專利名稱：達瑪烷型皂甙人參低元醇衍生物及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到具有達瑪烷為母環(huán)結(jié)構(gòu)的新的人參低元醇衍生物及其制備方法，以及此系列化合物作為藥物的應(yīng)用。
三七皂甙具有多種重要生理活性，如對心臟血管疾病作用代謝，增加免疫作用等，但作用不夠強。又且分離各種皂甙單體的技術(shù)，不能適用于生產(chǎn)。使用總皂甙由于組成的皂甙單體不一致，多糖甙性疚不穩(wěn)定導(dǎo)造成療效不穩(wěn)定。所以分離三七中二種主要皂甙元人參二醇及人參三醇半合成性質(zhì)穩(wěn)定的衍生物，以增強其效果，穩(wěn)定其療效，適用于生產(chǎn)及臨床應(yīng)用，很有必要。
本發(fā)明的目的是提供一系列具有抗癌活性而且毒性低的化合物、化合物的制備方法以及作為藥物的應(yīng)用。
本發(fā)明所述的達瑪烷型皂甙人參低元醇衍生物具有式Ⅰ的通式，式Ⅰ為 式Ⅰ中，R＝H、COCH2CH2COOK，COCH2CH2COONa、 (簡稱Ⅱ)，R′＝Ⅱ、H、OCOCH2CH2COONa。當R＝H時，R′＝Ⅱ，式Ⅰ所表示的化合物為人參三醇葡萄糖甙，分子式C36H62O9，白色晶體。當R＝COCH2CH2COOK時，R′＝H，式Ⅰ所表示的化合物為人參二醇琥珀酸鉀，分子式C34H55O6K，白色晶體，360℃以上變色。當R＝COCH2CH2COONa時，R′＝OCOCH2COONa，式Ⅰ所表示的化合物為人參三醇琥珀酸鈉，分子式C38H58O10Na2，白色晶體，300℃以上變色。當R＝Ⅱ時，R′＝H，式Ⅰ所表示的化合物為人參二醇葡萄糖甙，分子式C36H62O8，白色晶體，熔點223-226℃。
人參三醇葡萄糖甙C36H62O9的制備方法為取人參三醇4-5g，干燥乙醚90-190ml，二氯乙烷85-120ml混合，加熱溶解，加乙酰溴代葡萄糖6-12g，回流攪拌4-10小時，再加入碳酸銀4-7.9g回流攪拌4-10小時，過濾，濾液回收溶劑，殘余物溶于甲醇，過濾，濾液加入蒸餾水至溶液渾濁，再加入6-12ml三乙胺，室溫攪拌8-14小時，回收溶劑至干，通過硅膠柱層析，以氯仿-甲醇9∶1沖洗，即得成品。
人參二醇琥珀酸鉀C34H55O6K的制備方法a將人參二醇，琥珀酸酐，吡啶按1-3∶5-6∶15-20的比例混合，加熱攪拌回流，室溫放冷，傾入冷水中，有沉淀析出，過濾得灰白色沉淀物，將沉淀物溶于乙醇中，加熱溶解，加活性炭脫色，減壓過濾，回收乙醇，放冷，有白色簇狀結(jié)晶析出，濾干，得人參二醇琥珀酸;b、人參二醇琥珀酸加入丙酮中攪拌溶解，滴加KOH無水乙醇溶液，攪拌直至沉淀完全，靜置，過濾，沉淀物用丙酮洗滌，減壓過濾，即得成品。
人參三醇琥珀酸鈉C38H58O10Na2的制備方法為a、將人參三醇、琥珀酸酐、吡啶按1-2.5∶3-6∶9-12的比例混合，在134-135℃的油浴中回流3-5小時，然后將反應(yīng)混合物傾入水中，靜置、過濾、干燥，得灰白色固體，將此固體溶于乙醇中，以活性炭脫色，過濾，濾液傾入水中，靜置，濾取析出物，制得人參三醇3，6-二琥珀酸。
b、將人參三醇-3，6-二琥珀酸溶于丙酮中，攪拌滴入NaOH甲醇溶液至沉淀完全，過濾，用丙酮洗滌，干燥，得成品。
本發(fā)明所述的人參三醇葡萄甙糖、人參二醇琥珀酸鉀、人參三醇琥珀酸鈉以及人參二醇葡萄糖甙(簡稱B′3)經(jīng)實驗，具有較強的抑瘤效應(yīng)和殺傷癌細胞的能力。上述化合物的人癌細胞體外培養(yǎng)殺傷試驗數(shù)據(jù)見表1，結(jié)果表明，上述化合物具有殺傷肺腺癌細胞的作用，并有明顯的濃度-效應(yīng)依賴關(guān)系，最終濃度為100μg/ml以上時，殺傷率可超過50%。B′3對Lewis肺癌抑瘤作用如表2所示，結(jié)果表明連續(xù)給藥7天對Lewis肝癌有明顯的抑瘤作用，50mg/kg組抑瘤率為53.3%，達到規(guī)程要求。在同等條件下與順鉑相比其抑瘤作用稍低于順鉑。B′3對H22肝癌腹水型延壽作用如表3所示，結(jié)果表明，連續(xù)給藥7天H22肝癌有明顯延壽作用，50mg/kg組能延壽155.3%，達到規(guī)程要求，在同等條件下與順鉑相比，其抗腫瘤作用與化療藥相當。B′3對小鼠艾氏EAS抑瘤作用如表4所示，結(jié)果表明，連續(xù)給藥7天，對艾氏EAS有明顯的抑瘤作用，其作用強度與順鉑相當。
本發(fā)明所述的達瑪烷型皂甙人參低元醇衍生物分別以12-25mg/ml，可以制成醫(yī)藥上可接受的劑型制劑。
實施例1、人參三醇葡萄糖甙的制備人參三醇4.2克、乙酰溴代葡萄糖7.2克、乙醚(干燥)190毫升、二氯乙烷85毫升、碳酸銀7.9克制備方法
人參三醇，干燥乙醚，二氯乙烷混合物加熱溶解，加入乙酰溴代葡萄糖，回流攪拌10小時，加入碳酸銀回流攪拌10小時，過濾，回收溶劑，殘余物用20ml甲醇溶解，濾除不溶物，濾液加水至渾濁(加入水約10-15ml)，加12ml三乙胺攪拌12小時，回收溶劑至干，吸附在5克160-200目硅膠上通過85克硅膠濕法上柱，以9∶1氯仿沖洗，每份50毫升，第10-19份收集人參三醇葡萄糖甙。重0.94克。
2、人參三醇琥珀酸鈉的制備(A)人參三醇-3，6-二琥珀酸的制備4.76克人參三醇和20克琥珀酸酐溶于50ml吡啶中，在134-135℃的油浴中回流3.5小時，然后將反應(yīng)混合物傾入800ml水中靜置過夜，過濾，干燥，得到6.57克灰白色固體。將此溶于200ml95%乙醇之中，以活性炭脫色，過濾，濾液傾入800ml水中(醇1∶水4-5)，靜置過夜，過濾，濃硫酸真空干燥器內(nèi)真空干燥，得白色固體5.46克，產(chǎn)率80.8%。
(B)人參三醇琥珀酸鈉的制備3.0克的人參三醇-3.6-二琥珀酸溶于600ml丙醇中，在不斷攪拌下，滴入10ml1N的NaOH甲醇溶液，滴至沉淀完全，繼續(xù)攪拌1小時，過濾，真空干燥，得3.13g白色固體。
3、人參二醇琥珀酸鉀的制備人參二醇3克，琥珀酸酐6克，吡啶15毫升，裝入100ml三角錐形瓶中，水浴上攪拌回流，反應(yīng)2小時，放冷，傾入300毫升冷水中，有沉淀析出，減壓抽濾，得白色沉淀物。TLC反應(yīng)呈一點，上述反應(yīng)物溶于200ml(95%)乙醇中，加熱溶解，活性炭適當脫色，減壓抽濾，回收乙醇至約30ml，放冷有白色簇狀針晶析出，抽濾、干燥，得3g產(chǎn)品，產(chǎn)率100%。
TLC條件展開劑CHC13-MeOH(9∶1)顯色劑15%硫酸乙醇溶液，105℃加熱。薄層板硅膠G板。
8克人參二醇琥珀酸置于500ml錐形瓶中，加入400ml丙酮，充分攪拌，緩緩滴入0.5mlKOH乙醇液，共30ml，繼續(xù)攪拌20分鐘，靜置片刻，待沉淀完全，減壓過濾，沉淀物用丙酮洗滌3次，每次10ml，沉淀自然干燥，研細，稱重得白色粉末7.5gm，得率94%。
4、人參二醇葡萄糖甙(B′3)的制備(A)溴代四乙酰葡萄糖的制備在500ml的三頸瓶中，裝上攪拌，加入乙酸酐及少許濃硫酸，攪拌情況下，分次加入葡萄糖，控制溫度60-80℃，加完后繼續(xù)攪拌30分，冰水冷卻至30℃以下，分次加入紅磷，加完后繼續(xù)攪拌30分鐘，30℃以下緩緩滴加Br2，加完后，瓶塞塞好，放冰箱中過夜。加入定量水，以氯仿提取，氯仿層水洗，加入CaC12干燥，過濾，濾液減壓收回氯仿，殘余物無水乙醇中重結(jié)晶，真空干燥。
(B)乙酰化B′3制備人參二醇，乙酰化溴代葡萄糖，無水乙醚，二氯乙烷溶液，水浴上加熱到40℃，加入碳酸銀，避光攪拌8小時，過濾，回收溶劑殘余物加20ml甲醇，過濾除去不溶物，蒸干甲醇，上硅膠柱，以石油醚-丙酮8∶2洗脫，得乙?；疊′3。得率約25%。
(3)B′3的制備乙?；疊′3加入甲醇溶解，滴加水至微渾，加入三乙胺，室溫攪拌10小時，蒸干溶劑，乙醇中結(jié)晶，薄層檢查B′3及人參二醇，結(jié)晶溶于甲醇，通過硅膠柱層析，石油醚-丙酮8∶2洗脫人參二醇，再以氯仿-甲醇9∶1沖洗得B′3，在醋酸乙酯中結(jié)晶，得率約10%。
表1.
表2.
權(quán)利要求
1.一種達瑪烷型皂甙人參低元醇衍生物，具有式Ⅰ的通式，式Ⅰ為 其特征在于式Ⅰ中，R=H、COCH2CH2COOK、COCH2CH2COONa、 (簡稱Ⅱ)，R′=Ⅱ、H、OCOCH2CH2COONa。
2.按照權(quán)利要求1所述的衍生物，其特征在于當R＝H時，R′＝Ⅱ，式Ⅰ所表示的化合物為人參三醇葡萄糖甙，分子式C36H62O9，白色晶體。
3.按照權(quán)利要求1所述的衍生物，其特征在于當R＝COCH2CH2COOK時，R′＝H，式Ⅰ所表示的化合物為人參二醇琥珀酸鉀，分子式C34H55O6K，白色晶體，360℃以上變色。
4.按照權(quán)利要求1所述的衍生物，其特征在于當R＝COCH2CH2COONa時，R′＝OCOCH2COONa，式Ⅰ所表示的化合物為人參三醇琥珀酸鈉，分子式C38H58O10Na2，白色晶體，300℃以上變色。
5.按照權(quán)利要求1所述的衍生物，其特征在于當R＝Ⅱ時，R′＝H，式Ⅰ所表示的化合物為人參二醇葡萄糖甙，分子式C36H62O8，白色晶體，熔點223-226℃。
6.按照權(quán)利要求2所述的衍生物的制備方法，其特征在于所述的人參三醇葡萄糖甙C36H62O9的制備方法為取人參三醇4-5g，干燥乙醚90-190ml，二氯乙烷85-120ml混合，加熱溶解，加乙酰溴代葡萄糖6-12g，回流攪拌4-10小時，再加入碳酸銀4-7.9g回流攪拌4-10小時，過濾，濾液回收溶劑，殘余物溶于甲醇，過濾，濾液加入蒸餾水至溶液渾濁，再加入6-12ml三乙胺，室溫攪拌8-14小時，回收溶劑至干，通過硅膠柱層析，以氯仿-甲醇9∶1沖洗，即得成品。
7.按照權(quán)利要求3所述的衍生物的制備方法，其特征在于人參二醇琥珀酸鉀C34H55O6K的制備方法a將人參二醇，琥珀酸酐，吡啶按1-3∶5-6∶15-20的比例混合，加熱攪拌回流，室溫放冷，傾入冷水中，有沉淀析出，過濾得灰白色沉淀物，將沉淀物溶于乙醇中，加熱溶解，加活性炭脫色，減壓過濾，回收乙醇，放冷，有白色簇狀結(jié)晶析出，濾干，得人參二醇琥珀酸;b、人參二醇琥珀酸加入丙酮中攪拌溶解，滴加KOH無水乙醇溶液，攪拌直至沉淀完全，靜置，過濾，沉淀物用丙酮洗滌，減壓過濾，即得成品。
8.按照權(quán)利要求4所述的衍生物的制備方法，其特征在于人參三醇琥珀酸鈉C38H58O10Na2的制備方法為a、將人參三醇、琥珀酸酐、吡啶按1-2.5∶3-6∶9-12的比例混合，在134-135℃的油浴中回流3-5小時，然后將反應(yīng)混合物傾入水中，靜置、過濾、干燥，得灰白色固體，將此固體溶于乙醇中，以活性炭脫色，過濾，濾液傾入水中，靜置，濾取析出物，制得人參三醇3，6-二琥珀酸;b、將人參三醇-3，6-二琥珀酸溶于丙酮中，攪拌滴入NaOH甲醇溶液至沉淀完全，過濾，用丙酮洗滌，干燥，得成品。
9.按照權(quán)利要求1所述的衍生物作為藥物的應(yīng)用，其特征在于以所述的衍生物分別以12-25mg/ml，制成醫(yī)藥上可接受的劑型制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及到具有達瑪烷為母環(huán)結(jié)構(gòu)的新的人參低元醇衍生物及其制備方法，以及此系列化合物作為藥物的應(yīng)用。本發(fā)明所述的人參三醇葡萄糖甙、人參二醇琥珀酸鉀、人參三醇琥珀酸鈉以及人參二醇葡萄糖甙經(jīng)實驗，具有較強的抑瘤效應(yīng)和殺傷癌細胞的能力。用本發(fā)明所述的達瑪烷型皂甙人參低元醇衍生物分別以12—25mg/ml，可以制成醫(yī)藥上可接受的劑型制劑。
文檔編號A61K31/58GK1097194SQ93108189
公開日1995年1月11日 申請日期1993年7月6日 優(yōu)先權(quán)日1993年7月6日
發(fā)明者魏均嫻, 陳業(yè)高, 張紅彬, 趙愛華 申請人:昆明醫(yī)學院