專利名稱：丹參酮在治療血管平滑肌細胞異常增殖疾病藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及中藥丹參提取物丹參酮的用途，特別涉及丹參酮在制備治療以血管平滑肌細胞異常增殖為主要病理變化特征的疾病的藥物中的應用。
背景技術：
丹參系唇形科鼠尾草屬植物的根，為常用的活血化瘀中藥。其性微寒，味苦、無毒。有活血通經(jīng)、涼血消腫、除煩清心的功能。丹參有15種成分，它們是丹參酮I(I)、丹參酮IIA(II)、丹參酮IIB(III)、隱丹參酮(IV)、異丹參酮I(V)、異丹參酮IIA(VI)、異隱丹參酮(VII)、羥基丹參酮IIA(VIII)、丹參酸甲酯(IX)、Miltirone(X)、Salviol(XI)、二氫丹參酮I(XII)、丹參新醌甲(XIII)、丹參新醌乙(XIV)和丹參新醌丙(XV)。因此，可用丹參提取丹參酮。
丹參酮制備的藥物已在臨床上獲得了應用，但通常用于扁桃體炎、耳癤、化膿性骨髓炎、燒傷中的金葡萄菌感染的治療，冠心病的治療，抗動脈粥樣硬化。
中國專利申請99121460.9公開了丹參酮的一種新用途，即在制備治療腫瘤藥物中的應用。
目前，器官移植存活率較低，皮腔內(nèi)冠脈成形術(PTCA術)后再狹窄率高達30％～50％，這些疾病嚴重威脅人類健康。研究發(fā)現(xiàn)，這些疾病有一個共同的病理特征，即血管平滑肌細胞異常增殖，而現(xiàn)有的抑制血管平滑肌細胞異常增殖的藥物有尼群地平、激素(如雄二醇)、胸苷激酶基因等，使用這些藥物治療不僅費用高，而且療效不明顯，尤其是激素對人體的副作用較大。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對現(xiàn)有技術存在的不足，提供一種丹參酮的新用途，即在制備治療以血管平滑肌細胞異常增殖為主要病理變化特征的疾病的藥物中的應用。
為了便于理解本發(fā)明，下面以丹參酮IIA的藥理試驗及結(jié)果予以說明。將從丹參中提取的丹參酮IIA用四甲基偶氮唑蘭比色法測定細胞線粒體脫氫酶活性，用以評價丹參酮IIA的細胞毒性；在堿性纖維母細胞生長因子誘導的人血管平滑肌細胞增殖模型上，用氫標胸腺嘧啶脫氧核苷摻入法觀察該藥對DNA合成的影響；用細胞計數(shù)法測定該藥對血管平滑肌細胞增殖的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在無細胞毒性的濃度范圍內(nèi)，丹參酮IIA劑量依賴性的抑制堿性纖維母細胞生長因子誘導的人血管平滑肌細胞DNA的合成，IC50為2.8μmol/L，丹參酮IIA15μmol/L孵育6天，顯著抑制細胞增殖(P＜0.05)。
將體外培養(yǎng)的家兔主動脈中膜平滑肌細胞和第三代亞融合的肺動脈平滑肌細胞(PASMC)用丹參酮IIA作藥理試驗表明巨噬細胞源性生長因子可明顯促進血管平滑肌細胞c-myc基因高表達，丹參酮IIA具有阻止巨噬細胞源性生長因子刺激血管平滑肌細胞的作用，使c-myc基因表達水平下降；丹參酮IIA硫酸鈉能明顯抑制PASMC由G期進入S期(P＜0.05)，使PASMC增殖細胞核抗原的表達及PDGF-A和B鏈mRNA的表達均顯著降低(P＜0.01)。
丹參酮IIA的上述藥理試驗及結(jié)果提示，丹參酮對生長因子為始因引起的皮腔內(nèi)冠脈成形術后再狹窄、移植器官動脈硬化、慢性高血壓等疾病具有積極的治療作用。
丹參酮藥物的制備取一定量丹參，粉碎后裝入索氏提取器，用5～7倍量60～95％乙醇回流，每次3～5小時，共提取2～3次，合并提取液，然后將提取液濃縮、噴霧干燥即可得丹參酮粉末，將丹參酮粉末加入藥學上允許的載體或賦形劑和可選的其它成分，即可制備成各種劑型的藥物，給藥方式有口服和注射。
本發(fā)明具有以下有益效果1、發(fā)掘了丹參酮的新醫(yī)療用途，開拓了一個新的應用領域。
2、丹參酮對血管平滑肌細胞的異常增殖有很強的抑制作用，因而用該物質(zhì)配制的藥物對防治以血管平滑肌細胞異常增殖為主要病理變化特征的疾病有良好的療效，有利于改變目前國際國內(nèi)此類疾病有效治療藥物嚴重缺乏的現(xiàn)狀，推動器官移植學與介入治療學的發(fā)展。
3、丹參酮為丹參的提取物，毒副作用小，藥理作用強，具有良好的藥用前景。
4、丹參來源豐富、價廉，丹參酮的提取工藝簡單，因而具有很好的工業(yè)化應用前景。
具體實施例方式
下面通過實施例的描述，進一步說明但不限制本發(fā)明。
實施例1 丹參酮IIA抑制人血管平滑肌細胞增殖的體外研究將體外培養(yǎng)的人動脈平滑肌細胞分為5組，分別為空白組及不同劑量的丹參酮IIA組，劑量分別為75μmol/L，15μmol/L，3μmol/L，0.6μmol/L。用四甲基偶氮唑蘭比色法測定細胞線粒體脫氫酶活性，以評價丹參酮IIA的細胞毒性；在堿性纖維母細胞生長因子誘導的人血管平滑肌細胞增殖模型上，用氫標胸腺嘧啶脫氧核苷摻入法觀察該藥對DNA合成的影響；用細胞計數(shù)法測定該藥對血管平滑肌細胞增殖的影響；用t檢驗進行統(tǒng)計學處理。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)，75μmol/L劑量組有細胞毒性，在無細胞毒性的其他濃度范圍內(nèi)，丹參酮IIA劑量依賴性的抑制堿性纖維母細胞生長因子誘導的人血管平滑肌細胞DNA的合成，IC50為2.8μmol/L，丹參酮IIA15μmol/L孵育6天，顯著抑制細胞增殖(P＜0.05)。
實施例2 丹參酮IIA抑制巨噬細胞源性生長因子刺激血管平滑肌細胞c-myc基因表達的實驗研究將體外培養(yǎng)的家兔主動脈中膜平滑肌細胞，5天換液一次，培養(yǎng)15天。再分別用正常對照組培養(yǎng)液(含5％PPS的DMEM，不含生長因子)、陽性刺激組培養(yǎng)液(即Mp-CM，含巨噬細胞源性生長因子)、丹參酮IIA實驗組培養(yǎng)液(含20mg/L丹參酮IIA的Mp-CM)培養(yǎng)。48小時后，用含4％(W/V)多聚甲醛、0.1％戊二醛和4％蔗糖的PBS(pH7.4)洗3次，每次10分鐘，用DEPC處理過的雙蒸水洗1次，然后浸入70％乙醇中保存。將保存的雜交樣品用c-myc基因探針進行細胞內(nèi)原位雜交，顯微鏡下進行陽性細胞計數(shù)。
結(jié)果表明，巨噬細胞源性生長因子可明顯促進血管平滑肌細胞c-myc基因高表達，丹參酮IIA具有阻止巨噬細胞源性生長因子刺激血管平滑肌細胞的作用，使c-myc基因表達水平下降，表明丹參酮IIA可通過降低c-myc表達而抑制血管平滑肌細胞異常增殖。
實施例3 丹參酮IIA硫酸鈉對低氧誘導肺血管平滑肌細胞增殖的影響研究取第三代亞融合的肺動脈平滑肌細胞(PASMC)，按加入培養(yǎng)液的不同分為6組正常對照組(N)、正常加藥對照組(N+DS201)、常氧內(nèi)皮細胞培養(yǎng)液組(NECCM)、NECCM+DS201組、低氧內(nèi)皮細胞培養(yǎng)液組(HECCM)、HECCM+DS201組。各加藥組藥物濃度均為5μmol/L。分組培養(yǎng)24小時后，經(jīng)固定后行免疫細胞化學染色，光鏡下由各組隨機選取20個陽性PASMC，用TJTY-300型全自動圖像分析儀檢測胞漿及核內(nèi)雜交顆粒的平均光密度值(OD值)。取第三代亞融合的PASMC分組繼續(xù)培養(yǎng)24小時，1g/L胰蛋白酶消化后制備成單細胞懸液。PBS洗滌2次，700ml/L冷乙醇(4℃)固定2小時，碘化吡啶染色30分鐘，用FACsort型流式細胞儀(FCM)分析PASMC細胞周期中各期細胞數(shù)占細胞總數(shù)的百分值。用PDGF-AcDNA片段和PDGF-BcDNA片段作為探針進行細胞原位雜交，并對細胞增殖周期進行分析。對所測得的數(shù)據(jù)用t檢驗進行統(tǒng)計學處理。
結(jié)果發(fā)現(xiàn)，丹參酮IIA硫酸鈉能明顯抑制PASMC由G期進入S期(P＜0.05)，使PASMC增殖細胞核抗原的表達及PDGF-A和B鏈mRNA的表達均顯著降低(P＜0.01)。提示，丹參酮IIA硫酸鈉可能通過下調(diào)PDGFmRNA基因表達而有效抑制HECCM誘導的PASMC增殖。
權利要求
1.丹參酮在制備治療以血管平滑肌細胞異常增殖為主要病理變化特征的疾病的藥物中的應用。
2.根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于以血管平滑肌細胞異常增殖為主要病理變化特征的疾病包括皮腔內(nèi)冠脈成形術后再狹窄、移植器官動脈硬化、慢性高血壓。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的應用，其特征在于丹參酮為丹參酮IIA。
全文摘要
本發(fā)明涉及丹參酮在制備治療以血管平滑肌細胞異常增殖為主要病理變化特征的疾病的藥物中的應用。藥理試驗表明，在無細胞毒性的濃度范圍內(nèi)，丹參酮IIA劑量依賴性的抑制堿性纖維母細胞生長因子誘導的人血管平滑肌細胞DNA的合成，IC50為2.8μmol/L，丹參酮IIA15mol/L孵育6天，顯著抑制細胞增殖(P＜0.05)。上述藥理試驗提示，丹參酮對生長因子為始因引起的皮腔內(nèi)冠脈成形術后再狹窄、移植器官動脈硬化、慢性高血壓等疾病具有積極治療作用。
文檔編號A61K31/343GK1489999SQ0213391
公開日2004年4月21日 申請日期2002年10月18日 優(yōu)先權日2002年10月18日
發(fā)明者杜俊蓉 申請人:四川大學