專利名稱：一種奈拉濱的合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種奈拉濱的合成方法。
本申請的化學(xué)合成是指有機(jī)化學(xué)中合成方法，即使用有機(jī)物質(zhì)、有機(jī)溶劑制備成化合物的方法，制備過程中不使用任何生物學(xué)方法，比如酶法等。
背景技術(shù)：
T-ALL和T-LBL是兩種惡化速度非?？斓募膊?，它們嚴(yán)重影響著機(jī)體的造血功能。T-ALL在我國急性淋巴細(xì)胞白血病(急淋)的發(fā)病率僅次于普通型急淋(C-ALL)，占急淋發(fā)病的第二位。T細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞性白血病通常發(fā)病于較大的兒童、青少年和青年，較B細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞性白血病不太常見。美國每年大約有1600名成人和兒童被診斷患有T-ALL或T-LBL。隨著環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷和左旋門冬酰胺酶的應(yīng)用，T-細(xì)胞淋巴細(xì)胞白血病和T-細(xì)胞淋巴母細(xì)胞瘤的反應(yīng)率和生存率有了很大的改觀。但對于復(fù)發(fā)病人的補(bǔ)救化療方案的效果有限，反應(yīng)率低，許多病人必須進(jìn)行骨髓抑制，而緩解的病人進(jìn)行骨髓移植更有效。開發(fā)特異性地針對惡性T-細(xì)胞的化合物是關(guān)鍵的。
核苷類似物被證明是治療血液系統(tǒng)腫瘤的相當(dāng)成功的細(xì)胞毒藥物。脫氧鳥苷酸類似物9-β-D-arabinofuranosylguanine(ara-G)發(fā)現(xiàn)于20世紀(jì)60年代，但由于溶解性差而未能用于臨床。但開始于70年代的對嘌呤核苷磷酸酶(PNP)缺陷癥的研究則為開發(fā)脫氧鳥苷類似物提供了有益的思路。PNP催化脫氧鳥苷酸，缺乏PNP的病人出現(xiàn)了dGTP-介導(dǎo)的T-細(xì)胞淋巴細(xì)胞減少癥，而B細(xì)胞的數(shù)量卻沒有降低。這表明脫氧鳥苷酸類似物可以用來治療T-細(xì)胞惡性腫瘤，如T-ALL。實(shí)際上ara-G就選擇性地對T細(xì)胞有細(xì)胞毒作用。之后開發(fā)了ara-G的水溶性前藥奈拉濱。奈拉濱是脫氧鳥苷類似物9-β-D-阿糖呋喃糖鳥嘌呤(ara-G)的前體藥。在腺苷脫氨酶(ADA)的作用下，奈拉濱去甲基化生成ara-G，經(jīng)脫氧鳥苷激酶和脫氧胞嘧啶核苷激酶依次單磷酸化生成活性的5′-三磷酸鹽，ara-GTP。ara-GTP可在白血病原始細(xì)胞中積累，并與DNA相結(jié)合，最終導(dǎo)致抑制DNA合成和細(xì)胞死亡。臨床和藥物代謝研究發(fā)現(xiàn)奈拉濱是一種在血漿中可產(chǎn)生ara-G，在白血病細(xì)胞中可產(chǎn)生ara-GTP的前藥。奈拉濱被腺苷脫氨酶去甲基形成ara-G，在細(xì)胞內(nèi)被進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為活性形式ara-GTP，ara-GTP摻入到DNA可導(dǎo)致DNA合成的終止和細(xì)胞死亡。奈拉濱為罹患這兩種罕見但致命疾病的患者帶來了希望。
專利“EP 0294114”公開了奈拉濱的制備工藝，但該工藝方法以2-氨基-6-甲氧基嘌呤和尿嘧啶阿糖苷為原料，使用生化法得目標(biāo)產(chǎn)物奈拉濱，該方案的難點(diǎn)在于菌種較難得到，反應(yīng)時間太長，將近一個月，對設(shè)備要求較嚴(yán)格，因此，該工藝方法制備得到的奈拉濱的造價相當(dāng)昂貴，會給患者帶來巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)；文獻(xiàn)也公開奈拉濱的合成工藝，該工藝以2-氨基-6-氯嘌呤為原料，經(jīng)甲醇親核取代，2，3，5-三-氧-芐基-1-氧-對硝基苯甲酰-D-阿拉伯呋喃糖經(jīng)氯化，兩者縮合可得，該方案的難點(diǎn)在于起始原料2，3，5-三-氧-芐基-1-氧-對硝基苯甲酰-D-阿拉伯呋喃糖價格昂貴且來源有限，奈拉濱收率也不高，同樣，得到奈拉濱造價昂貴，會給患者帶來巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)；因此，研究開發(fā)出一種經(jīng)濟(jì)可行的合成奈拉濱的工藝方法，是很多醫(yī)藥工作者的希望。

發(fā)明內(nèi)容
基于上述原因，我們科研人員通過長期的研究發(fā)現(xiàn)一種非常經(jīng)濟(jì)、適合工業(yè)化化生產(chǎn)合成奈拉濱的工藝方法，該合成工藝是以6-氯鳥苷為原料，該原料具有易得、價格低的特點(diǎn)，以6-氯鳥苷為原料，經(jīng)多步反應(yīng)將呋喃核糖構(gòu)型轉(zhuǎn)換為呋喃阿拉伯糖制得奈拉濱。該路線起始原料廉價易得，合成步驟較短，操作較簡便，得率高，得到奈拉濱造價不高，降低了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。反應(yīng)過程如下所示 以6-氯鳥苷為原料，將呋喃核糖構(gòu)型轉(zhuǎn)換為呋喃阿拉伯糖還可以應(yīng)用1，3-二氯-1，1，3，3-四異丙基二硅氧烷或其它有機(jī)試劑進(jìn)行基團(tuán)保護(hù)，可以進(jìn)一步縮短上述實(shí)驗(yàn)步驟；本申請奈拉濱具體如下奈拉濱的化學(xué)結(jié)構(gòu)式、分子式、分子量中文名奈拉濱；漢語拼音Nailabin；英文名nelarabine；英文化學(xué)名2-amino-9-β-D-arabinofuranosyl-6-methoxy-9H-purine；中文化學(xué)名2-氨基-9-β-D-阿拉伯呋喃糖基-6-甲氧基-9H-嘌呤
分子式C11H15N5O5分子量297.27本申請通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
一種奈拉濱的合成方法，以6-氯鳥苷為原料，經(jīng)化學(xué)合成將呋喃核糖構(gòu)型轉(zhuǎn)換為呋喃阿拉伯糖制得奈拉濱。
一種奈拉濱的合成方法，其中化學(xué)合成方法為，以6-氯鳥苷為原料，經(jīng)化學(xué)合成的制備成6-甲氧基鳥苷，6-甲氧基鳥苷經(jīng)化學(xué)合成制備成2′，3′，5′三-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷，2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鳥苷經(jīng)化學(xué)合成制備成3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷，2′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷經(jīng)化學(xué)合成制備成2′-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鳥苷，2′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鳥苷經(jīng)化學(xué)合成制備成2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤，2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤經(jīng)化學(xué)合成制備成奈拉濱。
其中6-甲氧基鳥苷的制備方法為取甲醇鈉加入到甲醇中，攪拌，得白色渾濁液，加入6-氯鳥苷物料迅速溶解，得淡黃的溶液，隨后又析出白色固體，加熱至回流，繼續(xù)反應(yīng)，冷卻至室溫，攪拌下小心滴加鹽酸溶液中和至PH＝8-9，除溶劑后向剩余淡黃色粘稠物加入蒸餾水，70℃攪拌下溶解，再加入活性碳，熱過濾，濾液，自然冷卻析晶，過濾，得無色結(jié)晶固體，真空干燥，得白色固體，即6-甲氧基鳥苷。mp133-135℃；TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝6∶1)，產(chǎn)品Rf＝0.4，原料Rf＝0.45。
其中2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鳥苷的制備方法為取6-甲氧鳥苷溶于無水吡啶中，減壓蒸干，60℃真空干燥2小時，重復(fù)操作一次，然后加入乙腈混合攪拌，得白色渾濁液，將DMAP、三乙胺加至白色渾濁液中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下將乙酸酐先慢后快加入反應(yīng)瓶中，物料逐漸溶解，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，反應(yīng)完畢，向溶液中加入乙醇，將反應(yīng)液減壓蒸干，再加入乙酸乙酯，再用5％碳酸氫鈉溶液洗滌二次，水相用乙酸乙酯反萃，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，濃縮后所得到的無色膠狀固體，即2′，3′，5′-三-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷。TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝6∶1)，原料Rf＝0.4；產(chǎn)品Rf＝0.8。
其中3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鳥苷的制備方法為取醋酸鈉和鹽酸羥胺，懸浮于無水吡啶中，攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)下將2′，3′，5′-三-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷加入，室溫下攪拌反應(yīng)，TLC檢測反應(yīng)完畢，向體系中加入丙酮，反應(yīng)液減壓濃縮，剩余物料中加入丙酮繼續(xù)減壓蒸餾帶出殘余吡啶，粗品溶于丙酮后過濾，不溶濾渣用丙酮洗滌，合并丙酮液，減壓濃縮得一油狀物，硅膠柱層析，收集產(chǎn)品相，減壓蒸干得無色膠狀固體，用二氯甲烷-庚烷重結(jié)晶得白色固體，即3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷。mp150-153℃TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.6；產(chǎn)品Rf＝0.45；1HNMR.(DMSO)δ＝8.09(s，1H，H-8)；6.52(s，2H，NH2)；5.88(d，1H，H-1′)；5.81(d，1H，2′-OH)；5.23(m，1H，H-3′)；4.87(m，1H，H-2′)；4.31(m，1H，H-4′)；4.23(m，2H，H-5′)；3.97(s，3H，OCH3)；2.12(s，3H，CH3CO)；2.04(s，3H，CH3CO)其中′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鳥苷的制備方法為取3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷，N-二甲基氨基吡啶和三乙胺加入無水吡啶中，攪拌下降溫至-10℃，小心滴加三氟甲磺酸酐，反應(yīng)瓶中充滿白色煙霧，略有溫升，滴加完畢，反應(yīng)液變?yōu)樽丶t色，室溫?cái)嚢?，TLC檢測反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液小心倒入冰水中，用氯仿萃取四次，合并氯仿相，水洗，氯仿相用無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液濃縮至干，得紅褐色固體，即2′-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷。TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.45；Rf＝0.8。
其中2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤的制備方法為取2′-O-三氟甲磺?；?3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鳥苷加入乙酸乙酯中，加入乙酸，再加入N，N一二異丙基苯胺，于氮氛下40℃反應(yīng)，然后回流攪拌，TLC檢測反應(yīng)完畢，再加乙酸乙酯稀釋，稀釋后的溶液用水、碳酸氫鈉水溶液以及飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥后減壓蒸餾除去溶劑，所得粗品用無水乙醇重結(jié)晶，得白色同體，即2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤。TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.8；Rf＝0.6。
其中奈拉濱的制備方法為將2-氨基-6-甲氧基-9-β-D-(2′，3′ 5′-三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤加入無水乙醇中，置于冰水浴中冷卻，通氮?dú)馀趴阵w系中的空氣，然后向體系中通入無水氨氣直至體系均相，所得產(chǎn)物于冰箱中放置，然后減壓濃縮，濃縮產(chǎn)物用乙醇重結(jié)晶，干燥，加入甲醇混合加熱至回流，攪拌使物料溶解，趁熱過濾，濾液濃縮，攪拌下加入無水乙醇、乙醚，冷卻放置析晶，抽濾，用無水乙醇洗滌，抽濾，干燥，得到奈拉濱。
上述合成方法得到奈拉濱制備成藥物制劑，例如口服制劑、注射制劑等藥劑學(xué)上可以接受的制劑。
一、檢測分析實(shí)驗(yàn)照高效液相色譜法(中國藥典2005年版二部附錄VD)測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.02mol/L磷酸二氫鈉溶液-甲醇(70∶30)為流動相，檢測波長為247nm。流速0.75ml/min理論板數(shù)按奈拉濱計(jì)不低于2000，奈拉濱峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。
取本品約10mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加流動相超聲處理使溶解，并以流動相稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml至10ml量瓶中，以流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取奈拉濱對照品約10mg，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。
樣品檢測結(jié)果本申請奈拉濱純度大于99.90％二、工藝數(shù)據(jù)1、6-甲氧基鳥苷的制備

2、4-2.2′，3′，5′-三-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷的制備

3、3′，5′-二-O-乙?；?-6-甲氧基鳥苷的制備

4、2′-O-三氟甲磺?；?3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鳥苷的制備

5、2-氨基-6-甲氧基-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤的制備


6、奈拉濱的制備

三、中間體質(zhì)量控制在合成奈拉濱的過程中，我們運(yùn)用了多種方法來控制中間體的質(zhì)量。具體的結(jié)果如下表格

四、確證奈拉濱結(jié)構(gòu)1、1H-NMR核磁共振譜

2、513C-NMR核磁共振譜

五、藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)卫瓰I是脫氧鳥苷類似物9-β-D-阿糖呋喃糖鳥嘌呤(ara-G)的前體藥，在腺苷脫氨酶的作用下，奈拉濱去甲基化生成ara-G，然后轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的ara-G在腺苷激酶作用下轉(zhuǎn)變成ara-G單磷酸鹽(ara-GMP)，然后在脫氧胞苷激酶和脫氧鳥苷激酶作用下，轉(zhuǎn)化生成ara-G二磷酸鹽(ara-GDP)和有藥理活性的三磷酸鹽(ara-GTP)，生成ara-GTP的限速步驟是ara-G的單磷酸化。隨著ara-GTP在細(xì)胞中與脫氧核糖核苷競爭整合到DNA中，最終導(dǎo)致DNA合成的抑制而誘發(fā)細(xì)胞凋亡。
臨床前研究表明，ara-GTP對T細(xì)胞有選擇性，從而表現(xiàn)出更強(qiáng)的細(xì)胞毒作用。這說明ara-GTP在T細(xì)胞和B細(xì)胞中有不同的濃度，主要是由于前者對ara-GTP有更強(qiáng)的蓄積作用而后者對ara-GTP有更快的消除作用。在多項(xiàng)對病人的原始淋巴細(xì)胞研究中，也觀察到了相同結(jié)果。
1、在體外檢測ara-G和奈拉濱對人骨髓祖細(xì)胞的毒性。
細(xì)胞CFU-GM和BFU-E(來源于三位不同的捐獻(xiàn)者)，檢測藥物的IC50值。結(jié)果顯示奈拉濱的毒性比ara-G的大(見表1)。
表1.ara-G和奈拉濱對細(xì)胞的體外毒性

2、奈拉濱對T-細(xì)胞和B-細(xì)胞的選擇性試驗(yàn)?zāi)康氖潜容^奈拉濱對T-細(xì)胞(Molt4)和B-細(xì)胞(IM9)生長的抑制性，同時比較奈拉濱與其他嘌呤阿拉伯糖苷的毒性。結(jié)果顯示奈拉濱對T-細(xì)胞的毒性要大于對B-細(xì)胞。其對T-細(xì)胞的毒性大于ara-G對T-細(xì)胞的毒性(見表2)。
表2.ara-G和奈拉濱對細(xì)胞的體外毒性

3、比較ara-G和奈拉濱對各種T-細(xì)胞和B-細(xì)胞的毒性，同時檢測兩種腺苷脫氨基酶抑制劑(能阻止奈拉濱轉(zhuǎn)化為ara-G)助間型霉素和EHNA是否能降低奈拉濱的毒性。結(jié)果顯示ara-G和奈拉濱對大多數(shù)T-細(xì)胞的毒性差不多大，并且都是μM水平。對B-細(xì)胞(IM-9)均沒有毒性。兩種腺苷脫氨基酶抑制劑均能減弱奈拉濱的毒性(見表3、4)。
表3.ara-G和奈拉濱對細(xì)胞的體外毒性(IC50μM)及助間型霉素對奈拉濱毒性的抑制作用

注CEM、CEM CD4+、MOLT4T-細(xì)胞；U937巨噬細(xì)胞；IM9B-細(xì)胞表4.ara-G和奈拉濱對細(xì)胞的體外毒性(IC50μM)及EHNA對奈拉濱毒性的抑制作用

注CEM、CEM CD4+、MOLT4T-細(xì)胞；U937巨噬細(xì)胞；IM9B-細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)論mM濃度的奈拉濱對體外骨髓祖細(xì)胞具有毒性。體外試驗(yàn)顯示奈拉濱對人惡性T-細(xì)胞的毒性要大于對惡性B-細(xì)胞的毒性。對某些細(xì)胞系，奈拉濱的毒性要大于ara-G，這可能是由于奈拉濱更容易被吸收的緣故，不是由于單獨(dú)的毒性。
六、制備實(shí)施例實(shí)施例1其中6-甲氧基鳥苷的制備方法為取248.0克甲醇鈉加入到甲醇中，攪拌，得白色渾濁液，加入310克6-氯鳥苷物料迅速溶解，得淡黃的溶液，隨后又析出白色固體，加熱至回流，繼續(xù)反應(yīng)，冷卻至室溫，攪拌下小心滴加鹽酸溶液中和至PH＝8-9，除溶劑后向剩余淡黃色粘稠物加入蒸餾水，70℃攪拌下溶解，再加入活性碳，熱過濾，濾液，自然冷卻析晶，過濾，得無色結(jié)晶固體，真空干燥，得白色固體196.7克，即6-甲氧基鳥苷。mp133-135℃；TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝6∶1)，產(chǎn)品Rf＝0.4，原料Rf＝0.45。
其中2′，3′，5′-三-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷的制備方法為取195.0克6-甲氧鳥苷溶于無水吡啶中，減壓蒸干，60℃真空干燥2小時，重復(fù)操作一次，然后加入乙腈混合攪拌，得白色渾濁液，將DMAP、三乙胺加至白色渾濁液中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下將乙酸酐先慢后快加入反應(yīng)瓶中，物料逐漸溶解，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，反應(yīng)完畢，向溶液中加入乙醇，將反應(yīng)液減壓蒸干，再加入乙酸乙酯，再用5％碳酸氫鈉溶液洗滌二次，水相用乙酸乙酯反萃，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，濃縮后所得到的無色膠狀固體251.2克，即2′，3′，5′-三-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷。TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝6∶1)，原料Rf＝0.4；產(chǎn)品Rf＝0.8。
其中3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷的制備方法為取150克醋酸鈉和137.5克鹽酸羥胺，懸浮于無水吡啶中，攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)下將250克2′，3′，5′-三-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷加入，室溫下攪拌反應(yīng)，TLC檢測反應(yīng)完畢，向體系中加入丙酮，反應(yīng)液減壓濃縮，剩余物料中加入丙酮繼續(xù)減壓蒸餾帶出殘余吡啶，粗品溶于丙酮后過濾，不溶濾渣用丙酮洗滌，合并丙酮液，減壓濃縮得一油狀物，硅膠柱層析，收集產(chǎn)品相，減壓蒸干得無色膠狀固體，用二氯甲烷-庚烷重結(jié)晶得白色固體112.4克，即3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷。mp150-153℃TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.6；產(chǎn)品Rf＝0.45；1HNMR.(DMSO)δ＝8.09(s，1H，H-8)；6.52(s，2H，NH2)；5.88(d，1H，H-1′)；5.81(d，1H，2′-OH)；5.23(m，1H，H-3′)；4.87(m，1H，H-2′)；4.31(m，1H，H-4′)；4.23(m，2H，H-5′)；3.97(s，3H，OCH3)；2.12(s，3H，CH3CO)；2.04(s，3H，CH3CO)其中2′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鳥苷的制備方法為取110克3′，5′-二-O-乙?；?-6-甲氧基鳥苷，N-二甲基氨基吡啶和三乙胺加入無水吡啶中，攪拌下降溫至-10℃，小心滴加三氟甲磺酸酐35.2克，反應(yīng)瓶中充滿白色煙霧，略有溫升，滴加完畢，反應(yīng)液變?yōu)樽丶t色，室溫?cái)嚢瑁琓LC檢測反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液小心倒入冰水中，用氯仿萃取四次，合并氯仿相，水洗，氯仿相用無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液濃縮至干，得紅褐色固體125克，即′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷。TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.45；Rf＝0.8。
其中2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤的制備方法為取120克2′-O-三氟甲磺?；?3′，5′-二-O-乙?；?-6-甲氧基鳥苷加入乙酸乙酯中，加入乙酸，再加入N，N一二異丙基苯胺，于氮氛下40℃反應(yīng)，然后回流攪拌，TLC檢測反應(yīng)完畢，再加乙酸乙酯稀釋，稀釋后的溶液用水、碳酸氫鈉水溶液以及飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥后減壓蒸餾除去溶劑，所得粗品用無水乙醇重結(jié)晶，得白色固體85.3克，即2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤。TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.8；Rf＝0.6。
其中奈拉濱的制備方法為將80克2-氨基-6-甲氧基-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤加入無水乙醇中，置于冰水浴中冷卻，通氮?dú)馀趴阵w系中的空氣，然后向體系中通入無水氨氣直至體系均相，所得產(chǎn)物于冰箱中放置，然后減壓濃縮，濃縮產(chǎn)物用乙醇重結(jié)晶，干燥，加入甲醇混合加熱至回流，攪拌使物料溶解，趁熱過濾，濾液濃縮，攪拌下加入無水乙醇、乙醚，冷卻放置析晶，抽濾，用無水乙醇洗滌，抽濾，干燥，得到奈拉濱43.5克。
以6-氯鳥苷為原料，將呋喃核糖構(gòu)型轉(zhuǎn)換為呋喃阿拉伯糖還可以應(yīng)用1，3-二氯-1，1，3，3-四異丙基二硅氧烷或其它有機(jī)試劑進(jìn)行基團(tuán)保護(hù)，可以進(jìn)一步縮短上述實(shí)驗(yàn)步驟；上述合成方法得到奈拉濱制備成藥物制劑，例如口服制劑、注射制劑等藥劑學(xué)上可以接受的制劑。
實(shí)施例2其中6-甲氧基鳥苷的制備方法為取128克甲醇鈉加入到甲醇中，攪拌，得白色渾濁液，加入160克6-氯鳥苷物料迅速溶解，得淡黃的溶液，隨后又析出白色固體，加熱至回流，繼續(xù)反應(yīng)，冷卻至室溫，攪拌下小心滴加鹽酸溶液中和至PH＝8-9，除溶劑后向剩余淡黃色粘稠物加入蒸餾水，70℃攪拌下溶解，再加入活性碳，熱過濾，濾液，自然冷卻析晶，過濾，得無色結(jié)晶固體，真空干燥，得白色固體102.6克，即6-甲氧基鳥苷。mp133-135℃；TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝6∶1)，產(chǎn)品Rf＝0.4，原料Rf＝0.45。
其中2′，3′，5′-三-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷的制備方法為取102.6克6-甲氧鳥苷溶于無水吡啶中，減壓蒸干，60℃真空干燥2小時，重復(fù)操作一次，然后加入乙腈混合攪拌，得白色渾濁液，將DMAP、三乙胺加至白色渾濁液中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下將乙酸酐先慢后快加入反應(yīng)瓶中，物料逐漸溶解，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，反應(yīng)完畢，向溶液中加入乙醇，將反應(yīng)液減壓蒸干，再加入乙酸乙酯，再用5％碳酸氫鈉溶液洗滌二次，水相用乙酸乙酯反萃，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，濃縮后所得到的無色膠狀固體131.2克，即2′，3′，5′-三-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷。TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝6∶1)，原料Rf＝0.4；產(chǎn)品Rf＝0.8。
其中3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷的制備方法為取79克醋酸鈉和69克鹽酸羥胺，懸浮于無水吡啶中，攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)下將130克2′，3′，5′-三-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷加入，室溫下攪拌反應(yīng)，TLC檢測反應(yīng)完畢，向體系中加入丙酮，反應(yīng)液減壓濃縮，剩余物料中加入丙酮繼續(xù)減壓蒸餾帶出殘余吡啶，粗品溶于丙酮后過濾，不溶濾渣用丙酮洗滌，合并丙酮液，減壓濃縮得一油狀物，硅膠柱層析，收集產(chǎn)品相，減壓蒸干得無色膠狀固體，用二氯甲烷-庚烷重結(jié)晶得白色固體62.8克，即3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鳥苷。mp150-153℃TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.6；產(chǎn)品Rf＝0.45；1HNMR.(DMSO)δ＝8.09(s，1H，H-8)；6.52(s，2H，NH2)；5.88(d，1H，H-1′)；5.81(d，1H，2′-OH)；5.23(m，1H，H-3′)；4.87(m，1H，H-2′)；4.31(m，1H，H-4′)；4.23(m，2H，H-5′)；3.97(s，3H，OCH3)；2.12(s，3H，CH3CO)；2.04(s，3H，CH3CO)其中2′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷的制備方法為取60克3′，5′-二-O-乙?；?-6-甲氧基鳥苷，N-二甲基氨基吡啶和三乙胺加入無水吡啶中，攪拌下降溫至-10℃，小心滴加三氟甲磺酸酐33克，反應(yīng)瓶中充滿白色煙霧，略有溫升，滴加完畢，反應(yīng)液變?yōu)樽丶t色，室溫?cái)嚢?，TLC檢測反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液小心倒入冰水中，用氯仿萃取四次，合并氯仿相，水洗，氯仿相用無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液濃縮至干，得紅褐色固體68克，即2′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷。TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.45；Rf＝0.8。
其中2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤的制備方法為取65克2′-O-三氟甲磺?；?3′，5′-二-O-乙?；?-6-甲氧基鳥苷加入乙酸乙酯中，加入乙酸，再加入N，N一二異丙基苯胺，于氮氛下40℃反應(yīng)，然后回流攪拌，TLC檢測反應(yīng)完畢，再加乙酸乙酯稀釋，稀釋后的溶液用水、碳酸氫鈉水溶液以及飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥后減壓蒸餾除去溶劑，所得粗品用無水乙醇重結(jié)晶，得白色固體45.9克，即2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤。TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.8；Rf＝0.6。
其中奈拉濱的制備方法為將45克2-氨基-6-甲氧基-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤加入無水乙醇中，置于冰水浴中冷卻，通氮?dú)馀趴阵w系中的空氣，然后向體系中通入無水氨氣直至體系均相，所得產(chǎn)物于冰箱中放置，然后減壓濃縮，濃縮產(chǎn)物用乙醇重結(jié)晶，干燥，加入甲醇混合加熱至回流，攪拌使物料溶解，趁熱過濾，濾液濃縮，攪拌下加入無水乙醇、乙醚，冷卻放置析晶，抽濾，用無水乙醇洗滌，抽濾，干燥，得到奈拉濱21克。
以6-氯鳥苷為原料，將呋喃核糖構(gòu)型轉(zhuǎn)換為呋喃阿拉伯糖還可以應(yīng)用1，3-二氯-1，1，3，3-四異丙基二硅氧烷或其它有機(jī)試劑進(jìn)行基團(tuán)保護(hù)，可以進(jìn)一步縮短上述實(shí)驗(yàn)步驟；上述合成方法得到奈拉濱制備成藥物制劑，例如口服制劑、注射制劑等藥劑學(xué)上可以接受的制劑。
實(shí)施例3其中6-甲氧基鳥苷的制備方法為取800克甲醇鈉加入到甲醇中，攪拌，得白色渾濁液，加入1000克6-氯鳥苷物料迅速溶解，得淡黃的溶液，隨后又析出白色固體，加熱至回流，繼續(xù)反應(yīng)，冷卻至室溫，攪拌下小心滴加鹽酸溶液中和至PH＝8-9，除溶劑后向剩余淡黃色粘稠物加入蒸餾水，70℃攪拌下溶解，再加入活性碳，熱過濾，濾液，自然冷卻析晶，過濾，得無色結(jié)晶固體，真空干燥，得白色固體598.8克，即6-甲氧基鳥苷。mp133-135℃；TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝6∶1)，產(chǎn)品Rf＝0.4，原料Rf＝0.45。
其中2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鳥苷的制備方法為取590克6-甲氧鳥苷溶于無水吡啶中，減壓蒸干，60℃真空干燥2小時， 重復(fù)操作一次，然后加入乙腈混合攪拌，得白色渾濁液，將DMAP、三乙胺加至白色渾濁液中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下將乙酸酐先慢后快加入反應(yīng)瓶中，物料逐漸溶解，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，反應(yīng)完畢，向溶液中加入乙醇，將反應(yīng)液減壓蒸干，再加入乙酸乙酯，再用5％碳酸氫鈉溶液洗滌二次，水相用乙酸乙酯反萃，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，濃縮后所得到的無色膠狀固體752克，即2′，3′ 5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鳥苷。TLC(乙酸乙酯∶甲醇＝6∶1)，原料Rf＝0.4；產(chǎn)品R′0.8。
其中3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷的制備方法為取450克醋酸鈉和421.3克鹽酸羥胺，懸浮于無水吡啶中，攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)下將750克2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鳥苷加入，室溫下攪拌反應(yīng)，TLC檢測反應(yīng)完畢，向體系中加入丙酮，反應(yīng)液減壓濃縮，剩余物料中加入丙酮繼續(xù)減壓蒸餾帶出殘余吡啶，粗品溶于丙酮后過濾，不溶濾渣用丙酮洗滌，合并丙酮液，減壓濃縮得一油狀物，硅膠柱層析，收集產(chǎn)品相，減壓蒸干得無色膠狀固體，用二氯甲烷-庚烷重結(jié)晶得白色固體329.8克，即3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷。mp150-153℃；TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.6；產(chǎn)品Rf＝0.45；1HNMR.(DMSO)δ＝8.09(s，1H，H-8)；6.52(s，2H，NH2)；5.88(d，1H，H-1′)；5.81(d，1H，2′-OH)；5.23(m，1H，H-3′)；4.87(m，1H，H-2′)；4.31(m，1H，H-4′)；4.23(m，2H，H-5′)；3.97(s，3H，OCH3)；2.12(s，3H，CH3CO)；2.04(s，3H，CH3CO)其中2′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鳥苷的制備方法為取320克3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鳥苷，35.2克N-二甲基氨基吡啶和三乙胺加入無水吡啶中，攪拌下降溫至-10℃，小心滴加三氟甲磺酸酐176克，反應(yīng)瓶中充滿白色煙霧，略有溫升，滴加完畢，反應(yīng)液變?yōu)樽乩w色，室溫?cái)嚢?，TLC檢測反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液小心倒入冰水中，用氯仿萃取四次，合并氯仿相，水洗，氯仿相用無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液濃縮至干，得紅褐色固體365克，即2′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷。TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.45；Rf＝0.8。
其中2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤的制備方法為取350克2′-O-三氟甲磺?；?3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鳥苷加入乙酸乙酯中，加入乙酸，再加入N，N一二異丙基苯胺，于氮氛下40℃反應(yīng)，然后回流攪拌，TLC檢測反應(yīng)完畢，再加乙酸乙酯稀釋，稀釋后的溶液用水、碳酸氫鈉水溶液以及飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥后減壓蒸餾除去溶劑，所得粗品用無水乙醇重結(jié)晶，得白色固體243克，即2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤。TLC(乙酸乙酯)，原料Rf＝0.8；Rf＝0.6。
其中奈拉濱的制備方法為將240克2-氨基-6-甲氧基-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤加入無水乙醇中，置于冰水浴中冷卻，通氮?dú)馀趴阵w系中的空氣，然后向體系中通入無水氨氣直至體系均相，所得產(chǎn)物于冰箱中放置，然后減壓濃縮，濃縮產(chǎn)物用乙醇重結(jié)晶，干燥，加入甲醇混合加熱至回流，攪拌使物料溶解，趁熱過濾，濾液濃縮，攪拌下加入無水乙醇、乙醚，冷卻放置析晶，抽濾，用無水乙醇洗滌，抽濾，干燥，得到奈拉濱126.1克。
以6-氯鳥苷為原料，將呋喃核糖構(gòu)型轉(zhuǎn)換為呋喃阿拉伯糖還可以應(yīng)用1，3-二氯-1，1，3，3-四異丙基二硅氧烷或其它有機(jī)試劑進(jìn)行基團(tuán)保護(hù)，可以進(jìn)一步縮短上述實(shí)驗(yàn)步驟；上述合成方法得到奈拉濱制備成藥物制劑，例如口服制劑、注射制劑等藥劑學(xué)上可以接受的制劑。
注本發(fā)明所要求保護(hù)的具體技術(shù)方案，不限于上述實(shí)施例所表達(dá)的技術(shù)方案的具體組合。
權(quán)利要求
1.一種奈拉濱的合成方法，其特征在于以6-氯鳥苷為原料，經(jīng)化學(xué)合成將呋喃核糖構(gòu)型轉(zhuǎn)換為呋喃阿拉伯糖制得奈拉濱。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述得一種奈拉濱的合成方法，其中化學(xué)合成為，以6-氯鳥苷為原料，經(jīng)化學(xué)合成制備成6-甲氧基鳥苷，6-甲氧基鳥苷經(jīng)化學(xué)合成制備成2′，3′，5′-三-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷，2′，3′，5′-三-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷經(jīng)化學(xué)合成制備成3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷，2′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷經(jīng)化學(xué)合成制備成2′-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷，′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷經(jīng)化學(xué)合成制備成2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤，2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤經(jīng)化學(xué)合成制備成奈拉濱。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種奈拉濱的合成方法，其中6-甲氧基鳥苷的制備方法為取甲醇鈉加入到甲醇中，攪拌，得白色渾濁液，加入6-氯鳥苷物料迅速溶解，得淡黃的溶液，隨后又析出白色固體，加熱至回流，繼續(xù)反應(yīng)，冷卻至室溫，攪拌下小心滴加鹽酸溶液中和至PH＝8-9，除溶劑后向剩余淡黃色粘稠物加入蒸餾水，70℃攪拌下溶解，再加入活性碳，熱過濾，濾液，自然冷卻析晶，過濾，得無色結(jié)晶固體，真空干燥，得白色固體，即6-甲氧基鳥苷。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種奈拉濱的合成方法，其中2′，3′，5′-三-O-乙酰基-6-甲氧基鳥苷的制備方法為取6-甲氧鳥苷溶于無水吡啶中，減壓蒸干，60℃真空干燥2小時，重復(fù)操作一次，然后加入乙腈混合攪拌，得白色渾濁液，將DMAP、三乙胺加至白色渾濁液中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下將乙酸酐先慢后快加入反應(yīng)瓶中，物料逐漸溶解，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)，反應(yīng)完畢，向溶液中加入乙醇，將反應(yīng)液減壓蒸干，再加入乙酸乙酯，再用5％碳酸氫鈉溶液洗滌二次，水相用乙酸乙酯反萃，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液減壓濃縮，濃縮后所得到的無色膠狀固體，即2′，3′，5′-三-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種奈拉濱的合成方法，其中3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鳥苷的制備方法為取醋酸鈉和鹽酸羥胺，懸浮于無水吡啶中，攪拌，氮?dú)獗Ｗo(hù)下將2′，3′，5′-三-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷加入，室溫下攪拌反應(yīng)，TLC檢測反應(yīng)完畢，向體系中加入丙酮，反應(yīng)液減壓濃縮，剩余物料中加入丙酮繼續(xù)減壓蒸餾帶出殘余吡啶，粗品溶于丙酮后過濾，不溶濾渣用丙酮洗滌，合并丙酮液，減壓濃縮得一油狀物，硅膠柱層析，收集產(chǎn)品相，減壓蒸干得無色膠狀固體，用二氯甲烷-庚烷重結(jié)晶得白色固體，即3′，5′-二-O-乙酰基-6-甲氧基鳥苷。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種奈拉濱的合成方法，其中2′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷的制備方法為取3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鳥苷，N-二甲基氨基吡啶和三乙胺加入無水吡啶中，攪拌下降溫至-10℃，小心滴加三氟甲磺酸酐，反應(yīng)瓶中充滿白色煙霧，略有溫升，滴加完畢，反應(yīng)液變?yōu)樽丶t色，室溫?cái)嚢?，TLC檢測反應(yīng)完畢，將反應(yīng)液小心倒入冰水中，用氯仿萃取四次，合并氯仿相，水洗，氯仿相用無水硫酸鎂干燥，過濾，濾液濃縮至干，得紅褐色固體，即2′-O-三氟甲磺酰氧基-3′，5′-二-O-乙?；?6-甲氧基鳥苷。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種奈拉濱的合成方法，其中2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤的制備方法為取2′-O-三氟甲磺?；?3′，5′-二-O-乙酰基--6-甲氧基鳥苷加入乙酸乙酯中，加入乙酸，再加入N，N一二異丙基苯胺，于氮氛下40℃反應(yīng)，然后回流攪拌，TLC檢測反應(yīng)完畢，再加乙酸乙酯稀釋，稀釋后的溶液用水、碳酸氫鈉水溶液以及飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥后減壓蒸餾除去溶劑，所得粗品用無水乙醇重結(jié)晶，得白色固體，即2-氨基-6-甲氧-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙酰基阿拉伯呋喃糖基)嘌呤。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種奈拉濱的合成方法，其中奈拉濱的制備方法為將2-氨基-6-甲氧基-9-β-D-(2′，3′，5′-三-O-乙?；⒗秽腔?嘌呤加入無水乙醇中，置于冰水浴中冷卻，通氮?dú)馀趴阵w系中的空氣，然后向體系中通入無水氨氣直至體系均相，所得產(chǎn)物于冰箱中放置，然后減壓濃縮，濃縮產(chǎn)物用乙醇重結(jié)晶，干燥，加入甲醇混合加熱至回流，攪拌使物料溶解，趁熱過濾，濾液濃縮，攪拌下加入無水乙醇、乙醚，冷卻放置析晶，抽濾，用無水乙醇洗滌，抽濾，干燥，得到奈拉濱。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的合成方法得到奈拉濱制備成藥物制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種奈拉濱的合成方法，其特征在于以6－氯鳥苷為原料，經(jīng)化學(xué)合成將呋喃核糖構(gòu)型轉(zhuǎn)換為呋喃阿拉伯糖制得奈拉濱；這種合成奈拉濱的方法是一種非常經(jīng)濟(jì)、適合工業(yè)化化生產(chǎn)合成奈拉濱的工藝方法，該合成工藝是以6－氯鳥苷為原料，該原料具有易得、價格低的特點(diǎn)，該路線起始原料廉價易得，合成步驟較短，操作較簡便，得率高，得到奈拉濱造價不高，降低了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
文檔編號A61P35/00GK101092441SQ200710119140
公開日2007年12月26日 申請日期2007年7月17日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月17日
發(fā)明者顧群, 孫學(xué)偉, 徐春霞 申請人:北京本草天源藥物研究院