專利名稱：乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種磷脂復(fù)合物及其制備方法，特別涉及一種去甲斑蝥素衍生物的磷 脂復(fù)合物及其制備方法，屬醫(yī)藥制備技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
去甲斑蝥素為斑蝥素的合成衍生物，是由我國首先開發(fā)的治療肝癌的新藥，主要 用于原發(fā)性肝癌的治療。文獻“去甲斑蝥素的藥學(xué)研究與臨床應(yīng)用進展”(吳建梅等，中國 藥學(xué)雜志，2002，37 (8) :566 一 569)研究表明，由于臨床應(yīng)用時去甲斑蝥素的泌尿系統(tǒng)毒性 較大，其臨床最大用藥劑量有嚴格限制。文獻“肝靶向去甲斑蝥素修飾物的合成及其納米粒 的制備”(胡展紅等，中國藥學(xué)雜志，2009，44 (9) 679-684)和文獻“乳糖化-去甲斑蝥素納 米粒的肝靶向抗癌活性研究”(胡展紅等，中草藥，2010,41(12))中，公開了一種利用乙二 胺為連接臂，將去甲斑蝥素與乳糖酸偶聯(lián)，合成新的化合物乳糖化-去甲斑蝥素，其在體內(nèi) 被肝細胞的去唾液酸糖蛋白受體(asialoglycoprotein receptor, ASGP-R)特異性識別，從 而提高藥物肝靶向性，降低藥物的腎毒性。但是，將乳糖化-去甲斑蝥素與磷脂制備成復(fù)合 物，目前國內(nèi)外未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種能有效改善乳糖化-去甲斑蝥素脂溶性的 乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物，且提供一種制備該復(fù)合物工藝簡單，生產(chǎn)成本低，產(chǎn)率高 的的方法。為達到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是提供一種乳糖化-去甲斑蝥素磷 脂復(fù)合物，乳糖化-去甲斑蝥素與磷脂的質(zhì)量比為1:1 1:5 ；所述磷脂的平均分子量為 700 800。其中，所述磷脂包括大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂或合成磷脂；磷脂優(yōu)選平均分子量 為750的大豆卵磷脂。所述乳糖化-去甲斑蝥素與磷脂的質(zhì)量比優(yōu)選為1:1.5。所述乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物的制備方法，包括如下步驟
(1)將磷脂溶于適量溶劑A中，攪拌溶解；所述溶劑A包括氯仿、二氯甲烷、甲醇、四氫 呋喃及其含有上述溶劑的各種比例的混合溶劑；
(2)稱取與磷脂的質(zhì)量比為1 1 1 5的乳糖化-去甲斑蝥素，加入適量溶劑B中，超 聲分散；所述溶劑包括甲醇、乙醇及其含有上述溶劑的各種比例的混合溶劑；溶劑B的用量 為乳糖化-去甲斑蝥素的反應(yīng)濃度為5 100mg/ml ；
(3)將乳糖化-去甲斑蝥素混懸液加至磷脂溶液中，在溫度為25 35°C的條件下攪
拌；
(4)將所得溶液過濾，濾液旋蒸除去溶劑，真空干燥，得到黃色粉末狀乳糖化-去甲斑 蝥素磷脂復(fù)合物。
其中，所述溶劑A與溶劑B的用量體積比為1:1 1:5。本發(fā)明的原理是由于乳糖化-去甲斑蝥素的高水溶性和低滲透性，導(dǎo)致其口服 生物利用度低，使其臨床使用具有局限性，為改善高水溶性藥物的脂溶性，將藥物與磷脂按 一定配比在非質(zhì)子傳遞體系溶劑中結(jié)合而形成復(fù)合物，通過制備藥物磷脂復(fù)合物，其理化 性質(zhì)和生物學(xué)特性將發(fā)生很大改變，可改善藥物的脂溶性進而提高其在體內(nèi)的吸收。具體 地說，其依據(jù)是(1)乳糖化-去甲斑蝥素抗癌作用的發(fā)揮在于其結(jié)構(gòu)中氧橋結(jié)構(gòu)的完整， 并且其末端的半乳糖殘基可被肝臟表明的去唾液酸糖蛋白受體專一性識別，達到肝臟的主 動靶向治療作用。(2)乳糖化-去甲斑蝥素結(jié)構(gòu)中有大量羥基存在，磷脂可與其發(fā)生氫鍵締 和，反應(yīng)容易進行，產(chǎn)率高，終產(chǎn)物保留了乳糖化-去甲斑蝥素的藥效基團。(3)利用藥物極 性基團與磷脂締和，使藥物極性基團受到屏蔽，達到提高乳糖化-去甲斑蝥素脂溶性的目 的。本發(fā)明所得復(fù)合物在HPLC上顯示與乳糖化-去甲斑蝥素相同的保留時間，說明形 成的是復(fù)合物，而不是新的化合物，但該復(fù)合物與乳糖化-去甲斑蝥素和磷脂的物理混合 物在紅外光譜(IR)、差熱分析(DSC)及核磁共振分析(1H-NMR)中存在明顯差別頂中乳糖 化-去甲斑蝥素在3359. 98957CHT1處的酚-OH寬峰帶已與磷脂的-OH吸收峰重合，而磷脂 在1732. 07269cm"1處的-C=O吸收峰也向低波數(shù)移動至1695. 42528CHT1，提示在形成磷脂復(fù) 合物的過程中，磷脂的-C=O與乳糖化-去甲斑蝥素-OH形成了一定強度的締和。磷脂復(fù)合 物與物理混合物-C=O吸收峰位置的差異，即1695. 42538CHT1和1737. 85913cm"1,以及指紋 區(qū)內(nèi)磷脂復(fù)合物與物理混合物的差別，都可以說明制備的磷脂復(fù)合物并不是兩種物質(zhì)的簡 單物理混合，其形成過程中有化學(xué)鍵締和；DSC中混合物在157°C 173°C之間表現(xiàn)出磷脂 的熱力學(xué)特性，但在189°C有較強烈的吸收峰，考慮為藥物吸熱峰。與藥物及磷脂相比，磷脂 復(fù)合物的DSC圖譜發(fā)生了明顯改變，藥物的吸熱峰消失，在119°C 182°C之間出現(xiàn)了多個 明顯的吸熱峰，提示形成磷脂復(fù)合物后，藥物和磷脂的熱力學(xué)性質(zhì)已被明顯改變；1H-NMR中 顯示，乳糖化-去甲斑蝥素糖基上的各氫向高場發(fā)生了部分位移，推測是糖基上的羥基與 磷脂中的氫鍵供體結(jié)合，形成的磷脂復(fù)合物中各共軛基團使得電子云密度發(fā)生了改變。以 上四種圖譜說明了所制備的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物不是新生成的化合物，但也不 同于其二者的簡單物理混合物，而是以一種復(fù)合物的形式存在。由于上述技術(shù)方案的運用，本發(fā)明技術(shù)方案的優(yōu)點在于
(1)制備乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物后，能夠有效提高藥物的脂溶性，從而改善口 服給藥后其在體內(nèi)的吸收，提高生物利用度。(2)所用原料成本低，反應(yīng)易于進行，產(chǎn)率高，容易實現(xiàn)工業(yè)化大生產(chǎn)；在制備過程 中的有毒物質(zhì)二氯甲烷及甲醇都可通過旋蒸除盡；反應(yīng)復(fù)合物率達到97. 2%，終產(chǎn)物不需 要進一步純化。因此，生產(chǎn)成本低，制備工藝簡單，終產(chǎn)物產(chǎn)率高，純度高，容易實現(xiàn)工業(yè)化 大生產(chǎn)。


圖1是本發(fā)明實施例提供的乳糖化-去甲斑蝥素與混合物的HPLC分析結(jié)果比較； 圖2是本發(fā)明實施例提供的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物與混合物的頂分析結(jié)果
比較；圖3是本發(fā)明提供的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物與混合物的DSC分析結(jié)果比較； 圖4是本發(fā)明提供的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物與混合物的UV分析結(jié)果比較。
具體實施例方式下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步描述。實施例一
稱取大豆磷脂0. 075g溶于IOmL 二氯甲烷中，攪拌溶解；稱取乳糖化_去甲斑蝥素 0. 05g，加入IOmL甲醇中，超聲分散后，加入到大豆磷脂溶液中，35°C水浴攪拌2小時，過 濾，濾液蒸去溶劑，真空干燥48小時，得乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物0. 122g(產(chǎn)率 97. 2%)。采用流動相條件為乙腈pH3. 2磷酸水=10:90對乳糖化-去甲斑蝥素，磷脂，乳糖 化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物及物理混合物進行HPLC分析，其結(jié)果參見附圖1，圖中，a為乳 糖化-去甲斑蝥素，b為磷脂，c為復(fù)合物，d為物理混合物；由圖1的結(jié)果表明，乳糖化-去 甲斑蝥素及其磷脂復(fù)合物在此條件下的色譜行為一致，保留時間為5. 188min,這說明乳糖 化-去甲斑蝥素與磷脂形成的是一種復(fù)合物，而不是新的化合物。對乳糖化-去甲斑蝥素、磷脂、乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物及混合物進行紅 外掃描，其結(jié)果參見附圖2。圖中，a為乳糖化-去甲斑蝥素，b為磷脂，c為復(fù)合物，d為 物理混合物；圖a顯示了的乳糖化-去甲斑蝥素的特征吸收峰1. -0H, 3359. 98957^1 ； 2. -C=O, 1694. 31676cm-1 ；圖 b 顯示 了磷脂的特征吸收峰1. -0H, 3423. 64035cm-1; 2. -CH2, 2926. 00699cm-1 ； 3. -C=O, 1732. 07269cm-1 ；4. -P=O, 1234. 43934cm-1 ；圖 c 中乳糖 化-去甲斑蝥素在3359. 98957CHT1處的酚-OH寬峰帶已與磷脂的-OH吸收峰重合，而磷脂 在1732. 07269cm"1處的-C=O吸收峰也向低波數(shù)移動至1695. 42528CHT1，提示在形成磷脂復(fù) 合物的過程中，磷脂的-C=O與乳糖化-去甲斑蝥素-OH形成了一定強度的締和。磷脂復(fù)合 物與物理混合物-C=O吸收峰位置的差異，即1695. 42538CHT1和1737. 85913cm"1,以及指紋 區(qū)內(nèi)磷脂復(fù)合物與物理混合物的差別，都可以說明制備的磷脂復(fù)合物并不是兩種物質(zhì)的簡 單物理混合，其形成過程中有化學(xué)鍵締和。對乳糖化-去甲斑蝥素、磷脂、乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物及混合物進行差 示熱分析，其結(jié)果參見附圖3。圖中，a為乳糖化-去甲斑蝥素，b為磷脂，c為復(fù)合物，d為 物理混合物；圖3結(jié)果表明，乳糖化-去甲斑蝥素在190°C左右有一強烈的吸熱峰，表明藥 物熔點為190°C。磷脂為一混合物，無明顯的熔點，在127°C 212°C內(nèi)都有不明的吸熱峰 出現(xiàn)。物理混合物在157°C 173°C之間表現(xiàn)出磷脂的熱力學(xué)特性，但在189°C有較強烈的 吸收峰，考慮為藥物吸熱峰。與藥物及磷脂相比，磷脂復(fù)合物的DSC圖譜發(fā)生了明顯改變， 藥物的吸熱峰消失，在119°C 182°C之間出現(xiàn)了多個明顯的吸熱峰，提示形成磷脂復(fù)合物 后，藥物和大豆磷脂的熱力學(xué)性質(zhì)已被明顯改變，磷脂復(fù)合物不是兩種物質(zhì)的簡單混合物。對乳糖化-去甲斑蝥素、磷脂及乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物進行核磁 共振分析，其結(jié)果參見附圖4。圖中，a為乳糖化-去甲斑蝥素，b為磷脂，c為復(fù)合 物，圖4結(jié)果表明，乳糖化-去甲斑蝥素1H-NMR (400MHz，氘代DMSO)，δ (ppm) :1.619 (4H, s, 1-H) ； 2. 982 (2H, q, J=7. 2, 3-H) ； 3.146 (1H, t, J=6. 8, 5-H) ； 3. 236 (1H, t, J=6. 4，5-H) ； 3. 321 (4H, m, 12—H, 15—H, 10-2H) ； 3. 399 (2H, t, J=4. 4，4_H) ； 3. 491 (2H, t, J=5. 6，16-H) ； 3. 579 (2H, m, 13-H, 14-H) ； 3. 672 (2H, m, 8_H, 9-H) ； 3. 961 (1H, s, 7-H) ； 4. 055 (1H, d, J=4. 4，6-H) ； 4. 255 (1H, d, J=6. 4，11-H) ； 4. 663 (2H, s, 2—H)；磷脂復(fù)合物 1H-NMR (400MHz, 氘代 DMS0)，δ (ppm) 1.629 (4H, s, 1-H) ； 2. 99 (2H, q, J=7. 2, 3-H) ； 3. 425 (4H, m, 12-H, 15-H, 10-2H) ； 3. 505 (2H, t, J=4. 4，4_H) ； 3. 518 (2H, t, J=5. 6，16-H) ； 3. 613 (2H, m ，13-H, 14-H) ； 3. 685 (2H, m, 8_H, 9-H) ； 0. 853 (4H, s, 6-H, 4_H)。實施例二
稱取大豆磷脂0. 05g溶于IOmL 二氯甲烷中，攪拌溶解；稱取乳糖化-去甲斑蝥素 0. 05g，加入IOmL甲醇中，超聲分散，加至大豆磷脂溶液中，25°C水浴攪拌1小時，過濾，濾液 蒸去溶劑，真空干燥48小時，得Lac-NCTD磷脂復(fù)合物0. 093g (產(chǎn)率93. 4%)。實施例三
稱取大豆磷脂1. Og溶于IOmL 二氯甲烷中，攪拌溶解；稱取乳糖化-去甲斑蝥素0. 5g， 加入IOmL甲醇中，超聲分散，加至大豆磷脂溶液中，30°C水浴攪拌1. 5小時，過濾，濾液蒸 去溶劑，真空干燥48小時，得乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物1. 42g (產(chǎn)率94. 7%)。實施例四
稱取大豆磷脂50. Og溶于IOOmL 二氯甲烷中，攪拌溶解；稱取乳糖化_去甲斑蝥素 10. 0g，加入IOOmL甲醇中，超聲分散，加至大豆磷脂溶液中，35°C水浴攪拌2小時，過濾，濾 液蒸去溶劑，真空干燥48小時，得乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物57. 84g (產(chǎn)率96. 4%)。
權(quán)利要求
1.一種乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物，其特征在于乳糖化-去甲斑蝥素與磷脂的 質(zhì)量比為1:1 1:5 ；所述磷脂的平均分子量為700 800。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物，其特征在于磷脂包 括大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂或合成磷脂；磷脂優(yōu)選平均分子量為750的大豆卵磷脂。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物，其特征在于乳糖 化-去甲斑蝥素與磷脂的質(zhì)量比優(yōu)選為1:1.5。
4.一種制備如權(quán)利要求1所述的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物的方法，其特征在于 包括如下步驟(1)將磷脂溶于適量溶劑A中，攪拌溶解；所述溶劑A包括氯仿、二氯甲烷、甲醇、四氫 呋喃及其含有上述溶劑的各種比例的混合溶劑；(2)稱取與磷脂的質(zhì)量比為1:1 1:5的乳糖化-去甲斑蝥素，加入適量溶劑B中，超 聲分散；所述溶劑包括甲醇、乙醇及其含有上述溶劑的各種比例的混合溶劑；溶劑B的用量 為乳糖化-去甲斑蝥素的反應(yīng)濃度為5 100mg/ml ；(3)將乳糖化-去甲斑蝥素混懸液加至磷脂溶液中，在溫度為25 35°C的條件下攪拌；(4)將所得溶液過濾，濾液旋蒸除去溶劑，真空干燥，得到黃色粉末狀乳糖化-去甲斑 蝥素磷脂復(fù)合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種制備乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物的方法，其特征在 于溶劑A與溶劑B的用量體積比為1 1 1 5。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用磷脂與乳糖化-去甲斑蝥素的大量-OH形成氫鍵締和，得到乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復(fù)合物，該新復(fù)合物在保留乳糖化-去甲斑蝥素原抗癌活性的同時，顯著改善其脂溶性，因此能改善其在體內(nèi)的吸收，提高生物利用度。它是利用氫鍵將乳糖化-去甲斑蝥素和磷脂連接起來得到的新化合物，具有較好的脂溶性。其制備方法簡單，產(chǎn)率高，具有保持原有抗腫瘤作用的基礎(chǔ)上，提高藥物體內(nèi)吸收，提高治療肝癌的療效的作用。
文檔編號A61P35/00GK102068702SQ20101061892
公開日2011年5月25日 申請日期2010年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月31日
發(fā)明者周奕, 張學(xué)農(nóng) 申請人:蘇州大學(xué)