專(zhuān)利名稱(chēng)：一種鮮土貝母提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥提取物及其制備方法，特別涉及ー種鮮土貝母ニ氯甲烷提取物及其制備方法，屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
土貝母為葫蘆科植物土貝母[Bolbostemma paniculatum(Maxim. )Franquet]的干燥塊莖，是ー種傳統(tǒng)中藥。其又被稱(chēng)為土貝、大貝母、地苦膽、草貝等。主產(chǎn)于河南、陜西、山東等地。臨床具有清熱解毒、消腫散結(jié)之功效。土貝母所含的主要成分有脂肪酸、留醇、三萜皂苷等。分離出來(lái)的多種化學(xué)成分經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明具有抗腫瘤作用。據(jù)文獻(xiàn)調(diào)查，所進(jìn)行的理化實(shí)驗(yàn)材料多為土貝母干品，而用土貝母鮮品進(jìn)行研究者甚少。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種鮮土貝母提取物，本發(fā)明另一目的在于提供該提取物的制備方法。本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明鮮土貝母提取物的制備方法包括如下步驟取土貝母鮮品800 1200重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過(guò)10目篩，置索氏·提取器中，用6 10重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近無(wú)色，揮去藥渣中的石油醚，用6 10重量倍的ニ氯甲烷提取至提取液近無(wú)色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在50 70°C狀態(tài)下，真空干燥，得ニ氯甲烷提取物；本發(fā)明鮮土貝母提取物的制備方法可以?xún)?yōu)選為如下步驟取土貝母鮮品1000重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過(guò)10目篩，置索氏提取器中，用8重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近無(wú)色，揮去藥渣中的石油醚，用8重量倍的ニ氯甲烷提取至提取液近無(wú)色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在60°C狀態(tài)下，真空干燥，得ニ氯甲烷提取物；本發(fā)明鮮土貝母提取物制備方法還可以?xún)?yōu)選為如下步驟取土貝母鮮品900重量份，用蒸餾水洗浄，用研缽研碎，過(guò)10目篩，置索氏提取器中，用9重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近無(wú)色，揮去藥渣中的石油醚，用9重量倍的ニ氯甲烷提取至提取液近無(wú)色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在55°C狀態(tài)下，真空干燥，得ニ氯甲烷提取物；本發(fā)明鮮土貝母提取物的制備方法還可以?xún)?yōu)選為如下步驟取土貝母鮮品1100重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過(guò)10目篩，置索氏提取器中，用7重量倍的石油醚回流提取至回流提取液近無(wú)色，揮去藥渣中的石油醚，用7重量倍的ニ氯甲烷提取至提取液近無(wú)色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在65°C狀態(tài)下，真空干燥，得ニ氯甲烷提取物；取本發(fā)明土貝母ニ氯甲烷提取物，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)ェ藝，制成片劑、膠囊
4劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸剤、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、ロ服液體制劑、凍干粉針劑或注射制劑。上述本發(fā)明藥物組合物及其制備方法中的重量份與體積份的關(guān)系為g/ml的關(guān)系O本發(fā)明首次以鮮土貝母為原料，通過(guò)提取富集及柱層析的方法富集特定洗脫組分。該發(fā)明方法提取的有效部位提取物成分純度高，成分相對(duì)清晰，富集方法簡(jiǎn)單，重復(fù)性好。下述實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)ー步說(shuō)明但不限于本發(fā)明。實(shí)驗(yàn)例一 MTT法測(cè)定取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腫瘤細(xì)胞，用含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)配成濃度為7000個(gè)/ml，接種于96孔板，每孔加入200 μし細(xì)胞貼壁后，分別加入50 μ L 土貝母鮮品ニ氯甲烷提取物(實(shí)施例I制備)藥物溶液，試藥按濃度遞增原則各設(shè)5個(gè)不同的濃度，終濃度分別為O. l、l、10，20，40g/ml，每種藥的每種濃度均設(shè)10個(gè)平行孔，空白陰性對(duì)照組為等容積的RPMI-1640培養(yǎng)基。在37°C、5% CO2條件下培養(yǎng)48h。每孔加入20 μ L濃度為5mg/ml的MTT溶液，振蕩混勻后繼續(xù)培養(yǎng)4h。棄去上清液，每孔加入150 μ L DMSO溶液，輕輕振蕩10分鐘使MTT甲瓚沉淀溶解，用酶標(biāo)儀(測(cè)定波長(zhǎng)為570nm)測(cè)定其OD值，計(jì)算抑制率，求IC50、IC90。按下列公式計(jì)算藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞増殖的抑制率。抑制率(％ ) = [1_(藥物組OD值-空白組OD值V(對(duì)照組-空白組OD值)]*100%為了證明實(shí)驗(yàn)結(jié)果的客觀(guān)性及可重復(fù)性，我們進(jìn)行了三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表ー
和表ニ。 表ー該藥物對(duì)MCF-7細(xì)胞體外抑制作用結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種鮮土貝母提取物，其特征在于該提取物由如下方法制成 取土貝母鮮品800 1200重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過(guò)10目篩，置索氏提取器中，用6 10倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無(wú)色，揮去藥渣中的石油醚，用6 10倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無(wú)色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在50 70°C狀態(tài)下，真空干燥，即得土貝母提取物。
2.如權(quán)利要求I所述的土貝母提取物，其特征在于該提取物由如下方法制成 取土貝母鮮品1000重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過(guò)10目篩，置索氏提取器中，用8倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無(wú)色，揮去藥渣中的石油醚，用8倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無(wú)色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在60°C狀態(tài)下，真空干燥，備用，即得土貝母提取物。
3.如權(quán)利要求I所述的土貝母提取物，其特征在于該提取物由如下方法制成 取土貝母鮮品900重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過(guò)10目篩，置索氏提取器中，用9倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無(wú)色，揮去藥渣中的石油醚，用9倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無(wú)色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在55°C狀態(tài)下，真空干燥，即得土貝母提取物。
4.如權(quán)利要求I所述的土貝母提取物，其特征在于該提取物由如下方法制成 取土貝母鮮品1100重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過(guò)10目篩，置索氏提取器中，用7倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無(wú)色，揮去藥渣中的石油醚，用7倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無(wú)色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在65°C狀態(tài)下，真空干燥，即得土貝母提取物。
5.如權(quán)利要求1-4任一所述的土貝母提取物，其特征在于取本發(fā)明土貝母提取物，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)エ藝，制成片劑、膠囊劑、散劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、速釋制劑、控釋制劑、ロ服液體制劑、凍干粉針劑或注射制劑。
6.一種鮮土貝母提取物的制備方法，其特征在于該方法為 取土貝母鮮品800 1200重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過(guò)10目篩，置索氏提取器中，用6 10倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無(wú)色，揮去藥渣中的石油醚，用6 10倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無(wú)色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在50 70°C狀態(tài)下，真空干燥，即得土貝母提取物。
7.如權(quán)利要求6所述的土貝母提取物的制備方法，其特征在于該方法為 取土貝母鮮品1000重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過(guò)10目篩，置索氏提取器中，用8倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無(wú)色，揮去藥渣中的石油醚，用8倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無(wú)色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在60°C狀態(tài)下，真空干燥，即得土貝母提取物。
8.如權(quán)利要求6所述的土貝母提取物的制備方法，其特征在于該方法為 取土貝母鮮品900重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過(guò)10目篩，置索氏提取器中，用9倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無(wú)色，揮去藥渣中的石油醚，用9倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無(wú)色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在55°C狀態(tài)下，真空干燥，即得土貝母提取物。
9.如權(quán)利要求6所述的土貝母提取物的制備方法，其特征在于該方法為取土貝母鮮品1100重量份，用蒸餾水洗凈，用研缽研碎，過(guò)10目篩，置索氏提取器中，用7倍重量的石油醚回流提取至回流提取液近無(wú)色，揮去藥渣中的石油醚，用7倍重量的ニ氯甲烷提取至提取液近無(wú)色，提取液減壓回收ニ氯甲烷至干，在65°C狀態(tài)下，真空干燥，即得土貝母提取物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種土貝母提取物的制備方法。該提取物由以下制備方法制成取土貝母鮮品，經(jīng)石油醚回流提取，揮去藥渣中的石油醚，再經(jīng)二氯甲烷提取，回收二氯甲烷至干，真空干燥，備用即得。本發(fā)明首次以鮮土貝母為原料，通過(guò)常規(guī)提取富集，并采用柱層析的方法富集特定洗脫組分。該發(fā)明方法提取的有效部位提取物成分純度高，成分相對(duì)清晰，富集方法簡(jiǎn)單，重復(fù)性好。
文檔編號(hào)A61K36/42GK102908381SQ20111022199
公開(kāi)日2013年2月6日 申請(qǐng)日期2011年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月4日
發(fā)明者傅延齡 申請(qǐng)人:北京中醫(yī)藥大學(xué)