專(zhuān)利名稱(chēng)：雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑、其制備方法及應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種活疫苗的保護(hù)劑，尤其涉及雞新城疫活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑及其制備方法，屬于免疫學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
凍干保護(hù)劑及其制備工藝是活疫苗生產(chǎn)中的一項(xiàng)關(guān)鍵技術(shù)，對(duì)疫苗的保存、運(yùn)輸和使用有很大影響。目前，在我國(guó)獸用疫苗中，活的凍干疫苗占相當(dāng)大的比例，國(guó)內(nèi)常用的保護(hù)劑主要為牛奶、蔗糖、明膠等，組方簡(jiǎn)單，保護(hù)功能差。這些傳統(tǒng)的保護(hù)劑凍干的疫苗，要求保存在-15℃以下，給生產(chǎn)廠家及使用者造成很大不便，使成品疫苗的長(zhǎng)期保存和運(yùn)輸受限。且可能由于疫苗保存不當(dāng)造成疫苗失活，效力降低，達(dá)不到防疫目的，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。
耐熱凍干保護(hù)劑比常規(guī)的凍干保護(hù)劑更周到地考慮了具有生物活性的制品在較高溫度和較長(zhǎng)保存時(shí)間的情況下，凍干物質(zhì)可能產(chǎn)生的物理和化學(xué)變化對(duì)活疫苗存活的影響，因而其保護(hù)性能要比傳統(tǒng)保護(hù)劑更為優(yōu)良，使活疫苗可在有效期內(nèi)保存在2-8℃條件下，即使是較高的常溫甚至37℃也可以保存幾十天，因此使活疫苗的儲(chǔ)存、運(yùn)輸和使用都更方便、經(jīng)濟(jì)。
凍干保護(hù)劑的保護(hù)功能主要跟兩個(gè)方面的因素有很大的關(guān)系。一是微生物因素，微生物的種類(lèi)和其本身結(jié)構(gòu)差異(如病毒有無(wú)囊膜)、培養(yǎng)方法以及疫苗種類(lèi)等方面決定了不同種類(lèi)疫苗的保護(hù)劑的配方也應(yīng)不同；二是保護(hù)利用的組方因素，如何護(hù)劑原料及其性質(zhì)、配比、凍干曲線。耐熱凍干保護(hù)劑的組方要根據(jù)以上二者主要因素，選擇組方，合理搭配，并反復(fù)驗(yàn)證，制定合理的凍干曲線。產(chǎn)品凍干以后，對(duì)其物理性狀進(jìn)行保存期試驗(yàn)，并將樣品放置在不同溫度下進(jìn)行保存期長(zhǎng)短及效價(jià)測(cè)定、安全性檢驗(yàn)等對(duì)比試驗(yàn)。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，不斷調(diào)整配方及凍干曲線，以達(dá)到理想的效果。
在20世紀(jì)80年代，發(fā)達(dá)國(guó)家就已開(kāi)始進(jìn)行耐熱凍干保護(hù)劑的研究，目前他們的凍干活疫苗基本上使用耐熱保護(hù)劑。國(guó)內(nèi)獸用生物制品保護(hù)劑的研制相對(duì)滯后，近年我國(guó)也有一些這方面的研究報(bào)道，主要包括新城疫(ND)、IBD、MD、IBV、雞痘和豬瘟凍干活疫苗等的耐熱凍干保護(hù)劑研究，但仍未達(dá)到推廣應(yīng)用的水平，保護(hù)劑存在的問(wèn)題需要更深入研究解決。
雞新城疫(ND)是危害我國(guó)養(yǎng)雞事業(yè)的一種主要傳染病，用5％的蔗糖脫脂牛奶或0.9％明膠蔗糖凍干的ND低毒力活疫苗已大量使用，雖預(yù)防效果良好，但疫苗的存放條件為-15℃以下，這樣給疫苗的存儲(chǔ)、運(yùn)輸、使用帶來(lái)極大不便。
史濟(jì)筠等對(duì)脫脂牛奶、明膠、蔗糖、乳糖、山梨醇、谷氨酸鈉、檸檬酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉、磷酸鹽緩沖液(pH7.2)等按擬定的配方進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明耐熱保護(hù)劑苗適合農(nóng)村使用，它不需要低溫冷藏，可以在一般冷藏條件下儲(chǔ)存，也可以在常溫條件下存放。孫中成等把ND-LaSota系雞胚液與耐熱保護(hù)劑(右旋糖研、羥乙基淀粉、L-谷氨酸鈉、檸檬酸等)按一定比例混合制成凍干疫苗，在不同的溫度和時(shí)間，測(cè)定其疫苗活性，結(jié)果用耐熱凍干保護(hù)劑凍干的雞新城疫(LaSota系)活疫苗，在4℃環(huán)境下放置1年半，疫苗的病毒總量基本不變。王棟等對(duì)雞新城疫耐熱保護(hù)劑活疫苗進(jìn)行中試生產(chǎn)試驗(yàn)，在2℃-8℃，保存期達(dá)24個(gè)月。但所有這些研究?jī)H限于試驗(yàn)室研究階段，未能夠全面推廣應(yīng)用。主要原因是配方過(guò)于復(fù)雜，不便于操作，特別是由于其配方成分昂貴，使疫苗成本大為提高，無(wú)法實(shí)現(xiàn)大批量生產(chǎn)。隨著中國(guó)加入WTO，我國(guó)畜牧業(yè)的快速發(fā)展使得對(duì)疫苗的使用量和種類(lèi)也隨著增加了，加上中國(guó)市場(chǎng)巨大，國(guó)外生物制品涌入，市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)加劇。為了本國(guó)生物制品業(yè)的生存和發(fā)展，研制一種新的配制方法簡(jiǎn)單、成本低、能夠大規(guī)模生產(chǎn)、具有良好保護(hù)性能的雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑就顯得尤為迫切和重要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種配制方法簡(jiǎn)單、成本低、能夠大規(guī)模生產(chǎn)、具有良好保護(hù)性能的雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是通過(guò)以下技術(shù)途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的一種雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑，由以下重量體積(g/ml)百分比的各組分組成明膠1-1.4％、乳糖6-10％、精氨酸0.8-1.2％、山梨醇2-6％、剩余成分為蒸餾水。
優(yōu)選的，各組分的重量體積(g/ml)百分比為明膠1.2％、乳糖8％、精氨酸1％、山梨醇4％、剩余成分為蒸餾水。
本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是提供制備上述雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的方法。
一種制備上述雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護(hù)劑的方法，包括1)按下述重量體積百分比(g/ml)配制溶液明膠1-1.4％、乳糖6-10％、精氨酸0.8-1.2％、山梨醇2-6％，剩余成分為蒸餾水；2)將以上溶液蒸汽滅菌即得本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑。
本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑的使用方法將本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑與雞新城疫活疫苗以1∶1的體積比例進(jìn)行配苗。
本發(fā)明最大優(yōu)點(diǎn)是解決了現(xiàn)有耐熱凍干保護(hù)劑所存在的成分復(fù)雜和成本高等缺陷，具有耐熱性能好、可有效的保護(hù)活疫苗，配方成分及配制方法簡(jiǎn)單，成本低，在任何生物制品廠都完全可以實(shí)現(xiàn)大量生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明凍干保護(hù)劑可以使新城疫低毒力活疫苗在2～8℃保存24個(gè)月，37℃條件下亦可保存1個(gè)月。解決了新城疫低毒力活疫苗長(zhǎng)久以來(lái)低溫冷凍運(yùn)輸、儲(chǔ)存的不便以及高成本等問(wèn)題。
具體實(shí)施例方式
以下通過(guò)實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，這些實(shí)施例僅用于例證的目的，決不限制本發(fā)明的范圍。
本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑的制備按下述重量稱(chēng)取各組分明膠1.2g、乳糖8g、精氨酸1g、山梨醇4g、用蒸餾水定容至100ml；將以上各組分混合均勻，蒸汽滅菌即得本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑。
本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑的制備按下述重量稱(chēng)取各組分明膠1g、乳糖6g、精氨酸0.8g、山梨醇2g，用蒸餾水定容至100ml；將以上各組分混合均勻，蒸汽滅菌即得本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑。
本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑的制備按下述重量稱(chēng)取各組分明膠1.4g、乳糖10g、精氨酸1.2g、山梨醇6g，用蒸餾水定容至100ml；將以上各組分混合均勻，蒸汽滅菌即得本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑。
本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑對(duì)雞新城疫活疫苗的保護(hù)效力試驗(yàn)一、試驗(yàn)材料1、毒株(La Sota株，哈爾濱獸醫(yī)研究所提供)2、SPF雞胚及SPF雛雞(哈爾濱獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。
二、試驗(yàn)疫苗的制備試驗(yàn)疫苗分為A、B、C、D、E五個(gè)組別。其中各組試驗(yàn)疫苗的制備方法如下A組試驗(yàn)疫苗本發(fā)明實(shí)施例1、2和3所制備的耐熱凍干保護(hù)劑與雞新城疫活疫苗按1∶1的重量比例，以無(wú)菌操作程序，按規(guī)程配制試驗(yàn)疫苗，分為001、002、003三個(gè)批次。產(chǎn)品在-30℃入箱，預(yù)凍在-45℃下5小時(shí)后加溫；曲線全程共計(jì)48小時(shí)；在升華過(guò)程中真空度維持在10mHg以下，冷凝器保持在-70℃。
B組試驗(yàn)疫苗用常規(guī)5％蔗糖脫脂乳配制的保護(hù)劑與雞新城疫活疫苗，以無(wú)菌操作程序，按規(guī)程配制試驗(yàn)疫苗，分為001、002、003三個(gè)批次。產(chǎn)品在-30℃入箱，預(yù)凍在-45℃下5小時(shí)后加溫；曲線全程共計(jì)48小時(shí)；在升華過(guò)程中真空度維持在10mHg以下，冷凝器保持在-70℃。
C組試驗(yàn)疫苗用常規(guī)0.9％明膠蔗糖配制的保護(hù)劑與雞新城疫活疫苗按1∶1的重量比例分別配苗，以無(wú)菌操作程序，按規(guī)程配制試驗(yàn)疫苗，分為001、002、003三個(gè)批次。產(chǎn)品在-30℃入箱，預(yù)凍在-45℃下5小時(shí)后加溫；曲線全程共計(jì)48小時(shí)；在升華過(guò)程中真空度維持在10mHg以下，冷凝器保持在-70℃。
D組試驗(yàn)疫苗國(guó)外引進(jìn)的耐熱保護(hù)劑配制的雞新城疫活疫苗。
E組試驗(yàn)疫苗國(guó)外引進(jìn)的耐熱保護(hù)劑配制的雞新城疫活疫苗。
三、試驗(yàn)疫苗的保存及效價(jià)測(cè)定以上各批試驗(yàn)疫苗分別置于2～8℃、室溫(25～30℃)、37℃條件下保存。以雞胚半數(shù)感染量(EID50/羽)作為衡量疫苗效價(jià)的標(biāo)準(zhǔn)。
對(duì)試驗(yàn)疫苗的檢測(cè)項(xiàng)目如下(1)試驗(yàn)疫苗凍干后3天內(nèi)測(cè)其基礎(chǔ)效價(jià)；(2)試驗(yàn)疫苗在2～8℃保存24個(gè)月，測(cè)定EID50；(3)試驗(yàn)疫苗在25～30℃保存3個(gè)月測(cè)定EID50；(4)試驗(yàn)疫苗在37℃保存30天測(cè)定EID50。
按2000年版《獸醫(yī)生物制品規(guī)程》方法測(cè)定，用Reed2Muench法計(jì)算出各稀釋度的死亡百分?jǐn)?shù)，通過(guò)查表確定EID50值。試驗(yàn)結(jié)果分別見(jiàn)表1、2和3。
表1 37℃保存效價(jià)(EID50/羽)測(cè)定

表2 室溫(25～30℃)保存效價(jià)(EID50/羽)測(cè)定

表3 2-8℃保存效價(jià)(EID50/羽)測(cè)定

從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，在不同環(huán)境溫度條件下，本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑對(duì)雞新城疫活疫苗的保護(hù)效果明顯優(yōu)于用常規(guī)5％蔗糖脫脂乳配制的保護(hù)劑和常規(guī)0.9％明膠蔗糖配制的保護(hù)劑對(duì)雞新城疫活疫苗的保護(hù)效果；與進(jìn)口疫苗相比，其保護(hù)效果與國(guó)外的D組相當(dāng)，明顯優(yōu)于E組的保護(hù)效果。
試驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，采用本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑所配制的雞新城疫活疫苗耐熱性能良好，本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑對(duì)新城疫活疫苗具有良好的保護(hù)效果。
權(quán)利要求
1.一種雞新城疫活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑，該耐熱凍干保護(hù)劑由以下重量體積百分比的各組分組成明膠1-1.4wt％v、乳糖6-10wt％v、精氨酸0.8-1.2wt％v、山梨醇2-6wt％v、剩余成分為蒸餾水；其中，重量的單位為g，體積的單位為ml。
2.按照權(quán)利要求1的耐熱凍干保護(hù)劑，其特征是各組分的重量體積百分比為明膠1.2wt％v、乳糖8wt％v、精氨酸1wt％v、山梨醇4wt％v、剩余成分為蒸餾水；其中，重量的單位為g，體積的單位為ml。
3.一種制備權(quán)利要求1的耐熱凍干保護(hù)劑的方法，包括1)按以下重量體積百分比配制溶液明膠1-1.4％、乳糖6-10％、精氨酸0.8-1.2％、山梨醇2-6％，剩余成分為蒸餾水；2)將以上溶液蒸汽滅菌即得本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑。
4.權(quán)利要求1的耐熱凍干保護(hù)劑的使用方法，其特征是將權(quán)利要求1的耐熱凍干保護(hù)劑與雞新城疫活疫苗以1∶1的體積比例進(jìn)行配苗。
5.權(quán)利要求1的耐熱凍干保護(hù)劑在制備雞新城疫耐熱活疫苗中的用途。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種雞新城疫活疫苗的耐熱凍干保護(hù)劑、其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑由以下重量體積百分比的組分組成明膠1－1.4％、乳糖6－10％、精氨酸0.8－1.2％、山梨醇2－6％、剩余成分為蒸餾水。通過(guò)將以上各組分混合均勻，蒸汽滅菌即得本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑。試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明耐熱凍干保護(hù)劑對(duì)雞新城疫弱毒活疫苗的保護(hù)效果良好，其保護(hù)效果要明顯優(yōu)于現(xiàn)有保護(hù)劑的保護(hù)效果。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1772302SQ20051011516
公開(kāi)日2006年5月17日 申請(qǐng)日期2005年11月14日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月14日
發(fā)明者孫建宏, 張弘, 劉景力, 隋惠萍, 魏鳳祥, 金玉亮, 胡井雷, 王杰, 張從祿, 田楓嵐, 安少敏 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所