專利名稱：使用1，1，2-三苯基丁-1-烯衍生物治療阿爾茨海默病的制作方法
阿爾茨海默病(AD)是一種腦退化疾病，臨床特征表現(xiàn)為漸進(jìn)性喪失記憶、識別力、理性、判斷力和情緒穩(wěn)定性、逐漸導(dǎo)致嚴(yán)重精神失常以致最后死亡。AD是老年人漸進(jìn)性精神失常(癡呆)的一個常見原因，AD被認(rèn)為是美國第四位的最常見導(dǎo)致死亡的醫(yī)學(xué)原因。在世界的各種人種和種族中均有AD病發(fā)生，并且成為現(xiàn)在和未來公眾健康問題。該病目前估計大約折磨單獨美國就約有2～3百萬人。目前，AD證明為不治之癥。
AD患者的大腦表現(xiàn)出神經(jīng)元退化和特征性的損傷，后者指各種淀粉樣變性的蝕斑、血管淀粉樣變性血管病以及神經(jīng)原纖維纏亂。大量的這類損傷，尤其是淀粉性變樣的蝕斑和神經(jīng)原纖維纏亂，一般在AD患者腦中的許多區(qū)域被發(fā)現(xiàn)，這些區(qū)域?qū)τ洃浐妥R別功能很重要。在不患臨床AD的多數(shù)老年人腦中，發(fā)現(xiàn)了較少數(shù)目的更受限制解剖分布的這種損傷。淀粉樣變性蝕斑和血管淀粉樣變性血管病的特征也表現(xiàn)為個體腦中具有Trisomy(三體性)21(Down綜合癥)和具有Dutch型(HCHWA-D)的淀粉樣變性的遺傳性大腦出血。目前，對AD的確診需要在死于該病的病人腦組織中發(fā)現(xiàn)前述損傷，或者罕見地，在侵入性腦手術(shù)過程中取出的腦組織的小活體組織檢查樣品中發(fā)現(xiàn)。
許多證據(jù)表明，特定淀粉樣變性蛋白，即β-淀粉樣變性蛋白(βAP)，的漸進(jìn)性大腦沉積，在AD的發(fā)病機(jī)理中具有種子的作用。參見Selkoe，(1991)，神經(jīng)元(Neuror)6487。最近，已經(jīng)表明βAP從培養(yǎng)物中生長的神經(jīng)元細(xì)胞中釋放出來，并且在正常人和AD患者的腦脊髓液中均存在。參見Seubert等人，(1992)自然(Nature)359325-327。
幾組(試驗)已證實蝕斑病理的一個可能相關(guān)因素是βAP對培養(yǎng)的神經(jīng)元的直接神經(jīng)毒性。最近已報道與TGF-β的共治療可以減少βAP的神經(jīng)毒性。(Chao等人，神經(jīng)科學(xué)學(xué)會摘要(Soc.Neurosci.Abs.)，191251(1993))。
最近，除了直接神經(jīng)毒性外，可能由βAP引起的AD腦中的炎癥反應(yīng)，也對該病的病理有作用。NSAID吲哚美辛的限制性臨床試驗表明了可減緩阿爾茨海默癡呆癥的進(jìn)程(Rogers等人，科學(xué)(Science)，2601719-1720(1993))。歐洲專利申請0659418 A1，公開了使用某些苯并噻吩抑制AD。
雖然對AD機(jī)理的研究有所進(jìn)展，但仍需要開發(fā)治療該病的組合物和方法。治療方法應(yīng)優(yōu)選基于可以增加腦中TGF-β表達(dá)的藥物，從而可以減輕與AD相關(guān)的β-淀粉樣變性肽介導(dǎo)的神經(jīng)毒性和炎癥反應(yīng)。
本發(fā)明涉及抑制阿爾茨海默病的方法，包括給予待治的個體有效量的式I化合物或其藥物可接受的鹽
其中，R1和R2可以相同或不同，前提是當(dāng)R1和R2相同時，每個均為甲基或乙基，和當(dāng)R1和R2不同時，其中一個為甲基或乙基，另外一個為氫或芐基。優(yōu)選的式I化合物中R1和R2為甲基。優(yōu)選的鹽為檸檬酸鹽。
本發(fā)明涉及抑制阿爾茨海默病的方法，術(shù)語“抑制”定義為包含它的通?？山邮艿囊饬x，包括預(yù)防性治療一個病人以防止這些病癥的一種或多種的發(fā)生，持續(xù)地檢查該疾病的癥狀，和/或治療這些癥狀。因此，合適地講，本發(fā)明方法包括醫(yī)學(xué)治療和/或預(yù)防治療兩種。
本發(fā)明這一方法的實施包括給予待治的個體有效量的式I化合物或其藥物可接受的鹽
其中，R1和R2可以相同或不同，前提是當(dāng)R1和R2相同時，每個均為甲基或乙基，和當(dāng)R1和R2不同時，其中一個為甲基或乙基，另一個為氫或芐基。
式I化合物為本領(lǐng)域已知的，通過美國專利5,047,431記載的方法基本上可以制備，該文獻(xiàn)在此引入作為參考。
一個優(yōu)選的式I化合物為其中R1和R2均為甲基。這個優(yōu)選化合物已知為屈洛昔芬，(E)-1-[4′-(2-二甲氨基乙氧基)苯基]-1-(3-羥基苯基)-2-苯基丁-1-烯，它先前記載為一個抗雌激素劑，并且對治療激素依賴性哺乳動物的腫瘤有用(美國專利5,047,431)，也對由于雌激素或類似物缺乏引起的骨病的減輕有用(美國專利5,254,594)。另外，與其它抗雌激素化合物例如它莫西芬相比，屈洛西芬已知為具有較小的子宮促進(jìn)作用。
雖然式I化合物的自由堿形式可以用于本發(fā)明方法中，但是優(yōu)選制備和使用一種藥物可接受鹽的形式。因此，本發(fā)明方法使用的化合物形成藥物可接受的酸和堿的加成鹽，酸為各種無機(jī)酸，優(yōu)選有機(jī)酸，并且包括藥物化學(xué)中常用的生理可接受鹽。這些鹽也是本發(fā)明的一部分。用于形成此鹽的典型的無機(jī)酸包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、過磷酸等。也可使用由有機(jī)酸衍生的化合物，例如，脂肪族一元或二元羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸和羥基鏈烷二元酸、芳香酸、脂族和芳族的磺酸。因此這些藥物可接受鹽包括乙酸鹽、苯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、鄰-乙酰氧基苯甲酸鹽、萘-2-苯甲酸鹽、溴化物、異丁酸鹽、苯基丁酸鹽、β-羥丁酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-1，4-二酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、氯化物、肉桂酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、乙醇酸鹽、庚酸鹽、馬尿酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、羥基馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、異煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、對苯二甲酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、丙炔酸鹽、丙酸鹽、苯基丙酸鹽、水楊酸鹽、癸二酸鹽、丁二酸鹽、辛二酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、焦硫酸鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磺酸鹽、苯磺酸鹽、對-溴苯磺酸鹽、氯苯磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、對-甲苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽等等。優(yōu)選的鹽為檸檬酸鹽。
藥物可接受的酸加成鹽一般是通過式I化合物與等摩爾或過量的酸反應(yīng)制備的。反應(yīng)物通常在互溶劑例如乙醚或苯中結(jié)合。在一小時至10天內(nèi)該鹽一般從溶液中沉淀出來，并可以過濾分離或用常規(guī)方法除去溶劑。
與其母體化合物相比，式I化合物的藥物可接受鹽一般有較好的溶解性能，因此易于制成液體或乳液形式的制劑。
一旦制備完成，式I化合物的游離堿或鹽形式即可采取此處所述方法給藥于待冶個體。以下的非限制性試驗實施例說明本發(fā)明的方法。
在本發(fā)明方法中，式I化合物連續(xù)給藥或一天給藥1至4次。
此處的術(shù)語“有效量”指可以抑制此處病理癥狀表現(xiàn)的本發(fā)明方法的化合物量。根據(jù)本發(fā)明，化合物的給藥具體劑量應(yīng)根據(jù)特定的病例情況加以確定，例如，給藥化合物、給藥方式、病人狀態(tài)及待治病理癥狀的嚴(yán)重程度。通常的日劑量包含無毒的劑量水平，為本發(fā)明一種化合物約0.25mg～約100mg/天。優(yōu)選的日劑量為約10mg～約40mg/天。
本發(fā)明化合物可經(jīng)由各種途徑給藥，包括口服、直腸、透皮、皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)和鼻腔內(nèi)。這些化合物優(yōu)選在給藥前形成制劑，如何選擇由臨床醫(yī)師決定。通常，式I化合物或其藥物可接受鹽與一種藥物可接受的載體、稀釋劑或賦形劑結(jié)合以形成藥物制劑。
這樣的制劑中總的活性成份占制劑總量的0.1％至99.9％?！八幬锟山邮堋敝篙d體、稀釋劑、賦形劑、和/或鹽必須與制劑的其它成份配伍，并對病人無害。
采用本領(lǐng)域的公知技術(shù)方法和公知的易獲得的成分，可以制備含式I化合物的藥物制劑。例如，式I化合物可以與一般賦形劑、稀釋劑或載體一起配制并制成片劑、膠囊劑、懸浮劑、粉劑等等。適于此制劑的載體、賦形劑和稀釋劑的例子包括下述填充劑和增容劑，例如淀粉、蔗糖、甘露醇和硅酸衍生物粘合劑(如羧甲基纖維素和其它的纖維素衍生物)、藻酸鹽、凝膠和聚乙烯吡咯烷酮；潤濕劑例如甘油；分解劑例如碳酸鈣和碳酸氫鈉，延遲溶解劑如石蠟；吸收促進(jìn)劑如季銨化合物；表面活性劑如鯨蠟醇和甘油單硬脂酸酯、吸收載體例如高嶺土和皂土；潤滑劑例如滑石粉、硬脂酸鈣和鎂，以及固體聚乙二醇。
該化合物可以為方便口服做成酏劑或溶液制劑，或制成適于非腸道給藥的溶液劑，例如用于肌肉內(nèi)、皮下或靜脈內(nèi)給藥。
另外，該化合物很適于制成緩釋制劑等。這種制劑如此組成使之可以只釋放活性成分或優(yōu)選可能在一段延續(xù)時間內(nèi)在某一特定生理部位釋放。覆蓋物、包容物和保護(hù)基質(zhì)可由例如聚合物或蠟制得。
式I化合物一般以方便制劑給藥。以下的制劑實施例只用于說明而非意在限制本發(fā)明的范圍。
在下述制劑中，“活性成份”指式I的一種化合物或其鹽。
制劑1明膠膠囊硬明膠膠囊制備如下成份 量(mg/膠囊)活性成份0.25-100淀粉，NF(國家藥品集)0-650淀粉可流動粉0-50硅氧烷流體，350厘沲 0-15使用這些成份制備的一種片劑制劑如下制劑2片劑成份 量(mg/片)活性成份0.25-100纖維素，微晶200-650二氧化硅，泡沫化10-650硬脂酸 5-15將這些組分混合并壓成片劑。
另外，每片含0.25-100mg活性成份的片劑制備如下制劑3片劑成份 量(mg/片劑)活性成份0.25-100淀粉45纖維素，微晶35聚乙烯吡咯烷酮 4(10％水溶液)羧甲基纖維素鈉 4.5硬脂酸鎂0.5滑石粉 1活性成份、淀粉和纖維素濾過編號45目美國篩(No.45 mesh U.S.sieve)并徹底混合。聚乙烯吡咯烷酮與所得粉末混合，然后濾過編號14目美國篩。如此所得的顆粒在50-60℃干燥并濾過編號18目美國篩。羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂和滑石粉濾過編號60目美國篩，然后加入顆粒中，混合后在壓片機(jī)上壓制成片劑。
每5毫升藥劑含0.25-100mg活性成份的單位懸浮劑如下制備制劑4懸浮劑成份 量(mg/5ml)活性成份 0.25-100mg羧甲基纖維素鈉 50mg糖漿 1.25mg苯甲酸溶液 0.10ml調(diào)味劑 足量著色劑 足量純化水至5ml藥劑濾過編號45目美國篩，并與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合形成滑性糊狀物。在攪拌下加入用水稀釋的苯甲酸、調(diào)味劑和著色劑。然后加入足量的水至所需體積。制備含有下述成份的氣溶膠制劑5氣溶膠成份量(％重量)活性成份 0.25乙醇 25.75推進(jìn)劑22(氯代二氟甲烷) 70活性成份與乙醇混合，將混合物加入一部分推進(jìn)劑22中，冷卻至30℃，并移至一個填充裝置。然后將所需量加入一個不銹鋼容器并用剩余推進(jìn)劑稀釋。然后將閥部件裝入容器。
栓劑制備如下制劑6栓劑成份 量(mg/栓)活性成份 250飽和脂肪酸甘油酯 2000活性成份濾過編號60目美國篩，并懸浮于預(yù)先使用最低的必須熱熔化的飽和脂肪酸甘油酯中。然后將混合物傾入一個通常為2克容量的栓模中并進(jìn)行冷卻。
靜脈內(nèi)用的制劑制備如下制劑7靜脈內(nèi)溶液成份 量活性成份 20mg等滲鹽水 1,000ml上述組分的溶液以大約一分鐘一毫升速率靜脈內(nèi)注入病人體內(nèi)。
可以給藥式I化合物以預(yù)防性和/或治療性處理阿爾茲海默病。在治療性應(yīng)用中，將化合物給予已患病的宿主中。
在預(yù)防性應(yīng)用中，化合物給予易于患阿爾茲海默病的、但不一定已患病的宿主中?？梢杂苫驋呙韬团R床分析來確認(rèn)該宿主，如醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)中所述，參見如Goate，自然(Nature)，349704-706(1991)。無論預(yù)防性或治療性原因，接收本發(fā)明化合物的優(yōu)選組為閉經(jīng)后婦女。(參見如，Paganini-Hill，神經(jīng)科學(xué)協(xié)會摘要(Soc.Neurosci.Abs.，19，1046))。
根據(jù)本發(fā)明的式I化合物的給藥具體劑量應(yīng)根據(jù)待治病理癥狀的嚴(yán)重程度、給藥方式以及其他的由主治醫(yī)師決定的因素。通常，可接受的和有效的日劑量為約0.1mg～100mg/天，優(yōu)選的日劑量約10mg～40mg/天。這些劑量以每天一至三次給予待治個體，或根據(jù)需要更頻繁些，給藥時間足以抑制阿爾茲海默病或其癥狀的影響。
經(jīng)常地，將藥物組合物直接或間接引入大腦是理想的或必要的。直接的技術(shù)一般涉及藥物輸送導(dǎo)管放置在宿主的室系統(tǒng)以便越過血腦屏障。間接技術(shù)一般是優(yōu)選的，它包括將親水性藥物轉(zhuǎn)化為脂溶性藥物形成藥物制劑以提供藥物的潛化作用。潛化作用一般通過阻斷藥物上的羥基和氨基基團(tuán)使藥物更加脂溶化和易于穿越血腦屏障而實現(xiàn)。另外，通過動脈內(nèi)注入可以暫時打開血腦屏障的高滲溶液可以改善親水性藥物的輸送。
通常優(yōu)選將式I化合物以酸加成鹽的形式給藥，這是具有堿性基團(tuán)的藥物給藥的慣例。
檢測EP 0659418 A1記載了對治療AD有效的化合物的檢測。
支鏈淀粉可購于Bachem Inc.(Torrance，加利福尼亞州)，半島實驗室公司(Peninsula Laboratories，Inc.(Belmont，加利福尼亞州))和西格瑪化學(xué)品公司(Sigma Chemicals(St.Louis，密蘇里州))。淀粉樣蛋白-β(1-40)和反β-淀粉樣肽(40-1)可購于Bachem.Inc.。β2-微球蛋白可購于SigmaChemicals(St.Louis，密蘇里州)。
肽貯存液(1mM)在無熱源無菌的水中新鮮制備并在要求的培養(yǎng)基中稀釋至指示濃度。用肽或賦形劑處理鼠海馬培養(yǎng)物(體外10-14天)四天。鼠皮質(zhì)培養(yǎng)物的存活用相對比顯微技術(shù)觀察判斷并以測量釋放到培養(yǎng)基的乳酸脫氫酶(LDH)來定量。
檢測1采用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)體外培養(yǎng)原發(fā)鼠海馬神經(jīng)元。淀粉樣蛋白-β(Aβ)肽以25μm的正常毒性濃度加入培養(yǎng)的細(xì)胞中。處理4天后，存活性由測量釋放至培養(yǎng)基中的LDH來評價。用96孔板在標(biāo)準(zhǔn)340nm動力學(xué)的LDH檢測(Sigma目錄號#228-20)于20μl體積的條件確定的DMEM可分量中測量LDH。分析在37℃于PC-驅(qū)動EL 340微盤生物動力學(xué)(Microplate Biokinetics)盤讀數(shù)儀(Bio-Tek儀器)上進(jìn)行，數(shù)據(jù)分析用DeltaSoft II軟件(3.30B版本，BioMetallics，Inc.)。每一檢測均進(jìn)行含標(biāo)準(zhǔn)和升高的血清LDH水平(如，Sigma酶對照組2N和2E)的質(zhì)量對照標(biāo)準(zhǔn)。結(jié)果以LDH/升為單位表示，其中1個單位定義為在檢測條件下，每分鐘催化生成1微摩爾的輔酶I所需酶的量。對保護(hù)研究，在用Aβ處理之前和/或同時，式I的一種化合物加入到培養(yǎng)物中。
式I化合物的活性可用相對于對照組的釋放入培養(yǎng)基(神經(jīng)毒性指示劑)的LDH的減少來說明。
檢測2對5～15只鼠進(jìn)行15分鐘的四條血管閉合以致全身性缺血。閉合后15分鐘點的之前、同時和/或幾小時之后給予實驗動物和對照動物本發(fā)明的化合物。局部缺血性損害3天后處死動物，并以標(biāo)準(zhǔn)組織學(xué)方法觀察評估海馬和紋狀體的神經(jīng)元損傷。
式I化合物的活性以神經(jīng)元損傷的減少來說明。
檢測3選擇5～15名婦女進(jìn)行臨床研究。婦女均為閉經(jīng)后，即在研究開始前，已停止月經(jīng)6～12個月，她們診斷患有早期AD，并預(yù)料在研究期間AD癥狀將惡化，但其它方面健康狀態(tài)良好。研究有安慰劑對照組，即婦女分為兩組，一個組接受本發(fā)明的化合物，另一組接受安慰劑。對病人的與AD相關(guān)的記憶力、識別力、推斷力及其它癥狀進(jìn)行基準(zhǔn)點標(biāo)記。實驗組的婦女每天口服10～100mg的活性物質(zhì)。她們持續(xù)治療6～36個月。對兩組的作基準(zhǔn)點標(biāo)記的癥狀均作準(zhǔn)確記錄，并在研究結(jié)束時將這些結(jié)果進(jìn)行比較。研究開始前，結(jié)果不但在每組的成員間比較，并且每個病人的結(jié)果也與每個病人報告的癥狀相比較。被測藥物的活性由與AD相關(guān)的典型識別力衰退和/或行為失常的減弱來說明。
以上檢測的至少一項的活性可以證明式I化合物的實用性。
權(quán)利要求
1.一種抑制阿爾茨海默病的方法，包括給予待治的哺乳動物有效量的式I化合物或其藥物可接受鹽，
其中，R1和R2可以相同或不同，前提是當(dāng)R1和R2相同時，每個均為甲基或乙基，和當(dāng)R1和R2不同時，其中一個為甲基或乙基，另外一個為氫或芐基。
2.權(quán)利要求1的方法，其中式I化合物為其中R1和R2為甲基的化合物或其藥物可接受的鹽。
3.權(quán)利要求2的方法，其中所述的鹽為檸檬酸鹽。
4.式I化合物或其藥物可接受鹽在制備抑制阿爾茨海默病的藥物中的應(yīng)用，
其中，R1和R2可以相同或不同，前提是當(dāng)R1和R2相同時，每個均為甲基或乙基，和當(dāng)R1和R2不同時，其中一個為甲基或乙基，另外一個為氫或芐基。
5.權(quán)利要求4的應(yīng)用，其中式I化合物為其中R1和R2為甲基的化合物或其藥物可接受的鹽。
6.權(quán)利要求5的應(yīng)用，其中所述的鹽為檸檬酸鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供一種新的抑制阿爾茨海默病的方法，包括給予待治的哺乳動物有效量的式I化合物或其藥物可接受的鹽，其中，R
文檔編號A61P25/28GK1165650SQ97103410
公開日1997年11月26日 申請日期1997年2月28日 優(yōu)先權(quán)日1996年2月28日
發(fā)明者戴維·B·麥克萊恩, 戴維·D·湯普森 申請人:美國輝瑞有限公司