專利名稱：降血糖劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明是關于降低人血液中葡萄糖水平的方法，尤其是關于治療糖尿病的方法。
糖尿病是全身性疾病，其特征在于，在糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝中胰島素和其他調(diào)節(jié)激素的作用紊亂，以及血管的結構和功能異常。糖尿病的主要癥狀是高血糖，經(jīng)常伴有葡萄尿(在尿中有大量的葡萄糖)和多尿(排泄大量的尿)。另外的癥狀是慢性的和持續(xù)的糖尿病癥狀。這些癥狀包括血管壁的變性。雖然許多不同的器官均受上述血管變化的影響，但是神經(jīng)、眼睛和腎看來是最敏感的。因此，即使用胰島素進行治療，慢性的和持續(xù)的糖尿病還是導致眼瞎的一個因素。
有兩個類型公認的糖尿病。類型Ⅰ糖尿病是青少年型糖尿病，趨酮癥性糖尿病，發(fā)病高峰為青少年，帶有十分嚴重的癥狀，并幾乎肯定的有后期血管異常的預兆?？刂圃擃愋偷奶悄虿∈抢щy的，并且需要依賴外源性胰島素。類型Ⅱ糖尿病是成年型糖尿病，抗酮癥性糖尿病，發(fā)病高峰為成年，該類型糖尿病是較緩和的，并且逐漸的發(fā)展。
醫(yī)學科學歷史上最顯著的成績之一是1922年Banting和Best證明了胰島素對患糖尿病狗的治療作用。但是，糖尿病根本的生物化學障礙明確的實況即使今天仍然是未知的，因此，糖尿病仍然是一嚴重的健康問題。據(jù)信美國人口的2%患有某一形式的糖尿病。在高血糖的治療中，口服有效的降血糖劑是一重要的進展。口服降血糖劑通常用于治療成年型糖尿病。
Ⅱ型糖尿病的動物模型中有關葡萄糖代謝和人糖尿病的觀察研究表明，在高血糖的表現(xiàn)型中，性甾族化合物起許可的作用。這些觀察促進了有關雄激素和雌激素對血液葡萄糖水平影響的研究。給完整的或切除卵巢的雌性大鼠服用睪甾酮，產(chǎn)生與肌肉中形態(tài)學變化有關的顯著的抗胰島素作用，Holmang等Am.J.Physiol.，259，E555-560(1990);Holmang等AM.J.Physiol.，262，E851-855(1992)。在鏈佐霉素致糖尿病的大鼠中，植入的睪甾酮可拮抗余留的胰島素的作用以保持血糖含量，Le等Endocrinology，116，2450-2455(1985)。相反，在閹割后患糖尿病的KK小鼠中葡糖尿消失，但是當雄激素置于該小鼠中時又出現(xiàn)了葡糖尿，Nonaka等Jpn.J.Vet.Sci.，50，1121-1123(1988);Higuichi等Exp.Anim.，38，25-29(1989)。
服用雌激素的結果也支持了下述假設雄激素和雌激素之間的平衡對于高血糖的產(chǎn)生是關鍵性的。每天給患糖尿病的KK小鼠服用雌二醇，可以使血液葡萄糖水平正常并消除葡糖尿，Toshiro等Jpn.J.Vet.Sci.，51，823-826(1989)。雌二醇還可降低C57BL/6J-ob/ob小鼠的血液葡萄糖水平，DubucProc.Soc.Exp.Biol.Med.，180，468-473(1985)，以及C57BL/KsJ-db/db小鼠的血液葡萄糖水平，GarrisAnatomicalRecord，225，310-317(1989)。
本發(fā)明給需要降低血液葡萄糖濃度的哺乳動物提供了降低血液葡萄糖濃度的方法，該方法包括服用治療上有效劑量的抗雌激素類化合物或其藥學上適用的鹽或溶劑化物。
在本申請說明書和權利要求書中所用的短語“抗雌激素藥物”意指非內(nèi)生的、非甾族的化學化合物，該類化合物具有顯著的抗雌激素作用(下面進一步定義)，并且同時在某些選擇的組織和器官中具有激素或雌激素的作用。根據(jù)歷史的觀點，文獻是將雌激素劑看作是在體內(nèi)與雌激素受體結合(即與雌二醇競爭其受體)和抑制子宮或乳房對雌激素反應的化合物。許多所述化合物可以用作為抗生育劑、抗癌劑，或者如果抑制雌激素活性是有益的，那么還具有其他的病理作用。人們注意到，許多所述化合物是混合的激動劑-拮抗劑，即在某一劑量水平表現(xiàn)為雌激素激動劑，而在較高的劑量下為雌激素拮抗劑。測定經(jīng)典的抗雌激素藥物的方法對熟悉本技術領域的專業(yè)人員是熟知的，例如可參見Hayes，J.R.等J.A.Endocrinology，1981，108，164-172以及其他所列參考文獻。
近來發(fā)現(xiàn)，某些歷史上定義化學類別的抗雌激素藥物具有以有益的方式作用于某些雌激素敏感組織或器官的能力，同時在另一些組織或器官拮抗雌激素的反應。現(xiàn)在還不清楚這個差異是否可用定量交叉的激動劑-拮抗劑作用或者用定量的不同的機理來解釋。作為所述有益的實例，不同的敏感性可用雷洛昔芬(Raloxifene)降低絕經(jīng)后婦女中實質(zhì)上沒有不希望有的子宮作用的血清脂質(zhì)和骨吸收的能力來說明。
應該注意，不是所有的按以上分類所定義的抗雌激素藥物均具有本發(fā)明上述活性和效用。
一般來講，本發(fā)明所述抗雌激素化合物是經(jīng)典意義的抗雌激素化合物，但是它具有有益的雌激素性質(zhì)。最熟悉的化合物是三芳基乙烯類或(Z)三芳基丙烯酮胺類。其他的抗雌激素化合物是以其特征為基礎。
較好的和最好的本發(fā)明化合物具有最大的降血糖作用，并且在器官(如乳房和子宮)中還具有最小的不需要的雌激素副作用的一類化合物。參見Jones，C.D.等J.Med.Chem.，1984，27，1057-1066。此外，為了避免女性化副作用(如男子女性型乳房)，能大大降低雌激素激動劑活性的本發(fā)明較好的化合物可以最有效的用于治療男性患者。
本發(fā)明范圍內(nèi)包括的抗雌激素藥物是對雌激素受體具有明顯結合親和力的化合物，應用方程式Ki＝IC50/[1+(L/kd)]，由抑制劑IC50值計算的Ki值大于約0.05毫微摩爾～小于約5000毫微摩爾，其中L為放射性配位體濃度，kd為通過飽和研究或通過冷敏配位體自身結合抑制作用測得的配位體受體復合物的離解常數(shù)。
測定抗雌激素或雌激素活性的結合試驗的方法，對熟悉本技術領域的專業(yè)人員來講是已知的。例子見Black和GoodeLife Sciences，26，1453-1458(1980);Black和GoodeEndocrinology，109，987-989(1981);Black等Life Sciences，32，1031-1036(1983)。同樣，在上式所述的作為抑制劑IC50值函數(shù)的明顯(相對)結合親和性Ki，放射性配位體濃度和配位體受體復合物離解作用之間的關系對熟悉本技術領域的專業(yè)人員也是已知的。
測定雌激素/抗雌激素活性較好的方法可按下述方法進行。
下面各類抗雌激素劑已有報道，并且相信可用于本發(fā)明方法中1)三芳基乙烯類；2)2，3-二芳基-2H-1-苯并吡喃類；3)1-氨烷基-2-苯基吲哚類；4)2-苯基-3-芳?；讲⑧绶灶?；5)1-取代-2-芳基-二氫萘類；以及6)2-取代-3-芳基苯并呋喃類。下面較詳細地敘述以上各類。
用于本發(fā)明化合物的一般化學術語具有其常用的意義。例如單獨的或作為其他取代基部分的術語“烷基”意指有所述碳原子數(shù)目的直鏈或支鏈的烷基，例如甲基、乙基、丙基和異丙基，以及較高的同系或異構的基團。
術語“烷氧基”意指通過氧原子連接的有所述數(shù)目碳原子的烷基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基和己氧基，以及具有支鏈的結構例如異丙氧基和異丁氧基。
術語“C1-C7-鏈烷酰氧基”意指基團-O-C(O)-Ra，這里Ra為氫或C1-C5烷基，因此它包括甲酰氧基、乙酰氧基、丙酰氧基、丁酰氧基、戊酰氧基、己酰氧基等，并且還包括支鏈的異構基團如2，2-二甲基丙酰氧基和3，3-二甲基丁酰氧基。
同樣，術語“C4-C7環(huán)鏈烷酰氧基”意指基團-O-C(O)-(C3-C5環(huán)烷基)，這里C3-C5烷基包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。
術語“(C1-C6烷氧基)-C1-C7鏈烷酰氧基”意指基團-O-C(O)-Rb-O-(C1-C5烷基)，這里Rb為一化學鍵(C1-C5烷氧基羰氧基)或C1-C5烷烴二基，因此包括例如甲氧基羰氧基、乙氧基羰氧基、丙氧基羰氧基、丁氧基羰氧基、甲氧基乙酰氧基、甲氧基丙酰氧基、甲氧基丁酰氧基、甲氧基戊酰氧基、甲氧基己酰氧基、乙氧基乙酰氧基、乙氧基丙酰氧基、乙氧基丁酰氧基、乙氧基戊酰氧基、乙氧基己酰氧基、丙氧基乙酰氧基、丙氧基丙酰氧基、丙氧基丁酰氧基等。
術語“未取代或取代的芳酰氧基”意指基團-O-C(O)-芳基，這里芳基是苯基、萘基、噻吩基或呋喃基，它們可以是未被取代的，或者由羥基、鹵素、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基單取代。
術語“未取代或取代的芳氧基羰氧基”意指基團-O-C(O)-O-芳基，這里芳基是苯基、萘基、噻吩基或呋喃基，它們可以是未被取代的，或者由羥基、鹵素、C1-C3烷基或C1-C3烷氧基單取代。
術語“鹵素”意指氯、氟、溴或碘。
術語“藥學上適用的鹽”是指對活的機體基本上是無毒的以上各類化合物的鹽。常用的藥學上適用的鹽，包括根據(jù)化合物上取代基的類型，由上述類型化合物與藥學上適用的無機酸或有機酸，或者與藥學上適用的堿金屬或有機堿反應制得的鹽。
可以用于制備藥學上適用的鹽的藥學上適用的無機酸的實例包括鹽酸、磷酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸、亞磷酸等?？梢杂糜谥苽渌帉W上適用的鹽的藥學上適用的有機酸其實例包括脂肪族一羧酸和二羧酸、草酸、碳酸、檸檬酸、琥珀酸、苯基取代的鏈烷酸、脂肪族和芳香族磺酸等。由無機酸和有機酸制得的所述藥學上適用的鹽包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硝酸鹽、硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氫碘酸鹽、氫氟酸鹽、乙酸鹽、丙酸鹽、甲酸鹽、草酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、對甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、馬來酸鹽等。
通過與藥學上適用的堿金屬或有機胺反應，可以將許多含有羧基、羰基、羥基或亞砜基團的以上各類化合物轉變?yōu)樗帉W上適用的鹽。可以用于制備藥學上適用的鹽的藥學上適用的有機堿的實例包括氨、胺類(如三乙醇胺、三乙胺、乙胺等)。藥學上適用的堿金屬堿實例包括通式MOZ化合物，其中M代表堿金屬原子，例如鈉、鉀或鋰，Z代表氫或C1-C4烷基。
應該認識到，生成本發(fā)明任何鹽的具體的陰離子或陽離子不是關鍵性的，只要該鹽整個地是藥學上適用的，以及只要該陰離子或陽離子部分不提供非所要求的性質(zhì)。
此外，一些用于本發(fā)明方法中已公開的化合物可以與水或常用有機溶劑生成溶劑化物。所述溶劑化物包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
第一類抗雌激素藥物包括三芳基乙烯類化合物。所述化合物是廣泛已知的，已在下述文獻中公開并可按所列文獻方法制得美國專利4，536，516；美國專利2，914，563；Ogawa等Chem.Pharm.Bull.，39(4)，911(1991)，將這些文獻并入本申請中作為參考。在該類中具體的化合物包括三苯氧胺、氧芪酚胺和(Z)-4-[1-[4-[2-(二甲氨基)乙氧基]苯基]-2-(4-異丙基苯基)-1-丁烯基]苯基-磷酸酯。
三芳基乙烯類化合物包括具有下式的化合物及其藥學上適用的鹽和溶劑化物
其中R為式-OCnH2nA的堿性醚基團，這里n為2、3或4，A為二烷氨基，這里烷基獨立地含有1-4個碳原子，或者A為選自N-哌啶基、N-吡咯烷基、N-嗎啉基和N-六亞甲基亞氨基的環(huán)狀結構；每個R1獨立地為氫、羥基、鹵素或甲氧基。
美國專利4，536，516公開了屬于三芳基乙烯類的具有下式的三苯氧胺及其藥學上適用的酸加成鹽和溶劑化物，并且公開了合成的方法。
同樣，美國專利2，914，563公開了具有下式的三芳基乙烯類化合物及其藥學上適用的鹽和溶劑化物
其中R為式-OCnH2nA的堿性醚基團，這里n為2、3或4，A為二烷氨基，這里烷基獨立地含有1-4個碳原子，或者A為例如N-哌啶基、N-吡咯烷基或N-嗎啉基的環(huán)狀結構，基團-OCnH2nA在乙烯基碳原子連接的苯基的對位；每個R1各自獨立地為氫、羥基、鹵素或甲氧基;X為鹵素。
合成上述化合物的方法已經(jīng)公開。
在Ogawa等發(fā)表的文獻(見前)中，公開了具有下式的三芳基乙烯類化合物及其藥學上適用的鹽和溶劑化物 其中R2和R3系獨立地選自氫和甲基；R4為異丙基、異丙烯-2-基、或者為一或二羥基異丙基；R5為羥基或磷酸酯(-OPO3H2)。
該文獻還公開了上述化合物的合成方法。
第二類抗雌激素藥物包括2，3-二芳基-2H-1-苯并吡喃類化合物。該類化合物已在EP470310A1和Sharma等J，Med.Chem.，33，3210，3216，3222(1990)中公開，并且可以按照所述文獻方法制備，將這些文獻并入本申請中作參考。該類中具體的化合物包括2-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-3-[4-羥基苯基]-2H-1-苯并吡喃;2-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-3-苯基-7-甲氧基-2H-1-苯并吡喃;2-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]-3-[4-羥基苯基]-7-羥基-2H-1-苯并吡喃。
EP470310A1公開了具有下式的苯并吡喃類化合物及其藥學上適用的鹽和溶劑化物 其中R6和R7可以相同或不同，它們可以為氫、羥基、C1-C17烷氧基或C2-C18烷氧基羰基； 所述苯并吡喃類化合物的合成方法已在上述文獻中公開。
第三類抗雌激素藥物包括1-氨烷基-2-苯基吲哚。所述化合物已在VonAngerer等J.Med.Chem.，33，2635(1990)中公開，并可以按所述方法制備，將該文獻并入本申請中作為參考。
VonAngerer等在上述文獻中敘述的1-氨烷基-2-苯基吲哚為具有下式的化合物及其藥學上適用的鹽和溶劑化物 其中R9為氫或甲基；R10和R11為甲氧基或羥基；m為4-8；Y為NR12R13，這里R12和R13系獨立地選自氫、甲基和乙基；或者R12或R13中之一為氫，另一為芐基；或者R12和R13與氮原子一起構成吡咯烷基、哌啶基或嗎啉基。
上述化合物的合成方法已具體地公開，將該文獻并入本申請中作為參考。
第四類抗雌激素藥物包括2-苯基-3-芳?；讲b]噻吩；(Z-三芳基丙烯酮類)。所述化合物已在美國專利4，133，814；美國專利4，418，068和Jones等J.Med.Chem.，27，1057-1066(1984)中公開，并可按所述方法制備，將上述文獻并入本申請中作為參考。在該類中具體的實例化合物包括雷洛昔芬[6-羥基-2-(4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽，以前稱為凱歐西芬；以及[6-羥基-2-(4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]苯基]甲酮鹽酸鹽。
在美國專利4，133，814中列舉了2-苯基-3-芳酰基苯并[b]噻吩類化合物及其藥學上適用的酸加成鹽和溶劑化物，它們具有下式結構 Ⅵ其中R16為氫、羥基、C1-C5烷氧基、C1-C7鏈烷酰氧基、C3-C7環(huán)烷酰氧基、(C1-C5烷氧基)-C1-C7鏈烷酰氧基、取代或未取代的芳酰氧基，或者為取代或未取代的芳氧基羰氧基；R17為氫、羥基、C1-C5烷氧基、金剛酰氧基、氯、溴、C1-C7鏈烷酰氧基、C3-C7環(huán)烷酰氧基、(C1-C6烷氧基)-C1-C7鏈烷酰氧基、取代或未取代的芳酰氧基，或者為取代或未取代的芳氧基羰氧基；R18為-O-CH2-CH2-X1-NR19R20；X1為一鍵或-CH2-，R19和R20獨立地為C1-C4烷基，或者R19與R20和它們所連接的氮原子一起構成吡咯烷基、哌啶基、六亞甲基亞氨基或嗎啉基環(huán)。
合成上述化合物的方法已在美國專利4，133，814中公開。雷洛昔芬(Raloxifene)及其制備方法已在美國專利4，418，068中公開。
第五類抗雌激素藥物包括1-取代-2-芳基-二氫萘類化合物。該類化合物已在美國專利4，400，543、4，323，707、4，230，862和3，274，213中公開，并且可按所述方法制備，將這些文獻并入本申請中作為參考。該類中具體的化合物實例包括萘氧啶和氫萘吡苯酮。
美國專利4，230，862列舉了1-取代-2-芳基-二氫萘，所述化合物為下式化合物及其藥學上適用的酸加成鹽和溶劑化物 其中Z為-CH2-CH2-或-CH＝CH-；R16為氫、羥基或C1-C5烷氧基；R17為氫、羥基、C1-C5烷氧基、C1-C5酰氧基、C1-C5烷氧基羰氧基、芐氧基、金剛酰氧基、氯或溴；R18為C1-C5烷氧基或-O-CH2-CH2-NR19R20；這里R19和R20獨立地為C1-C4烷基，或者它們與其所連接的氮原子一起構成吡咯烷基、哌啶基、六亞甲基亞氨基或嗎啉基環(huán)，其限制是當R17為氫時，R16為氫、羥基或C1-C5烷氧基，并且R16和R17中之一不是氫。
合成上述化合物的方法已在美國專利4，230，862中公開。
美國專利3，274，213中還列舉了1-取代-2-芳基-二氫萘類化合物，所述化合物為下式化合物及其藥學上適用的鹽和溶劑化物 其中R19和R20為C1-C8烷基，或者它們與其所連接的氮原子一起形成五至七元飽和的選自以下的雜環(huán)基吡咯烷基、2-甲基吡咯烷基、2，2-二甲基吡咯烷基、哌嗪基、4-甲基哌嗪基、2，4-二甲基哌嗪基、嗎啉基、哌啶基、2-甲基哌啶基、3-甲基哌啶基、六亞甲基亞氨基、高哌嗪基和高嗎啉基;
q為2-6；p為1-4；R21為C1-C8烷氧基。
合成這些化合物的方法已經(jīng)公開。
第六類抗雌激素藥物包括2-取代-3-芳基-苯并呋喃類化合物。所述化合物已在Teo等J.Med.Chem.，35，1330-1339中公開，并且可按照所述方法制備，將該文獻并入本申請中作為參考。
Teo等J.Med.Chem.，35，1330-1339(1992)中敘述的2-取代-3-芳基-苯并呋喃類化合物包括下式化合物及其藥學上適用的鹽和溶劑化物 Ⅸ其中X2為鹵素；Y2為一鍵或-CH2-;
R22為氫或甲基;
R23為基團-NR19R20，這里R19和R20獨立地為C1-C4烷基，或者R19和R20與它們所連接的氮原子一起構成吡咯烷基、哌啶基、六亞甲基亞氨基或嗎啉基環(huán)。
合成上述化合物的方法也已經(jīng)公開。
用于本發(fā)明方法中較好的化合物是苯并噻吩類。更好的化合物是具有下式的苯并噻吩類化合物及其藥學上適用的鹽和溶劑化物
Ⅹ其中X1為一鍵或-CH2-；R16為羥基、甲氧基、C1-C7鏈烷酰氧基、C3-C7環(huán)烷酰氧基、(C1-C5烷氧基)-C1-C7鏈烷酰氧基、取代或未取代的芳酰氧基、或者為取代或未取代的芳氧基羰氧基；R17為氫、羥基、氯、溴、甲氧基、C1-C7鏈烷酰氧基、C3-C7環(huán)烷酰氧基、(C1-C6烷氧基)-C1-C7鏈烷酰氧基、取代或未取代的芳酰氧基，或者為取代或未取代的芳氧基羰氧基;
Y1為選自吡咯烷基、哌啶基或六亞甲基亞氨基的雜環(huán)。特別好的是雷洛昔芬(Raloxifene)及它的吡咯烷基類似物。
本發(fā)明提供了降低哺乳動物血液葡萄糖水平的方法，該方法包括服用治療上有效劑量的抗雌激素化合物或其藥學上適用的鹽或溶劑化物。這里定義的術語“治療上有效劑量”意指患成年型糖尿病或易患成年型糖尿病的人在服藥之后提供降低血糖作用所需化合物的劑量。如果合適，本發(fā)明方法的降血糖作用包括治療和/或預防處理。在用口服降血糖劑進行治療的同時應用胰島素或胰島素衍生物也在本發(fā)明范圍內(nèi)。應用的輔助治療藥物可以由主治醫(yī)師根據(jù)情況決定。
本發(fā)明化合物在體內(nèi)的降血糖作用可以由化合物對活的雄性過度肥胖的糖尿病黃色小鼠的試驗結果來測定。下面敘述試驗方法。
應用由Lilly得到的5～6月齡的雄性先天過度肥胖的糖尿病黃色小鼠(VY/WfL-Avy/a，稱為糖尿病小鼠)。20年前，帶有Avy變異的VY品系由Dr.George L.Wolff處轉移到Lilly研究實驗室。該群體通過Avy/a和a/a小鼠之間的姐妹×兄弟近親交配維持。活的雄性黃色小鼠是肥胖的、高血糖的、高胰島素的和抗胰島素的。
小鼠置于帶有基底的塑料籠內(nèi)，每只塑料籠內(nèi)放置6只小鼠，并供應水和PurinaFormulabChow5008(PurinaMills，St.Louis.MO)，任意飲用。動物房的溫度保持在23±2℃。動物房內(nèi)的光亮為0600～1800h。
以各種劑量作為混合物飼料進行抗雌激素藥物試驗。每個劑量的抗雌激素藥物用同一籠中的6只小鼠進行試驗。將化合物與粉碎的飼料混合，并重新制成球狀。用作為對照的小鼠給予不含任何試驗化合物的球狀飼料。在試驗前和試驗開始后每周從尾靜脈采集血樣。按葡萄糖氧化酶方法，應用300型AlpkemRapidFlowAnalyzer(Clackamaus，OR)測定血液葡萄糖濃度。
表1、2和3中所列數(shù)值是每次試驗得到的平均值，而每個表報告的是一個獨立的試驗。劑量是根據(jù)實際食物消耗和體重計算的平均劑量。表2列出了ICI164384的結果，ICI164384是實質(zhì)上沒有雌激素作用的抗雌激素藥物，因此它是在本發(fā)明范圍以外的。根據(jù)方差分析，用最小顯著差進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學分析。
表1試驗化合物對肥胖的糖尿病小鼠的降血糖作用試驗化合物劑量血糖濃度(mg/dl)(mg/kg/天)0天7天14天三苯氧胺0.08483±15280±42288±280.20466±31194±29196±230.74533±16240±32188±202.30450±39183±22207±26氫萘吡苯酮0.09483±20223±26234±320.27501±13192±27164±140.88471±32186±27158±122.00501±32154±24141±4未處理的對照組0.02543±31457±27434±9
表2試驗化合物對肥胖的糖尿病小鼠的降血糖作用試驗化合物劑量血糖濃度(mg/dl)(mg/kg/天)0天7天14天天ICI164384N-正丁基-N-甲基-11-(3,17β-二羥雌甾-1,3,5(10)-三烯-7α-基)十一酰胺0.03366±17326±21317±300.30381±28388±16327±142.80383±27292±26297±15[6-羥基-2-(4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]苯基]-甲酮鹽酸鹽0.03354±13361±14318±150.24327±20250±33210±261.95379±18185±44163±3217α-乙炔基雌甾二醇0.02400±17108±3105±2
表3試驗化合物對肥胖的糖尿病小鼠的降血糖作用試驗化合物劑量血糖濃度(mg/dl)(mg/kg/天)0天7天14天雷洛昔芬0.1363±23354±16357±110.28406±20378±17314±110.84373±34239±39196±352.4407±14231±34165±327.36390±10210±26177±2517α-乙炔基雌甾二醇0.025399±10186±10151±14下面的步驟將描述測定上述化合物的雌激素/抗雌激素活性的優(yōu)選方法。
股骨密度75天齡的雌性SpragneDawley大鼠(體重范圍為225g-275g)來自CharlesRiver實驗室(Portage，MI)。分成3組飼養(yǎng)，可任取食物和飲水(食物中鈣含量約1%)。室溫保持在22.2℃±1.7℃，最低相對濕度為40%。室內(nèi)光照周期為12小時光照，12小時黑暗。
大鼠在實驗室飼養(yǎng)一周以后，在麻醉下作雙側卵巢切除手術(麻醉劑為44mg/kg體重氯胺酮和5mg/kg體重甲苯噻嗪(ButlerIndianapolis，IN)肌內(nèi)注射給藥)。在手術的當天，動物從麻醉中蘇醒后即開始分3組給藥處理，第1組給予藥物賦形劑，第2組給予雌激素，第3組給予待測化合物。以管飼注口服給藥0.5ml，賦形劑為1%羧甲基纖維素(CMC)或20%環(huán)糊精。手術前給大鼠稱體重，以后每周稱體重一次，給藥劑量隨體重改變而調(diào)整。以藥物賦形劑或雌激素給藥的卵巢切除(ovex)大鼠和非卵巢切除(完整)大鼠作為陰性對照或陽性對照，與每個給予待測藥物實驗組一同平行作試驗評價。
大鼠每天給藥處理，共連續(xù)35天(每個給藥組6只大鼠)，第36天以二氧化碳室息法活殺大鼠。據(jù)此實驗結果表明，連續(xù)35天給藥時間，對于卵巢切除的大鼠，使其產(chǎn)生骨質(zhì)密度最大程度的降低是足夠的。動物活殺時，取出子宮，切去外部無關的組織，排出液體內(nèi)含物，然后測量子宮凈重，用于確證由于卵巢完全切除而引起的雌激素不足。由于卵巢切除，子宮重量通常減少約75%。然后，將子宮置于用中性緩沖液配制的10%福爾馬林中固定，以便用于下一步組織學檢查。
切開右側股骨，用單色光吸光測定法仔細檢查距髕骨溝1mm處的，干骨后端(干骺端)。密度計測定的結果相當于骨質(zhì)密度的計算結果，以骨礦物質(zhì)含量和骨寬度的函數(shù)來表示。
與完整的大鼠賦形劑給藥對照組相比較，大鼠卵巢切除引起股骨骨質(zhì)密度降低約25%。雌激素，以口服有效的乙炔基雌二醇(EE2)的形式給藥，可以防止由此而引起的骨質(zhì)密度降低，并顯示具有與劑量相關的作用方式，但是，雌二醇還顯示對子宮具有刺激作用，當以100μg/kg體重給藥時，可使卵巢切除的大鼠子宮重量接近于完整大鼠子宮的重量。
子宮的組織學參數(shù)子宮上皮細胞的高度增加是治療藥物具有雌激素作用的一個征兆，并且還可能與子宮癌癥發(fā)生率增加有關。以卵巢切除的大鼠作對照組，對子宮上皮細胞長度增加進行比較。雌二醇處理組可增加子宮上皮細胞高度，使子宮上皮的厚度超過完整大鼠。
雌激素作用還可以通過檢查嗜曙紅細胞浸潤進入子宮基質(zhì)層的逆向反應來測定。正如所預料，雌二醇可引起嗜曙紅細胞浸潤作用大大增加。
還對子宮基質(zhì)層和子宮肌層的厚度作了測量。結果表明，雌激素可引起這二個參數(shù)增加。
對雌激素作用的總體評估是所有這四個參數(shù)的綜合結果。
一些資料可能以骨質(zhì)密度降低抑制作用百分數(shù)和子宮重量增加百分數(shù)的形式給出報告，其計算方法如下骨質(zhì)密度降低抑制作用百分數(shù)＝(卵巢切除給藥動物的骨質(zhì)密度-卵巢切除不給藥動物的骨質(zhì)密度)÷(卵巢切除雌激素給藥動物骨質(zhì)密度-卵巢切除不給藥動物的骨質(zhì)密度)×100。
子宮重量增加百分數(shù)＝(卵巢切除給藥動物的子宮重量-卵巢切除動物的子宮重量)÷(卵巢切除雌激素給藥動物的子宮重量-卵巢切除動物的子宮重量)×100。
血清酯水平75天齡的雌性SpragneDawley大鼠(體重范圍為200g-225g)，來自CharlesRiver實驗室(Portage，MI)。動物先在CharlesRiver實驗室施行雙側卵巢切除術或給于假手術處理，然后，在手術后一周啟程運送。運達后將大鼠分養(yǎng)在金屬網(wǎng)籠內(nèi)，每籠3或4只，可以任取食物和飲水(食物中鈣含量約為0.5%)。室溫保持在22.2℃±1.7℃，最低相對濕度為40%。室內(nèi)光照周期為12小時光照，12小時黑暗，如此飼養(yǎng)一周。
給藥方式/樣品組織采集動物被訓養(yǎng)一周后(因此為雙側卵巢切除術后二周)，開始用待測化合物每天給藥，所有待測化合物都是口服給藥，劑量為1ml/kg體重。17β-雌二醇以20%聚乙烯二醇作賦形劑皮下給藥。17α-乙炔基雌二醇和待測化合物，以1%羧甲基纖維素或20%環(huán)糊精作賦形劑，制成混懸液口服給藥。對動物每天給藥，連續(xù)4天，按上述方式給藥完成后，給動物稱體重，然后以氯胺酮∶甲苯噻嗪(2∶1(V/V))混合麻醉劑麻醉動物，用心臟穿刺法采集血液樣品，采血樣品后，CO2室息法活殺動物，從腹中線切口取出子宮，并測量其凈重。
膽固醇分析血液樣品在室溫下放置2小時使之凝固，然后以每分鐘3000轉離心10分鐘，得到血清。用BoehringerMannheim診斷儀，以高效膽固醇檢測法測定血清膽固醇。簡而言之，就是先將膽固醇氧化成膽甾-4-烯-3-酮，和過氧化氫。然后過氧化氫在過氧化物酶存在下與苯酚和4-氨基安替比林反應，生成對醌亞胺染料，此染料可用分光光度計在500nm處測定。根據(jù)標準曲線可計算出膽固醇的濃度。借助于BiomekAutomatedWorkstation上述整個測定過程可自動完成。
子宮嗜曙紅細胞過氧化物酶(EPO)測定作酶分析測定之前，子宮一直在4℃下保存。測定時，先將子宮在50倍體積的含0.005%TritonX-100的50mMTris緩沖液(pH8.0)中制成勻漿。在向Tris緩沖液子宮勻漿內(nèi)加入0.01%過氧化氫和10mM鄰苯二胺(最后濃度)后，立即在450nm波長下監(jiān)測光吸收率增加1分鐘。子宮內(nèi)出現(xiàn)嗜曙紅細胞是待測化合物具有雌激素活性的一個指針。測定表明，對子反應曲線的起始線性部分，持續(xù)15秒后反應達到最大速度。
實驗分組所有的實驗組都由5或6只動物組成。
與完整動物給予賦形劑的對照組相比較，大鼠卵巢切除引起了血清膽固醇增加。雌激素，以口服有效的乙炔基雌二醇(EE2)的形式給藥，可引起血清膽固醇以劑量相關的作用方式降低。但是，雌激素對子宮也有刺激作用，當以100μg/kg/天的劑量給藥時，可使卵巢切除大鼠的子宮重量接近于完整大鼠子宮的重量。
組織學參數(shù)組織學評估按上述方法進行。
化合物對依賴雌激素的哺乳動物腫瘤的抑制活性，可根據(jù)美國專利Nos.4，133，814和4，418，068中敘述的的程序進行評價。
用于本發(fā)明方法中的化合物在廣泛的劑量范圍內(nèi)是有效的。例如，每天的劑量通常在約10～1000mg/kg體重的范圍內(nèi)。在成年人治療中，優(yōu)選的劑量為約50～600mg/kg，一次服用或分次服用。但是，應該認識到，實際服用的劑量將由醫(yī)生根據(jù)有關的情況(例如需治療的病情、選擇服用的化合物、患者的年齡、體重和反應、癥狀的嚴重程度以及選用的給藥途徑)來決定。因此，上述劑量范圍無論如何無意限制本發(fā)明的范圍。雖然本發(fā)明化合物優(yōu)選口服途徑給藥，但是本發(fā)明化合物也可以經(jīng)許多其他途徑給藥(例如經(jīng)皮給藥、皮下給藥、鼻內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥和靜脈給藥)。
雖然可以直接地服用本發(fā)明化合物，但是最好以藥用組合物的形式應用，該組合物由藥學上適用的載體、稀釋劑或賦形劑以及本發(fā)明化合物組成。所述組合物含有約0.01～99%本發(fā)明化合物。
配制本發(fā)明的組合物中，有效化合物通常至少與一種載體混合，或至少用一種載體稀釋，或封入膠囊、小藥囊、紙或其他形式的載體中。當載體用作稀釋劑時，它可以是固體、半固體或液體，它們可以作為有效成分的載體、賦形劑或介質(zhì)。因此，組合物可以為片劑、顆粒劑、丸劑、粉劑、錠劑、小藥囊、扁囊劑、酏劑、乳劑、溶液劑、糖漿劑、混懸劑、氣霧劑(作為固體或在液體介質(zhì)中)以及軟明膠膠囊和硬明膠膠囊。
合適載體、稀釋劑和賦形劑的實例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯樹脂、磷酸鈣、藻酸鹽、液體石蠟、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、黃著膠、明膠、糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯和羥基苯甲酸丙酯、植物油(例如橄欖油)、可注射的有機酯(例如油酸乙酯)、滑石、硬脂酸鎂、水和礦物油。該組合物還可包括濕潤劑、潤滑劑、乳化劑和混懸劑、防腐劑、甜味劑、芳香劑、穩(wěn)定劑或調(diào)味劑?？梢詰帽炯夹g領域已知的方法配制本發(fā)明組合物，以便在患者服用后提供快速、緩釋或延效的有效成分。
對于口服給藥，可以將本發(fā)明化合物與載體和稀釋劑充分地混合并模壓成片劑或裝入明膠膠囊中。
組合物最好以單元劑量形式進行制劑，每個劑量含約1～500mg有效成分，通常含約5-300mg有效成分。術語“單元劑量形式”是指適合作為人和哺乳動物單次劑量的物理上獨立的單位，為了產(chǎn)生所需的治療作用每個單元劑量含有預定量經(jīng)計算的有效成分，并與其藥學上適用的載體、稀釋劑或賦形劑混合。
為了進一步充分闡明本發(fā)明的操作，提供以下制劑實施例。這些實施例僅僅是為了說明，無意限制本發(fā)明的范圍。上述任一抗雌激素化合物可用作為這些制劑的有效化合物。
制劑1用以下成分配制硬明膠膠囊劑每個膠囊的量濃度(重量%)有效成分250mg55.0干燥淀粉220mg43.0硬脂酸鎂10mg2.0460mg100.0將上述成分混合并以460mg的量裝入硬明膠膠囊。
制劑2按下法配制每個含20mg藥物的膠囊每個膠囊的量濃度(重量%)有效成分20mg10.0淀粉89mg44.5微晶纖維素89mg44.5硬脂酸鎂2mg1.0200mg100.0將有效成分、纖維素、淀粉和硬脂酸鎂混合，并通過美國45號篩，然后裝入硬明膠膠囊。
制劑3按下法配制每個含100mg有效成分的膠囊每個膠囊的量濃度(重量%)有效成分100mg29.0聚氧乙烯山梨糖醇-油酸酯50mcg0.02粉末狀淀粉250mg71.0350.05mg100.02將上述成分充分地混合，并裝入空明膠膠囊。
制劑4按下法配制每片含10mg有效成分的片劑每片的量濃度(重量%)有效成分10mg10.0淀粉45mg45.0微晶纖維素35mg35.0聚乙烯吡咯烷酮4mg4.0(10%水溶液)羧乙基淀粉鈉4.5mg4.5硬脂酸鎂0.5mg0.5滑石1mg1.0100mg100.0將有效成分、淀粉和纖維素通過美國45號篩并充分混合。使得到的粉末與聚乙烯吡咯烷酮溶液混合，然后再通過美國14號篩。制得的顆粒于50°-60℃干燥，并通過美國18號篩。羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂和滑石預先通過美國60號篩，然后加到顆粒中，混合后于壓片機上壓片，得到重100mg的片劑。
制劑5用以下成分配制片劑每片的量濃度(重量%)有效成分250mg38.0微晶纖維素400mg60.0煙霧狀二氧化硅10mg1.5硬脂酸5mg0.5665mg100.0將各成分混合，并壓制成每片重665mg的片劑。
制劑6按下法配制每40ml劑量含5mg藥物的混懸液劑每5ml混懸液有效成分5mg羧甲基纖維素鈉50mg糖漿1.25ml苯甲酸溶液0.10ml食用香料適量著色劑適量水適量至5ml
將藥物通過美國45號篩，并與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合形成流暢的糊。苯甲酸溶液、食用香料和著色劑用一些水稀釋，并在攪拌下加入上述糊中。然后加入足量的水以形成所需體積。
制劑7制備含下列成分的氣溶膠溶液濃度(重量%)有效成分0.25乙醇29.75推進劑2270.00(氯二氟甲烷)100.00將有效化合物與乙醇混合，混合物加到一部分推進劑22中，于-30℃冷卻并轉入灌裝設備中。然后將所需量加入不銹鋼容器中，用剩余量的推進劑進一步稀釋。然后將閥門裝置裝到容器上。
權利要求
1.抗雌激素化合物在制備降低血液葡萄糖濃度的藥物中的應用，所述抗雌激素化合物系選自以下化合物及其藥學上適用的鹽和溶劑化物1)三芳基乙烯類；2)2，3-二芳基-2H-1-苯并吡喃類；3)1-氨基烷基-2-苯基吲哚類；4)2-苯基-3-芳?；讲⑧绶灶?；5)1-取代的-2-芳基二氫萘類；以及6)苯并呋喃類。
2.權利要求1的應用，其中所述抗雌激素化合物為具有下式的三芳基乙烯及其藥學上適用的鹽和溶劑化物 或 在式Ⅰ和Ⅱ中，R為式-OCnH2nA的堿性醚基團，n為2、3或4，A為二烷氨基，這里烷基含有1-4個碳原子，或者A為選自N-哌啶基、N-吡咯烷基、N-六亞甲基亞氨基和N-嗎啉基的環(huán)結構，每個R1各自獨立地為氫、羥基、鹵素或甲氧基；X為鹵素；在式Ⅲ中R2和R3系獨立地選自氫和甲基，R4為異丙基、異丙烯-2-基、一或二羥基異丙基，R5為羥基或磷酸酯(-OPO3H2)。
3.權利要求1的應用，其中所述抗雌激素化合物為2，3-二芳基-2H-1-苯并吡喃及其藥學上適用的鹽和溶劑化物。
4.權利要求3的應用，其中所述2，3-二芳基-2H-1-苯并吡喃及其藥學上適用的鹽和溶劑化物具有下式結構 其中R6和R7可以相同或不同，它們可以是氫、羥基、C1-C17烷氧基或C2～C18烷氧基羰基，
5.權利要求1的應用，其中所述抗雌激素化合物為具有下式的1-氨烷基-2-苯基吲哚及其藥學上適用的鹽和溶劑化物， 其中R9為氫或甲基，R10和R11為甲氧基或羥基，m為4～8，Y為NR12R13，其中R12和R13系獨立地選自氫、甲基和乙基或者R12或R13中之一為氫，另一為芐基，或者R12和R13與該氮原子一起構成吡咯烷基、哌啶基或嗎啉基。
6.權利要求1的應用，其中所述抗雌激素化合物為具有下式的2-苯基-3-芳?；讲b]噻吩及其藥學上適用的酸加成鹽和溶劑化物 其中R16為氫、羥基或C1～C5烷氧基C1～C7鏈烷酰氧基、C3～C7環(huán)烷酰氧基、(C1～C6烷氧基)-C1～C7鏈烷酰氧基、取代或未取代的芳酰氧基、取代或未取代的芳氧基羰氧基，R17為氫、羥基、C1～C5烷氧基、金剛酰氧基、氯、溴、C1～C7鏈烷酰氧基、C3～C7環(huán)烷酰氧基、(C1～C5烷氧基)-C1～C7鏈烷酰氧基、取代或未取代的芳酰氧基、取代或未取代的芳氧基羰氧基，R18為-O-CH2-CH2-X1-NR19R20，這里X1為一鍵或-CH2-，R19和R20獨立地為C1～C4烷基，或者R19和R20與它們所連接的氮原子一起構成吡咯烷基、哌啶基、六亞甲基亞氨基或嗎啉環(huán)。
7.權利要求6的應用，其中所述的2-苯基-3-芳?；讲b]噻吩為[6-羥基-2-(4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲酮及其藥學上適用的鹽和溶劑化物。
8.權利要求6的應用，其中所述的2-苯基-3-芳?；讲b]噻吩為[6-羥基-2-(4-羥基苯基)苯并[b]噻吩-3-基][4-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]苯基]甲酮及其藥學上適用的鹽和溶劑化物。
9.權利要求1的應用，其中所述的抗雌激素化合物為具有下式的1-取代的-2-芳基-二氫萘及其藥學上適用的鹽和溶劑化物 在式Ⅶ中Z為-CH2-CH2-或-CH＝CH-；R16為氫、羥基或C1～C5烷氧基；R17為氫、羥基、C1～C5烷氧基、C1～C5酰氧基、C1～C5烷氧基羰氧基、芐氧基、金剛酰氧基、氯或溴；R18為C1～C5烷氧基或-O-CH2-CH2-NR19R20，R19和R20獨立地為C1～C4烷基，或者R19和R20與它們所連接的氮原子一起構成吡咯烷基、哌啶基、六亞甲基亞氨基或嗎啉環(huán)；其限制是當R17為氫時，R16為氫、羥基或C1～C5烷氧基，并且R16和R17中至少一個不是氫，在式Ⅷ中，R19和R20為C1～C8烷基，或者它們與所連接的氮原子一起形成選自以下的五～七元飽和的雜環(huán)基吡咯烷基、2-甲基吡咯烷基、2，2-二甲基吡咯烷基、哌嗪基、4-甲基哌嗪基、2，4-二甲基哌嗪基、嗎啉基、哌啶基、2-甲基哌啶基、3-甲基哌啶基、六亞甲基亞氨基、高哌嗪基和高嗎啉基，q為2～6；p為1～4；R21為C1～C8烷氧基。
10.權利要求1的應用，其中所述的抗雌激素化合物為具有下式的2-取代的-3-芳基-苯并呋喃及其藥學上適用的鹽和溶劑化物； 其中X2為鹵素；Y2為一鍵或-CH2-；R22為氫或甲基；R23為基團-NR19R20，這里R19和R20獨立地為C1～C4烷基，或者它們與所連接的氮原子一起構成吡咯烷基、哌啶基、六亞甲基亞氨基或嗎啉環(huán)。
11.用于降低人血液葡萄糖濃度的藥物制劑，該制劑包括權利要求1～10中任何一項定義的化合物。
全文摘要
本發(fā)明提供了治療哺乳動物高血糖的方法，該方法包括服用抗雌激素化合物及其藥學上適用的鹽和溶劑化物。
文檔編號A61P3/08GK1100933SQ9410756
公開日1995年4月5日 申請日期1994年6月23日 優(yōu)先權日1993年6月24日
發(fā)明者G·J·庫里南, T·T·嚴 申請人:伊萊利利公司