專(zhuān)利名稱(chēng)：一種提高脂質(zhì)體中脂溶性藥物裝載量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提高脂質(zhì)體中脂溶性藥物裝載量的方法，以及由該方法制得的脂質(zhì)體，及其在制備用于治療腫瘤疾病的藥物中的用途。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體作為藥物載體具有提高藥物療效、減輕藥物不良反應(yīng)及靶向、緩釋等特點(diǎn)，尤其是作為抗腫瘤藥物的載體時(shí)可以使絕大多數(shù)藥物靶向腫瘤區(qū)而起到減毒、增效作用。目前臨床上應(yīng)用的抗腫瘤藥物眾多，大致可分為細(xì)胞毒類(lèi)、激素類(lèi)、生物反應(yīng)調(diào)節(jié)齊U、單克隆抗體以及其他抗腫瘤藥物這五類(lèi)。其中細(xì)胞毒類(lèi)藥物占市場(chǎng)份額最大，其按照作用機(jī)制可以分為以下五類(lèi)(I)作用于DNA化學(xué)結(jié)構(gòu)的藥物，如燒化劑和鉬類(lèi)；(2)影響核酸合成的藥物，如甲氨蝶呤、氟尿嘧啶等；(3)作用于核酸轉(zhuǎn)錄的藥物，如阿霉素、表阿 霉素等；(4)作用于微管蛋白合成的藥物，如紫杉烷類(lèi)、長(zhǎng)春堿類(lèi)；作用于拓?fù)洚悩?gòu)酶的藥物，如喜樹(shù)堿類(lèi)；(5)其他細(xì)胞毒藥。紫杉醇是紫杉烷類(lèi)的代表藥物，它通過(guò)促進(jìn)微管蛋白聚合抑制解聚，保持微管蛋白穩(wěn)定，抑制細(xì)胞有絲分裂來(lái)實(shí)現(xiàn)抗腫瘤作用，是一個(gè)優(yōu)秀的廣譜抗腫瘤藥物。但是紫杉醇會(huì)產(chǎn)生骨髓抑制、外周神經(jīng)毒性、肌肉/關(guān)節(jié)疼痛、心律失常以及胃腸道毒性等毒副作用，其劑量限制毒性為噬中性白細(xì)胞減少。由于紫杉醇是脂溶性藥物，其在水中的溶解能力很差，所以市售的制劑采用Cremophor EL和乙醇作為溶劑。Cremophor EL是一種表面活性齊U，會(huì)引起嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)，即使預(yù)先使用皮質(zhì)激素和抗組胺類(lèi)藥物，這種不良反應(yīng)的發(fā)生率仍為41%左右。并且Cremophor EL的使用，使得紫杉醇在體內(nèi)呈非線(xiàn)性代謝，不利于臨床用藥安全。為了避免Cremophor EL的使用，降低藥物的毒副作用，考慮將紫杉醇制成脂質(zhì)體制劑。脂質(zhì)體制劑的載藥技術(shù)分為主動(dòng)載藥技術(shù)和被動(dòng)載藥技術(shù)兩種，脂溶性藥物一般選擇被動(dòng)載藥技術(shù)，水溶性藥物通常采用主動(dòng)載藥技術(shù)。紫杉醇屬于脂溶性藥物，所以選擇被動(dòng)載藥技術(shù)，其常用的脂質(zhì)體制備方法包括薄膜分散法、乙醇注入法、有機(jī)溶劑凍干法、單相溶液凍干法等等，分述如下。(I)薄膜分散法將藥物、磷脂和膽固醇等脂溶性成分溶解在有機(jī)溶劑中，通常為氯仿、乙醚等，濃度為10 40mg/ml，置于圓底燒瓶中減壓蒸發(fā)，得到一層干燥的脂膜，再加入適量的緩沖鹽水化脂膜，即可得到脂質(zhì)體。該方法的缺點(diǎn)是①需要使用氯仿等有機(jī)溶劑。雖然也有使用乙醇做溶劑的，但是乙醇相對(duì)而言不易揮發(fā)，成膜性較差。②很難生產(chǎn)放大。雖然有人設(shè)計(jì)了表面積較大的特殊裝置，希望借此來(lái)改良此項(xiàng)技術(shù)，但是迄今還沒(méi)有得到應(yīng)用。(2)乙醇注入法將藥物、磷脂的乙醇溶液在適宜的溫度下，緩慢注入到高速攪拌的水相溶液中，乙醇迅速擴(kuò)散，從而導(dǎo)致磷脂分子由于熱力學(xué)的原因聚集形成脂質(zhì)體。形成的脂質(zhì)體的粒度和分布與磷脂溶液的濃度、攪拌速度、磷脂組成以及脂相和水相的比例有很大關(guān)系。上述方法由于影響因素太多，較難產(chǎn)業(yè)化，因此需要改良。(3)有機(jī)溶劑凍干法將藥物、磷脂、膽固醇溶解于適宜的有機(jī)溶劑中，最常用的是叔丁醇，然后冷凍干燥得到疏松的粉末，將其水化后，則可以得到脂質(zhì)體。此種方法應(yīng)可以產(chǎn)業(yè)化，并且使用的叔丁醇毒性和乙醇相似，不至于引起安全上的問(wèn)題。(4)單相溶液凍干法將藥物、磷脂和膽固醇、二糖溶解于比例適宜的叔丁醇/水共溶劑中，形成單相溶液，將上述單相溶液冷凍干燥，可得到脂/糖的固體分散體。如果糖/脂比合適，水化凍干產(chǎn)物，即可以得到粒度分布均勻的亞微米級(jí)的脂質(zhì)體。此種工藝可以解決脂質(zhì)體制劑的穩(wěn)定性問(wèn)題，且工藝簡(jiǎn)單，易得到無(wú)菌制劑。但是只適合相變溫度低的天然磷脂，并且處方中應(yīng)添加少量荷電的磷脂。
由于有較多的方法可能可以應(yīng)用于制備紫杉醇脂質(zhì)體，為了縮減試驗(yàn)范圍，我們首先調(diào)研了一些國(guó)內(nèi)外紫杉醇脂質(zhì)體的成功案例，分析結(jié)果如下。德國(guó)的medigene公司研制的代號(hào)為EndoTAG-I的紫杉醇脂質(zhì)體目前已經(jīng)進(jìn)入二期臨床階段，美國(guó)專(zhuān)利 US7794747,名稱(chēng)Method of producing a cationic liposomalpreparation comprising a lipophilic compound,公開(kāi)的制備方法是將50mol% 的雙油酸三甲基胺丙烷(DOTAP)、47mol%的雙油酸磷脂酰膽堿(DOPC)和3mol %的紫杉醇溶于乙醇中，然后使用針泵以0. 4ml/min的速度注入海藻糖水相溶液中,孵育至少5分鐘。將形成的脂質(zhì)體通過(guò)200nm的聚碳酸酯膜擠出，然后通過(guò)0. 22um濾膜無(wú)菌過(guò)濾，最后凍干得到成品。該制備工藝屬于上面提到的乙醇注入法，其存在的問(wèn)題是①紫杉醇載藥量偏小DOTAP和DOPC均非常昂貴，國(guó)內(nèi)不易購(gòu)得。美國(guó)的neopharm公司研制的代號(hào)為L(zhǎng)EP-ETU的紫杉醇脂質(zhì)體也已經(jīng)進(jìn)入二期臨床階段，美國(guó)專(zhuān)利 US7314637,名稱(chēng)Method of administering liposomal encapsulatedtaxane，公開(kāi)的制備方法是將重量比為I. 8 9. O 3. O 0. I I的心磷脂、磷脂酰膽堿、膽固醇、維生素E和紫杉醇，加熱溶解于叔丁醇中，然后通過(guò)0. 22 μ m濾膜，分裝并冷凍干燥。臨床使用時(shí)加入生理鹽水，室溫水化I小時(shí)，其后將小瓶渦動(dòng)十分鐘，最后在水浴超聲振蕩器中以最大頻率超聲十分鐘。該制備工藝屬于上面提到的有機(jī)溶劑凍干法，其存在的問(wèn)題是①心磷脂較昂貴，國(guó)內(nèi)不易購(gòu)得；②臨床用藥操作繁瑣，不同的操作人員和超聲設(shè)備得到的脂質(zhì)體終溶液可能會(huì)存在差異；③脂質(zhì)體粒徑?jīng)]有得到有效的控制，可能會(huì)影響其療效和毒性。國(guó)內(nèi)南京思科藥業(yè)有限公司研制的紫杉醇脂質(zhì)體力撲素已經(jīng)上市，其制備方法是將質(zhì)量比為6 72 10. 8的紫杉醇、卵磷脂和膽固醇溶解于適量乙醇中，恒溫減壓干燥成膜后用含有賴(lài)氨酸的甘露醇溶液水化，然后超聲粉碎或高壓勻漿，最后通過(guò)0. 22 μ m濾膜無(wú)菌過(guò)濾，分裝后冷凍干燥。臨床使用前先向瓶?jī)?nèi)加入IOml 5%葡萄糖溶液，置振蕩器上振搖5分鐘，待完全溶解后，注入250-500ml5%葡萄糖溶液中，靜脈滴注3小時(shí)。該制備工藝屬于上面提到的薄膜分散法，其存在的問(wèn)題是①臨床使用時(shí)比較繁瑣，需要水化后在振蕩器上震搖5分鐘。②分析力撲素的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)發(fā)現(xiàn)其復(fù)溶后粒徑范圍為4. 5-5 μ m，說(shuō)明其是多室脂質(zhì)體，不是我們擬開(kāi)發(fā)的納米脂質(zhì)體范疇。③通過(guò)力撲素使用說(shuō)明書(shū)中可見(jiàn)，在使用前30分鐘仍需進(jìn)行抗過(guò)敏預(yù)處理，而且通過(guò)分析其專(zhuān)利(中國(guó)專(zhuān)利CN00119039. 3，名稱(chēng)紫杉醇脂質(zhì)組合物及其制備方法)發(fā)現(xiàn)其藥效也與紫杉醇普通注射劑相當(dāng)，所以認(rèn)為其并未體現(xiàn)出脂質(zhì)體制劑的優(yōu)勢(shì)。通過(guò)以上分析我們認(rèn)為上述提到的薄膜分散法、有機(jī)溶劑凍干法和乙醇注入法是可行的，因此我們分別使用該三種方法進(jìn)行了紫杉醇脂質(zhì)體的制備，但是在摸索了多個(gè)處方后均未獲得成功。前兩種方法出現(xiàn)的問(wèn)題是紫杉醇不能得到良好的包封而析晶，導(dǎo)致含量下降，結(jié)果見(jiàn)表I。采用針管泵實(shí)施的乙醇注入法可以實(shí)現(xiàn)紫杉醇的良好包封，但是載藥量偏低，紫杉醇與磷脂的摩爾百分比最高只能達(dá)到3mol%。而紫杉醇注射液的臨床給藥量高達(dá)135-175mg/m2，如此計(jì)算約為紫杉醇30倍量的磷脂需要輸注入人體內(nèi)，即70kg體重的患者每次需要使用8. 1-10. 5g磷脂。如此大量的使用磷脂這一藥用輔料，首先安全性需要評(píng)估，其次耗費(fèi)的磷脂成本比較高昂，不利于臨床上的廣泛應(yīng)用，因此該方法也不理想。表I不同制備方法得到的紫杉醇脂質(zhì)體的含量損失
紫杉醇含量損失(％)
制備方法_
處方I處方2處方3
薄膜分散法 6L466Λm6
有機(jī)溶劑凍干法 5.6.791.091.3其中，紫杉醇含量損失=(I-脂質(zhì)體中包含的紫杉醇總量/紫杉醇投料量)Χ100%ο其中，處方信息如表2所示。表2紫杉醇脂質(zhì)體處方信息
處方I處方2處方3
紫杉醇0.3mol0.3mol0.3mol
大豆卵嶙脂(EP200)9mol—一大旦印鱗脂(PC90) —9mol一 大旦即鱗脂(PC70) ——9mol 膽固醇一ImolImol 標(biāo)桐釀鱗脂釀甘油(DPPG) Imol——其中脂質(zhì)體中包含的紫杉醇總量由高效液相色譜法測(cè)定而得。液相色譜條件為使用十八烷基鍵合硅膠色譜柱，以乙腈水(9 : 11)混合溶液為流動(dòng)相，流速I(mǎi). 5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)227nm。測(cè)定方法取紫杉醇脂質(zhì)體2ml，用甲醇溶解并定容到IOml量瓶中，取10 μ I注入到液相色譜儀中進(jìn)行含量測(cè)定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明一種提高脂質(zhì)體中脂溶性藥物裝載量的方法，該脂質(zhì)體含有作為活性成分的脂溶性藥物和脂質(zhì)體的雙分子層，雙分子層含有一種或多種磷脂和一種或多種親水聚合物修飾的脂類(lèi)，該方法的特征在于脂溶性藥物先形成乳劑，然后再形成脂質(zhì)體。該方法包括如下步驟(I)將脂溶性藥物、磷脂和親水聚合物修飾的脂類(lèi)溶解于有機(jī)溶劑中，形成油相；(2)將油相緩慢注入水相溶液中，研磨成乳劑；(3)將乳劑均質(zhì)得到脂質(zhì)體。其中所述藥物為紫杉烷類(lèi)抗腫瘤藥。其中所述紫杉烷類(lèi)抗腫瘤藥為紫杉醇。其中所述磷脂選自卵磷脂、氫化大豆卵磷脂(HSPC)、雙肉豆蘧酸卵磷脂(DMPC)、·雙軟脂酸卵磷脂(DPPC)或雙硬脂酸卵磷脂(DSPC)或者其任意組合。其中所述親水聚合物修飾的脂類(lèi)選自聚乙二醇修飾的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG)、聚乙二醇修飾的二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG-PEG)、聚乙二醇修飾的膽固醇(chol-PEG)、聚維酮修飾的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE-PVP)、聚維酮修飾的二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG-PVP)、聚維酮修飾的膽固醇(chol-PVP)或者其任意組合。其中所述有機(jī)溶劑選自三氯甲烷。其中所述水相溶液選自乳糖、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖或海藻糖水溶液。本發(fā)明還提供一種脂質(zhì)體藥物制劑，其特征在于含有按照上述方法得到的脂質(zhì)體，和藥學(xué)上可接受的載體和/或賦型劑。該脂質(zhì)體藥物制劑還含有改變滲透壓的鹽、緩沖物質(zhì)和/或抗氧劑。本發(fā)明還提供上述脂質(zhì)體藥物制劑在制備用于治療腫瘤患者的藥物中的用途。本發(fā)明采用一種全新的方法實(shí)現(xiàn)了高載藥量紫杉醇脂質(zhì)體的制備。其制備工藝是首先將紫杉醇、磷脂和親水聚合物修飾的脂類(lèi)等成膜材料溶解于有機(jī)溶劑中形成油相，接著將油相緩慢注入水相溶液中研磨形成o/w乳劑，再通過(guò)高壓擠出儀均質(zhì)得到均一粒徑的脂質(zhì)體，該制備方法可以將紫杉醇載藥量提高到6mol%。由于以往的脂質(zhì)體內(nèi)包裹的大多是水相的芯，因此脂溶性藥物紫杉醇只能插在磷脂雙層中；而我們的制備方法使脂質(zhì)體內(nèi)包裹的芯變成了氯仿，因此紫杉醇不僅能插在磷脂雙層中，還能以無(wú)定形的狀態(tài)存在于脂質(zhì)體內(nèi)相的氯仿芯中，從而大大提高了紫杉醇脂質(zhì)體的載藥量。按本發(fā)明技術(shù)方案制備的紫杉醇脂質(zhì)體制劑與市售紫杉醇注射液的毒性、藥代、藥效對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果顯示紫杉醇脂質(zhì)體藥效提高、毒性降低。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的具體說(shuō)明，不應(yīng)對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成限制。實(shí)施例I紫杉醇脂質(zhì)體的制備取摩爾比為100 O. 5 3 8的卵磷脂、DSPE-PEG及紫杉醇，攪拌溶解于適量氯仿中,此為油相溶液。將適量10%蔗糖水溶液加入膠體磨中，滴入油相溶液進(jìn)行研磨成乳，然后使用高壓擠出儀擠出得到粒徑約140nm的脂質(zhì)體。30_40°C減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，然后使用交叉流透析設(shè)備將脂質(zhì)體濃縮到紫杉醇濃度為I. 5mg/ml左右，最后分裝于西林瓶中冷凍干燥獲得紫杉醇脂質(zhì)體成品。不同藥脂比處方的紫杉醇脂質(zhì)體包封率如表3所示，可見(jiàn)當(dāng)紫杉醇載藥量高達(dá)6mol%時(shí)，包封率仍保持在95%以上。表3不同藥脂比紫杉醇脂質(zhì)體的包封率
權(quán)利要求
1.一種提高脂質(zhì)體中脂溶性藥物裝載量的方法，該脂質(zhì)體含有作為活性成分的脂溶性藥物和脂質(zhì)體的雙分子層，雙分子層含有一種或多種磷脂和一種或多種親水聚合物修飾的脂類(lèi)，該方法的特征在于脂溶性藥物先形成乳劑，然后再形成脂質(zhì)體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于包括如下步驟(I)將脂溶性藥物、磷脂和親水聚合物修飾的脂類(lèi)溶解于有機(jī)溶劑中，形成油相；(2)將油相緩慢注入水相溶液中，研磨成乳劑；(3)將乳劑均質(zhì)得到脂質(zhì)體。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于所述藥物為紫杉烷類(lèi)抗腫瘤藥。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述紫杉烷類(lèi)抗腫瘤藥為紫杉醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于所述磷脂選自卵磷脂、氫化大豆卵磷月旨、雙肉豆蘧酸卵磷脂、雙軟脂酸卵磷脂或雙硬脂酸卵磷脂或者其任意組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其特征在于所述親水聚合物修飾的脂類(lèi)選自聚乙二醇修飾的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇修飾的二硬脂酰磷脂酰甘油、聚乙二醇修飾的膽固醇、聚維酮修飾的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚維酮修飾的二硬脂酰磷脂酰甘油、聚維酮修飾的膽固醇或者其任意組合。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述有機(jī)溶劑選自三氯甲烷。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述水相溶液選自乳糖、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖或海藻糖水溶液。
9.一種脂質(zhì)體藥物制劑，其特征在于含有按照權(quán)利要求I或2所述的方法得到的脂質(zhì)體，和藥學(xué)上可接受的載體和/或賦型劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的脂質(zhì)體藥物制劑，其特征在于還含有改變滲透壓的鹽、緩沖物質(zhì)和/或抗氧劑。
11.權(quán)利要求9-10中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)體藥物制劑在制備用于治療腫瘤患者的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種提高脂溶性藥物裝載量的脂質(zhì)體的制備方法，該方法是將脂溶性藥物溶解于有機(jī)溶劑中，然后與水相混合成乳，高壓均質(zhì)得到均一粒徑的脂質(zhì)體，最后旋蒸、濃縮、凍干獲得高載藥量的脂質(zhì)體。該方法不僅能夠得到高的包封率，而且能夠提高藥物的療效、降低毒性。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102949343SQ20111024690
公開(kāi)日2013年3月6日 申請(qǐng)日期2011年8月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月26日
發(fā)明者李春雷, 李彥輝, 張?zhí)m, 修憲, 李永豐 申請(qǐng)人:石藥集團(tuán)中奇制藥技術(shù)(石家莊)有限公司