專利名稱：小鵝瘟卵黃抗體凍干保護(hù)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于家禽抗體保存技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種小鵝瘟卵黃抗體的凍干保護(hù)齊U、及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
小鵝瘟，又稱鵝細(xì)小病毒感染，是雛鵝的一種急性敗血性傳染病，可經(jīng)消化道和呼吸道感染，并可經(jīng)卵垂直傳播?；疾※Z精神萎頓、食欲廢絕、嚴(yán)重下痢，有時出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。目前本病呈世界性分布，主要發(fā)生于20日齡以內(nèi)的雛鵝，發(fā)病率和死亡率可達(dá)90-100%，且發(fā)病日齡越小，死亡率越高，對養(yǎng)鵝業(yè)的發(fā)展影響極大。雛番鴨亦可感染小鵝瘟病毒，并有類似的臨床表現(xiàn)。小鵝瘟卵黃抗體是用小鵝瘟疫苗多次免疫蛋禽，當(dāng)達(dá)到一定程度后收集禽蛋經(jīng)提取純化后制備的抗體制劑。其可有效預(yù)防和治療小鵝瘟病毒引起的鵝群相關(guān)疾病，減輕小 鵝瘟造成的危害，在臨床上得到廣泛應(yīng)用。目前，國內(nèi)小鵝瘟卵黃抗體都是經(jīng)稀釋分裝而成的液體劑型，存在著體積大，運(yùn)輸不便，需低溫保存和運(yùn)輸。由于反復(fù)凍融和運(yùn)輸不當(dāng)很容易造成效價降低，而冷凍干燥能使萃取抗體在預(yù)先冷凍的狀態(tài)下，不經(jīng)液態(tài)直接升華除去水分而獲得凍干制劑，它避免了液態(tài)下保存的抗體易失活易變性的缺點(diǎn)，使產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，體積縮小，便于運(yùn)輸及長時間保存。目前常用的凍干保護(hù)劑種類有多羥基化合物、糖類、蛋白質(zhì)、聚合物、氨基酸、鹽和表面活性劑等。但鑒于畜禽養(yǎng)殖用藥開發(fā)的特點(diǎn)，凍干保護(hù)劑成本不能太高、凍干操作要簡單。因此，研發(fā)出一種配方簡單、成本低廉、能夠批量制備的小鵝瘟卵黃抗體凍干保護(hù)劑就顯得尤為迫切和重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種小鵝瘟卵黃抗體的凍干保護(hù)劑及其制備方法，從而彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。本發(fā)明的小鵝瘟卵黃抗體的凍干保護(hù)劑，為包含有明膠、海藻糖、甘氨酸的蒸餾水溶液。上述的凍干保護(hù)劑，各組分濃度質(zhì)量體積百分比g/ml為0. 5-2%明膠、4_7%海藻糖和O. 8-1. 2%甘氨酸。上述凍干保護(hù)劑配方各組分濃度優(yōu)選為1%明膠、6%海藻糖和1%甘氨酸。上述的凍干保護(hù)劑中還加入有大豆蛋白胨，加入的大豆蛋白胨的質(zhì)量體積百分比g/ml濃度為5-10%，優(yōu)選為8%。將小鵝瘟卵黃抗體與上述凍干保護(hù)劑以提及比7:1比例混合，作為小鵝瘟卵黃抗體凍干液體。本發(fā)明的凍干保護(hù)劑組分簡單、成本低廉、易于制備。從而解決了小鵝瘟卵黃抗體的長途運(yùn)輸、保存的低溫儲存難題。使用效果表明本發(fā)明的凍干保護(hù)劑可使小鵝瘟卵黃抗體在2-8°C下保存12個月以上，25°C下保存6個月以上。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，但這些實(shí)例僅是范例性的，并不對本發(fā)明中應(yīng)用的常規(guī)技術(shù)作限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明的技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明保護(hù)范圍內(nèi)。實(shí)施例I小鵝瘟卵黃抗體的凍干保護(hù)劑配制在IOOml的蒸餾水中加入Ig明膠、6g海藻糖、Ig甘氨酸后，使各組分充分溶解后，調(diào)PH值至7. 2 7. 4，經(jīng)滅菌處理后，2 8°C保存?zhèn)溆?。?shí)施例2小鵝瘟卵黃抗體的凍干保護(hù)劑配制在IOOml的蒸餾水中加入Ig明膠、6g海藻糖、Ig甘氨酸和8g大豆蛋白胨后，使各 組分充分溶解，調(diào)PH值至7. 2 7. 4，經(jīng)滅菌處理后2 8°C保存?zhèn)溆谩?shí)施例3小鵝瘟卵黃抗體的凍干將小鵝瘟卵黃抗體與上述實(shí)施例I制備的凍干保護(hù)劑以體積比7:1比例混合，作為小鵝瘟卵黃抗體凍干液體。預(yù)凍階段凍干液體常溫進(jìn)箱，I小時將制品降至-40°C并維持4小時。升華階段1小時將制品從-40°C升至_8°C并維持14小時。解吸干燥階段0. 5小時將制品從_8°C升至28°C并維持10小時，凍干全程30. 5小時。實(shí)施例4小鵝瘟卵黃抗體的凍干制劑的性狀、剩余水分和抗體效價將凍干后小鵝瘟卵黃抗體的凍干制劑分別放置2_8°C和25°C環(huán)境下保存，定期觀察抗體的性狀、剩余水分和效力。性狀、剩余水分檢測方法參見現(xiàn)行《獸用生物制品檢驗(yàn)規(guī)程》，抗體效價采用雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(AGP)打孔將制備好的瓊脂板按模板用打孔器打孔，并挑出孔中的瓊脂。中心I孔，周圍6孔，孔徑3 mm,孔距4 mm,用熔化瓊脂補(bǔ)孔底。加樣中央孔加入標(biāo)準(zhǔn)瓊擴(kuò)抗原，周圍孔分別加入2倍系列稀釋的待檢小鵝瘟卵黃抗體，各孔加樣25μ1。將加樣后的瓊脂板放入填有濕紗布的盒內(nèi)，置20-25°C室溫或37°C溫箱，24 h初判，72 h終判。結(jié)果判定待檢小鵝瘟卵黃抗體與抗原孔之間也出現(xiàn)沉淀線，且與標(biāo)準(zhǔn)陽性血清沉淀線末端相吻合，即判為陽性。當(dāng)待檢小鵝瘟卵黃抗體與抗原孔之間無沉淀線出現(xiàn)時，即判為陰性。當(dāng)待檢小鵝瘟卵黃抗體最高稀釋度孔與抗原孔之間形成清晰沉淀線時，即判為瓊擴(kuò)效價。結(jié)果小鵝瘟卵黃抗體凍干后和2_8°C保存12個月、25°C保存6個月，抗體物理性狀保持穩(wěn)定，均為微黃色疏松團(tuán)塊，易與瓶壁分離；剩余水分均為2. 12%左右；抗體效價均為1:128以上，未見下降。表I小鵝瘟卵黃抗體凍干制劑檢驗(yàn)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種小鵝瘟卵黃抗體的凍干保護(hù)劑，所述的凍干保護(hù)劑為包含有明膠、海藻糖和甘氨酸的蒸餾水溶液。
2.如權(quán)利要求I所述的凍干保護(hù)劑，其特征在于所述的明膠、海藻糖、甘氨酸的濃度如下0. 5-2%明膠、4-7%海藻糖和O. 8-1. 2%甘氨酸。
3.如權(quán)利要求2所述的凍干保護(hù)劑，其特征在于所述的明膠、海藻糖、甘氨酸的濃度如下1%甘露醇、6%海藻糖、I %甘氨酸。
4.權(quán)利要求I所述的凍干保護(hù)劑，其特征在于，在蒸餾水溶液中還加入有大豆蛋白胨。
5.如權(quán)利要求4所述的凍干保護(hù)劑，其特征在于所述的大豆蛋白胨的加入濃度為5-10%ο
6.如權(quán)利要求5所述的凍干保護(hù)劑，其特征在于所述的大豆蛋白胨的加入濃度為8%。
7.一種小鵝瘟卵黃抗體的凍干制劑，其特征在于，所述的凍干制劑的制備方法如下首先將小鵝瘟卵黃抗體與權(quán)利要求I或權(quán)利要求4所述的凍干保護(hù)劑以7:1比例混合，作為小鵝瘟卵黃抗體凍干液體，然后將凍干液體常溫下放入冷凍箱，I小時將制品降至_40°C并維持4小時；然后在I小時內(nèi)將制品從_40°C升至_8°C并維持14小時；最后在O. 5小時將制品從_8°C升至28°C并維持10小時完成制備。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種小鵝瘟卵黃抗體的凍干保護(hù)劑、其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明凍干保護(hù)劑由以下重量體積百分比的組分組成0.5-2%明膠、4-7%海藻糖、0.8-1.2％甘氨酸，剩余成分為蒸餾水。將以上各組分混合均勻，蒸汽滅菌即得本發(fā)明凍干保護(hù)劑。上述的凍干保護(hù)劑還加入了大豆蛋白胨。通過試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明凍干保護(hù)劑對小鵝瘟卵黃抗體的的保護(hù)效果良好，其保護(hù)效果要明顯優(yōu)于現(xiàn)有保護(hù)劑的保護(hù)效果。
文檔編號A61P31/20GK102824645SQ20121031712
公開日2012年12月19日 申請日期2012年8月30日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月30日
發(fā)明者王宏華, 孫海新, 凌紅麗, 魏波, 董婷婷 申請人:青島康地恩藥業(yè)股份有限公司, 青島寶依特生物制藥有限公司