專利名稱：逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品、藥品加工領(lǐng)域中多酚類物質(zhì)脂質(zhì)體技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及以純化后的石榴皮多酚為原料，逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體。
背景技術(shù)：
石榴皮多酚為石榴科植物石榴果皮的主要活性成分，是石榴皮中所含的一類多羥基酚類化合物的總稱。其組成成分包括安石榴苷、沒食子酸、兒茶素、綠原酸、表兒茶素、咖啡酸、蘆丁等多種化合物。石榴皮多酚具有抗氧化、清除自由基活性、抗突變和抗腫瘤、防癌、抑菌消炎、抗病毒活性、防治心腦血管疾病、降血脂作用，還具有養(yǎng)肝護(hù)腎、調(diào)節(jié)免疫、抗疲勞等多種藥理功能。石榴皮多酚作為一種天然的功能性成分，其應(yīng)用領(lǐng)域十分廣闊，已在醫(yī)藥、食品、保健品、動(dòng)物飼料和化妝品等領(lǐng)域擁有突出優(yōu)勢。但是，石榴皮多酚穩(wěn)定性差， 易受光、熱、氧氣、PH等因素影響，極易失去生理活性功能和營養(yǎng)價(jià)值，極大地限制了其應(yīng)用。因此，石榴皮多酚的穩(wěn)定性及生物利用率成為現(xiàn)在研究的焦點(diǎn)。脂質(zhì)體是由磷脂雙分子層構(gòu)成的脂質(zhì)微囊，粒徑可從幾十納米到幾微米，分散性和生物相溶性均較為理想。同時(shí)，脂質(zhì)體作為藥物或保健食品載體，具有天然無毒及生物可降解性，提高了藥物的穩(wěn)定性，促進(jìn)藥物吸收，延長藥物作用時(shí)間，對局部病變部位有靶向作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種操作簡便、生產(chǎn)成本低、包封率高、產(chǎn)物粒度均勻、穩(wěn)定性好的石榴皮多酚脂質(zhì)體的制備方法。解決上述技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是用氯仿溶解大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為1 5 1的混合物，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液，膽固醇與石榴皮多酚的質(zhì)量比為1 0.025，氯仿與石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的體積比為1 5 1， 超聲至混合物形成均勻單相體系，蒸除氯仿，用PH值為4. 5 8. 5的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，充分水合，用孔徑為0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體。上述濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液是由石榴皮干粉末與pH值為 6. 5的磷酸鹽緩沖液配制成。本發(fā)明優(yōu)選大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為2 4 1，氯仿與石榴皮多酚磷酸鹽緩沖液的體積比為2 4 1，磷酸鹽緩沖液的pH值為5. 5 7. 5。本發(fā)明最佳選擇大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為3. 08 1、氯仿與石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的體積比為4 1、磷酸鹽緩沖溶液的pH值為6. 17。本發(fā)明采用脂質(zhì)體對石榴皮多酚進(jìn)行包埋處理，采用逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體，并通過響應(yīng)曲面法優(yōu)化工藝條件，制備出包封率較高的脂質(zhì)體，經(jīng)對制備的脂質(zhì)體進(jìn)行質(zhì)量評價(jià)，所制備的石榴皮多酚脂質(zhì)體質(zhì)量良好。


圖1是大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比、氯仿與石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的體積比兩個(gè)因素對石榴皮多酚脂質(zhì)體包封率的交互作用影響圖。圖2是石榴皮多酚脂質(zhì)體的光學(xué)顯微鏡照片。圖3是石榴皮多酚脂質(zhì)體透射顯微鏡照片。圖4是石榴皮多酚脂質(zhì)體的粒徑分布圖。圖5是石榴皮多酚脂質(zhì)體的kta電位圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明，但本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。實(shí)施例1將大豆卵磷脂308mg、膽固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入IOmL氯仿溶解大豆卵磷脂和膽固醇，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液2. 5mL，超聲5 8分鐘，混合物形成均勻單相體系，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使脂質(zhì)體在瓶壁成膜，用30mL pH值為6. 17 的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，充分水合，用孔徑為0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體，其包封率為54. 87%。本實(shí)施例濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液是由石榴皮干粉末與pH值為6. 5的磷酸鹽緩沖液配制而成。實(shí)施例2將大豆卵磷脂300mg、膽固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入7. 5mL氯仿溶解大豆卵磷脂和膽固醇，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液2. 5mL，超聲5 8分鐘， 混合物形成均勻單相體系，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使脂質(zhì)體在瓶壁成膜，用30mL pH值為 6. 5的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，充分水合，用孔徑為0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體，其包封率為53.對％。本實(shí)施例石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的配制方法與實(shí)施例1相同。實(shí)施例3將大豆卵磷脂lOOmg、膽固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入2. 5mL氯仿溶解大豆卵磷脂和膽固醇，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液2. 5mL，超聲5 8分鐘， 混合物形成均勻單相體系，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使脂質(zhì)體在瓶壁成膜，用30mL pH值為 4. 5的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，充分水合，用孔徑為0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體。本實(shí)施例石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的配制方法與實(shí)施例1相同。實(shí)施例4將大豆卵磷脂500mg、膽固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入12. 5mL氯仿溶解大豆卵磷脂和膽固醇，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液2. 5mL，超聲5 8分鐘， 混合物形成均勻單相體系，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使脂質(zhì)體在瓶壁成膜，用30mL pH值為 8. 5的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，充分水合，用孔徑為0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體。本實(shí)施例石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的配制方法與實(shí)施例1相同。
實(shí)施例5將大豆卵磷脂200mg、膽固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入5. OmL氯仿溶解大豆卵磷脂和膽固醇，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液2. 5mL，超聲5 8分鐘， 混合物形成均勻單相體系，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使脂質(zhì)體在瓶壁成膜，用30mL pH值為 5. 5的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，充分水合，用孔徑為0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體。本實(shí)施例石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的配制方法與實(shí)施例1相同。實(shí)施例6將大豆卵磷脂400mg、膽固醇IOOmg置于梨形瓶中，加入10. OmL氯仿溶解大豆卵磷脂和膽固醇，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液2. 5mL，超聲5 8分鐘， 混合物形成均勻單相體系，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使脂質(zhì)體在瓶壁成膜，用30mL pH值為 7. 5的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，充分水合，用孔徑為0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體。本實(shí)施例石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的配制方法與實(shí)施例1相同。為了確定本發(fā)明的最佳工藝條件，發(fā)明人進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)室研究試驗(yàn)，每種試驗(yàn)重復(fù)三次，試驗(yàn)結(jié)果為三次重復(fù)試驗(yàn)的平均值，各種試驗(yàn)情況如下實(shí)驗(yàn)儀器XW_80A型漩渦混合器，由海門市其林貝爾儀器有限責(zé)任公司提供； 3k30超高速低溫離心機(jī)，由美國Sigma公司提供；TU-1810型紫外可見分光光度計(jì)，由北京普析通用儀器有限責(zé)任公司提供；NAN04S型激光粒度和kta電位儀，由英國Malvern公司提供；H-600型透射式電子顯微鏡，由日本日立公司提供。1、大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比對脂質(zhì)體包封率的影響向5個(gè)25mL梨形瓶中均加入膽固醇lOOmg、大豆卵磷脂、7. 5mL氯仿、2. 5mL濃度為 lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液，大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比分別為1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1，超聲至混合物形成均勻單相體系，40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，使脂質(zhì)體在瓶壁成膜，用30mL pH值為6. 5的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，充分水合，用孔徑為0. 45 μ m 濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體。研究大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比對脂質(zhì)體包封率的影響。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線精確稱取石榴皮多酚標(biāo)準(zhǔn)品6. 25mg，加入25mL的棕色容量瓶中， 用二次蒸餾水定容，配制成質(zhì)量濃度為250 μ g/mL的石榴皮多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密移取O、 0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5,3. 0,3. 5,4. OmL質(zhì)量濃度為250 μ g/mL的石榴皮多酚標(biāo)準(zhǔn)溶液于 25mL的棕色容量瓶中，用二次蒸餾水定容，配制成質(zhì)量濃度分別為0、5、10、15、20、25、30、 35,40 μ g/mL的石榴皮多酚工作溶液，在最佳波長260nm處用紫外可見分光光度計(jì)分別測定石榴皮多酚工作溶液的吸光度值，以石榴皮多酚的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行回歸分析，得到線性回歸方程y = 0. 0249x+0. 0095式中χ為石榴皮多酚的質(zhì)量濃度，y為吸光度值，相關(guān)系數(shù)R2 = 0. 9997。高速冷凍離心法測定脂質(zhì)體包封率取石榴皮多酚脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體溶液各 3mL于離心管中，分別加入3mL無水乙醇，置于漩渦混合器中渦旋破乳3分鐘，4°C條件下 15000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，取上清液ImL分別置于25mL容量瓶中，用無水乙醇定容，以空白脂質(zhì)體溶液作為對照，在最佳波長260nm處測定吸光度，代入線性回歸方程，得到石榴皮多酚的質(zhì)量濃度X，經(jīng)計(jì)算，得到總藥物量Ct ；另取石榴皮多酚脂質(zhì)體、空白脂質(zhì)體溶液各 3mL于離心管中，4°C條件下15000轉(zhuǎn)/分鐘離心30分鐘，取上清液ImL定容至25mL容量瓶中，以空白脂質(zhì)體溶液作為對照，在最佳波長260nm處測定吸光度，代入線性回歸方程，得到石榴皮多酚的質(zhì)量濃度X，經(jīng)計(jì)算，得到游離石榴皮多酚的量Cf。根據(jù)下式計(jì)算脂質(zhì)體的包封率
權(quán)利要求
1.一種逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體的方法，其特征在于用氯仿溶解大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為1 5 1的混合物，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液，膽固醇與石榴皮多酚的質(zhì)量比為1 0.025，氯仿與石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的體積比為1 5 1，超聲至混合物形成均勻單相體系，蒸除氯仿，用pH值為4. 5 8. 5的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，用0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體；上述濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液是由石榴皮干粉末與pH值為6. 5的磷酸鹽緩沖液配制成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體的方法，其特征在于大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為2 4 1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體的方法，其特征在于氯仿與石榴皮多酚磷酸鹽緩沖液的體積比為2 4 1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體的方法，其特征在于磷酸鹽緩沖液的pH值為5. 5 7. 5。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體的方法，其特征在于用氯仿溶解大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為3. 08 1的混合物，加入濃度為lmg/mL的石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液，膽固醇與石榴皮多酚的質(zhì)量比為1 0.025，氯仿與石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的體積比為4 1，超聲至混合物形成均勻單相體系，蒸除氯仿，用pH值為 6. 17的磷酸鹽緩沖溶液溶解脂質(zhì)膜，用0. 45 μ m濾膜過濾，制備成石榴皮多酚脂質(zhì)體。
全文摘要
一種逆向蒸發(fā)法制備石榴皮多酚脂質(zhì)體的方法，采用脂質(zhì)體對石榴皮多酚進(jìn)行包埋處理，通過調(diào)節(jié)大豆卵磷脂與膽固醇的質(zhì)量比、氯仿與石榴皮多酚磷酸鹽緩沖溶液的體積比、磷酸鹽緩沖液的pH值制備成包封率高的石榴皮多酚脂質(zhì)體。經(jīng)質(zhì)量評價(jià)，所得石榴皮多酚脂質(zhì)體粒度均勻，具有良好的體外緩釋性和穩(wěn)定性。本發(fā)明制備方法操作簡單、生產(chǎn)成本低，可應(yīng)用于石榴皮多酚脂質(zhì)體的制備。
文檔編號A61K9/127GK102204939SQ20111012473
公開日2011年10月5日 申請日期2011年5月13日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月13日
發(fā)明者李建科, 杜丹丹 申請人:陜西師范大學(xué)