xì)胞減少癥、自身免疫性中性白細(xì)胞減少癥、腎病N0S、腎小球腎炎、顯微鏡可見的腎脈管炎、萊姆病、盤狀狼瘡紅斑、男性不育性特發(fā)性或N0S、精子自身免疫、多發(fā)性硬化(所有亞型)、交感性眼炎、結(jié)締組織病繼發(fā)性肺動(dòng)脈高壓、古德帕斯徹綜合征(Goodpasture's syndrome)、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎的肺部表現(xiàn)、急性風(fēng)濕熱、類風(fēng)濕性脊椎炎、斯蒂爾氏病(Still’ s disease)、全身性硬化、斯耶格倫綜合征、Takayasu病/動(dòng)脈炎性、自身免疫性血小板減少、特發(fā)性血小板減少、自身免疫性甲狀腺病、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、甲狀腺腫自身免疫性甲狀腺機(jī)能減退(橋本病)、萎縮性自身免疫性甲狀腺機(jī)能減退、原發(fā)性粘液性水腫、晶狀體性眼色素層炎、原發(fā)性脈管炎、白斑、急性肝病、慢性肝病、變態(tài)反應(yīng)和哮喘、精神障礙(例如抑郁癥和精神分裂癥)以及Th2型和Thl型介導(dǎo)的疾病。
60. 一種治療罹患其中IL-18活性是有害的疾病的患者的方法，所述方法包括在給予第二種藥物之前、同時(shí)或之后，給予抗IL-18抗體的步驟，其中所述第二種藥物選自抗 IL-12抗體或其抗原結(jié)合片段、氨甲蝶呤、抗TNF抗體或其抗原結(jié)合片段、皮質(zhì)類固醇、環(huán)孢菌素、雷帕霉素、Π(506或非甾體消炎藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及結(jié)合人白介素-18的抗體及制備和使用方法。本發(fā)明提供了結(jié)合人白介素-18(hIL-18)的抗體、尤其是結(jié)合人IL-18表位的抗體。所述抗體可以是例如完整的人抗體、重組抗體或單克隆抗體。優(yōu)選抗體對(duì)hIL-18具有高親和力并且在體外和體內(nèi)均中和hIL-18活性。本發(fā)明的抗體可以全長(zhǎng)抗體或其抗原結(jié)合部分。本發(fā)明也提供本發(fā)明抗體的制備方法和應(yīng)用方法。本發(fā)明的抗體或抗體部分可用來檢測(cè)hIL-18和可用來抑制hIL-18活性，例如抑制罹患其中hIL-18活性是有害的疾病的病人體內(nèi)的hIL-18活性。
文檔編號(hào)A61P25/14GK102504024SQ20111031153
公開日2012年6月20日 申請(qǐng)日期2001年2月9日 優(yōu)先權(quán)日2000年2月10日
發(fā)明者A·R·敦坎, B·拉布科夫斯基, C·P·索爾羅克, J·E·湯普森, J·曼科維奇, J·薩菲爾德, M·懷特, M·羅古斯卡, R·W·迪克松, S·M·布洛克勒胡爾斯特, S·N·倫納德, T·哈于爾 申請(qǐng)人:雅培制藥有限公司