專利名稱：一種治療卵巢早衰的中藥組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥組合物，具體涉及一種治療卵巢早衰的中藥組合物及其制備 方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
卵巢早衰(Premature Ovarian Failure, P0F)是指婦女40歲以前因某種原因引 起以閉經(jīng)、不孕、雌激素缺乏及促性腺激素升高為特征的一種疾病?；颊叩穆雅輧?nèi)無卵母 細(xì)胞或雖有原始細(xì)胞，但對(duì)促性腺激素?zé)o反應(yīng)，表現(xiàn)為雌激素水平低下、促性腺激素水平升 高。臨床上患者表現(xiàn)為閉經(jīng)、不孕，兼有面色潮紅、烘熱汗出、情緒波動(dòng)、白帶減少、性欲低 下、陰部干燥、生殖器及第二性征逐漸退化的類更年期癥狀，影響患者的生活質(zhì)量?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病病因復(fù)雜，目前還不是十分清楚。理論上P0F發(fā)病機(jī)制為先天 性卵泡數(shù)量少、卵泡閉鎖增加、卵泡成熟障礙等。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，本病屬“血枯”、“血隔”、“閉 經(jīng)”、“不孕”等范疇。其病因有學(xué)者將其歸納為以下幾個(gè)方面腎氣不足，腎精虧耗是本病 發(fā)病的基本病因；氣血虛弱，是本病發(fā)病的重要病因；其次情志郁結(jié)，氣血暗耗，沖任失調(diào) 或六淫時(shí)毒，浸淫胞脈，擾亂沖任是本病發(fā)病的主要誘因。在治療方面，西醫(yī)不外乎恢復(fù)，保養(yǎng)，替代卵巢功能這幾方面。到目前為止還沒有 確切有效的方法能恢復(fù)卵巢的功能。常用的治法有激素替代療法(HRT)，誘導(dǎo)排卵，輔助 贈(zèng)卵技術(shù)，自體或異體卵巢移植技術(shù)，免疫抑制治療，補(bǔ)充鈣劑或降鈣素治療。中醫(yī)治療以腎為本，常見的有⑴單方驗(yàn)方治療，如歸腎丸加減、一貫煎加減等； (2)成藥治療，如烏鱉口服液、仙樂雄膠囊等；(3)中藥人工周期治療；(4)中西醫(yī)結(jié)合治療， 如中西藥人工周期療法等；(5)針灸治療等。主要是通過補(bǔ)腎益氣、養(yǎng)血活血來改善癥狀。近10年來P0F的發(fā)生率有升高趨勢(shì)，其發(fā)病率在婦女中占1 % 3%，占繼發(fā)性閉 經(jīng)的2% 10%。由于其可導(dǎo)致自主神經(jīng)功能紊亂，新陳代謝障礙，雌激素靶器官萎縮及退 行性變從而產(chǎn)生軀干及精神癥狀，表現(xiàn)為不孕，并因體內(nèi)低雌激素水平而出現(xiàn)一系列癥狀， 如潮熱、出汗、陰道干澀、白帶減少、頭暈、情緒波動(dòng)、失眠及性欲減退、骨質(zhì)疏松，嚴(yán)重影響 婦女的生活質(zhì)量，是當(dāng)今生殖醫(yī)學(xué)和生殖健康研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。西醫(yī)治療采用HRT方法， 停用后復(fù)發(fā)率高，且長(zhǎng)期應(yīng)用可能誘發(fā)子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌，而且患有子宮肌瘤、乳腺增生、 糖尿病及血栓等血液系統(tǒng)疾病的患者，不宜采取，還有部分婦女對(duì)激素的使用有心理障礙。 因此，探討中藥治療取代激素治療很有必要。發(fā)明人在多年的科研實(shí)踐和臨床經(jīng)驗(yàn)中反復(fù)總結(jié)，發(fā)現(xiàn)了本發(fā)明的組合物對(duì)治療 卵巢早衰具有良好的效果，本發(fā)明組合物的處方由熟地黃、山茱萸、當(dāng)歸、白芍、淫羊藿、丹 參等中藥組成。方中熟地黃、山茱萸滋陰補(bǔ)肝腎，為君藥；當(dāng)歸、白芍、丹參補(bǔ)血、活血通經(jīng)； 淫羊藿補(bǔ)腎陽；丹參還可清心除煩。本發(fā)明組合物主要用于肝腎陰虛型卵巢早衰。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療卵巢早衰的中藥組合物；
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本發(fā)明的另一目的是提供一種治療卵巢早衰的中藥組合物的制備方法。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種治療卵巢早衰的中藥組合物，該組合物是由包含如下重量份的中藥原料制成 的熟地黃2 6 山茱萸2 6 當(dāng)歸2 6 白芍2 6淫羊藿2 6 丹參1 3。上述中藥組合物優(yōu)選的原料藥與重量配比為熟地黃2 山茱萸2 當(dāng)歸2 白芍2淫羊藿2 丹參1。上述中藥組合物優(yōu)選的原料藥與重量配比為熟地黃3 山茱萸3 當(dāng)歸2 白芍2淫羊藿2 丹參1。上述中藥組合物優(yōu)選的原料藥與重量配比為熟地黃3 山茱萸3 當(dāng)歸2 白芍2淫羊藿2 丹參2。以上中藥組合物的制備方法為(1)取丹參，加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次0. 5 2小時(shí)，
合并提取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入8 20倍量水提取1 3次，每次0. 5 2. 5小時(shí)，合并 提取液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)60 % 75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷， 加入乙醇使含醇量達(dá)75 % 90 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并 提取液，濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)15 % 30 %，攪拌，離心，取上清液，加入 乙醇使含醇量達(dá)75% 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。該制備方法的優(yōu)選為(1)取丹參，加入8倍量90%乙醇回流提取兩次，每次1小時(shí)，減壓濃縮至相對(duì)密 度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別煎煮提取2次，每次1. 5小時(shí)，合 并提取液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)70%，靜 置12小時(shí)，上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá) 80%，靜置12小時(shí)，上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的干膏II。(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入8倍量水煎煮提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，減 壓濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)20%，充分?jǐn)嚢?，離 心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置12小時(shí)，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。本發(fā)明的中藥組合物，還可以是由如下重量份的中藥原料制成的熟地黃2 6 山茱萸2 6 當(dāng)歸2 6 白芍2 6淫羊藿2 6 丹參1 3 桂枝2 6。
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該中藥組合物優(yōu)選的原料藥與重量配比為熟地黃2 山茱萸2 當(dāng)歸2 白芍2淫羊藿2 丹參1桂枝2。以上中藥組合物的制備方法為(1)取丹參，加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次0. 5 2小時(shí)，
合并提取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入8 20倍量水提取1 3次，每次0. 5 2. 5小時(shí)，合并 提取液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)60 % 75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷， 加入乙醇使含醇量達(dá)75 % 90 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并 提取液，濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)15% 30 %，攪拌，離心，靜置，取上清液， 加入乙醇使含醇量達(dá)75% 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桂枝加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并提取液，濃縮 至浸膏，備用；藥渣加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并 提取液，濃縮至浸膏，與水提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。該制備方法的優(yōu)選為(1)取丹參，加入8倍量90%乙醇回流提取兩次，每次1小時(shí)，減壓濃縮至相對(duì)密 度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別煎煮提取2次，每次1. 5小時(shí)，合 并提取液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)70%，靜 置12小時(shí)，上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá) 80%，靜置12小時(shí)，上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的干膏II。(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入8倍量水煎煮提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，減 壓濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)20%，充分?jǐn)嚢?，離 心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置12小時(shí)，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III ；(4)取桂枝加入8倍量水煎煮提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，備 用；藥渣加入8倍量90%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提 取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。本發(fā)明的中藥組合物，還可以是由如下重量份的中藥原料制成的熟地黃2 6 山茱萸2 6 當(dāng)歸2 6 白芍2 6淫羊藿2 6 丹參1 3桃仁2 6。該中藥組合物優(yōu)選的原料藥與重量配比為熟地黃2 山茱萸2 當(dāng)歸2 白芍2淫羊藿2 丹參1桃仁2。以上中藥組合物的制備方法為(1)取丹參，加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次0. 5 2小時(shí)，
合并提取液，濃縮干燥，得干膏I ；
(2)取白芍、淫羊藿加入8 20倍量水提取1 3次，每次0. 5 2. 5小時(shí)，合并 提取液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)60 % 75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷， 加入乙醇使含醇量達(dá)75 % 90 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并 提取液，濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)15% 30 %，攪拌，離心，靜置，取上清液， 加入乙醇使含醇量達(dá)75% 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III;(4)取桃仁加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并提取液，濃縮 至浸膏，備用；藥渣加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并 提取液，濃縮至浸膏，與水提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。該制備方法的優(yōu)選為(1)取丹參，加入8倍量90%乙醇回流提取兩次，每次1小時(shí)，減壓濃縮至相對(duì)密 度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別煎煮提取2次，每次1. 5小時(shí)，合 并提取液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)70%，靜 置12小時(shí)，上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá) 80%，靜置12小時(shí)，上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的干膏II。(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入8倍量水煎煮提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，減 壓濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)20%，充分?jǐn)嚢瑁x 心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置12小時(shí)，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III ；(4)取桃仁加入8倍量水煎煮提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，備 用；藥渣加入8倍量90%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提 取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。本發(fā)明的中藥組合物，還可以是由如下重量份的中藥原料制成的熟地黃2 6 山茱萸2 6 當(dāng)歸2 6 白芍2 6淫羊藿2 6 丹參1 3知母2 6。該中藥組合物優(yōu)選的原料藥與重量配比為熟地黃2 山茱萸2 當(dāng)歸2 白芍2淫羊藿2 丹參1知母2。以上中藥組合物的制備方法為(1)取丹參，加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次0. 5 2小時(shí)，
合并提取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入8 20倍量水提取1 3次，每次0. 5 2. 5小時(shí)，合并 提取液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)60 % 75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷， 加入乙醇使含醇量達(dá)75 % 90 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并 提取液，濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)15% 30 %，攪拌，離心，靜置，取上清液， 加入乙醇使含醇量達(dá)75% 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III;
(4)取知母加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并提取液，濃縮 至浸膏，備用；藥渣加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并 提取液，濃縮至浸膏，與水提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。該制備方法的優(yōu)選為(1)取丹參，加入8倍量90%乙醇回流提取兩次，每次1小時(shí)，減壓濃縮至相對(duì)密 度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別煎煮提取2次，每次1. 5小時(shí)，合 并提取液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)70%，靜 置12小時(shí)，上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá) 80%，靜置12小時(shí)，上清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的干膏II。(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入8倍量水煎煮提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，減 壓濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)20%，充分?jǐn)嚢?，離 心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置12小時(shí)，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III ；(4)取知母加入8倍量水煎煮提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，備 用；藥渣加入8倍量90%乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提 取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。本發(fā)明的中藥組合物處方中熟地黃中多糖成分具有補(bǔ)血和抗衰老作用，山茱萸中 多糖成分有抗氧化及抗衰老作用，當(dāng)歸中水溶性成份具有補(bǔ)血和調(diào)節(jié)免疫和物質(zhì)代謝的功 能。因此，熟地黃、山茱萸、當(dāng)歸采用加水煎煮、濃縮，浸膏經(jīng)兩次醇沉，取沉淀減壓干燥，得 到多糖部分。白芍中總皂苷類成分具有免疫調(diào)節(jié)、護(hù)肝、改善睡眠、抗缺氧作用，淫羊藿苷對(duì) 卵泡顆粒細(xì)胞分泌E2有直接刺激作用，也促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞分泌皮質(zhì)酮，丹參的脂溶性 類有效成分具有抗血小板聚集和抗血栓形成，改善微循環(huán)作用，抗氧化損傷和高脂損傷，多 途徑發(fā)揮心肌、肝細(xì)胞保護(hù)作用和抗炎等多種作用。所以，丹參采用醇提濃縮干燥的方法制 備中間體，淫羊藿、白芍采用水煎煮醇沉，浸膏減壓干燥。本發(fā)明還提供了采用藥劑學(xué)中常規(guī)的制藥方法和上述的制備方法將本發(fā)明的中 藥組合物制備成片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、軟膠囊、口服液等制劑的技術(shù)方案。本發(fā)明的中藥組合物可以用來治療卵巢早衰，發(fā)明人對(duì)本發(fā)明提供的技術(shù)方案進(jìn) 行了藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)研究，用以證明本發(fā)明中藥組合物的治療作用。下述實(shí)驗(yàn)用于進(jìn)一步說明 本發(fā)明的效果，但不限制本發(fā)明。本發(fā)明組合物對(duì)卵巢早衰的實(shí)驗(yàn)研究1試驗(yàn)材料1. 1 藥物本發(fā)明組合物實(shí)施例1組合物藥物中間體(以下簡(jiǎn)稱“實(shí)施例1藥物”)17-雌二醇Sigma，批號(hào) 016kll94 ；1. 2 動(dòng)物Balb/c小鼠雌性，8 9周齡，18 22g，來源上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物公司， 合格證號(hào)SCXK (滬)2003-0002
1. 3 試劑豬卵透明帶蛋白(pZP4)，復(fù)旦大學(xué)附屬婦產(chǎn)科研究所免疫室自制，制備參見實(shí)驗(yàn) 方法磷酸鹽緩沖液(PBS,pH7. 4) :Na2HP04 1. 44g, KH2P04 0 . 24g, NaCl 8. Og, KC1 0. 2g, 加蒸餾水定容至1000ml，高壓滅菌后于室溫保存異丙基硫代-D-半乳糖苷(IPTG)上海申能博彩生物科技公司Ni-NTA Agarose :Qiagen，批號(hào) 12190983離心超濾管(5KD):Milipore, Amicon Ultra-15BCA-100蛋白定量試劑盒上海申能博彩生物科技有限公司完全弗氏佐劑(CFA):Sigma，批號(hào) 054k8931不完全弗氏佐劑(IFA) :Sigma，批號(hào)025k8910胎牛血清(FBS):GIBC0，批號(hào) 4987161640 培養(yǎng)液GIBC0，批號(hào) 31800刀豆蛋白(ConA):Sigma，批號(hào) C 2010羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)國(guó)藥集團(tuán)上海化學(xué)試劑公司，批號(hào)F2000027小鼠脾臟淋巴細(xì)胞分離液(EZ-S^jp Mouse)達(dá)科為生物技術(shù)公司，批號(hào) 33R020703羊抗鼠雌二醇(E2)測(cè)定試劑盒(ELISA):Adlitteram diagnosticlaboratories, Inc.批號(hào) 0708辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗小鼠IgG抗體，上海華美生物工程公司，批號(hào)576807包被緩沖液(0. 05M碳酸鹽緩沖，pH9. 6) :Na2C03 1. 59g，NaHC032. 93g，加蒸餾水定 容至 1000ml ；洗滌緩沖液(PBST，pH7.4) :PBS+0. 05% Tween-20封閉液及抗體稀釋液PBST+5% FCS底物緩沖液(pH5.0) 0. 2M Na2HP04 (28 . 4g/L) 25. 7ml, 0. 1M 檸檬酸(19. 2g/ L)24. 3ml，加蒸餾水 50mlTMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液TMB(10mg/5ml無水乙醇)0. 5ml，底物緩沖液 (PH5. 5) 10ml,0. 75% H20232 u 1 ；終止液(2M H2S04)蒸餾水178. 3ml，逐滴加入濃硫酸(98% )21. 7ml ；1.4 儀器潔凈操作臺(tái)(細(xì)菌)上海凈化設(shè)備廠垂直面對(duì)面超凈臺(tái)(細(xì)胞)上海上凈凈化設(shè)備公司振蕩培養(yǎng)箱國(guó)華電器有限公司，BS-2F低溫離心機(jī):Beckman, GS—15R小型臺(tái)式離心機(jī):Eppendorf,5424型電泳圖像分析系統(tǒng)儀Alpha Innotech. Corporation酶標(biāo)儀Bio_Rad，Model 3550C02 培養(yǎng)箱Heal Force，HF90熒光正置顯微鏡0LYMPUS，BX51
電熱恒溫水浴槽上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司，DKB-8A液閃發(fā)光測(cè)定儀美國(guó)PerkinElmer(PE)公司，MicroBeta 1450微量振蕩器江蘇海門其林醫(yī)用儀器廠，MH-1型電子天平:METTER AE260 Delta RangepH 儀Fisher Scientific，Model 102實(shí)驗(yàn)方法2. 1重組豬卵透明帶蛋白(pZP4)的表達(dá)與純化將pET28a(+)-pZP4重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到BL21(DE3)大腸桿菌中。含重組質(zhì)粒的大腸 桿菌于37°C振蕩培養(yǎng)至0D600達(dá)到0. 6，加入終濃度為0. 5mmol/L的IPTG，37°C誘導(dǎo)表達(dá) 5h，離心收集菌液沉淀。因?yàn)橹亟M蛋白在大腸桿菌中以包涵體形式存在，故在變性條件下使 用Ni-NTA Agarose純化蛋白。將蛋白純化洗脫液裝入離心超濾管中，PBS(pH7. 4)4°C脫鹽 濃縮，收集到的蛋白溶液經(jīng)0. 22 P m濾器過濾后，分裝保存于一 20°C備用。使用BCA蛋白定 量試劑盒對(duì)蛋白溶液定量。2. 2卵巢早衰小鼠模型制備、分組給藥2. 2.1模型制備每天上午9:00取雌性Balb/c小鼠陰道脫落細(xì)胞制備涂片，于光學(xué)顯微鏡下觀察 其性周期。2周后篩選出性周期正常小鼠90只，隨機(jī)選取10只小鼠作為正常對(duì)照組，其余 小鼠以6His-pZP4重組蛋白作為抗原進(jìn)行免疫制備卵巢早衰小鼠模型。方法如下將50iU 含有5 y g抗原的PBS溶液與50 u 1 CFA充分乳化，于小鼠兩后腳掌和皮下進(jìn)行多點(diǎn)注射。 之后每隔2周以等量抗原與IFA乳化液加強(qiáng)免疫1次，共加強(qiáng)免疫2次。正常對(duì)照組小鼠 同時(shí)以100 ill緩沖液PBS進(jìn)行免疫。2. 2. 2分組給藥第3次免疫后第7天于小鼠眼球后靜脈叢取血，離心取血清測(cè)定E2。根據(jù)E2含量 篩選出造模成功小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為本發(fā)明實(shí)施例1藥物的高、 中、低三個(gè)劑量組(15. 0,7. 5,3. 75g/kg)、雌激素組(0. 13mg/kg)及模型對(duì)照組(與正常對(duì) 照組給予等量的0. 5% CMC-Na)。實(shí)施例1藥物的人臨床用量為60g生藥/d，換算成小鼠 臨床等效劑量60 X 0. 0026 X 50 = 7. 8g生藥/kg，此劑量即為中劑量，2倍臨床等效劑量為 高劑量，0.5倍臨床等效劑量為低劑量。卵巢早衰及卵巢儲(chǔ)備功能下降，目前一般用雌激素 補(bǔ)充療法，人臨床用量為lmg/d，換算成小鼠臨床等效劑量為1X0. 0026X50 = 0. 13mg/kg。 各組小鼠每天灌胃一次(雌激素組灌胃3天，間隔1天)，給藥容積為0. 2ml/10g，共給藥20 天。于末次給藥后一小時(shí)從小鼠眼球后靜脈叢取血，分離出血清，-20°C儲(chǔ)存?zhèn)溆谩２⑿蓄i 椎脫白處死小鼠，無菌條件下摘取脾臟及卵巢。2. 3檢測(cè)指標(biāo)2. 3. 1陰道脫落細(xì)胞涂片觀察每天用無菌棉簽蘸適量生理鹽水取雌性Balb/c小鼠陰道脫落細(xì)胞制備涂片，于 光學(xué)顯微鏡下觀察其性周期隨時(shí)間的變化。2. 3.2血清E2的測(cè)定ELISA方法測(cè)定。2. 3. 3重組抗原體外誘導(dǎo)脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)
無菌條件下取小鼠脾臟研磨，于200目尼龍網(wǎng)過濾收集細(xì)胞，以小鼠脾臟淋巴 細(xì)胞分離液分離淋巴細(xì)胞。臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞活率> 95%，以含20%胎牛血清的 RPMI-1640培養(yǎng)液制備細(xì)胞懸液，調(diào)整細(xì)胞濃度為2X106cells/ml。取細(xì)胞懸液100 yl 加入96孔圓底細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)(3復(fù)孔)，隨后加入100 ill RPMI-1640培養(yǎng)液稀釋的重組 6His-pZP4抗原(10u g/ml,20u g/ml)或ConA(20 y g/ml，陽性對(duì)照)及 RPMI-1640 (空白對(duì) 照)，置于37°C ,5% C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h。培養(yǎng)結(jié)束前18h，每孔加20 u l3H_TdR(30 u Ci/ ml)。將每孔細(xì)胞用多頭細(xì)胞收集儀收集至凈化濾紙上，紅外線干燥后，放入閃爍液中，于3 射線計(jì)數(shù)儀測(cè)量cpm值。計(jì)算細(xì)胞增殖活性，以刺激指數(shù)(stimulateindex，SI)表示SI =(抗原刺激后cpm值-抗原未刺激cpm值)/抗原未刺激cpm值。2. 3. 4ELISA方法測(cè)定血清抗pZP4抗體滴度96孔酶標(biāo)板每孔加入100 ill含有0. 5 ii g重組6His-pZP4蛋白的包被緩沖液，4°C 過夜。PBST洗板3次，含5%小牛血清的PBST溶液37°C封閉lh。再洗板3次，將血清按一 定比例進(jìn)行3倍倍比稀釋后于37°C孵育lh，PBS作為陰性對(duì)照。再洗板6次，用辣根過氧 化物酶標(biāo)記的羊抗小鼠IgG抗體(1 1000稀釋)37°C孵育lh。再洗板6次，于各反應(yīng)孔 中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液100111，371孵育151^11，最后用211 H2S04 50 yl終止顯色 反應(yīng)。以630nm為參照波長(zhǎng)，測(cè)定0D450?？寡遄罡呦♂尪瘸赎栃哉?0D450彡0. 2)，其 稀釋度的倒數(shù)即為抗血清效價(jià)。2. 3. 5自身免疫性卵巢組織炎形態(tài)學(xué)觀察收集的卵巢經(jīng)10%中性福爾馬林固定，由實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)非知情人員進(jìn)行石蠟包埋、切 片，常規(guī)HE染色，在光學(xué)顯微鏡下計(jì)數(shù)黃體及各個(gè)時(shí)期濾泡數(shù)量。2. 4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 11. 5. 0的多因素方差分析模塊進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，P < 0. 05表示 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3實(shí)驗(yàn)結(jié)果3. 1陰道脫落細(xì)胞涂片改變卵巢的主要功能表現(xiàn)為周期性排卵及分泌相應(yīng)性激素水平的周期性變化，同時(shí)， 伴有陰道上皮細(xì)胞學(xué)的周期性變化。由于雌二醇分泌減少，造成動(dòng)情周期延長(zhǎng)，動(dòng)情期縮 短、動(dòng)情間期延長(zhǎng)，所以動(dòng)情周期的紊亂可以作為反映性激素分泌與代謝失衡的敏感指標(biāo)。 小鼠動(dòng)情周期一般為4 5天，包括動(dòng)情前期、動(dòng)情期、動(dòng)情后期和動(dòng)情間期。第2次免疫 后2周，正常對(duì)照組動(dòng)情周期無明顯變化，而抗原免疫組大多數(shù)小鼠周期變的不規(guī)則，主要 表現(xiàn)為動(dòng)情期延長(zhǎng)至2 4天或動(dòng)情間期延長(zhǎng)至3 5天。第3次免疫后1周，依據(jù)血清 E2含量篩選出造模成功小鼠50只，隨機(jī)分為實(shí)施例1藥物的高、中、低三個(gè)劑量組，雌激素 組和模型對(duì)照組5組，每組10只。在隨后的3周內(nèi)，正常對(duì)照組動(dòng)情周期未見明顯變化；模 型對(duì)照組大部分小鼠周期延長(zhǎng)至7 9天，或持續(xù)處于動(dòng)情間期；雌激素組周期紊亂，以動(dòng) 情期延長(zhǎng)為主，或持續(xù)處于動(dòng)情期；實(shí)施例1藥物的低劑量組小鼠周期變化與模型對(duì)照組 小鼠相似；實(shí)施例1藥物的中劑量組小鼠周期不規(guī)則，表現(xiàn)為動(dòng)情期或間期延長(zhǎng)；實(shí)施例1 藥物的高劑量組小鼠周期大多數(shù)為6 7天，動(dòng)情期2 3天，間期3 4天。3. 2各組小鼠的血清E2含量比較與模型組相比，雌激素組小鼠和實(shí)施例1藥物的高劑量組小鼠的血清氏濃度明顯升高，其差別具有顯著性意義(P < 0. 01)，見表1。
表1各組小鼠的血清E2濃度 注與正常組比較，AP<0.01 ；與模型組比較廣P<0.013. 3重組抗原體外誘導(dǎo)脾淋巴細(xì)胞增殖能力的測(cè)定不同濃度的重組6His_pZP4蛋白在體外均可誘導(dǎo)免疫后小鼠脾淋巴細(xì)胞發(fā)生增 殖，且增殖能力有正相關(guān)趨勢(shì)。與模型組比較，重組抗原誘導(dǎo)實(shí)施例1的本發(fā)明組合物中、 高劑量組小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖能力顯著降低(P < 0. 05)，誘導(dǎo)雌激素組小鼠脾淋巴細(xì)胞 的增殖能力沒有明顯變化(P > 0. 05)，見表2。表2重組抗原對(duì)各組小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的作用(SI，I 士SD) 注與模型組比較，*P < 0. 05 ；正常組中抗原未刺激的cpm值高于抗原刺激后的 cpm值3. 4各組小鼠血清抗pZP4抗體效價(jià)比較雌激素組小鼠和實(shí)施例1藥物各組小鼠的血清抗PZP4抗體滴度較模型組小鼠都 有下降，但只有實(shí)施例1藥物高劑量組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0. 05)，見表3。表3藥物對(duì)小鼠抗pZP4抗體滴度的影響 注與模型組相比，乍< 0.05;正常組的抗體滴度低于1 100
3. 5自身免疫性卵巢組織損傷的形態(tài)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。表4小鼠卵巢病理變化平均積分值(X±SD)
正常組 模型組 雌激素組 實(shí)施例1藥物高
劑量組 實(shí)施例1藥物中
劑量組 實(shí)施例1藥物低 劑量組注與模型組比較，*P< 0. 05，**P < 0.01光鏡下見模型組小鼠的卵巢組織表現(xiàn)為各期卵泡數(shù)量較正常組明顯減少，包括原 始卵泡、初級(jí)卵泡、次級(jí)卵泡；黃體數(shù)量減少，多數(shù)呈萎縮狀態(tài)，體積較小，中央部有較為明 顯的退行性變；卵巢間質(zhì)致密，有多量閉鎖卵泡和間質(zhì)腺(發(fā)育退變的卵泡)，未見明顯的 炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。雌激素組和實(shí)施例1藥物低、中、高劑量組各組小鼠卵巢組織各期卵泡數(shù) 及黃體數(shù)較正常組少，但較模型組增多，部分黃體細(xì)胞發(fā)育良好，部分有萎縮現(xiàn)象。其中 實(shí)施例1藥物高劑量組小鼠初級(jí)卵泡和次級(jí)卵泡的數(shù)量與模型組比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P < 0. 05)。4.結(jié)論上述各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果表明，本研究成功地建立了自身免疫性卵巢損傷的小鼠動(dòng) 物模型；實(shí)施例1藥物灌服模型組小鼠后，能改善卵巢的生殖內(nèi)分泌功能和卵巢內(nèi)各期卵 泡和黃體的發(fā)育狀況，并可在一定程度上抑制自身免疫損傷作用。三種不同劑量比較，以實(shí) 施例1藥物高劑量組的效果最佳，由此可以證明，本發(fā)明實(shí)施例1藥物具有治療卵巢早衰的 作用。采用與上述實(shí)驗(yàn)相同的方法對(duì)本發(fā)明實(shí)施例11組合物藥物中間體(以下簡(jiǎn)稱“實(shí) 施例11藥物”)、實(shí)施例14組合物藥物中間體(以下簡(jiǎn)稱“實(shí)施例14藥物”)的進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5、6、7、8、9、10、11、12 各組小鼠的血清E2含量比較，結(jié)果見表5，表6。表5各組小鼠的血清E2濃度
14 注與正常組比較，AP<0.01 ；與模型組比較廣P < 0. 01表6各組小鼠的血清氏濃度 注與正常組比較，△P<0.01；與模型組比較**P<0.01重組抗原體外誘導(dǎo)脾淋巴細(xì)胞增殖能力的測(cè)定，結(jié)果見表7，表8 。 表7重組抗原對(duì)各組小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的作用(SI，I 士SD) 注與模型組相比較，*P<0.05；正常組中抗原未刺激的CPM值高于抗原刺激后的cpm值表8重組抗原對(duì)各組小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)的作用(SI，Ｘ±ＳＤ) 注與模型組比較，*P < 0. 05 ；正常組中抗原未刺激的cpm值高于抗原刺激后的cpm值
各組小鼠血清抗PZP4抗體效價(jià)比較，結(jié)果見表9、表10。 表9藥物對(duì)小鼠抗pZP4抗體滴度的影響 注與模型組相比，乍< 0.05;正常組的抗體滴度低于1 100
表10藥物對(duì)小鼠抗pZP4抗體滴度的影響
注與模型組相比，乍< 0.05;正常組的抗體滴度低于1 100 自身免疫性卵巢組織損傷的形態(tài)學(xué)分析，結(jié)果見表11，表12。 表11小鼠卵巢病理變化平均積分值彳X±SD) 注與模型組比較，*P< 0. 05，**P < 0.01表12小鼠卵巢病理變化平均積分值(X±SD)
注與模型組比較，*P< 0. 05, **P < 0.01結(jié)論上述各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)結(jié)果表明，實(shí)施例11藥物與實(shí)施例14藥物灌服模型組小 鼠后，能改善卵巢的生殖內(nèi)分泌功能和卵巢內(nèi)各期卵泡和黃體的發(fā)育狀況，并可在一定程 度上抑制自身免疫損傷作用。三種不同劑量比較，以實(shí)施例11藥物與實(shí)施例14藥物的高 劑量組的效果最佳。綜上實(shí)驗(yàn)可以證明，本發(fā)明的中藥組合物可以有效治療卵巢早衰。有益效果1、本發(fā)明組合物的處方由熟地黃、山茱萸、當(dāng)歸、白芍、淫羊藿、丹參等中藥組成。 方中熟地黃、山茱萸滋陰補(bǔ)肝腎，當(dāng)歸、白芍、丹參補(bǔ)血、活血通經(jīng)；淫羊藿補(bǔ)腎陽；丹參還 可清心除煩。本發(fā)明的中藥組合物組方合理，配伍得當(dāng)，通過實(shí)驗(yàn)研究表明，本發(fā)明組合物 對(duì)于治療肝腎陰虛型卵巢早衰，效果顯著。2、本發(fā)明的中藥組合物處方中熟地黃中多糖成分具有補(bǔ)血和抗衰老作用，山茱萸 中多糖成分有抗氧化及抗衰老作用，當(dāng)歸中水溶性成份具有補(bǔ)血和調(diào)節(jié)免疫和物質(zhì)代謝的 功能。因此，熟地黃、山茱萸、當(dāng)歸采用加水煎煮、濃縮，浸膏經(jīng)兩次醇沉，取沉淀減壓干燥， 得到多糖部分。白芍中總皂苷類成分具有免疫調(diào)節(jié)、護(hù)肝、改善睡眠、抗缺氧作用，淫羊藿苷 對(duì)卵泡顆粒細(xì)胞分泌E2有直接刺激作用，也促進(jìn)腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞分泌皮質(zhì)酮，丹參的脂溶 性類有效成分具有抗血小板聚集和抗血栓形成，改善微循環(huán)作用，抗氧化損傷和高脂損傷， 多途徑發(fā)揮心肌、肝細(xì)胞保護(hù)作用和抗炎等多種作用。所以，丹參采用醇提濃縮干燥的方法 制備中間體，淫羊藿、白芍采用水煎煮醇沉，浸膏減壓干燥。將以上膏粉碎，混勻，即得本發(fā) 明組合物。本發(fā)明提供的制備方法簡(jiǎn)便，易操作，而且可以有效地提取得到組合物的有效成 分。3、本發(fā)明提供了多種藥物劑型的制備方法，將本發(fā)明組合物制備成一定的藥物劑 型能夠更加地方便服用，提高治療效果。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:膠囊劑處方熟地黃180g 山茱萸180g 當(dāng)歸180g白芍180g 淫羊藿180g 丹參90g
制備方法(1)取丹參，加入8倍量90%乙醇提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液， 減壓回收乙醇并濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別提取2次，每次1. 5小時(shí)，合并提 取液，減壓濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)70%， 靜置12小時(shí)，上清液減壓濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含 醇量達(dá)80%，靜置12小時(shí)，上清液減壓濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的 干膏II。(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入8倍量水提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃 縮至60°C相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)20%，充分?jǐn)嚢?，離 心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置12小時(shí)，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，加 入適量二氧化硅，干燥，粉碎，過篩，裝入膠囊，制1000粒。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5粒，一日3次。實(shí)施例2 膠囊劑熟地黃240g 山茱萸240g 當(dāng)歸160g白芍160g 淫羊藿160g丹參80g制備方法⑴取丹參，加入4倍量70 %乙醇提取3次，每次0. 5小時(shí)，合并提取
液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入8倍量水煎煮提取3次，每次0.5小時(shí)，合并提取液，濃縮， 放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)60 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá) 75%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入4倍量水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液， 濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)15 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá) 75%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，加 入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、木 糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇等稀釋輔料中的 一種或多種)，干燥，粉碎，過篩，裝入膠囊，制1000粒，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5粒，一日3次。實(shí)施例3 膠囊劑熟地黃210g山茱萸210g當(dāng)歸140g白芍140g 淫羊藿140g丹參140g。制備方法⑴取丹參，加入5倍量75%乙醇回流提取3次，每次0. 5小時(shí)，合并提
取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入9倍量水提取3次，每次0. 5小時(shí)，合并提取液，濃縮， 放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)60 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá) 75%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；
(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入12倍量水提取1次，每次3小時(shí)，合并提取液，濃 縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)15 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá) 75%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，加 入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、木 糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇等稀釋輔料中的 一種或多種)，干燥，粉碎，過篩，裝入膠囊，制1000粒，即得。實(shí)施例4 顆粒劑熟地黃240g 山茱萸240g 當(dāng)歸240g白芍160g 淫羊藿80g 丹參160g。制備方法⑴取丹參，加入6倍量75 %乙醇提取3次，每次0. 5小時(shí)，合并提取
液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入10倍量水提取3次，每次0. 5小時(shí)，合并提取液，濃縮， 放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)60 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá) 75%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入11倍量水提取1次，每次3小時(shí)，合并提取液，濃 縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)15 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá) 75%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，加 入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、木 糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇等稀釋輔料中 的一種或多種)，干燥，粉碎，加入合適的粘合劑(固體粘合劑如PEG200、PEG300、PEG400、 PEG600、PEG800、PEG1000、PEG1500、微晶纖維素等或液體粘合劑如乙醇、明膠漿、淀粉漿、糖 漿等一種或多種)，制粒，整粒制成顆粒劑lOOOg，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5克，一日3次。實(shí)施例5 片劑熟地黃180g 山茱萸180g 當(dāng)歸180g白芍120g 淫羊藿180g丹參120g。制備方法(1)取丹參，加入7倍量80%乙醇提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液， 濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入11倍量水提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液，濃縮，放冷， 加入乙醇使含醇量達(dá)65 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)80 %， 靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入10倍量水提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃
縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)20 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá) 80%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，入 適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇及其他藥劑學(xué)常用 的稀釋輔料等一種或多種)，混合，干燥，粉碎，加入適量的粘合劑(固體粘合劑如PEG200、 PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、PEG1000、PEG1500、高分子材料聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖 維素鈉、甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉等或液體粘合劑 如乙醇、明膠漿、淀粉漿等一種或多種)，制顆粒，加入潤(rùn)滑劑(如硬脂酸鎂、滑石粉、硬脂富 馬酸鈉等一種或多種)，整粒，總混，壓制成1000片，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5片，一日3次。實(shí)施例6:軟膠囊熟地黃300g 山茱萸150g 當(dāng)歸300g白芍100g 淫羊藿100g丹參100g。制備方法(1)取丹參，加入8倍量80%乙醇回流提取2次，每次1小時(shí)，合并提取 液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入12倍量水煎煮提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液，濃縮， 放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)65 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá) 80%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入9倍量水煎煮提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液， 濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)20 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá) 80%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，加 入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、木 糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇等稀釋輔料中的 一種或多種)，干燥，粉碎，與合適的輔料(如PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、 PEG1000、PEG1500及植物油系列等，防腐劑如山梨酸或鉀鹽、苯甲酸和丙酸等；增溶劑如吐 溫系列等一種或多種，抗氧化劑如亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉等一種或多種)，以任何方式混 勻后，裝入膠囊中，制成1000粒軟膠囊，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5粒，一日3次。實(shí)施例7: 口服液熟地黃150g 山茱萸150g 當(dāng)歸300g白芍250g 淫羊藿100g丹參150g。制備方法(1)取丹參，加入9倍量85%乙醇提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液， 濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入13倍量水提取2次，每次1. 5小時(shí)，合并提取液，濃縮， 放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)70 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá) 85%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入8倍量水提取2次，每次1. 5小時(shí)，合并提取液，濃 縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)25 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá) 85%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；
20
(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，加 入到沸水里，熱處理適當(dāng)時(shí)間，冷藏，濾過，加入輔料嬌味劑的如蔗糖、蜂蜜、木糖醇、甜菊 糖、麥芽糖醇等一種或多種；防腐劑如山梨酸或鉀鹽、苯甲酸和丙酸等一種或多種；增溶劑 如吐溫系列等，抗氧化劑如亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉等等一種或多種)，濾過，灌封，制成 lOOOmL，滅菌，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5毫升，一日3次。實(shí)施例8 濃縮丸熟地黃200g 山茱萸150g 當(dāng)歸200g白芍200g 淫羊藿200g丹參50g。制備方法⑴取丹參，加入10倍量85%乙醇提取1次，每次1. 5小時(shí)，合并提取
液，濃縮，得浸膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入14倍量水煎煮提取1次，每次1. 5小時(shí)，合并提取液，濃 縮，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)70 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量 達(dá)85%，靜置，取上清液濃縮，得浸膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入7倍量水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液， 濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)25 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá) 90%，靜置，取沉淀部分，得浸膏III ；(4)取以上I、II、III三份浸膏，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，泛制成 丸，低溫干燥，制成濃縮丸5000粒，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次10 15粒，一日3次。實(shí)施例9:咀嚼片熟地黃275g 山茱萸165g 當(dāng)歸110g白芍110g 淫羊藿220g丹參110g。制備方法⑴取丹參，加入11倍量90%乙醇回流提取1次，每次1. 5小時(shí)，合并
提取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入15倍量水提取1次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃縮，放冷， 加入乙醇使含醇量達(dá)75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)90 %， 靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入6倍量水提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液，濃縮至 浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)30 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá)95 %， 靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體， 加入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、 木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖或甘露糖醇等稀釋輔料 中的一種或多種)混合，干燥，粉碎，得到細(xì)粉與適量的粘合劑(固體粘合劑如PEG200、 PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、PEG1000、PEG1500、高分子材料聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖 維素鈉、甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉等等或液體粘合劑如乙醇、淀粉漿、糊精漿等一種或多種)混合制顆粒，加入適量矯味劑(如甘露醇、蔗糖、 木糖醇、甜菊糖、麥芽糖醇、薄荷腦、四丁醇、橙皮油、桂皮油、各種香精等一種或多種)、潤(rùn)滑 劑(如硬脂酸鎂、滑石粉、硬脂富馬酸鈉、月桂醇硫酸鎂等一種或多種)、崩解劑(如羧甲基 淀粉鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基纖維素、預(yù)膠化淀粉、微 晶纖維素、大豆多糖、海藻酸、處理瓊脂等一種或多種)整粒，總混，壓制成1000片，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5片，一日3次。實(shí)施例10 滴丸熟地黃200g 山茱萸120g 當(dāng)歸200g白芍200g 淫羊藿160g丹參120g。制備方法⑴取丹參，加入12倍量90%乙醇提取1次，每次2小時(shí)，合并提取液，
濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量水煎煮提取1次，每次2. 5小時(shí)，合并提取液，濃 縮，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量 達(dá)90%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入5倍量水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液， 濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)30 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá) 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體，將 聚乙二醇-4000與浸膏粉以1 6 1 5的比例熔融混合，甲基硅油作冷卻劑，滴制成滴 丸1000粒，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5粒，一日3次。實(shí)施例11 膠囊劑處方熟地黃180g 山茱萸180g 當(dāng)歸180g 白芍180g淫羊藿180g丹參90g 桂枝180g制備方法(1)取丹參，加入8倍量90%乙醇提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液， 減壓回收乙醇并濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別提取2次，每次1.5小時(shí)，合并提 取液，減壓濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)70%， 靜置12小時(shí)，上清液減壓濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含 醇量達(dá)80%，靜置12小時(shí)，上清液減壓濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的 干膏II。(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入8倍量水提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃 縮至60°C相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)20%，充分?jǐn)嚢?，離 心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置12小時(shí)，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III ；(4)取桂枝加入8倍量水提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，備用； 藥渣加入8倍量75%乙醇提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體， 加入適量二氧化硅，干燥，粉碎，過篩，裝入膠囊，制1000粒。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5粒，一日3次。實(shí)施例12:顆粒劑熟地黃240g 山茱萸240g 當(dāng)歸240g 白芍160g淫羊藿80g 丹參160g 桂枝100g制備方法⑴取丹參，加入6倍量75%乙醇回流提取3次，每次0. 5小時(shí)，合并提
取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入10倍量水煎煮提取3次，每次0. 5小時(shí)，合并提取液，濃 縮，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)60 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量 達(dá)75%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入11倍量水煎煮提取1次，每次3小時(shí)，合并提取液， 濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)15 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá) 75%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桂枝加入6倍量水煎煮提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，備 用；藥渣加入6倍量80%乙醇回流提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，與水煎 煮提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體， 加入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、 木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇等稀釋輔料中 的一種或多種)，干燥，粉碎，加入合適的粘合劑(固體粘合劑如PEG200、PEG300、PEG400、 PEG600、PEG800、PEG1000、PEG1500、微晶纖維素等或液體粘合劑如乙醇、明膠漿、淀粉漿、糖 漿等一種或多種)，制粒，整粒制成顆粒劑lOOOg，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5克，一日3次。實(shí)施例13 片劑熟地黃240g 山茱萸240g 當(dāng)歸240g 白芍160g淫羊藿80g 丹參160g 桂枝180g制備方法(1)取丹參，加入7倍量80%乙醇提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液， 濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入11倍量水提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液，濃縮，放冷， 加入乙醇使含醇量達(dá)65 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)80 %， 靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入10倍量水提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃
縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)20 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá) 80%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桂枝加入12倍量水提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，備用；藥渣加入9倍量85%乙醇提取2次，每次3小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提取得到的 浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間 體，入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、 木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇及其他藥劑 學(xué)常用的稀釋輔料等一種或多種)，混合，干燥，粉碎，加入適量的粘合劑(固體粘合劑如 PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、PEG1000、PEG1500、高分子材料聚乙烯吡咯烷酮、 羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉等或液 體粘合劑如乙醇、明膠漿、淀粉漿等一種或多種)，制顆粒，加入潤(rùn)滑劑(如硬脂酸鎂、滑石 粉、硬脂富馬酸鈉等一種或多種)，整粒，總混，壓制成1000片，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5片，一日3次。實(shí)施例14 膠囊劑處方熟地黃180g 山茱萸180g 當(dāng)歸180g 白芍180g淫羊藿180g丹參90g 桃仁180g。制備方法⑴取丹參，加入8倍量90%乙醇提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液， 減壓回收乙醇并濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別提取2次，每次1. 5小時(shí)，合并提 取液，減壓濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)70%， 靜置12小時(shí)，上清液減壓濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含 醇量達(dá)80%，靜置12小時(shí)，上清液減壓濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的 干膏II。(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入8倍量水提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃 縮至60°C相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)20%，充分?jǐn)嚢?，離 心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置12小時(shí)，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III (4)取桃仁加入8倍量水提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，備用； 藥渣加入8倍量75%乙醇提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提取得到的 浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體， 加入適量二氧化硅，干燥，粉碎，過篩，裝入膠囊，制1000粒。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5粒，一日3次。實(shí)施例15 軟膠囊熟地黃300g 山茱萸150g 當(dāng)歸300g 白芍100g淫羊藿100g丹參100g 桃仁180g。制備方法⑴取丹參，加入8倍量80%乙醇回流提取2次，每次1小時(shí)，合并提取 液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入12倍量水提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)65 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)80 %， 靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入9倍量水提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃縮至 浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)20 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá)80 %， 靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桃仁加入12倍量水提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，備用； 藥渣加入9倍量75%乙醇回流提取2次，每次1. 5小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提取 得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體， 加入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、 木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇等稀釋輔料中 的一種或多種)，干燥，粉碎，與合適的輔料(如PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、 PEG1000、PEG1500及植物油系列等，防腐劑如山梨酸或鉀鹽、苯甲酸和丙酸等；增溶劑如吐 溫系列等一種或多種，抗氧化劑如亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉等一種或多種)，以任何方式混 勻后，裝入膠囊中，制成1000粒軟膠囊，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5粒，一日3次。實(shí)施例16: 口服液熟地黃300g 山茱萸150g 當(dāng)歸300g 白芍100g淫羊藿100g丹參100g 桃仁150g。制備方法(1)取丹參，加入9倍量85%乙醇提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液， 濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入13倍量水煎煮提取2次，每次1. 5小時(shí)，合并提取液，濃 縮，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)70 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量 達(dá)85%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入8倍量水煎煮提取2次，每次1. 5小時(shí)，合并提取液， 濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)25 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá) 85%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桃仁加入7倍量水煎煮提取3次，每次1. 5小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏， 備用；藥渣加入10倍量85%乙醇提取1次，3小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，與水煎煮提取 得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體， 加入到沸水里，熱處理適當(dāng)時(shí)間，冷藏，濾過，加入輔料嬌味劑的如蔗糖、蜂蜜、木糖醇、甜 菊糖、麥芽糖醇等一種或多種；防腐劑如山梨酸或鉀鹽、苯甲酸和丙酸等一種或多種；增溶 劑如吐溫系列等，抗氧化劑如亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉等等一種或多種)，濾過，灌封，制成 lOOOmL，滅菌，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5毫升，一日3次。實(shí)施例17 濃縮丸
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處方熟地黃180g 山茱萸180g 當(dāng)歸180g 白芍180g淫羊藿180g丹參90g 知母180g。制備方法(1)取丹參，加入8倍量90%乙醇提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液， 減壓回收乙醇并濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別提取2次，每次1. 5小時(shí)，合并提 取液，減壓濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)70%， 靜置12小時(shí)，上清液減壓濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含 醇量達(dá)80%，靜置12小時(shí)，上清液減壓濃縮至60°C相對(duì)密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的 干膏II。(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入8倍量水提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃 縮至60°C相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)20%，充分?jǐn)嚢?，離 心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置12小時(shí)，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III ；(4)取桃仁加入8倍量水提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，備用； 藥渣加入8倍量75%乙醇提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提取得到的 浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體， 泛制成丸，低溫干燥，制成濃縮丸5000粒，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次10 15粒，一日3次。實(shí)施例18 咀嚼片熟地黃300g 山茱萸150g 當(dāng)歸300g 白芍100g淫羊藿100g丹參100g 知母130g。制備方法(1)取丹參，加入8倍量80%乙醇回流提取2次，每次1小時(shí)，合并提取 液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入12倍量水煎煮提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液，濃縮， 放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)65 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá) 80%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入9倍量水煎煮提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液， 濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)20 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá) 80%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桃仁加入12倍量水煎煮提取3次，每次1小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，備 用；藥渣加入9倍量75%乙醇回流提取2次，每次1. 5小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，與水 煎煮提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間 體，加入適量輔料(如二氧化硅、糊精、淀粉、磷酸鹽、碳酸鹽、甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀 鹽、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖或甘露糖醇等稀釋輔 料中的一種或多種)混合，干燥，粉碎，得到細(xì)粉與適量的粘合劑(固體粘合劑如PEG200、 PEG300、PEG400、PEG600、PEG800、PEG1000、PEG1500、高分子材料聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、低取代羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉等等或液體粘合 劑如乙醇、淀粉漿、糊精漿等一種或多種)混合制顆粒，加入適量矯味劑(如甘露醇、蔗糖、 木糖醇、甜菊糖、麥芽糖醇、薄荷腦、四丁醇、橙皮油、桂皮油、各種香精等一種或多種)、潤(rùn)滑 劑(如硬脂酸鎂、滑石粉、硬脂富馬酸鈉、月桂醇硫酸鎂等一種或多種)、崩解劑(如羧甲基 淀粉鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基纖維素、預(yù)膠化淀粉、微 晶纖維素、大豆多糖、海藻酸、處理瓊脂等一種或多種)整粒，總混，壓制成1000片，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5片，一日3次。實(shí)施例19 滴丸熟地黃300g 山茱萸150g 當(dāng)歸300g 白芍100g淫羊藿100g丹參100g 知母170g。制備方法(1)取丹參，加入9倍量85%乙醇回流提取2次，每次1小時(shí)，合并提取 液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入13倍量水提取2次，每次1. 5小時(shí)，合并提取液，濃縮， 放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)70 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá) 85%，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入8倍量水提取2次，每次1. 5小時(shí)，合并提取液，濃 縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)25 %，攪拌，離心，取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá) 85%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桃仁加入7倍量水提取3次，每次1.5小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，備用； 藥渣加入10倍量85%乙醇提取1次，3小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸膏，與水提取得到的浸 膏合并，混勻，干燥，得干膏VI;(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，即為本發(fā)明中藥組合物藥物中間體， 將聚乙二醇-4000與浸膏粉以1 6 1 5的比例熔融混合，甲基硅油作冷卻劑，滴制成 滴丸1000粒，即得。功能主治用于卵巢早衰。用法用量口服。一次3 5粒，一日3次。
2權(quán)利要求
一種治療卵巢早衰的中藥組合物，其特征在于該組合物是由包含如下重量份的中藥原料制成的熟地黃 2～6 山茱萸2～6 當(dāng)歸2～6 白芍2～6淫羊藿 2～6 丹參1～3。
2.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該組合物是由如下重量份的中藥原料 制成的熟地黃2山茱萸2當(dāng)歸2白芍2 淫羊藿2丹參1。
3.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該組合物是由如下重量份的中藥原料 制成的熟地黃3山茱萸3當(dāng)歸2白芍2 淫羊藿2丹參1。
4.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該組合物是由如下重量份的中藥原料 制成的熟地黃3山茱萸3當(dāng)歸2白芍2 淫羊藿2丹參2。
5.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該組合物是由如下重量份的中藥原料 制成的熟地黃2 6 山茱萸2 6 當(dāng)歸2 6 白芍2 6 淫羊藿2 6丹參1 3 桂枝2 6。
6.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該組合物是由如下重量份的中藥原料 制成的熟地黃2 6 山茱萸2 6 當(dāng)歸2 6 白芍2 6 淫羊藿2 6 丹參1 3 桃仁2 6。
7.如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該組合物是由如下重量份的中藥原料 制成的熟地黃2 6 山茱萸2 6 當(dāng)歸2 6 白芍2 6 淫羊藿2 6 丹參1 3 知母2 6。
8.如權(quán)利要求1 4所述的中藥組合物，其特征在于制備方法為(1)取丹參，加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次0.5 2小時(shí)，合并 提取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入8 20倍量水提取1 3次，每次0.5 2. 5小時(shí)，合并提取 液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)60 % 75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入 乙醇使含醇量達(dá)75 % 90 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并提取 液，濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)15% 30 %，攪拌，離心，靜置，取上清液，加入 乙醇使含醇量達(dá)75% 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。
9.如權(quán)利要求8所述的中藥組合物制備方法，其特征在于(1)取丹參，加入8倍量90%乙醇提取2次，每次1小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇并 濃縮至相對(duì)密度為1. 15 1. 20的浸膏，減壓干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入16倍量與14倍量水分別提取2次，每次1.5小時(shí)，合并提取 液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)70%，靜置，上 清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)80%，靜置，上 清液減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 20的浸膏，減壓干燥，的干膏II。(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入8倍量水提取2次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至 相對(duì)密度為1. 10 1. 15的浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)20%，充分?jǐn)嚢?，離心，，靜置， 取上清液，加入乙醇使含醇量達(dá)85%，靜置，取沉淀部分常壓干燥，得干膏III ；(4)取以上I、II、III三份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。
10.如權(quán)利要求5所述的中藥組合物，其特征在于制備方法為(1)取丹參，加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次0.5 2小時(shí)，合并 提取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入8 20倍量水提取1 3次，每次0.5 2. 5小時(shí)，合并提取 液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)60 % 75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入 乙醇使含醇量達(dá)75 % 90 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并提取 液，濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)15% 30%，攪拌，離心，靜置，取上清液，加入 乙醇使含醇量達(dá)75% 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桂枝加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸 膏，備用；藥渣加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并提取 液，濃縮至浸膏，與水提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。
11.如權(quán)利要求6所述的中藥組合物，其特征在于制備方法為(1)取丹參，加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次0.5 2小時(shí)，合并 提取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入8 20倍量水提取1 3次，每次0.5 2. 5小時(shí)，合并提取 液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)60 % 75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入 乙醇使含醇量達(dá)75 % 90 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并提取 液，濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)15% 30%，攪拌，離心，靜置，取上清液，加入 乙醇使含醇量達(dá)75% 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取桃仁加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸 膏，備用；藥渣加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并提取 液，濃縮至浸膏，與水提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。
12.如權(quán)利要求7所述的中藥組合物，其特征在于制備方法為(1)取丹參，加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次0.5 2小時(shí)，合并 提取液，濃縮干燥，得干膏I ；(2)取白芍、淫羊藿加入8 20倍量水提取1 3次，每次0.5 2. 5小時(shí)，合并提取 液，濃縮，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)60 % 75 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，放冷，加入 乙醇使含醇量達(dá)75 % 90 %，靜置，取上清液濃縮至浸膏，干燥，得干膏II ；(3)取當(dāng)歸、熟地、山茱萸加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并提取 液，濃縮至浸膏，放冷，加入乙醇使含醇量達(dá)15% 30%，攪拌，離心，靜置，取上清液，加入 乙醇使含醇量達(dá)75% 95%，靜置，取沉淀部分干燥，得干膏III ；(4)取知母加入4 12倍量水提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并提取液，濃縮至浸 膏，備用；藥渣加入4 12倍量70% 90%乙醇提取1 3次，每次1 3小時(shí)，合并提取 液，濃縮至浸膏，與水提取得到的浸膏合并，混勻，干燥，得干膏VI ；(5)取以上I、II、III、VI四份干膏粉碎，混勻，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。
13.如權(quán)利要求8 12所述的制備方法，其特征在于采用藥劑學(xué)中常規(guī)的制藥方法制 備成片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、軟膠囊、口服液體制劑。
14.如權(quán)利要求1 7所述的中藥組合物，其特征在于該組合物在制備治療卵巢早衰藥 物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種治療卵巢早衰的中藥組合物，該組合物是由包含如下重量份的中藥原料制成的熟地黃2～6重量份，山茱萸2～6重量份，當(dāng)歸2～6重量份，白芍2～6重量份，淫羊藿2～6重量份，丹參1～3重量份。本發(fā)明還提供了上述的中藥組合物的制備方法，可將中藥組合物制備成片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、軟膠囊、口服液體制劑的技術(shù)方案。
文檔編號(hào)A61P15/08GK101850016SQ20091013407
公開日2010年10月6日 申請(qǐng)日期2009年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月31日
發(fā)明者劉濤, 孫永城, 尚強(qiáng), 李淼, 王振中, 章晨峰, 蕭偉, 鄒燕萍 申請(qǐng)人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司