專利名稱：：長春花及其提取物在制備抗艾滋病藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種藥用植物新的醫(yī)療用途，尤其是長春花及其提取物在制備抗艾滋病藥物中的用途，屬于中藥、天然藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：長春花(C"A"raW/n^ra^w)是夾竹桃科長春花屬植物。長春花藥用全草，具有鎮(zhèn)靜安神、平肝降壓之功效，可用于治療高血壓、白血病、肺癌、胃癌、子宮癌等多種惡性腫瘤。目前，己經(jīng)從長春花植物中分離出100余種生物堿，其中已正式用于臨床的有長春堿和長春新堿，衍生物有硫酸長春地辛和酒石酸長春瑞濱(《中華人民共和國藥典》(二部)，2005年版)。至今文獻(xiàn)報道多為長春花生物堿在治療癌癥等方面的研究和應(yīng)用(《天然產(chǎn)物研究與開發(fā)》，2006，18:325;《中國醫(yī)藥工業(yè)雜志》，2005，36:424)，公開專利"從長春花中提取抗癌活性成分的工藝"(專利ZL01131987.9)涉及長春堿等抗癌成分提取新工藝，"長春花生物堿及其鹽的應(yīng)用"(申請?zhí)朜0.200480016059.4)涉及長春花生物堿誘導(dǎo)胰臟產(chǎn)生胰島素等。艾滋病是一種獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)，目前尚無有效的治療手段，臨床用藥從單一藥物治療過渡到多藥聯(lián)合化療，但是,這些治療僅能延長生命而不能根除病毒,伴隨治療產(chǎn)生的許多毒副作用如肝功能衰竭和糖尿病等，使得患者的免疫系統(tǒng)受到損害。目前從天然藥物中尋找抗AIDS疾病藥物是研究的熱門課題。一些中草藥的提取物如姜黃素、甘草甜素、盧薈多糖等具有抑制HIV的活性，其化學(xué)結(jié)構(gòu)包括生物堿、多糖、噻吩類等。大蒜、蘑燕、番木瓜和人參等已被許多國家用于AIDS治療。本發(fā)明所述的長春花及其提取物在制備抗艾滋病藥物中的用途，至今尚未見文獻(xiàn)報道和專利公開。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供長春花新的醫(yī)療用途，即長春花及其提取物在制備抗艾滋病藥物中的用途。本發(fā)明的內(nèi)容是長春花及其提取物在制備抗艾滋病藥物中的用途，所述用途特征在于1、長春花提取物可通過下述步驟獲得長春花干燥全草，適當(dāng)粉碎后用8-11倍量80-95%乙醇浸泡提取，也可滲漉提取，將提取液減壓回收乙醇，得濃縮液，濃縮液加適量水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取，減壓回收乙酸乙酯、正丁醇萃取液，得到乙酸乙酯段浸膏A和正丁醇段浸膏B，浸膏A、B干燥即得長春花提取物A和長春花提取物B;2、長春花提取物A和/或長春花提取物B，添加適當(dāng)?shù)乃幱幂o料，按常規(guī)的制劑工藝，即可制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑、口服液等口服藥物制劑和注射藥物制劑。長春花提取物A和長春花提取物B經(jīng)薄層層析，與長春堿和長春新堿標(biāo)準(zhǔn)品對照，顯示長春花提取物A和長春花提取物B均含有長春堿和長春新堿。本發(fā)明的長春花提取物A、B，經(jīng)體外活性篩選，統(tǒng)計處理結(jié)果顯示均有較好的抗艾滋病病毒的活性。為了進(jìn)一步驗證長春花及其提取物在治療艾滋病方面的功效，對長春花提取物A進(jìn)行了20例病人初步的臨床療效觀察，結(jié)果表明長春花提取物A是有效的。由長春花提取物A、B的體外活性篩選和病人初步臨床療效觀察結(jié)果，可以合理推導(dǎo)長春花及其提取物可用于制備抗艾滋病藥物，即長春花及其提取物在制備抗艾滋病藥物方面的用途。本發(fā)明的有益效果是提供了長春花在通常用于制備治療高血壓、癌癥藥物以外的新的醫(yī)療用途，即長春花及其提取物在制備抗艾滋病藥物方面的用途，并采用不同的溶媒萃取得到長春花提取物A、B，長春花提取物A和/或長春花提取物B添加適當(dāng)?shù)乃幱幂o料，按常規(guī)的制劑工藝，即可制成口服和注射藥物制劑。下面是長春花提取物A、B的體外活性篩選和病人初步臨床療效觀察試驗及其結(jié)果。一、體外活性篩選抗HIV活性測試多采用美國NCI的方法MTT或XTT法。該方法的基本原理是通過監(jiān)測體外CD4淋巴細(xì)胞被HIV病毒殺死的狀況并對照相同條件下加入待檢藥品后細(xì)胞存活的狀況來觀察待檢藥物對HIV病毒的抑制活性將少量的HIV病毒加入CD4淋巴細(xì)胞，在病毒繁殖的一個完整周期內(nèi)細(xì)胞完全死亡；如加入藥物，則藥物與病毒粒子、細(xì)胞或干擾病毒活性的基因產(chǎn)物相互作用，從而保護(hù)細(xì)胞不被溶解。試驗的結(jié)果將表現(xiàn)為被檢測藥物在病毒繁殖的整個周期內(nèi)所有階段的活性。待檢藥品的濃度一般為l-1000嗎/ml，如活性較好，再選則更稀濃度的樣品試驗。超過1000ng/ml濃度，其活性很低，一般不再考慮。試驗方法選用人T淋巴細(xì)胞系C8166、MT-4(P)以及HIV-1實驗株HIV-1IIIB測試樣品對C8166細(xì)胞的毒性作用、樣品對HIV-lmB誘導(dǎo)C8166細(xì)胞病變的抑制作用，樣品對HRMIIIB感染MT-4(P)細(xì)胞死亡的保護(hù)，并測出樣品的CCso值、ECso值和TI值。結(jié)果表明長春花提取物A和B對艾滋病病毒均有較好的抑制作用。實驗結(jié)果樣品對C8166細(xì)胞的毒性作用和樣品對HIV-lmB誘導(dǎo)C8166細(xì)胞病變的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注毒性值CC5。，即藥物對細(xì)胞殺滅50%時的濃度值。CC5。值越大則毒性越小?；钚灾礒C5。，即藥物對HIV活性抑制50n/。時的濃度值。ECso值越小則活性越強(qiáng)。CQ。/EC5。得到它的治療指數(shù)即TI。數(shù)值越大，治療指數(shù)越大。二、初步臨床療效觀察研究對象HIV感染者，無先天和后天免疫缺陷，年齡性別不限。診斷標(biāo)準(zhǔn)1、HIV抗體呈陽性，且病毒載量為20,000-200,000;2、CD4+淋巴細(xì)胞大于200cells/ml;3、無其他任何不良癥狀；4、沒有服用過任何其他抗HIV藥物。研究方法該試驗以20名HIV感染者為研究對象，不分年齡和性別給藥，受試物為長春花提取物A。每天按時按量給藥，分別觀察服藥后的HIV載量和CD4細(xì)胞數(shù)目。以20周為試驗期限，每4周觀察病人體內(nèi)的HIV載量和CD4細(xì)胞數(shù)目。病人每天每次服用長春花提取物A2g，一天3次。病人在服藥后第4、8、12、16和20周后接受臨床檢測。治療結(jié)果(1)有8例HlV感染者病毒承載量明顯下降(4(m);(2)IO例HIV感染者病毒承載量無明顯變化(50%);(3)2例HIV感染者病毒承載量升高(10%)，前兩項之和即為總有效率90%。病人體內(nèi)的病毒載量顯著降低或維持不變，CD4細(xì)胞數(shù)量第20周比第0周升了近90cells/ml，病人的免疫能力得到增強(qiáng)。說明長春花提取物A初步臨床療效觀察是有效的。具體實施例方式實施例1取長春花干燥品2.0kg，用11倍量95%乙醇分3次(5、3、3倍)浸提，減壓回收乙醇，濃縮干燥得到浸膏粉，浸膏粉加入淀粉適量，混均、制粒、干燥、整粒，裝入膠囊，制成iooo粒即可。實施例2取長春花干燥品10.0kg,用9倍量90%乙醇滲漉，減壓濃縮滲漉液至無醇味得濃縮液，濃縮液加適量水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取4次，減壓回收乙酸乙酯、正丁醇萃取液，得到乙酸乙酯段浸膏A和正丁醇段浸膏B，浸膏A、B干燥即得長春花提取物A和長春花提取物B。取①或②或③(①長春花提取物A;②長春花提取物B;③長春花提取物A、B混合物)100g，加入淀粉等適量輔料，混均、制粒、干燥，壓制成1000片即可。實施例3取長春花干燥品5.0kg，用8倍量80%乙醇滲漉，減壓濃縮滲漉液至無醇味得濃縮液，濃縮液加適量水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取4次，減壓回收正丁醇萃取液，得到正丁醇段浸膏，正丁醇段浸膏干燥即得長春花提取物B;取長春花提取物B25g,加適量注射用水溶解，按常規(guī)的水針劑工藝，調(diào)PH值、過濾、灌封、滅菌制成1000ml即可；或者添加適量附加劑如甘露醇，溶解攪勻，過濾、分裝、凍干制成500瓶即可。權(quán)利要求1、長春花在制備抗艾滋病藥物中的用途，其特征在于所述長春花為夾竹桃科長春花屬植物長春花(Catharanthusroseus)，藥用全草。2、長春花提取物在制備抗艾滋病藥物中的用途，其特征在于長春花提取物可通過下述步驟獲得-長春花全草，干燥粉碎后用80-95%乙醇浸提，將浸提液減壓回收乙醇，得濃縮液，濃縮液加適量水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分別萃取，減壓回收乙酸乙酯、正丁醇萃取液，得到乙酸乙酯段浸膏A和正丁醇段浸膏B，浸膏A、B干燥即得長春花提取物A和長春花提取物B。3、根據(jù)權(quán)利要求2所述長春花提取物，其特征在于所述長春花提取物A和長春花提取物B均含有長春堿和長春新堿。4、根據(jù)權(quán)利要求1、2所述用途，其特征在于將長春花提取物A和/或長春花提取物B，添加適當(dāng)?shù)乃幱幂o料，按常規(guī)的制劑工藝，即可制成片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑、口服液等口服藥物制劑和凍干粉針、水針的注射藥物制劑。全文摘要本發(fā)明公開了長春花及其提取物在制備抗艾滋病藥物中的用途，屬于中藥、天然藥物領(lǐng)域。長春花通過乙醇提取，然后用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇進(jìn)行萃取，得到不同的提取部位，經(jīng)實驗證明，提取所得到的乙酸乙酯部位和正丁醇部位具有抗艾滋病病毒的作用。文檔編號A61K36/24GK101167771SQ20071018127公開日2008年4月30日申請日期2007年10月26日優(yōu)先權(quán)日2007年10月26日發(fā)明者興張,戴好富,曾艷波,梅文莉,雪白,鄭永唐申請人:中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶生物技術(shù)研究所;中國科學(xué)院昆明動物研究所