專利名稱：含鐵制劑的生物等效性試驗(yàn)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及基于將制劑樣品中的鐵(III)還原為鐵(II)的動力學(xué)來評價(jià)鐵補(bǔ)充劑制劑、特別是鐵-碳水化合物絡(luò)合物中鐵的生物等效性的快速方法。本發(fā)明還涉及質(zhì)量控制方法和相關(guān)的試劑盒。
背景技術(shù)：
右旋糖酐鐵被研制用于治療鐵缺乏病癥，最初其經(jīng)肌內(nèi)注射施用于不能耐受各種口服鐵鹽制劑的缺鐵性貧血患者。參見例如Lawrence，“右旋糖酐鐵產(chǎn)品的研制和比較”PDA Journal of Pharmaceutical Science &Technology 52(5)190-197(1998)。后來，右旋糖酐鐵也經(jīng)靜脈內(nèi)施用，并且發(fā)現(xiàn)可產(chǎn)生相似的有益效果。
已經(jīng)研制出多種含鐵制劑。靜脈內(nèi)注射膠體氫氧化鐵制劑、特別是蔗糖鐵(iron sucrose)在臨床上適用于治療接受補(bǔ)充紅細(xì)胞生成素治療、進(jìn)行長期血液透析的患者的缺鐵性貧血。
蔗糖鐵被制備成膠體混懸液并作為前藥施用，其被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)胞攝取，釋放出鐵離子。鐵離子與運(yùn)鐵蛋白結(jié)合，運(yùn)鐵蛋白進(jìn)而將其轉(zhuǎn)運(yùn)至骨髓用于紅細(xì)胞生成或者轉(zhuǎn)運(yùn)至鐵蛋白和骨髓、脾和肝中的鐵貯存池。
鐵的生理學(xué)和代謝人體以鐵蛋白和血鐵黃素形式貯存三價(jià)鐵。鐵蛋白包括含有貯存腔的蛋白質(zhì)外殼，所述貯存腔用于容納組成約為[(FeOOH)8(Fe)OPO3H2]n的多核氫氧化鐵/磷酸鐵核。鐵蛋白的蛋白質(zhì)外殼、即脫鐵鐵蛋白包括24個(gè)多肽亞單位，所述的多肽亞單位形成平均分子量為約440,000的脫鐵鐵蛋白分子。脫鐵鐵蛋白外殼的直徑約13納米(130)，內(nèi)腔約7納米(70)。
鐵蛋白的蛋白質(zhì)殼、即脫鐵鐵蛋白在結(jié)合和氧化二價(jià)鐵中作為亞鐵氧化酶發(fā)揮作用，然后所述的二價(jià)鐵作為多核氫氧化鐵/磷酸鐵核貯存在蛋白質(zhì)殼的空腔中。鐵蛋白可含有多達(dá)4,500個(gè)聚合的鐵離子，整個(gè)分子的分子量為700,000至800,000。鐵蛋白分子中30％以上的重量可以是鐵。
當(dāng)可利用的鐵的量超過鐵蛋白的離子貯存機(jī)制時(shí)，可形成稱為血鐵黃素的聚集的鐵蛋白，其為單核細(xì)胞-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的正常成分。血鐵黃素包括失去其部分蛋白質(zhì)殼并聚集的鐵蛋白分子。血鐵黃素構(gòu)成正常鐵貯存量的約三分之一，作為不溶性顆粒，其在網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)胞中積聚。
鐵蛋白是水溶性的，并且可通過滲透作用進(jìn)入血流。鐵蛋白的正常血清水平取決于性別/年齡，為40至160ng/mL。據(jù)認(rèn)為，在血流中鐵蛋白緩慢釋放出二價(jià)鐵和還原劑如還原性黃素單核苷酸及較少量的抗壞血酸。二價(jià)鐵被血漿銅藍(lán)蛋白氧化為三價(jià)鐵，然后與血蛋白脫鐵運(yùn)鐵蛋白緊密結(jié)合形成運(yùn)鐵蛋白。運(yùn)鐵蛋白的分子量為約76,000，每個(gè)分子含有兩個(gè)鐵離子結(jié)合位點(diǎn)。
當(dāng)施用于患者時(shí)，蔗糖鐵絡(luò)合物(或其它例如用葡糖酸鹽、右旋糖酐、山梨醇或糊精制備的三價(jià)鐵膠體)作為顆粒被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的巨噬細(xì)胞從血流中除去并代謝，以補(bǔ)充機(jī)體的血鐵黃素、鐵蛋白和運(yùn)鐵蛋白的鐵貯存。從血流中除去的速率取決于膠體氫氧化鐵的粒徑和組成。
鐵碳水化合物絡(luò)合物的合成鐵碳水化合物絡(luò)合物如蔗糖鐵包含與蔗糖絡(luò)合的膠體氫氧化鐵顆粒(即核)。這些鐵核通過將氯化鐵用堿中和至pH為2而制得。在該pH下，飽和氫氧根離子使得形成膠體氫氧化鐵，其在形成后與適宜的碳水化合物如蔗糖原位絡(luò)合。鐵核的結(jié)構(gòu)遵循經(jīng)典的配位化學(xué)。碳水化合物通過其羥基替換與鐵核外表面結(jié)合的水分子而與鐵核絡(luò)合。
鐵核與碳水化合物之間的結(jié)合是非共價(jià)的分子間力，例如鐵核表面鐵原子的部分正電荷對碳水化合物羥基的偶極矩負(fù)端(negative dipolemoment)的吸引力。
例如，蔗糖鐵的分子量(Mw)為約34,000至60,000道爾頓，其分子式如下[Na2Fe5O8(OH)·3(H2O)]n·m(C12H22O11)其中n是鐵聚合度，m是與多核聚合鐵核[Na2Fe5O8(OH)·3(H2O)]n絡(luò)合的蔗糖分子(C12H22O11)數(shù)。
在溶液中，在多核聚合鐵核(Pn)與其增溶配體(L)之間存在平衡[Pn]+(m)[L][Pn]·m[L]。
為了確保得到穩(wěn)定的水溶性鐵絡(luò)合物，需要過量的增溶配體，該平衡如下[Pn]+(x)[L]→[Pn]·m[L]+(x-m)[L]。
合成該鐵碳水化合物絡(luò)合物的優(yōu)選方法例如由Lawrence等人在公布的PCT申請WO97/11711(1997)中進(jìn)行了描述。
鐵碳水化合物均一性的評價(jià)通過在右旋糖酐存在下中和氯化鐵制得的右旋糖酐鐵絡(luò)合物具有相似的結(jié)構(gòu)式，然而氫氧化鐵核的聚合度有差異。參見例如Lawrence(1998)。Lawrence的論文還討論了通過評估還原降解動力學(xué)來評價(jià)右旋糖酐鐵絡(luò)合物的粒徑均一性的方法。對三種來自不同廠商的右旋糖酐鐵產(chǎn)品的評價(jià)進(jìn)行描述后，該論文報(bào)道稱它們之間在所測定的每種物理和化學(xué)參數(shù)上均有顯著差異。
右旋糖酐鐵顆粒的生物等效性測定如上述所指出的，市售鐵補(bǔ)充劑制劑為絡(luò)合物的膠體混懸液。例如，根據(jù)關(guān)于Luitpold制藥公司的蔗糖鐵注射劑的USP專論(在2002年7/8月的USP 25第2增補(bǔ)本中出版)，該制劑的pH被控制，除了鐵和蔗糖組分外其還含有一定量的顆粒物。Erni等人，“氫氧化鐵(III)-糊精絡(luò)合物的化學(xué)性質(zhì)”，Arzneim.-Forsch./Drug Res.34(11)1555-1559(1984)報(bào)道了糊精鐵(III)絡(luò)合物的市售制劑之間的比較。該論文指出鐵(III)的水解產(chǎn)物在其結(jié)構(gòu)、形態(tài)和化學(xué)性質(zhì)上有很大差異，這取決于它們形成的條件和其它因素。注意力集中于該水解產(chǎn)物的性質(zhì)而非鐵的氧化狀態(tài)——即鐵(II)與鐵(III)的比較。
Erni等人討論了鐵(III)還原的動力學(xué)分析，將其與單分散體系中的粒徑分布和表面積/體積比相關(guān)聯(lián)并與多分散體系進(jìn)行了比較。參見例如1556-57頁的章節(jié)2.3和3.2?？箟难帷幟仕?、磷酸和山梨醇是Erni等人使用的幾種還原劑。還討論了當(dāng)為口服制劑時(shí)的生物利用度；然而，值得注意的是，這些作者得出下述結(jié)論單獨(dú)的化學(xué)試驗(yàn)不能預(yù)計(jì)生物利用度，因?yàn)樗鼈儾荒苣M腸內(nèi)復(fù)雜的化學(xué)環(huán)境(參見第1559頁)。
其它已知的方法采用絡(luò)合物的分子量分布來與其生物利用度相關(guān)聯(lián)。然而，這種分布似乎根據(jù)分子量分析中所用的方法、試驗(yàn)方案和標(biāo)準(zhǔn)而有所變化。參見例如Lawrence等人的PCT WO97/11711。
FDA在http//www.fda.gov/cder/guidance/1713bp1.pdf上提供了通過溶出試驗(yàn)體外測定速釋固體口服劑型的通用指導(dǎo)原則，其標(biāo)題為“工業(yè)指導(dǎo)原則速釋固體口服劑型的溶出試驗(yàn)”。
因此，盡管文獻(xiàn)中已經(jīng)基于含鐵絡(luò)合物的還原降解動力學(xué)報(bào)道了對其粒徑分布的評價(jià)，但文獻(xiàn)似乎未確定在粒徑分布與生物等效性之間有任何特定相關(guān)性。確實(shí)，迄今仍未定義特定的動力學(xué)參數(shù)如T75并將其與生物等效性相關(guān)聯(lián)。因此，所需要的是一種能可靠且穩(wěn)定地測定含鐵組合物的生物等效性的準(zhǔn)確、廉價(jià)的方法，以及所述測定的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。該方法還應(yīng)最優(yōu)化鐵補(bǔ)充劑制劑并進(jìn)行產(chǎn)品的批間比較。
發(fā)明概述在人體內(nèi)，鐵的代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)包括一系列的氧化/還原反應(yīng)，其中鐵的價(jià)態(tài)在二價(jià)態(tài)和三價(jià)態(tài)之間來回改變。為了控制和監(jiān)測蔗糖鐵絡(luò)合物的批間生物等效性，已經(jīng)研發(fā)了一種體外試驗(yàn)來測定膠體氫氧化鐵由三價(jià)鐵還原為二價(jià)鐵的速率。當(dāng)鐵被還原時(shí)，膠體氫氧化鐵核解離，并且膠體氫氧化鐵核解離的速率與其粒徑成正比。此外，對粒徑均勻(即單分散的)且組成均一的氫氧化鐵核而言，其還原速率符合一級動力學(xué)。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，用加入生理鹽水中的過量抗壞血酸作為體外試驗(yàn)的還原劑。抗壞血酸(C6H8O6)如下將鐵核的三價(jià)鐵(Fe3+)還原為二價(jià)鐵(Fe2+)。
抗壞血酸被氧化為脫氫抗壞血酸(C6H6O6)，氫氧化鐵(Fe(OH)3)被還原為氫氧化亞鐵(Fe(OH)2)。
膠體氫氧化鐵絡(luò)合物為暗紅色至棕色溶液，于450nm有強(qiáng)吸收帶。當(dāng)還原為氫氧化亞鐵時(shí)，顏色消失，導(dǎo)致吸收度下降。這種褪色(或解離)可在設(shè)定為450nm的控溫(37±1℃)UV/Vis分光光度計(jì)中容易地監(jiān)測。
在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，通過將絡(luò)合物用適宜的還原劑還原，使用鐵-碳水化合物絡(luò)合物還原的T75時(shí)間來測定相對生物等效性。如果其T75還原時(shí)間不超過20分鐘并且其還原反應(yīng)的“Log(三價(jià)鐵濃度百分?jǐn)?shù))”對“時(shí)間”圖為線性、相關(guān)系數(shù)絕對值不低于0.98，則符合蔗糖鐵制劑的優(yōu)選的生物等效性標(biāo)準(zhǔn)。
本發(fā)明的其它特征、優(yōu)點(diǎn)和實(shí)施方案在以下的發(fā)明詳述和權(quán)利要求中給出或參考其是顯而易見的。此外，應(yīng)當(dāng)理解的是以上的發(fā)明概述和以下的發(fā)明詳述均是示范性的，其用于進(jìn)一步解釋而非限制本發(fā)明所要求保護(hù)的范圍。
發(fā)明詳述本發(fā)明部分地基于下述發(fā)現(xiàn)鐵-碳水化合物絡(luò)合物、特別是蔗糖鐵制劑中的鐵的生物等效性可通過評價(jià)含鐵(III)絡(luò)合物的還原降解動力學(xué)而被有效地測定。具體而言，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)給定制劑的還原時(shí)間與生物等效性有效相關(guān)。由于還原動力學(xué)是絡(luò)合物粒徑分布的函數(shù)，因此對這些動力學(xué)進(jìn)行分析使測定粒徑分布成為可能。而粒徑分布可進(jìn)而被用于測定生物等效性。該方法可減少分析時(shí)間，并可顯著降低其制備過程中和制備后與鐵補(bǔ)充劑制劑的生物等效性評價(jià)有關(guān)的費(fèi)用。
本發(fā)明涉及測定鐵-碳水化合物絡(luò)合物中鐵的相對生物等效性的方法，該方法通過使絡(luò)合物與還原劑接觸、測定絡(luò)合物的還原動力學(xué)并將這些動力學(xué)與生物等效性已知的標(biāo)準(zhǔn)組合物的還原動力學(xué)進(jìn)行比較來進(jìn)行。
本發(fā)明還包括測定鐵-碳水化合物絡(luò)合物中鐵的相對生物等效性的方法，該方法通過使絡(luò)合物與還原劑接觸、測定絡(luò)合物還原動力學(xué)的T75來進(jìn)行。T75小于約20分鐘表明當(dāng)施用于個(gè)體時(shí)絡(luò)合物中的鐵具有有效的生物等效性。優(yōu)選T75小于約18分鐘，更優(yōu)選T75為約9至約18分鐘。
優(yōu)選鐵-碳水化合物絡(luò)合物由碳水化合物制成，例如右旋糖酐、糊精、葡糖酸鹽、山梨醇和蔗糖。最優(yōu)選鐵-碳水化合物絡(luò)合物為蔗糖鐵。
該創(chuàng)造性的方法可使用任何數(shù)量的適宜的還原劑，包括例如還原性黃素單核苷酸、連二亞硫酸鹽、巰基乙酸鹽、氫醌、乳酸或乳酸鹽、檸檬酸或檸檬酸鹽、碳酸氫鹽、丙酮酸鹽、琥珀酸或琥珀酸鹽、果糖、半胱氨酸、山梨醇，尤其優(yōu)選的是抗壞血酸。還原劑存在的量應(yīng)足以使還原反應(yīng)完全，或者至少是基本上完全，優(yōu)選的量為相對于鐵-碳水化合物絡(luò)合物約50倍過量。還優(yōu)選使用在溶液中的且具有酸性pH的還原劑，最優(yōu)選溶液pH為約1.0至約4.0。
本發(fā)明還包括用于測定鐵-碳水化合物絡(luò)合物生物等效性的創(chuàng)造性的質(zhì)量控制裝置。該創(chuàng)造性的裝置以計(jì)算機(jī)監(jiān)測生產(chǎn)系統(tǒng)為特征，該系統(tǒng)可監(jiān)測膠體氫氧化鐵與碳水化合物在不同反應(yīng)階段的反應(yīng)產(chǎn)物的還原動力學(xué)。
該產(chǎn)物優(yōu)選用還原劑如抗壞血酸還原。優(yōu)選地，還原劑存在的量足以使還原反應(yīng)完全，或者至少是基本上完全。更優(yōu)選地，還原劑存在的量為相對于產(chǎn)物至少約50倍過量。還優(yōu)選的是在溶液中的且具有酸性pH的還原劑，尤其優(yōu)選的是溶液pH為約1.0至約4.0。
該產(chǎn)物優(yōu)選是鐵與碳水化合物的絡(luò)合物，所述的碳水化合物選自右旋糖酐、糊精、葡糖酸鹽、山梨醇和蔗糖。當(dāng)碳水化合物為蔗糖時(shí)是特別優(yōu)選的。
本發(fā)明還涉及鑒別基本上具有相同的生物等效性的鐵-碳水化合物絡(luò)合物批次的質(zhì)量控制方法。該方法包括制備鐵-碳水化合物絡(luò)合物、使用上述方法測定所選擇批次的鐵-碳水化合物絡(luò)合物的還原動力學(xué)并鑒別符合生物等效性已知的標(biāo)準(zhǔn)組合物的還原動力學(xué)的鐵-碳水化合物絡(luò)合物批次。
本發(fā)明還包括用于評價(jià)蔗糖鐵絡(luò)合物的生物等效性的試劑盒，該試劑盒使用容納蔗糖鐵絡(luò)合物樣品的容器、測定蔗糖鐵絡(luò)合物的還原動力學(xué)的手段和將該還原動力學(xué)與已知的標(biāo)準(zhǔn)蔗糖鐵絡(luò)合物的生物等效性相關(guān)聯(lián)的手段。
定義“生物利用度”意指口服施用于個(gè)體后給定量的藥物活性成分的生理利用度，與藥物的化學(xué)濃度或效價(jià)不同。
“生物等效性”意指一種藥物與該藥物或另一種藥物的標(biāo)準(zhǔn)品或另一種制劑相比具有基本相似的活性性質(zhì)。
“T75”或“T75間期”或“T75還原時(shí)間”意指蔗糖鐵溶液中不少于75％的膠體氫氧化鐵被還原(即解離)的時(shí)間(以分鐘表示)。
鑒于前述討論，以下給出的具體實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明，而非旨在限制本發(fā)明的范圍。其它通用和特定的內(nèi)容對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。
實(shí)施例每天制備貯備液。通過稱取9.00g氯化鈉至1000mL容量瓶中并加純化水至刻度制備0.9％氯化鈉稀釋溶液(溶液A)。然后將該溶液在水浴中保持在37℃。
抗壞血酸貯備液(溶液B)如下制備稱取約8.8g抗壞血酸至50mL容量瓶中，然后加入需要量的溶液A。同樣將該溶液保持在37℃。
蔗糖鐵貯備液如下制備將5.0mL樣品轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中，然后加純化水至刻度。同樣將該溶液保持在37℃。
監(jiān)測反應(yīng)的一般步驟是將20.0mL溶液A、4.0mL溶液B和1.0mL蔗糖鐵貯備液加入25mL容量瓶中。將該溶液充分混合，然后取適量轉(zhuǎn)移至在設(shè)定為37℃的控溫UV/Vis分光光度計(jì)中的1cm石英池中。以1分鐘的時(shí)間間隔測定在450nm下的吸收，總反應(yīng)時(shí)間為80分鐘。使用溶液A作為空白。
用以下方程式計(jì)算給定測定時(shí)間的三價(jià)鐵濃度百分?jǐn)?shù)100×[(吸收度測定值-吸收度終值)/(吸收度初始值-吸收度終值)]。
如果T75還原時(shí)間不超過20分鐘且60分鐘內(nèi)的“Log(三價(jià)鐵濃度百分?jǐn)?shù))”對“時(shí)間”圖為線性、相關(guān)系數(shù)不低于0.98，則蔗糖鐵溶液符合其生物等效性標(biāo)準(zhǔn)。
實(shí)施例1體外試驗(yàn)在控制半成品蔗糖鐵溶液中的應(yīng)用在約為7的中性pH下，使飽和氯化鐵溶液與10％w/v碳酸鈉溶液接觸。將所得膠體氫氧化鐵凝膠用足量純化水洗滌以除去作為反應(yīng)副產(chǎn)物存在的所有痕量氯化鈉。
將足量飽和蔗糖溶液加入膠體氫氧化鐵凝膠中，加入體積等于使最終溶液含有約4.0％w/w鐵元素的體積。用氫氧化鈉將溶液的pH調(diào)至10.7，并將溶液于90℃下混合36小時(shí)。采集過程中的QC樣品用于測定pH、鐵含量和進(jìn)行體外生物等效性試驗(yàn)。如果結(jié)果在允許限度內(nèi)，則加入純化水調(diào)節(jié)溶液體積，使最終鐵含量為約4.0％w/w鐵元素，然后經(jīng)0.2微米膜過濾。
用含3.7％w/w鐵元素的半成品蔗糖鐵溶液獲得了以下體外試驗(yàn)結(jié)果
表1半成品蔗糖鐵溶液的體外試驗(yàn)
回歸結(jié)果常數(shù)(b) 1.93237估計(jì)值Y的標(biāo)準(zhǔn)誤差 0.05684R2 0.99514相關(guān)系數(shù) 0.99757測定次數(shù) 13自由度11X系數(shù)(m) -0.04001系數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)誤差0.00084

圖1的回歸結(jié)果證明三價(jià)鐵的還原為線性，相關(guān)系數(shù)為0.99757。這表明該半成品蔗糖鐵溶液的膠體氫氧化鐵核的還原符合一級動力學(xué)，其中用以下方程式計(jì)算T75
T75＝(1.3979-b)/m其中“1.3979”為在75％還原時(shí)間點(diǎn)(即三價(jià)鐵濃度百分?jǐn)?shù)＝25％)的三價(jià)鐵濃度百分?jǐn)?shù)的對數(shù)值，“b”為常數(shù)，“m”為X系數(shù)。
使用由圖1的線性回歸得到的“b”和“m”值，發(fā)現(xiàn)該半成品蔗糖鐵溶液的T75為13.36分鐘。
實(shí)施例2體外試驗(yàn)在控制適于注射使用的蔗糖鐵溶液中的應(yīng)用通過將實(shí)施例1中所述的半成品溶液用注射用水稀釋至鐵元素終濃度為20mg/mL制備適于注射使用的蔗糖鐵溶液。將所得溶液的pH用氫氧化鈉調(diào)節(jié)至10.8，然后混合均勻。將該溶液通過不銹鋼供應(yīng)線轉(zhuǎn)移并經(jīng)過兩個(gè)串聯(lián)的無菌0.2微米過濾器裝置過濾至無菌灌裝瓶中。過濾器和灌裝瓶在潔凈度恒定為100級的指定的灌裝室內(nèi)置于層流下。
在灌裝期間使用的所有裝置均進(jìn)行鑒定、滅菌并記錄。將瓶塞洗滌、硅化處理、除熱原并滅菌。玻璃器皿用去離子水洗滌并最后用注射用水漂洗，然后除熱原。
小瓶灌裝器位于環(huán)境控制為10,000級的潔凈室內(nèi)的100級層流工作臺內(nèi)。在小瓶灌裝器正上方的HEPA過濾器提供了無形的無菌、無顆?？諝鈮σ苑乐刮廴尽Ｔ诠嘌b完成后，將產(chǎn)品在高壓滅菌鍋內(nèi)于100℃下加熱處理35分鐘。
用適于注射使用的含20mg/mL鐵元素的鐵蔗糖溶液獲得了以下體外試驗(yàn)結(jié)果
表2注射用蔗糖鐵溶液的體外試驗(yàn)
回歸結(jié)果常數(shù) 1.87588估計(jì)值Y的標(biāo)準(zhǔn)誤差 0.06695R2 0.99395相關(guān)系數(shù) 0.99697測定次數(shù) 13自由度11X系數(shù) -0.0422系數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)誤差0.00099與實(shí)施例1相同，圖2的回歸結(jié)果證明三價(jià)鐵的還原為線性，相關(guān)系數(shù)為0.9969，這表明該適于注射使用的蔗糖鐵溶液的還原符合一級動力學(xué)。用以下方程式計(jì)算T75T75＝(1.3979-b)/m；
發(fā)現(xiàn)其為11.32分鐘。
雖然已經(jīng)參考上述實(shí)施例詳細(xì)描述了本發(fā)明，然而應(yīng)當(dāng)理解可不背離本發(fā)明的宗旨進(jìn)行各種修改。因此，本發(fā)明僅由所附的權(quán)利要求所限定。本申請中提及的所有引用的專利和出版物在此處全文引入作為參考。
權(quán)利要求
1.測定鐵-碳水化合物絡(luò)合物中鐵的相對生物等效性的方法，該方法包括下述步驟使絡(luò)合物與還原劑接觸；測定絡(luò)合物的還原動力學(xué)；和將這些動力學(xué)與生物等效性已知的標(biāo)準(zhǔn)組合物的還原動力學(xué)進(jìn)行比較。
2.測定鐵-碳水化合物絡(luò)合物中鐵的相對生物等效性的方法，該方法包括下述步驟使絡(luò)合物與還原劑接觸；測定絡(luò)合物還原動力學(xué)的T75；其中T75小于約20分鐘表明當(dāng)施用于個(gè)體時(shí)絡(luò)合物中的鐵具有有效的生物等效性。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中鐵-碳水化合物絡(luò)合物中的碳水化合物包括選自右旋糖酐、糊精、葡糖酸鹽、山梨醇和蔗糖中的至少一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3中所述的方法，其中碳水化合物包括蔗糖。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中還原劑包括選自還原性黃素單核苷酸、連二亞硫酸鹽、巰基乙酸鹽、氫醌、乳酸或乳酸鹽、檸檬酸或檸檬酸鹽、碳酸氫鹽、丙酮酸鹽、琥珀酸或琥珀酸鹽、果糖、半胱氨酸、山梨醇和抗壞血酸中的至少一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求5中所述的方法，其中還原劑包括抗壞血酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中還原劑存在的量足以使絡(luò)合物的還原基本上完全。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中還原劑存在的量為相對于鐵-碳水化合物絡(luò)合物至少約50倍過量。
9.根據(jù)權(quán)利要求1或2中所述的方法，其中還原劑在溶液中且具有酸性pH。
10.根據(jù)權(quán)利要求9中所述的方法，其中溶液的pH為約1.0至約4.0。
11.測定鐵-碳水化合物絡(luò)合物的生物等效性的質(zhì)量控制裝置，該裝置包括計(jì)算機(jī)監(jiān)測生產(chǎn)系統(tǒng)，所述系統(tǒng)可監(jiān)測膠體氫氧化鐵與碳水化合物在不同反應(yīng)階段的反應(yīng)產(chǎn)物的還原動力學(xué)。
12.根據(jù)權(quán)利要求11中所述的質(zhì)量控制裝置，其中產(chǎn)物用還原劑還原。
13.根據(jù)權(quán)利要求12中所述的質(zhì)量控制裝置，其中還原劑包括選自還原性黃素單核苷酸、連二亞硫酸鹽、巰基乙酸鹽、氫醌、乳酸或乳酸鹽、檸檬酸或檸檬酸鹽、碳酸氫鹽、丙酮酸鹽、琥珀酸或琥珀酸鹽、果糖、半胱氨酸、山梨醇和抗壞血酸中的至少一種。
14.根據(jù)權(quán)利要求13中所述的質(zhì)量控制裝置，其中還原劑包括抗壞血酸。
15.根據(jù)權(quán)利要求12中所述的質(zhì)量控制裝置，其中還原劑存在的量足以使絡(luò)合物的還原基本上完全。
16.根據(jù)權(quán)利要求12中所述的質(zhì)量控制裝置，其中還原劑存在的量為相對于產(chǎn)物至少約50倍過量。
17.根據(jù)權(quán)利要求12中所述的質(zhì)量控制裝置，其中還原劑在溶液中且具有酸性pH。
18.根據(jù)權(quán)利要求17中所述的質(zhì)量控制裝置，其中溶液的pH為約1.0至約4.0。
19.根據(jù)權(quán)利要求11中所述的質(zhì)量控制裝置，其中鐵-碳水化合物絡(luò)合物中的碳水化合物包括選自右旋糖酐、糊精、葡糖酸鹽、山梨醇和蔗糖中的至少一種。
20.根據(jù)權(quán)利要求19中所述的質(zhì)量控制裝置，其中碳水化合物包括蔗糖。
21.鑒別基本上具有相同的生物等效性的鐵-碳水化合物絡(luò)合物批次的質(zhì)量控制方法，該方法包括下述步驟制備鐵-碳水化合物絡(luò)合物；根據(jù)權(quán)利要求1的方法測定所選擇批次的鐵-碳水化合物絡(luò)合物的還原動力學(xué)；和鑒別符合生物等效性已知的標(biāo)準(zhǔn)組合物的還原動力學(xué)的鐵-碳水化合物絡(luò)合物批次。
22.根據(jù)權(quán)利要求21中所述的質(zhì)量控制方法，其中鐵-碳水化合物絡(luò)合物中的碳水化合物包括選自右旋糖酐、糊精、葡糖酸鹽、山梨醇和蔗糖中的至少一種。
23.根據(jù)權(quán)利要求22中所述的質(zhì)量控制方法，其中碳水化合物包括蔗糖。
24.評價(jià)鐵-碳水化合物絡(luò)合物的生物等效性的試劑盒，該試劑盒包括容納蔗糖鐵絡(luò)合物樣品的容器；測定鐵-碳水化合物絡(luò)合物的還原動力學(xué)的手段；和將該還原動力學(xué)與已知的標(biāo)準(zhǔn)鐵-碳水化合物絡(luò)合物的生物等效性相關(guān)聯(lián)的手段。
全文摘要
本發(fā)明描述了評價(jià)鐵補(bǔ)充劑制劑、特別是蔗糖鐵制劑中鐵的生物等效性的方法，該方法基于將制劑樣品中的鐵(III)還原為鐵(II)的動力學(xué)。還描述了質(zhì)量控制方法和相關(guān)的試劑盒。
文檔編號A61K31/295GK1685227SQ02829666
公開日2005年10月19日 申請日期2002年8月26日 優(yōu)先權(quán)日2002年8月26日
發(fā)明者M·J·赫勒內(nèi)克, R·A·朗格, R·P·勞倫斯 申請人:維福(國際)股份公司