專利名稱：新的西克拉敏皂苷化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新的西克拉敏皂苷化合物，含有該化合物的用于治療癌癥或炎癥的藥物組合物，以及該化合物在制備抗癌或抗炎藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
紅毛根是紫金牛科植物，在中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中它被認(rèn)為具有清熱利濕，活血和瘀的作用。據(jù)《中藥大辭典》中記載，該植物可用于治療痢疾、肝炎、膽囊炎、風(fēng)濕、跌打損傷、咳血、瘡癤腫痛等疾病。
到目前為止，尚沒有見到西克拉敏皂苷類成分具有抗癌、抗炎、鎮(zhèn)痛活性的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛的篩選，發(fā)現(xiàn)了新的一類西克拉敏皂苷化合物具有良好的抗癌和消炎鎮(zhèn)痛作用。
本發(fā)明涉及式I的西克拉敏皂苷化合物。
式I其中R1為氫、羥基、C1-C4烷基；R2為氫、羥基、鹵素原子、C1-C4烷基或由1-3個(gè)選自羥基、鹵素原子、C2-C4鏈烯基、C3-C8環(huán)烷基和苯基的基團(tuán)取代的C1-C4烷基；R3為甲基或氫；R4為甲基或氫。
本發(fā)明還涉及含有上述式I西克拉敏皂苷化合物的藥物組合物，特別是用于治療癌癥或炎癥的藥物組合物。
本發(fā)明還涉及上述式I西克拉敏皂苷化合物在制備藥物、特別是治療癌癥或炎性疾病的藥物的用途。
本發(fā)明還涉及一種治療癌癥或炎性疾病的患者的方法，包括給予該患者治療有效量的上述式I西克拉敏皂苷化合物。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明提供如上所定義的式I西克拉敏皂苷化合物
式I本發(fā)明中，C1-C4烷基指含有1到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基等。
C2-C4鏈烯基是指含有2到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烯基，例如乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁烯基、異丁烯基等。
C3-C8環(huán)烷基是指含有3到8個(gè)碳原子的環(huán)烷基，例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基。
鹵素原子是指氟、氯、溴或碘，優(yōu)選為溴或氯。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選方案中，所述西克拉敏皂苷化合物是R1為氫或甲基的式I化合物。
在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選方案中，所述西克拉敏皂苷化合物是R2為氫或甲基的式I化合物。
在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選方案中，所述西克拉敏皂苷化合物是R3為氫的式I化合物。
在本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選方案中，所述西克拉敏皂苷化合物是R4為氫的式I化合物。
本發(fā)明中最優(yōu)選的化合物是R1、R2、R3和R4均為甲基的式I化合物。該化合物為3β-O-{α-L-鼠李糖-(1-4)-[β-D-葡萄糖-(1-2)-β-D-葡萄糖(1-2)]-α-D芹菜糖}西克拉敏苷(化合物1)。
本發(fā)明化合物1可以從紫金牛科植物紅毛根(Ardesia mamilataHance)中提取得到的。提取方法包括將粉碎的毛紅根用有機(jī)溶劑提取，然后對(duì)有機(jī)溶劑提取物進(jìn)行層析分析，從而獲得本發(fā)明的化合物1。所用的有機(jī)體溶劑包括鹵代烷類如二氯甲烷、三氯甲烷等；醇類如甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等；酯類如乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丙酯等；醚類如石油醚、乙醚；或它們的混合物。在本發(fā)明的提取方法中，優(yōu)選在有機(jī)溶劑提取之前，用非極性有機(jī)溶劑如石油醚、乙醚或環(huán)己烷對(duì)毛紅根粉末進(jìn)行脫脂處理。本發(fā)明方法的有機(jī)溶劑提取步驟優(yōu)選使用極性較高的有機(jī)溶劑，如甲醇、乙醇、或醇/水混合物。本發(fā)明更優(yōu)選在上述高極性有機(jī)溶劑提取后，將提取物溶于水中再用極性較小的極性有機(jī)溶劑如正丁醇、乙酸丁酯等提取。上述提取步驟最好包括乙醇提取和隨后對(duì)乙醇提取物的正丁醇提取。上述有機(jī)溶劑提取后獲得的產(chǎn)物隨后進(jìn)行層析分離，優(yōu)選是硅膠層析。硅膠層析可以是柱層析或制備性薄層層析。層析用的洗脫劑容易有本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明化合物的性質(zhì)確定。本發(fā)明優(yōu)選的洗脫劑是正丁醇與水的混合物，更優(yōu)選添加適量的醋酸。例如使用正丁醇∶醋酸∶水＝7∶1∶2的溶劑混合物洗脫。
本發(fā)明的其它化合物可以以化合物1或已知的其它天然西克拉敏苷的配基為起始物，用常規(guī)的有機(jī)合成方法獲得。
本發(fā)明已證明，本發(fā)明式I化合物具有較好的抗癌、抗炎鎮(zhèn)痛作用。
因此，本發(fā)明的化合物可用于治療和/或預(yù)防癌癥、炎性疾病或治療疼痛等相關(guān)疾病。本發(fā)明提供一種治療癌癥或炎性疾病的患者的方法，包括給予該患者治療有效量的上述式I西克拉敏苷衍生物。
可以將本發(fā)明的化合物用于制備藥物，特別是用于治療癌癥、炎性疾病或疼痛的藥物。因此，本發(fā)明涉及式I化合物在制備藥物中的用途，特別是在制備用于治療癌癥、炎性疾病或疼痛的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包括式I化合物及藥用載體。
本發(fā)明式I化合物或藥物組合物可通過(guò)注射、口服或局部途徑給藥，給藥劑型可以是例如片劑，膠囊、緩釋和注射液等。
本發(fā)明的藥物組合物可按本領(lǐng)域已知方法制備，例如將式I化合物與藥用載體混合。
通過(guò)以下實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，但本發(fā)明的范圍并不限于這些實(shí)施例。
制備實(shí)施例化合物1的制備將紅毛根5kg(干品)粉碎，過(guò)40目篩，篩過(guò)物用石油醚提取。每次用5升，提取3次。藥渣用乙醇提取，每次用乙醇4升，提取3次，將提取液合并。將該乙醇提取液減壓蒸發(fā)至衡重。得到乙醇提取物200g。該乙醇提取物用水溶解，將其在正丁醇/水中進(jìn)行分配。將正丁醇層減壓蒸發(fā)至干，得到提取物23g。將水層蒸發(fā)至干得到提取物150g。將正丁醇取物用少量溶劑溶解，并上樣至硅膠柱上Φ100mm×1500mm，用正丁醇∶醋酸∶水＝7∶1∶2混合溶劑洗脫。得到50g化合物1。
化合物1為黃色粉末。10％EtOH-H2SO4檢驗(yàn)呈紅黑色(加熱)，表明有糖存在。FAB-MS質(zhì)譜(m/z[M+H]+)確定其分子量是1074，同時(shí)具有M/Z 133(芹菜糖脫水)，147(鼠李糖脫水)和163(葡萄糖脫水)峰。經(jīng)過(guò)氣相層析(GC)與標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)，表明分子中含有芹菜糖、鼠李糖和葡萄糖，其摩爾比為1∶1∶2。其分子結(jié)構(gòu)經(jīng)13C-NMR、1H-NMR得到確證，其數(shù)據(jù)見表一、二。
表一 化合物1的13C-NMR數(shù)據(jù)(δppm，DMC0-d6，400MHz)

表二化合物1的1H NMR數(shù)據(jù)(δppm DMSO-d6，600MHz)

試驗(yàn)實(shí)施例1化合物1的抗腫瘤活性腫瘤細(xì)胞體外生長(zhǎng)抑制實(shí)驗(yàn)(MTT法)表明，本發(fā)明化合物1對(duì)人胃癌細(xì)胞株(Kato-III)、人紅白血病細(xì)胞株瘤(K562)、人卵巢癌細(xì)胞株(.OVCA2780)、小鼠淋巴白血病細(xì)胞株(L1210)、人肺癌細(xì)胞株(A549)等具有很好的抑制作用。見表三、表四。表中顯示，K562、L1210對(duì)本發(fā)明化合物1較為敏感。本實(shí)驗(yàn)中，化合物1在10μg.mL-1濃度時(shí)，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率達(dá)50％，而陽(yáng)性對(duì)照藥順鉑的抑制率為35.7％。
表三 MTT顯色法檢測(cè)化合物1的體外抗癌活性(n＝12)組別 劑量OD值(x±s)微克 K562 Kato-III OVCA2780/毫升對(duì)照- 0.83±0.07 0.69±0.03 1.380±0.03順鉑15 0.32±0.03###(43.7) 0.51± 0.28±0.03###(75.2)0.03###(18.0)化合物 5 0.65±0.02***(71.2) 0.63± 1.29±1 0.02***(89.2)0.03***(93.2)化合物 10 0.54±0.05***(52.5) 0.51± 1.22±1 0.04***(79.1)0.05***(80.7)化合物 15 0.43±0.04***(31.6) 0.64± 0.96±1 0.02***(73.2)0.08***(74.3)化合物 17.50.36±0.02***(3.6) 0.52± 0.96±1 0.02***(76.7)0.08***(69.4)化合物 20 0.12±0.02***(2.6) 0.53± 0.69±1 0.05***(75.9)0.14***(49.4)IC50/ 6.8μg.mL-134.2μg.mL-140.8μg.mL-1注(1).括號(hào)里的數(shù)字為OD值占溶劑對(duì)照組的百分率
(2).###P＜0.001與溶劑對(duì)照組比較(3).**P＜0.01，***P＜0.001與溶劑對(duì)照組比較(4).Kato-III為人胃印戒癌細(xì)胞株(5).K562為人白血病細(xì)胞株(6).OVCA2780為人卵巢癌細(xì)胞株表四MTT比色法檢測(cè)化合物1的體外抗癌活性(n＝10)組別 劑量 OD值(x±s)微克/毫升A549 L1210對(duì)照 0 0.98±0.04(100.0)1.23±0.01(100.0)順鉑 10 0.53±0.02###(48.2) 0.13±0.01###(12.8)化合物15 0.89±0.02(98.2) 1.04±0.02**(94.4)化合物110 0.85±0.02***(93.1) 0.81±0.16***(73.4)化合物115 0.72±0.015***(78.2)0.13±0.04***(13.3)化合物120 0.21±0.05***(31.1) 0.034±0.02***(6.1)IC5014.27μg/ml 7.74μg/ml注(1)括號(hào)里的數(shù)字為OD值占溶劑對(duì)照組的百分率(2)###為陽(yáng)性對(duì)照藥順鉑(DDP)與溶劑對(duì)照組比較P＜0.001(3)***實(shí)驗(yàn)組與溶劑對(duì)照組比較P＜0.001(4)L1210小鼠淋巴白血病細(xì)胞株(5)A549人肺癌細(xì)胞株試驗(yàn)實(shí)施例2化合物1的消炎鎮(zhèn)痛試驗(yàn)將70只小鼠隨機(jī)分為7組，于二甲苯致炎前1小時(shí)，6個(gè)組的動(dòng)物分別經(jīng)口服給予如下劑量的化合物1(3.125、6.25、12.5、25、50、100mg.kg-1)，另外一組動(dòng)物接受等體積的溶媒。致炎后30分鐘取兩側(cè)耳片，求得腫脹度。表五結(jié)果顯示，化合物1對(duì)二甲苯致小鼠耳部水腫有一定抑制作用，其中25mg.kg-1的劑量下作用最為顯著，抑制率達(dá)89.3％表五 化合物1對(duì)二甲苯誘發(fā)小鼠耳部水腫的抑制作用(n＝10，ig給藥)組別劑 量 腫塊重量(mg)抑制率(％)(mg.kg-1)生理鹽水組 - 7.34±2.15 0化合物1 50 2.42±1.23 74.8化合物1 25 1.22±1.289.3化合物1 12.03.12±1.13 64.5化合物1 6.0 4.21±1.12 45.權(quán)利要求
1.下式I化合物 式I其中R1為氫、羥基、C1-C4烷基；R2為氫、羥基、鹵素原子、C1-C4烷基或由1-3個(gè)選自羥基、鹵素原子、C2-C4鏈烯基、C3-C8環(huán)烷基和苯基的基團(tuán)取代的C1-C4烷基；R3為氫或甲基；R4為氫或甲基。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1為甲基或氫。
3.權(quán)利要求1的化合物，其中R2為甲基或氫。
4.權(quán)利要求1的化合物，其中R3甲基或氫。
5.權(quán)利要求1的化合物，其中R4甲基或氫。
6.權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2、R3和R4各自為甲基。
7.一種藥物組合物，其含有權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的化合物和藥用載體。
8.權(quán)利要求7的藥物組合物，其為用于治療癌癥或炎癥的藥物組合物。
9.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的化合物在制備藥物中的用途。
10.權(quán)利要求9的用途，其中所述藥物是治療癌癥或炎性疾病的藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了式I的西克拉敏皂苷類化合物，其中各基團(tuán)的定義見說(shuō)明書。這些化合物具有較好的抗癌和抗炎鎮(zhèn)痛作用。因此，本發(fā)明還涉及含有這些化合物的藥物組合物，以及它們用于治療腫瘤和炎性疾病的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P35/00GK1524871SQ0310493
公開日2004年9月1日 申請(qǐng)日期2003年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月27日
發(fā)明者鄭祥福 申請(qǐng)人:北京瑞康醫(yī)藥技術(shù)有限公司