專利名稱：高純度紫丹參甲素的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從天然產(chǎn)物中分離制備高純度的紫丹參甲素(Przewaquinone A，Przewatanshinquinone A)的方法。
背景技術(shù)：
目前報(bào)道含有紫丹參甲素的天然產(chǎn)物主要是丹參或紫丹參。藥理研究表明，紫丹參甲素具有明顯的抗腫瘤活性對(duì)小鼠Lewis肺癌、黑色素瘤1316和肉瘤180有不同程度的抑制作用。
紫丹參甲素的制備工藝在文獻(xiàn)中報(bào)道的非常少，且很不成熟。高速逆流色譜(High-speed Countercurrent Chromatography，HSCCC)是近年發(fā)展起來的一種連續(xù)的無需固體支撐物的高效、快速的液液分配色譜分離技術(shù)，具有分離量大、樣品無損失、回收率高、分離環(huán)境緩和、節(jié)約溶劑等特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于生物、醫(yī)藥、環(huán)保等領(lǐng)域化學(xué)物質(zhì)的制備分離和純化。
發(fā)明目的本發(fā)明的目的是提出一種采用高速逆流色譜法可克量級(jí)制備紫丹參甲素的工藝，制備的紫丹參甲素純度可達(dá)98％以上。
技術(shù)內(nèi)容本發(fā)明的基本工藝路線是(1)用有機(jī)溶劑浸提含有紫丹參甲素的天然產(chǎn)物，得到其提取物；(2)將所得提取物用柱色譜層析法進(jìn)行提純，收集含紫丹參甲素的組分，蒸干溶劑；(3)將(2)所得樣品用高速逆流色譜法分離制得純度高于98％的紫丹參甲素產(chǎn)品。
柱色譜層析采用的固定相為硅膠(顆粒度為10-500目)；流動(dòng)相可選不同比例的二元混合液A組分可選自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等鹵代烴；B組分可選自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸正丁酯等脂肪酯類，優(yōu)選氯仿-乙酸乙酯體系。A與B的體積比為1-10∶1。
高速逆流色譜法對(duì)紫丹參甲素精制溶劑體系主要有三個(gè)。均以上相為固定相，下相為流動(dòng)相。一號(hào)溶劑體系由三個(gè)組分構(gòu)成，A組分可選自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等鹵代烴，B組分可選自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，C組分為水，優(yōu)選氯仿-甲醇-水體系，A、B、C的體積比為2-6∶2-6∶1-4。二號(hào)溶劑體系由四個(gè)組分構(gòu)成，A組分可選自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等鹵代烴，B組分可選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，C組分可選自正己烷、石油醚、環(huán)己烷等烷烴或醚類，D組分為水，優(yōu)選氯仿-甲醇-正己烷-水體系，A、B、C、D的體積比為2-5∶2-5∶1-4∶1-4。三號(hào)溶劑體系由五個(gè)組分構(gòu)成，A、C組分可選自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等鹵代烴，B組分可選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，D組分可選自正己烷、石油醚、環(huán)己烷等烷烴或醚類，E組分為水，優(yōu)選四氯化碳-甲醇-二氯甲烷-正己烷-水體系，A、B、C、D、E的體積比為0.5-3∶2-5∶0.5-3∶1-4∶1-4。
實(shí)驗(yàn)適合于在室溫為15℃-30℃下進(jìn)行。
優(yōu)點(diǎn)及效果用本法制備的紫丹參甲素純度可達(dá)到98％以上。本法適用于以各種含紫丹參甲素的天然產(chǎn)物、天然產(chǎn)物的提取物為原料制備高純度的紫丹參甲素。適用于采用各種型號(hào)的逆流色譜儀分離制備紫丹參甲素。本發(fā)明率先提出了一種可克量級(jí)制備紫丹參甲素的工藝，本工藝具有分離量大、樣品無損失、回收率高、分離環(huán)境緩和、節(jié)約溶劑等特點(diǎn)。
實(shí)施例1采用氯仿-甲醇-正己烷-水體系制備純度高于98％的紫丹參甲素首先用石油醚浸提丹參，減壓蒸干溶劑，用硅膠柱對(duì)3g丹參提取物進(jìn)行分離，洗脫劑比例為9∶1的氯仿-乙酸乙酯溶液，分步收集，將含有紫丹參甲素的溶劑減壓濃縮至干，得到初步純化產(chǎn)物。使用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20ml進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240ml，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa3057便攜式記錄儀。進(jìn)樣前，先用固定相充滿整個(gè)柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm，以2.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測器紫外譜圖，接收目標(biāo)成分。溶劑體系的制備將體積比為2.8∶3∶1.2∶2的氯仿-甲醇-正己烷-水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動(dòng)相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解初步純化樣品進(jìn)行分離，收集紫丹參甲素的組分峰，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，得到紅色紫丹參甲素固體，經(jīng)HPLC分析，其純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例2采用二氯甲烷-乙醇-水體系制備純度高于98％的紫丹參甲素首先用硅膠柱對(duì)3g丹參提取物進(jìn)行分離，洗脫劑比例為7∶1的二氯甲烷-乙酸丙酯溶液，分步收集，將含有紫丹參甲素的溶劑減壓濃縮至干，得到初步純化產(chǎn)物。使用分析型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，2ml進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為40ml，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀。進(jìn)樣前，先用固定相充滿整個(gè)柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為1800rpm，以1.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測器紫外譜圖，接收目標(biāo)成分。溶劑體系的制備將體積比為5∶3∶2的二氯甲烷-乙醇-水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動(dòng)相。用1∶1的上相和下相混合液2ml溶解初步純化樣品進(jìn)行分離，收集紫丹參甲素的組分峰，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，得到紅色紫丹參甲素固體，經(jīng)HPLC分析，其純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例3采用氯仿-甲醇-水體系制備純度高于98％的紫丹參甲素首先用硅膠柱對(duì)3g丹參提取物進(jìn)行分離，洗脫劑比例為4∶1的四氯化碳-乙酸異丙酯溶液，分步收集，將含有紫丹參甲素的溶劑減壓濃縮至干，得到初步純化產(chǎn)物。使用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20ml進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240ml，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀。進(jìn)樣前，先用固定相充滿整個(gè)柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm，以2.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測器紫外譜圖，接收目標(biāo)成分。溶劑體系的制備將體積比為3∶2∶2的氯仿-甲醇-水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動(dòng)相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解初步純化樣品進(jìn)行分離，收集紫丹參甲素的組分峰，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，得到紅色紫丹參甲素固體，經(jīng)HPLC分析，其純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例4采用四氯化碳-甲醇-二氯甲烷-正己烷-水體系制備純度高于98％的紫丹參甲素首先用正己烷浸提丹參，減壓蒸干溶劑，用硅膠柱對(duì)3g丹參提取物進(jìn)行分離，洗脫劑比例為8∶1的氯仿-乙酸正丁酯溶液，分步收集，將含有紫丹參甲素的溶劑減壓濃縮至干，得到初步純化產(chǎn)物。使用分析型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20ml進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240ml，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀。進(jìn)樣前，先用固定相充滿整個(gè)柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm，以2.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測器紫外譜圖，接收目標(biāo)成分。溶劑體系的制備將體積比為2∶3∶1∶1∶2的四氯化碳-甲醇-二氯甲烷-正己烷-水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動(dòng)相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解初步純化樣品進(jìn)行分離，收集紫丹參甲素的組分峰，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，得到紅色紫丹參甲素固體，經(jīng)HPLC分析，其純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例5采用氯仿-乙醇-二氯甲烷-石油醚-水體系制備純度高于98％的紫丹參甲素首先用乙醇浸提紫丹參，減壓蒸干溶劑，用硅膠柱對(duì)3g紫丹參提取物進(jìn)行分離，洗脫劑比例為9∶1的氯仿-乙酸乙酯溶液，分步收集，將含有紫丹參甲素的溶劑減壓濃縮至干，得到初步純化產(chǎn)物。使用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20ml進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240ml，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀。進(jìn)樣前，先用固定相充滿整個(gè)柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm，以2.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測器紫外譜圖，接收目標(biāo)成分。溶劑體系的制備將體積比為0.5∶3∶2∶1∶2的氯仿-乙醇-二氯甲烷-石油迷-水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動(dòng)相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解初步純化樣品進(jìn)行分離，收集紫丹參甲素的組分峰，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，得到紅色紫丹參甲素固體，經(jīng)HPLC分析，其純度達(dá)到98％以上。
實(shí)施例6采用四氯化碳-甲醇-正己烷-水體系制備純度高于98％的紫丹參甲素首先用硅膠柱對(duì)3g紫丹參提取物進(jìn)行分離，洗脫劑比例為9∶1的氯仿-乙酸乙酯溶液，分步收集，將含有紫丹參甲素的溶劑減壓濃縮至干，得到初步純化產(chǎn)物。使用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20ml進(jìn)樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240ml，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀。進(jìn)樣前，先用固定相充滿整個(gè)柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速為800rpm，以2.0ml/min的流速將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)，待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，然后根據(jù)檢測器紫外譜圖，接收目標(biāo)成分。溶劑體系的制備將體積比為3∶3∶1∶2的二氯甲烷-丙酮-環(huán)己烷-水混溶于分液漏斗中，搖勻后靜置分層，取其上層溶液(上相)為固定相，下層溶液(下相)為流動(dòng)相。用1∶1的上相和下相混合液20ml溶解初步純化樣品進(jìn)行分離，收集紫丹參甲素的組分峰，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，得到紅色紫丹參甲素固體，經(jīng)HPLC分析，其純度達(dá)到98％以上。
權(quán)利要求
1.一種高純度紫丹參甲素的制備方法，其特征在于他的基本工藝路線是(1)用有機(jī)溶劑浸提含有紫丹參甲素的天然產(chǎn)物，得到其提取物；(2)將所得提取物用柱色譜層析進(jìn)行提純，收集含紫丹參甲素的組分，蒸干溶劑；(3)將(2)所得樣品用高速逆流色譜法分離制得純度高于98％的紫丹參甲素產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度紫丹參甲素的制備方法，其特征在于柱色譜層析采用的固定相為硅膠(顆粒度為10-500目)，流動(dòng)相可選不同比例的二元混合液，A組分可選自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等鹵代烴；B組分可選自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸正丁酯等脂肪酯類，優(yōu)選氯仿-乙酸乙酯體系。A與B的體積比為1-10∶1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度紫丹參甲素的制備方法，其特征在于高速逆流色譜法對(duì)紫丹參甲素精制溶劑體系由三個(gè)組分構(gòu)成，A組分可選自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等鹵代烴，B組分可選自甲醇、乙醇、丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，C組分為水，優(yōu)選氯仿-甲醇-水體系，A、B、C的體積比為2-6∶2-6∶1-4。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度紫丹參甲素的制備方法，其特征在于高速逆流色譜法對(duì)紫丹參甲素精制溶劑體系由四個(gè)組分構(gòu)成，A組分可選自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等鹵代烴，B組分可選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，C組分可選自正己烷、石油醚、環(huán)己烷等烷烴或醚類，D組分為水，優(yōu)選氯仿-甲醇-正己烷-水體系，A、B、C、D的體積比為2-5∶2-5∶1-4∶1-4。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度紫丹參甲素的制備方法，其特征在于高速逆流色譜法對(duì)紫丹參甲素精制溶劑體系由五個(gè)組分構(gòu)成，A、C組分可選自氯仿、二氯甲烷、四氯化碳等鹵代烴，B組分可選自甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙酮等脂肪醇或脂肪酮，D組分可選自正己烷、石油醚、環(huán)己烷等烷烴或醚類，E組分為水，優(yōu)選四氯化碳-甲醇-二氯甲烷-正己烷-水體系，A、B、C、D、E的體積比為0.5-3∶2-5∶0.5-3∶1-4∶1-4。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從天然產(chǎn)物中分離制備高純度的紫丹參甲素的方法,他的基本工藝路線是:(1)用有機(jī)溶劑浸提含有紫丹參甲素的天然產(chǎn)物,得到其提取物;(2)將所得提取物用柱色譜層析進(jìn)行提純,收集含紫丹參甲素的組分,蒸干溶劑;(3)將(2)所得樣品用高速逆流色譜法分離制得純度高于98%的紫丹參甲素產(chǎn)品;本法適用于以各種含紫丹參甲素的天然產(chǎn)物、天然產(chǎn)物的提取物為原料制備高純度的紫丹參甲素,適用于采用各種型號(hào)的逆流色譜儀分離制備紫丹參甲素,本發(fā)明率先提出了一種可克量級(jí)制備紫丹參甲素的工藝,本工藝具有分離量大、樣品無損失、回收率高、分離環(huán)境緩和、節(jié)約溶劑等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1380295SQ02104328
公開日2002年11月20日 申請(qǐng)日期2002年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2002年2月27日
發(fā)明者韓笑, 張?zhí)煊?申請(qǐng)人:北京天純維通生物技術(shù)有限公司