專利名稱：烏司他丁作為制備抗hiv-1病毒藥物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及烏司他丁作為制備抗Hiv-I病毒藥物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
AIDS自1970年以來(lái)就以驚人的速度在全球蔓延，近年來(lái)在防治艾滋病方面取得巨大的進(jìn)展，但仍缺乏根治HIV感染的有效藥物?，F(xiàn)階段的治療目標(biāo)是最大限度和持久的降低病毒載量；獲得免疫功能重建和維持免疫功能；提高生活質(zhì)量；降低HIV相關(guān)的發(fā)病率和死亡率。治療方法包括一般性治療、抗病毒治療、恢復(fù)和改善免疫功能的治療和機(jī)會(huì)性感染及惡性腫瘤的治療。其中抗病毒是治療的關(guān)鍵。隨著HIV蛋白酶抑制劑的出現(xiàn)，就出現(xiàn)了高效抗反轉(zhuǎn)錄病毒聯(lián)合療法(highly active anti-retroviral therapy, HAART)的應(yīng)用，大大提高了抗HIV的療效，顯著改善了 AIDS患者的生活質(zhì)量和預(yù)后，使AIDS的治療前進(jìn)了一大步。當(dāng)前主要的抗病毒藥物已獲批準(zhǔn)進(jìn)入市場(chǎng)的有16種，主要分三大類核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NRTI)、非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTIs)和蛋白酶抑制劑(PI)。其中蛋白酶抑制劑(protease inhibitor, PI) :HIV_1蛋白酶是一個(gè)對(duì)稱的二聚體，在該酶的催化下，HIV有兩種蛋白前體裂解為成熟蛋白，所以此酶對(duì)病毒的復(fù)制非常重要。蛋白酶抑制劑能通過(guò)抑制蛋白酶即阻斷HIV復(fù)制和成熟過(guò)程中所必需的蛋白質(zhì)合成，從而抑制HIV的復(fù)制。此類制劑包括
A.沙奎那韋(saquinavir):高效高選擇性的HIV蛋白酶抑制劑。本品作用于HIV繁殖的后期，與HIV蛋白酶的激活點(diǎn)結(jié)合，使之失去結(jié)合和水解斷裂多肽的功能。本品抑制HIV蛋白酶與其它抗HIV病毒藥如疊氮胸苷，抑制HIV逆轉(zhuǎn)錄酶的作用靶酶系不同，無(wú)交叉耐藥病毒產(chǎn)生。600mg，2次/d或3次/d。副作用可有惡心、嘔吐、腹瀉等消化道癥狀，亦可見(jiàn)頭痛，轉(zhuǎn)氨酶升高等。B.茚地那韋(indinavir) : (HIV蛋白酶抑制劑，和其他抗逆轉(zhuǎn)錄病毒藥物聯(lián)合使用。800mg，3次/d。副作用有惡心、嘔吐、頭痛、乏力、眩暈、皮疹等，并可致非結(jié)合膽紅素升聞、血小板減少、腎結(jié)石、血糖升聞及脂肪重新分布等。C.奈非那韋(nelfinavir) :750mg,3次/d。副作用有腹灣、高血糖等。D.利托那韋(ritonavir) =HIV-I和HIV-2天冬氨酸蛋白酶的口服有效抑制劑，阻斷該酶促使產(chǎn)生形態(tài)學(xué)上成熟HIV顆粒所需的聚蛋白，使HIV顆粒因而保持在未成熟的狀態(tài)，從而減慢HIV在細(xì)胞中的蔓延，以防止新一輪感染的發(fā)生和延遲疾病的發(fā)展。本品對(duì)齊多夫定敏感的和齊多夫定與沙喹那韋耐藥的HIV株一般均有效。300 600mg，2次/d。副作用有惡心、嘔吐、腹瀉、乏力、感覺(jué)異常、肝功能不良、甘油三酯升高、尿酸增加、血糖升高
坐寸o上述三類藥物多數(shù)都有不良反應(yīng)，單用很難有效抑制病毒的復(fù)制，且易產(chǎn)生耐藥。因此，強(qiáng)調(diào)聯(lián)合用藥。聯(lián)合用藥的方案很多，目前多以一種蛋白酶抑制劑加兩種NRTI制劑，或兩種蛋白酶抑制劑加一兩種NRTI制劑，常見(jiàn)的聯(lián)合方案有沙奎那韋ZDV 3TC ;或奈非那韋D4T ddi ;或茚地那韋ZDV ddi ;或利托那韋ZDV ddc ;或沙奎那韋利托那韋D4T 3TC。使用這些聯(lián)合方案治療，能同時(shí)抑制HIV復(fù)制過(guò)程的多個(gè)環(huán)節(jié)，可高效抑制HIV復(fù)制，最大限度降低耐藥性，提高患者生活質(zhì)量和存活率，顯著降低母嬰垂直傳播的危險(xiǎn)性等。關(guān)于抗病毒治療的時(shí)機(jī)HAART聯(lián)合方案應(yīng)用所取得的療效，重新喚起人們戰(zhàn)勝獲得性免疫缺陷綜合征的信心。一度使許多醫(yī)師認(rèn)為越早治療，效果越好。但是隨著應(yīng)用時(shí)間的延長(zhǎng)，人們發(fā)現(xiàn)盡管聯(lián)合治療能夠抑制血液中的病毒載量到測(cè)不到的水平，但是要清除淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和神經(jīng)組織內(nèi)藏匿的病毒并不容易，可能要治療幾十年甚至終身服藥。然而，服藥期間，除了消化道反應(yīng)和骨髓抑制等常見(jiàn)副作用以外，這些藥物引起的其他嚴(yán)重的毒副作用，患者的依從性、順應(yīng)性比較差，加以HIV的抗藥性越來(lái)越大，抗藥性毒株的傳播越來(lái)越嚴(yán)重等等，迫使醫(yī)師慎重考慮治療時(shí)機(jī)。目前主張①已發(fā)展至AIDS者，無(wú)論⑶4及病毒載量的值高低如何，都應(yīng)進(jìn)行治療?、跓o(wú)癥狀者的，CD4〈200X106/L，雖然病毒載量測(cè)不出也應(yīng)治療；@CD4細(xì)胞 >200X 106/L，但〈350X 106/L，病毒載量不高，患者無(wú)癥狀，此時(shí)的治療仍有爭(zhēng)論；④無(wú)癥狀者的⑶4>350X 106/L，病毒載量>55000拷貝數(shù)，目前大多主張治療；⑤無(wú)癥狀者的⑶4>350X 106/L，病毒載量〈55000拷貝數(shù)，現(xiàn)大多主張繼續(xù)監(jiān)控⑶4量；⑥間斷治療。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種既可以在感染HIV后的窗口期防止AIDS的發(fā)病，又可以對(duì)已患AIDS的患者有治療作用，防止復(fù)發(fā)，而且沒(méi)有明顯的毒副作用的抗HIV-I病毒的藥物。技術(shù)方案本發(fā)明所述的烏司他丁作為制備抗HIV-I病毒藥物的應(yīng)用，烏司他丁的濃度為200 400ii g/ml o優(yōu)選地，所述烏司他丁的濃度為400 ii g/ml，在該濃度下，可以對(duì)HIV-I病毒達(dá)到100%抑制率。優(yōu)選地，所述烏司他丁的濃度為200 ii g/ml，在該濃度下，可以對(duì)HIV-I病毒達(dá)到99%抑制率，同時(shí)，對(duì)細(xì)胞的毒性作用更小，經(jīng)濟(jì)成本更低。所述藥物中還包括可藥用輔料。所述藥物可以為凍干粉針劑，所述可藥用輔料為甘露醇、乳糖、水解明膠、氯化鈉或葡糖糖中的任意一種或幾種。所述藥物也可以為注射液，所述可藥用輔料為注射用水、甘露醇、氯化鈉或葡萄糖中的任意一種或幾種。有益效果1、本發(fā)明藥物可以在感染HIV后的窗口期立即使用，也可以用于AIDS已經(jīng)發(fā)生的不同階段，與已上市的藥物相比毒副作用??；2、本發(fā)明藥物，在烏司他丁的濃度為400 ii g/ml時(shí)，可以對(duì)HIV-I病毒達(dá)到100%抑制率，而且在細(xì)胞毒試驗(yàn)中，沒(méi)有明顯的細(xì)胞毒性作用；3、多年來(lái)，在使用本發(fā)明藥物活性成分烏司他丁治療急性胰腺炎的臨床觀察中未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副作用，因此是相對(duì)安全的。
具體實(shí)施例方式下面對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于所述實(shí)施例。 實(shí)施例本發(fā)明烏司他丁作為制備抗HIV-I病毒藥物的應(yīng)用，烏司他丁的濃度為200 400 u g/ml，濃度為400 u g/ml時(shí)可達(dá)到100%的抑制率。利用烏司他丁制備的抗HIV-I病毒藥物，可以在感染HIV后的窗口期立即使用，也可以用于AIDS已經(jīng)發(fā)生的不同階段。窗口期給藥量為烏司他丁 10萬(wàn)U，用5%葡萄糖注射液500ml溶解1-2次/日，靜脈點(diǎn)滴。當(dāng)進(jìn)入AIDS病時(shí)期則與各種逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑聯(lián)合應(yīng)用。藥物通常以靜脈途徑給藥，主要?jiǎng)┬蜑閮龈舍槃┗蜃⑸湟簞?。藥物為凍干粉針劑時(shí)，可藥用輔料為甘露醇、乳糖、水解明膠、氯化鈉或葡糖糖中的任意一種或幾種，在使用時(shí)可以溶解于滅水菌或各種其它注射用滅菌介質(zhì)中。藥物為注射液時(shí)，可藥用輔料為注射用水、甘露醇、氯化鈉或葡萄糖中的任意一種或幾種。下面提供本發(fā)明抗艾滋病病毒的藥效學(xué)研究試驗(yàn)
I、材料與藥物
I. I藥物烏司他丁用水充分溶解后，用透析袋透析后，用1640培育基稀釋成不同濃度(烏司他丁藥品由大連北方生物制品廠生產(chǎn));
I.2試劑P24試劑盒購(gòu)自美國(guó)Organon Teknika公司，MTT (Thiazoll blue)購(gòu)自Sigma公司；
1.3細(xì)胞MT4細(xì)胞系采培養(yǎng)獲得，培養(yǎng)基為RPMI-1640加10%胎牛血清，1%谷氨酰
胺，1%青鏈霉素；
1.4病毒HIV-I病毒德國(guó)株，中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒所保存?zhèn)鞔?、實(shí)驗(yàn)方法
2.I對(duì)HIV-I急性感染的抑制試驗(yàn)
將HIV-I融化后稀釋至I萬(wàn)TCID 50/ml,取Iml稀釋后的病毒液加入離心后并棄上清的500萬(wàn)MT4細(xì)胞(1800轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘)，置37°C溫箱中作用2小時(shí)。取出后離心，棄上清，用1640洗一次，用20%胎牛血清的培養(yǎng)基至50萬(wàn)細(xì)胞/ml，將配好的感染細(xì)胞和對(duì)應(yīng)的不同濃度的烏司他丁加入培養(yǎng)板。置37°C，5% CO2孵箱中。48小時(shí)后換液，繼續(xù)孵育48小時(shí)。取基上清用美國(guó)Organon Teknika公司P24抗原試驗(yàn)盒測(cè)定P24抗原。根據(jù)計(jì)算出各孔中病毒濃度，計(jì)算藥物對(duì)病毒復(fù)制的抑制率。2.2 MTT細(xì)胞毒試驗(yàn)
將MT4細(xì)胞用含20%胎牛血清的培養(yǎng)基配至50萬(wàn)/ml，加100 ill配好的細(xì)胞和100 ill的烏司他丁入96孔培養(yǎng)板，37°C，5% CO2孵箱中培養(yǎng)6天，取出后每孔吸除150 上清，力口入新配的MTT (0. 25%)25iil，37°C下作用4小時(shí)，向每孔中加入100 ylDMSO充分溶解所形成的結(jié)晶，用BIO-RAD公司550型酶標(biāo)儀讀數(shù)(570nm)，計(jì)算細(xì)胞存活率?；?jì)算方法為細(xì)胞抑制率=(細(xì)胞對(duì)照孔OD值一加藥細(xì)胞孔OD值)+細(xì)胞對(duì)照孔OD值X 100%。3、結(jié)果
3.1抗HIV-I實(shí)驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.烏司他丁作為制備抗HIV-I病毒藥物的應(yīng)用，烏司他丁的濃度為200 400u g/ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于所述烏司他丁的濃度為400y g/ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于所述烏司他丁的濃度為200y g/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物中還包括可藥用輔料。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物為凍干粉針劑，所述可藥用輔料為甘露醇、乳糖、水解明膠、氯化鈉或葡糖糖中的任意一種或幾種。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物為注射液，所述可藥用輔料為注射用水、甘露醇、氯化鈉或葡萄糖中的任意一種或幾種。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種烏司他丁作為制備抗HIV-1病毒藥物的應(yīng)用，烏司他丁的濃度為200～400μg/ml。本發(fā)明藥物可以在感染HIV后的窗口期立即使用，也可以用于AIDS已經(jīng)發(fā)生的不同階段；本發(fā)明藥物，在烏司他丁的濃度為400μg/ml時(shí)，可以對(duì)HIV-1病毒達(dá)到100%抑制率，而且在細(xì)胞毒試驗(yàn)中，沒(méi)有明顯的細(xì)胞毒性作用。
文檔編號(hào)A61P31/18GK102614502SQ201210123158
公開(kāi)日2012年8月1日 申請(qǐng)日期2012年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月25日
發(fā)明者徐宗昆 申請(qǐng)人:徐宗昆