專利名稱：一種小花棘豆黃酮的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥和保健品技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種小花棘豆黃酮的制備方法及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
小花棘豆(Oxytropisglabra DC)是豆科(Leguminosae)棘豆屬(Oxytropis)植物，在新疆分布廣泛。據(jù)蒙藥典記載，小花棘豆是一種重要的中蒙藥原料，具有麻醉、鎮(zhèn)靜和止痛作用，主治牙痛、關(guān)節(jié)痛、失眠、健忘、神經(jīng)衰弱及皮膚瘙癢。如小花棘豆4.5g、北五加皮6g及地枸葉9g,水煎服,可治關(guān)節(jié)痛。黃酮類化合物是小花棘豆的有效成分之一。目前，已從小花棘豆中分離得到了 7種黃酮類化合物，均以黃酮苷的形式存在，且均為氧苷。苷元主要為山柰酚、槲皮素、鼠李素和異鼠李素等，糖取代基有D-葡萄糖、L-鼠李糖和D-蕓香糖等。并且發(fā)現(xiàn)小花棘豆的黃酮含量高于傳統(tǒng)藏藥“達(dá)夏”(鐮形棘豆)，表明小花棘豆黃酮具有較好的開發(fā)利用前景。國內(nèi)外研究認(rèn)為黃酮類化合物除具有抗菌、抗炎、抗突變、降壓、清熱解毒、鎮(zhèn)靜、利尿等作用，在抗氧化、抗癌、抑制脂肪酶等方面有顯著效果，同時(shí)也是大多數(shù)氧自由基的清除劑，對(duì)冠心病、心絞痛等疾病的治療效果顯著；而且黃酮類化合物安全性好、毒性小。而到目前為止，并未有小花棘豆黃酮保肝和抗氧化作用的研究報(bào)道和專利申請(qǐng)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述技術(shù)存在的缺陷，提供一種小花棘豆黃酮的制備方法及其應(yīng)用，提取得到新疆小花棘豆黃酮類成分，通過體外抗脂質(zhì)氧化試驗(yàn)、體外自由基清除試驗(yàn)、肝損傷小鼠體內(nèi)自由基清除試驗(yàn)，小鼠飼喂安全性試驗(yàn)等，發(fā)現(xiàn)小花棘豆黃酮具有保肝和抗氧化作用，可以用于制備保肝和抗氧化藥物及保健食品。。其具體技術(shù)方案 為:一種小花棘豆黃酮的制備方法，包括以下步驟:(I)小花棘豆粉碎:取小花棘豆地上部分，陰干、粉碎、過20目篩后備用；(2)超聲波協(xié)助法提取小花棘豆總提取物:稱取小花棘豆樣品，按照物料比I: 10 1: 20g/mL的比例加入體積分?jǐn)?shù)60% 100%的甲醇超聲波提取45 90min，超聲波功率800W，溫度45°C，提取完成后過濾，濾液采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，恒溫干燥箱干燥，即得到小花棘豆總提取物；(3)小花棘豆黃酮的分離:將小花棘豆總提取物用水充分溶解；向?qū)游鲋屑尤?/3體積的去離子水，然后將D-101型大孔吸附樹脂用去離子水轉(zhuǎn)移至層析柱中，加入70%的乙醇溶液(V/V)，體積為樹脂體積的2倍，流速為I倍樹脂體積/min，然后用去離子水洗至無醇味后進(jìn)行小花棘豆總提取物水溶液的梯度洗脫，用10% 100%的乙醇洗脫，收集50% 85%的乙醇洗脫液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，冷凍干燥儀干燥，得到棕黃色粉末；(4)小花棘豆黃酮的定性檢測:通過顯色反應(yīng)和紙層析法鑒定，顯色反應(yīng)包括鹽酸-鎂試驗(yàn)、堿液試驗(yàn)和熒光試驗(yàn)；紙層析反應(yīng)條件為:取待測液10 μ L點(diǎn)在濾紙上，用正丁醇:冰乙酸:水體積比=4: I: 5為展開劑，上行展開5h，取出晾干，噴1%氯化鋁乙醇溶液，吹干后紫外燈下觀察，結(jié)果表明得到棕黃色粉末為黃酮類物質(zhì)；(5)小花棘豆黃酮含量的測定:采用NaNO2-Al (N03) 3_NaOH顯色方法操作，在500nm或者274nm波長處測定吸光度,結(jié)果表明小花棘豆樣品中黃酮含量為16.54mg/kg。本發(fā)明所述的小花棘豆黃酮在制備保肝和抗氧化藥物及保健食品中的應(yīng)用。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為:(I)本發(fā)明建立了小花棘豆黃酮保肝和抗氧化作用的新用途，為進(jìn)一步開發(fā)小花棘豆資源提供了新的思路。(2)本發(fā)明中的制備工藝簡單，成本較低。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說明。小花棘豆提取試驗(yàn):為了綜合考察小花棘豆黃酮提取的影響因素，利用正交法“均衡分散”的特點(diǎn)，選取超聲時(shí)間、甲醇濃度、物料比作為考察因素，并結(jié)合多次提取的經(jīng)驗(yàn)每因素又選取3個(gè)水平安排試驗(yàn)，以黃酮的得率為衡量提取效率的客觀指標(biāo)，優(yōu)選最佳提取工藝。表I正交試驗(yàn)設(shè) 計(jì)
權(quán)利要求
1.一種小花棘豆黃酮的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)小花棘豆粉碎:取小花棘豆地上部分，陰干、粉碎、過20目篩后備用； (2)超聲波協(xié)助法提取小花棘豆總提取物:稱取小花棘豆樣品，按照物料比1: 10 I: 20g/mL的比例加入體積分?jǐn)?shù)60% 100%的甲醇超聲波提取45 90min，超聲波功率800W，溫度45°C，提取完成后過濾，濾液采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，恒溫干燥箱干燥，即得到小花棘 總提取物； (3)小花棘豆黃酮的分離:將小花棘豆總提取物用水充分溶解；向?qū)游鲋屑尤?/3體積的去離子水，然后將D-101型大孔吸附樹脂用去離子水轉(zhuǎn)移至層析柱中，加入70%的乙醇溶液，體積為樹脂體積的2倍，流速為I倍樹脂體積/min，然后用去離子水洗至無醇味后進(jìn)行小花棘豆總提取物水溶液的梯度洗脫，用10% 100%的乙醇洗脫，收集50% 85%的乙醇洗脫液，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，冷凍干燥儀干燥，得到棕黃色粉末； (4)小花棘豆黃酮的定性檢測:通過顯色反應(yīng)和紙層析法鑒定，顯色反應(yīng)包括鹽酸-鎂試驗(yàn)、堿液試驗(yàn)和熒光試驗(yàn)；紙層析反應(yīng)條件為:取待測液10 μ L點(diǎn)在濾紙上，用正丁醇:冰乙酸:水體積比=4: I: 5為展開劑，上行展開5h，取出晾干，噴1%氯化鋁乙醇溶液，吹干后紫外燈下觀察，結(jié)果表明得到棕黃色粉末為黃酮類物質(zhì)； (5)小花棘豆黃酮含量的測定:采用NaN02-Al(N03) 3-NaOH顯色方法操作，在500nm或者274nm波長處測定吸光度,結(jié)果表明小花棘豆樣品中黃酮含量為16.54mg/kg。
2.權(quán)利要求1所述的小花 棘豆黃酮在制備保肝和抗氧化藥物及保健食品中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種小花棘豆黃酮的制備方法及其應(yīng)用，包括以下步驟(1)小花棘豆粉碎；(2)超聲波協(xié)助法提取小花棘豆總提取物；(3)小花棘豆黃酮的分離；(4)小花棘豆黃酮的定性檢測；(5)小花棘豆黃酮含量的測定。本發(fā)明具有制備工藝簡單，成本較低的特點(diǎn)，適合推廣和應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61P1/16GK103202872SQ201310132590
公開日2013年7月17日 申請(qǐng)日期2013年4月8日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月8日
發(fā)明者王帥, 馬春暉, 胡建軍, 賈琦珍, 陳根元, 楊麗娟 申請(qǐng)人:塔里木大學(xué)