專利名稱：用1r,2s－甲氧胺治療大便失禁和其他相關(guān)疾病的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及大便失禁和其他相關(guān)疾病的治療。
背景技術(shù)：
成人中大便失禁約為2％1，老年人中更加多見，而且許多人似乎并未為他們的癥狀尋求幫助。造成大便失禁最常見的原因是在分娩時(shí)損傷了肛門括約肌復(fù)合體，這種損傷可由陰部神經(jīng)病變或分娩的直接損傷造成2。大便失禁還可在無(wú)結(jié)構(gòu)損傷的情況下發(fā)生；在這種情況下，肛門內(nèi)括約肌(IAS)的單一退行性變是最常見的原因3。
對(duì)輕度大便失禁的保守治療包括襯墊4、肛門塞5、抗腹瀉治療6和改變飲食。然而有些病人用上述方法不能得到控制。盡管肛門內(nèi)括約肌修復(fù)術(shù)的結(jié)果令人失望8，但肛門外括約肌的損傷可經(jīng)重疊手術(shù)修復(fù)7。對(duì)于更深度的損傷需進(jìn)行更大的手術(shù)，包括人造腸括約肌9，骶部神經(jīng)刺激10和細(xì)微成形術(shù)(graciloplasty)11。這些是主要的治療方法，但對(duì)許多病人而言要么不適合，要么難以忍受。
采用局部給藥治療大便失禁是解決這一老問(wèn)題的一種不同方法。WO98/27971提出了多種藥劑在治療大便失禁中的應(yīng)用。這些藥劑包括α-腎上腺素能受體激動(dòng)劑、一氧化氮合成酶抑制劑、前列腺素F2。、多巴胺、嗎啡、β-受體阻斷劑和5羥色胺。然而，僅有去氧腎上腺素和一氧化氮合成酶抑制劑Nω-氮-L-精氨酸有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
迄今為止，所有大便失禁局部治療的臨床研究均集中在去氧腎上腺素，一種α-1腎上腺素能受體激動(dòng)劑(這種藥物以前稱為α-1腎上腺素能激動(dòng)劑)。據(jù)認(rèn)為正常人局部使用去氧腎上腺素后，會(huì)產(chǎn)生劑量依賴的肛門腔靜態(tài)壓力升高。當(dāng)含量有10％重量去氧腎上腺素的凝膠應(yīng)用于正常人肛門時(shí)，肛門腔靜態(tài)壓力增加33％，平均持續(xù)時(shí)間為7小時(shí)12，參見WO98/27971。肛門括約肌超聲圖象正常的病人反復(fù)局部應(yīng)用去氧腎上腺素凝膠時(shí)，卻導(dǎo)致了肛門腔靜態(tài)壓降低和大便失禁癥狀。然而，在該試驗(yàn)組中，含有10％到20％重量去氧腎上腺素的凝膠并未產(chǎn)生肛門靜態(tài)壓力的顯著升高，雖然采用含量30％到40％凝膠的受試者中產(chǎn)生的升高達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義13。該數(shù)據(jù)提示，大便失禁病人的肛門內(nèi)括約肌對(duì)腎上腺素能受體激動(dòng)劑的敏感性較正常人為低。這一結(jié)果還得到體外研究數(shù)據(jù)的支持14。
該事實(shí)還可以解釋，為何當(dāng)去氧腎上腺素?cái)U(kuò)大用于包括36位大便失禁和肛門括約肌超聲圖象正常病人的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)，采用鹽酸去氧腎上腺素含量為10％的凝膠時(shí)，大便失禁評(píng)分、肛門腔靜態(tài)壓力或肛門皮膚血流均未見顯著全面改善的原因15。相反，在一項(xiàng)小型的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)中，回腸肛門窩建立后發(fā)生糞漏的病人中，發(fā)現(xiàn)10％的去氧腎上腺素凝膠與安慰劑相比較，產(chǎn)生了非常顯著而持久的改善16。
這些結(jié)果表明，要有效地治療大便失禁，用于局部治療的去氧腎上腺素制劑必需含有高濃度的去氧腎上腺素，其重量應(yīng)達(dá)到30％到40％。此濃度時(shí)，報(bào)道有肛周燒灼感15。單就這一原因，該類制劑不適合用于治療。
去氧腎上腺素作用于血管平滑肌的α-腎上腺素能受體，具有升高血壓的作用，已知還有抗低血壓或加壓作用，并已用于低血壓時(shí)的系統(tǒng)治療。局部應(yīng)用去氧腎上腺素治療大便失禁的另一個(gè)擔(dān)心是需要高劑量才有效，即局部用藥制劑中含有的去氧腎上腺素重量為30％到40％，局部給予α-腎上腺素能受體激動(dòng)劑可能會(huì)作用于全身血管，影響血壓和/或心率。
去氧腎上腺素眼科局部應(yīng)用時(shí)所見的心血管副作用事實(shí)17，支持了對(duì)于局部應(yīng)用高劑量α-腎上腺素能受體激動(dòng)劑治療大便失禁的擔(dān)心，另外還觀察到局部刺激作用18。這類擔(dān)心還包括作用于血管α-腎上腺素能受體的其他α-腎上腺素能受體激動(dòng)劑，它們具有與去氧腎上腺素相似的血管收縮和升高血壓特性，即作為升壓劑和血管收縮劑。甲氧胺(2-氨基-1-(2，5-二甲氧苯基)-1-丙醇)即是該類α-腎上腺素能受體激動(dòng)劑的一個(gè)實(shí)例。
甲氧胺有兩個(gè)手性中心，因此有四種立體異構(gòu)體。目前甲氧胺以異構(gòu)體混合物形式，在臨床上用作升壓劑和血管收縮劑。
Fujita和Hiyama19描述了一種據(jù)說(shuō)在酸性介質(zhì)中的氫化硅烷(幫助下)使α-取代鏈烷酮赤向還原方法。所產(chǎn)生的一種化合物稱為(1R，2S)-2-氨基-1-(2，5-二甲氧基苯基)-1-丙醇，F(xiàn)ujita和Hiyama又稱之為L(zhǎng)-紅-甲氧胺。然而，F(xiàn)ujita和Hiyama并未明確地鑒定到推測(cè)的1R，2S-甲氧胺異構(gòu)體(或它們所生產(chǎn)的其他異構(gòu)體)，即通過(guò)單晶X線衍射計(jì)量法進(jìn)行檢測(cè)，但他們沒有進(jìn)行過(guò)推測(cè)的1R，2S-甲氧胺異構(gòu)體(或他們所產(chǎn)生的其他異構(gòu)體)的生物活性研究。再者，雖然所描述的合成方法適合于生產(chǎn)大約1克的小劑量產(chǎn)品，但我們發(fā)現(xiàn)當(dāng)生產(chǎn)規(guī)模擴(kuò)大到1克以上例如生產(chǎn)大約30克到50克異構(gòu)體時(shí)，這種方法不能選擇性地生產(chǎn)出所述的1R，2S-異構(gòu)體。
Fujita和Hiyama的方法包括將α-氨基酮還原為醇。作者指出在以往描述的還原α-氨基酮的方法中常會(huì)發(fā)現(xiàn)烴的過(guò)度還原。作者聲稱，采用他們的方法，用常規(guī)分析方法未測(cè)到烴的形成。此外，還注意到高紅式選擇性還原。據(jù)說(shuō)發(fā)現(xiàn)選擇性＞99％。
雖然我們?cè)诖蠹s1克的小規(guī)模生產(chǎn)所述甲氧胺1R，2S-異構(gòu)體(L-紅-甲氧胺)時(shí)，我們得到了相似的結(jié)果，但當(dāng)批量生產(chǎn)規(guī)模放大到30克到50克時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)，與Fujita和Hiyama的發(fā)現(xiàn)正相反，發(fā)生了過(guò)度還原，產(chǎn)品中有60％以上到70％為烴，而不是所需要的醇。此外，此過(guò)程不是紅向選擇。形成了大量蘇型異構(gòu)體。
當(dāng)涉及到他們的生產(chǎn)方法和所產(chǎn)生的異構(gòu)體時(shí)，F(xiàn)ujita和Hiyama采用了“R，S”命名和“紅/蘇”命名兩種方法。鑒于Cahn-Ingold-Prelong“R，S”命名法被廣泛接受來(lái)明確定義異構(gòu)體，因此本文用“R，S”術(shù)語(yǔ)而不是“紅/蘇”術(shù)語(yǔ)來(lái)定義甲氧胺異構(gòu)體。

發(fā)明內(nèi)容
我們已經(jīng)合成了1R，2S-甲氧胺，又稱L-紅-甲氧胺，并通過(guò)核磁共振(NMR)、分光鏡和單晶X線衍射儀證實(shí)，該異構(gòu)體具有下列結(jié)構(gòu) 本發(fā)明提供用作藥物的1R，2S-甲氧胺。
本發(fā)明提供用作α-腎上腺素能受體激動(dòng)劑的1R，2S-甲氧胺。
本發(fā)明提供1R，2S-甲氧胺，用于提高胃腸道平滑肌伸縮力，和用于治療因胃腸道平滑肌失去伸縮力而導(dǎo)致的紊亂或疾病。
本發(fā)明還提供1R，2S-甲氧胺用于提高胃腸道括約肌的張力，和用于治療因胃腸道括約肌失去伸縮而導(dǎo)致的紊亂和疾病。例如，本發(fā)明提供1R，2S甲氧胺用于提高幽門括約肌伸縮力治療胃源性腹瀉，和用于提高胃食管括約肌伸縮治療食管反流和Barrett’s病。
本發(fā)明提供1R，2S-甲氧胺用于提高肛門括約肌張力和用于治療大便失禁。
本發(fā)明還提供1R，2S-甲氧胺用于預(yù)防或治療心功能紊亂和疾病，例如，心律紊亂或疾病。
本發(fā)明還提供1R，2S-甲氧胺用作血管收縮劑。本發(fā)明還提供1R，2S-甲氧胺用作鼻減充血?jiǎng)┖陀米餮劭蒲苁湛s劑，以及用作擴(kuò)大眼睛瞳孔的擴(kuò)瞳劑。
本發(fā)明還提供1R，2S-甲氧胺用作升血壓(加壓)劑，例如，用于預(yù)防或治療低血壓，例如，在麻醉期間和/或之后維持血壓。
本發(fā)明還提供1R，2S-甲氧胺在制造上述任一種用途的藥物中的用途。
本發(fā)明還提供治療需要用α-腎上腺素能受體激動(dòng)劑治療的哺乳動(dòng)物的方法，包括給予哺乳動(dòng)物治療有效劑量的1R，2S-甲氧胺。
本發(fā)明提供了一種提高哺乳動(dòng)物胃腸道平滑肌張力的方法，包括給予哺乳動(dòng)物治療有效劑量的1R，2S-甲氧胺。
本發(fā)明提供一種治療因胃腸道平滑肌失去張力而導(dǎo)致的紊亂和疾病的方法，包括給予需要所述治療的哺乳動(dòng)物治療有效劑量的1R，2S-甲氧胺。
本發(fā)明提供一種提高哺乳動(dòng)物胃腸道括約肌，例如幽門括約肌和肛門括約肌伸縮的方法，包括給予哺乳動(dòng)物治療有效劑量的1R，2S-甲氧胺。
本發(fā)明提供一種治療因胃腸道括約肌失去伸縮力而導(dǎo)致的紊亂和疾病的方法，包括給予需要所述治療的哺乳動(dòng)物治療有效劑量的1R，2S-甲氧胺。該類疾病包括胃源性腹瀉和大便失禁。
本發(fā)明還提供一種預(yù)防或治療哺乳動(dòng)物心功能紊亂或疾病的方法，包括給予需要所述預(yù)防或治療的哺乳動(dòng)物治療有效劑量的1R，2S-甲氧胺。該類紊亂或疾病包括心律紊亂或疾病。
本發(fā)明還提供一種治療需要用血管收縮劑治療的哺乳動(dòng)物的方法，包括給予需要這種治療的哺乳動(dòng)物治療有效劑量的1R，2S-甲氧胺。需要治療的可以是鼻充血、眼發(fā)紅，或可以是眼睛的擴(kuò)瞳。
本發(fā)明還提供一種治療或預(yù)防低血壓的方法，例如，在麻醉期間維持血壓，包括給予需要這種治療的哺乳動(dòng)物治療有效劑量的1R，2S-甲氧胺。
1R，2S-甲氧胺可以其游離堿或鹽的形式存在。在用于治療時(shí)，鹽應(yīng)為生理學(xué)上可耐受的鹽。
本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其含有1R，2S-甲氧胺或其生理學(xué)上可以耐受的鹽與藥學(xué)上適合的運(yùn)載體的混合物或結(jié)合物。
本發(fā)明還提供一種適合生產(chǎn)1R，2S-甲氧胺的制造方法，此方法包括向含有二甲基苯基硅烷和(S)-氨基-1-(2，5-二甲氧-苯基)-1-丙酮的溶液中逐滴加入三氟醋酸，其中，氨基基團(tuán)用例如，烷氧基-或芳氧基羧基基團(tuán)，(例如，甲氧羧基基團(tuán))保護(hù)，并從所得到的氨基受保護(hù)的(1R，2S)-2-氨基-1-(2，5-二甲氧基-苯基)-1-丙醇上除去該保護(hù)基團(tuán)。硅烷和丙酮溶液的溶劑具體是氯化烴，例如，二氯甲烷。用二甲基苯基硅烷還原丙酮應(yīng)在冷卻下進(jìn)行。該反應(yīng)通常在用冰冷卻下進(jìn)行，例如，區(qū)域溫度為0℃。該制造方法可使1R，2S-鹽酸甲氧胺的生產(chǎn)超過(guò)1克規(guī)模，例如，達(dá)到30克到50克或更大的規(guī)模。
可將所得到的1R，2S-甲氧胺轉(zhuǎn)變?yōu)槠潲}，例如，加酸產(chǎn)生的鹽，例如，所述鹽是通過(guò)與酸反應(yīng)而產(chǎn)生的。
本發(fā)明還提供了一種從甲氧胺異構(gòu)體混合物中分離1R，2S-甲氧胺異構(gòu)體的方法，該方法包括用高壓液相層折處理異構(gòu)體混合物，所用層折介質(zhì)含有β-環(huán)糊精R，S-羥丙基醚，結(jié)合于二氧化硅膠，最好隨后用反相層析法分離，所用層折介質(zhì)含有在乙烯醇共聚體的羥基引入十八烷基而衍生得到的乙烯醇共聚體基層。


圖1顯示的是一個(gè)超級(jí)融合器官槽，槽中為采用甲氧胺消旋物和四種異構(gòu)體檢測(cè)豬肛門內(nèi)括約肌的肌肉條。
圖2至圖5顯示體外測(cè)定的肛門內(nèi)括約肌的劑量/反應(yīng)曲線。在圖2和圖4中，用去氧腎上腺素作為對(duì)照品。在實(shí)施例3所列的條件下用液相層析法分離四種甲氧胺異構(gòu)體。層析法分離的異構(gòu)體以峰1到峰4命名。
圖2顯示采用甲氧胺消旋物(黑色圓圈)和去氧腎上腺素(空心方塊)的劑量反應(yīng)曲線。
圖3顯示在實(shí)施例3所列條件下用液相層析法所得到的四種甲氧胺異構(gòu)體的劑量反應(yīng)曲線，峰1(黑色圓圈)，峰2(空心方塊)，峰3(空心三角形)和峰4(×)，圖4顯示采用甲氧胺消旋物(黑色圓圈)，峰2(空心三角形)和去氧腎上腺素(空心圓圈)的劑量反應(yīng)曲線。
圖5顯示采用實(shí)施例4合成的1R，2S-甲氧胺，表示為峰2(合成的)(空心方塊)，和實(shí)施例3層析法分離得到的1R，2S-甲氧胺，表示為峰2(分離的)(黑色圓圈)的劑量反應(yīng)曲線。
圖6至圖11顯示氧明消旋物和在實(shí)施例3所列條件下用液相層析法得到的四種異構(gòu)體的色譜圖。
圖6是消旋物的色譜圖，顯示四個(gè)峰(WWD1 A，波長(zhǎng)＝225nM(樣品\01-16-8.D)。
圖7是甲氧胺消旋物的色譜圖，剖視圖顯示了收集的分離峰1到峰4。
圖8是顯示峰3純度的色譜圖(WWD1 A，波長(zhǎng)＝225nM(樣品\0116P3-5.D)。
圖9是顯示峰4純度的色譜圖(WWD1 A，波長(zhǎng)＝225nM(樣品\0116P4-1.D)。
圖10是顯示峰1純度的色譜圖(WWD1 A，波長(zhǎng)＝225nM(樣品\0116P1-4.D)。
圖11是顯示峰2純度的色譜圖(WWD1 A，波長(zhǎng)＝225nM(樣品\0116P2-4.D)。
圖12顯示峰1的nmr范圍，圖13是峰3的nmr范圍，圖14是峰2的nmr范圍，而圖15為峰4的nmr范圍。
圖16顯示1R，2S甲氧胺的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)(峰2)。
圖17顯示0.5毫升劑量的安慰劑和0.3％，1％，3％w/w 1R，2S-甲氧胺凝膠對(duì)豬外周動(dòng)脈收縮壓的影響。
圖18顯示0.5毫升劑量的安慰劑和0.3％，1％和3％w/w1R，2S-甲氧胺凝膠對(duì)豬外的周動(dòng)脈舒張壓的影響。
圖19顯示0.5毫升劑量的安慰劑和0.3％，1％和3％w/w1R，2S-甲氧胺凝膠對(duì)豬外周動(dòng)脈平均血壓的影響。
圖20顯示0.5毫升劑量的安慰劑和0.3％，1％，3％w/w1R，2S-甲氧胺凝膠對(duì)豬肛門平均靜忘壓的影響。
圖21顯示0.5毫升劑量的安慰劑和0.3％，1％，3％w/w1R，2S-甲氧胺凝膠對(duì)豬的心率的影響。
在圖17到圖21的每張圖中，黑色圓圈為平均值，空心圓圈為豬1的檢測(cè)值，空心三角為豬3的檢測(cè)值，而空心方塊為豬4的檢測(cè)值。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明涉及1R，2S-甲氧胺和及其治療用途，例如，用作α-腎上腺素能受體激動(dòng)劑。
我們發(fā)現(xiàn)，1R，2S-甲氧胺低劑量體外和體內(nèi)局部使用時(shí)能有效誘導(dǎo)肛門內(nèi)括約肌收縮，而且其體內(nèi)作用不伴有血壓的升高。
我們發(fā)現(xiàn)，1R，2S-甲氧胺在體外誘導(dǎo)肛門內(nèi)括約肌收縮時(shí)比去氧腎上腺素至少?gòu)?qiáng)四倍以上。我們還發(fā)現(xiàn)，豬體外試驗(yàn)中，0.5毫升含1％重量的1R，2S-甲氧胺凝膠，甚至劑量小到0.5毫升含0.3％重量的1R，2S-甲氧胺凝膠，也就是劑量分別為5毫克和1.5毫克的1R，2S-甲氧胺局部使用時(shí)，提高了肛門內(nèi)括約肌壓，而對(duì)血壓無(wú)影響。
這些發(fā)現(xiàn)具有極重要的意義，因?yàn)楫?dāng)僅限于局部給予所需去氧腎上腺素濃度和劑量的幾分之一時(shí)，局部給予1R，2S-甲氧胺引起的肛門肌肉張力和肛門腔壓的提高，在提高的數(shù)量上與局部使用去氧腎上腺素相似，而不引起血壓升高。
以往已報(bào)道過(guò)，甲氧胺以異構(gòu)體混合物形式，作為一種α-腎上腺素能受體激動(dòng)劑作用于血管肌肉系統(tǒng)的α-腎上腺素能受體。不受下列因素的限制，我們認(rèn)為所觀察到的1R，2S-甲氧胺體外對(duì)肛門肌肉伸縮力的作用和體內(nèi)對(duì)肛門括約肌伸縮力的作用，是1R，2S-甲氧胺通過(guò)括約肌本身的α-腎上腺素能受體直接作用于肛門括約肌的結(jié)果，而非通過(guò)對(duì)肌肉供血血管肌肉系統(tǒng)的間接作用。
α-腎上腺素能受體存在于整個(gè)胃腸道自身的平滑肌系統(tǒng)和各種括約肌中，包括肛門內(nèi)括約肌、胃食管括約肌、幽門括約肌、Oddi括約肌和回腸結(jié)腸括約肌。胃腸道(GI)平滑肌伸縮力或任何胃腸道括約肌伸縮力的減退，可能導(dǎo)致胃腸道正常功能的紊亂，或?qū)е屡R床疾病。例如，肛門括約肌伸縮力減退可導(dǎo)致大便失禁；幽門括約肌伸縮力減退可能是胃源性腹瀉的原因。
1R，2S-甲氧胺可用于提高胃腸道平滑肌伸縮力，治療因胃腸道平滑肌失去張伸縮力所致的紊亂或疾病。1R，2S-甲氧胺還可用于提高胃腸道括約肌伸縮力，治療因胃腸道括約肌失去伸縮力所致的紊亂或疾病。
例如，1R，2S-甲氧胺可用于提高肛門括約肌伸縮力，治療大便失禁。局部給予1R，2S-甲氧胺能夠有效治療大便失禁而無(wú)顯著的全身副作用，特別是沒有心血管的副作用，例如血壓，且無(wú)局部刺激。1R，2S-甲氧胺可用于提高幽門括約肌張力，治療胃源性腹瀉。
α-腎上腺素能受體也存在于心肌中。心功能紊亂，例如心律紊亂，可用1R，2S-甲氧胺預(yù)防和治療，一般采用全身給藥。
目前，甲氧胺以異構(gòu)體混合物形式被用作升壓劑，也稱為升壓劑或抗低血壓劑和作為血管收縮劑。據(jù)認(rèn)為升壓劑和血管收縮劑的作用，是通過(guò)甲氧胺作用于血管肌肉系統(tǒng)的α-腎上腺素能受體而實(shí)現(xiàn)的。1R，2S-甲氧胺可用于治療任何需要用α-腎上腺素能激動(dòng)劑的適應(yīng)癥，特別是作為α-腎上腺素能受體激動(dòng)劑作用于血管肌肉系統(tǒng)的α-腎上腺素能受體，例如任何需用或已用異構(gòu)體混合物形式的甲氧胺，或去氧腎上腺素治療的適應(yīng)癥。1R，2S-甲氧胺具體可作為升壓劑和血管收縮劑使用。
本發(fā)明所治療的對(duì)象為哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物一般指人，但也可以是商用飼養(yǎng)動(dòng)物或陪伴動(dòng)物。
用于治療時(shí)，1R，2S-甲氧胺可如此使用，即以游離堿形式，或以其生理上可耐受的鹽的形式使用。除非另有說(shuō)明，以下所用的術(shù)語(yǔ)“1R，2S-甲氧胺”包括其游離堿和生理上可耐受的鹽。當(dāng)給予一定數(shù)量或百分比的1R，2S-甲氧胺或其鹽時(shí)，鹽的數(shù)量或濃度宜根據(jù)1R，2S-甲氧胺的游離堿計(jì)算。
1R，2S-甲氧胺的鹽是，例如，加酸的鹽，包括酸加成鹽。鹽的例子為鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、醋酸、三氟醋酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、酒石酸、馬來(lái)酸、檸檬酸、抗壞血酸、草酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、對(duì)甲苯磺酸、苯磺酸、羥乙磺酸或樟腦酸的鹽。
1R，2S-甲氧胺一般可以本發(fā)明的藥物組合物形式全身給藥或非全身給藥。1R，2S-甲氧胺的給藥途徑、合適的藥物組合物及適宜的劑量取決于其用途。
本發(fā)明還提供了一種適合于以藥用規(guī)模生產(chǎn)1R，2S-甲氧胺的方法，例如，約1克以上的量，例如，約30克到50克或更多的量。上面已對(duì)該方法進(jìn)行了描述，下面將作更為詳細(xì)的描述。Fujita等先前提出方法的僅適合于小規(guī)模生產(chǎn)，量大約為1克。這種規(guī)模即使對(duì)生產(chǎn)臨床試驗(yàn)用藥而言也太小了。因此，本文不可能描述在本發(fā)明開發(fā)的生產(chǎn)工藝之前該制劑的用途。
本發(fā)明提供了一種含有1R，2S-甲氧胺或其生理上可耐受的鹽作為活性成分，與藥學(xué)上適合的載體的混合物或結(jié)合物的藥物組合物。
本發(fā)明的藥物組合物可以適當(dāng)?shù)男问綄?shí)現(xiàn)其全身或局部的作用。本文所用術(shù)語(yǔ)“全身性”表示關(guān)系或影響到“整個(gè)”機(jī)體。術(shù)語(yǔ)“局部”用于表示“局限于或關(guān)系到一個(gè)點(diǎn)或一部分，而不是全部”。術(shù)語(yǔ)“體表局部”意味著“關(guān)系到特定的表面部分”。適合于特殊體表區(qū)域，(例如皮膚)，局部給藥的藥物組合物，通常提供的作用是局部性的而非全身性的。然而，可設(shè)計(jì)一些體表局部給藥配方主要用于全身給予活性成分。除非另有說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)“體表局部”，例如，作為體表局部給藥或體表局部藥物組合物，本文用于指“關(guān)系到某特定表面區(qū)域和具有局部作用”。
本發(fā)明的藥物組合物包括適合于注射或輸注給予1R，2S-甲氧胺的組合物；適合于皮下給藥；經(jīng)皮給藥；口服，包括舌下給藥；直腸給藥；和體表局部給藥，例如皮膚給藥、眼表面給藥或鼻粘膜給藥。
已經(jīng)知道適合口服和舌下給藥的藥物組合物。片劑和膠囊廣泛用于口服，而其他制劑，例如，藥丸、顆粒劑、糖衣丸和糯米紙囊劑較少使用。也可采用緩釋或靶向釋放制劑，例如，向事先確定的胃腸道某一部分靶向釋放的制劑，例如。延時(shí)釋放或pH依賴劑型，例如，向胃、十二指腸或胃腸道下部(例如結(jié)腸)，靶向釋放的制劑。例如，可使用設(shè)計(jì)成在結(jié)腸的pH環(huán)境下釋放活性成分的制劑，因?yàn)榘邢蚪Y(jié)腸的制劑包括易受結(jié)腸細(xì)菌降解的包衣。可使制劑靶向胃腸道的其他部分，例如胃或十二指腸。液體制劑，例如糖漿或濃縮液，例如濃縮凝膠或漿液，可用于口服。
適合于直腸給藥的藥物組合物包括栓劑、明膠直腸膠囊和灌腸溶液。
適合于鼻粘膜給藥的藥物組合物是，例如滴鼻劑、噴霧劑和氣霧劑。用于眼表面給藥的組合物是，例如滴眼劑、眼霜和眼膏。
本發(fā)明的藥物組合物可以是，例如適合于皮膚局部給藥的形式，例如凝膠、霜?jiǎng)?、軟膏、糊劑、泡沫劑或粘貼劑。
藥物組合物可用于皮下給藥。一些組合物，例如皮下儲(chǔ)存制劑和粘貼劑可提供緩釋或持續(xù)釋放。
以上所述的藥物組合物還可包含除1R，2S-甲氧胺以外的一種或多種活性成分。例如，用于治療大便失禁的肛門區(qū)局部給藥的組合物可含有通常用于肛門區(qū)局部給藥組合物中的活性成分，例如，類固醇，其作用是減輕刺激，和/或局部麻醉劑。用于肛門區(qū)皮膚局部給藥的藥物組合物還可包含一種或多種選自皮膚滲透增強(qiáng)劑、皮膚水合劑和皮膚柔軟劑的成分。皮膚局部給藥的組合物可放在，例如管子里，帶泵的容器中，或氣霧劑容器中。
本發(fā)明的用于皮膚局部給藥的藥物制劑，例如，凝膠、霜?jiǎng)┗蜍浉?，尤其是用于治療大便失禁的組合物，一般包含不到10％重量的1R，2S-甲氧胺，例如通常不到10％，包含8％，包含5％，包含4％，3％，或1％的1R，2S-甲氧胺。也可采用1R，2S-甲氧胺含量小于1％的制劑，例如0.8％或更低，0.5％或更低，0.3％或更低，例如0.1％含量的1R，2S-甲氧胺。組合物可含有，例如，0.1％到5％重量，0.3到3％重量的1R，2S-甲氧胺。該制劑可每天一次或多次給藥，例如，每天兩或三次，甚至更多次，例如，每天四或五次。體表局部制劑的單位劑量，通常約為1毫升凝膠、軟膏或霜?jiǎng)?，例如，其含有上述量?R，2S-甲氧胺。每次應(yīng)用時(shí)給予的1R，2S-甲氧胺劑量，可通過(guò)所給予的組合物體積和該組合物中1R，2S-甲氧胺的濃度計(jì)算。例如，1毫升1％含量的1R，2S-甲氧胺凝膠可提供10毫克劑量的1R，2S-甲氧胺。
本發(fā)明的藥物組合物可以為單位劑型。上面描述了全身給藥的單位劑型的例子?？诜蛑蹦c給藥的單位劑型包括，例如片劑、膠囊和栓劑，注射或輸注給藥的單位劑型包括，例如小瓶和安瓿。皮膚局部給藥的單位劑型為氣泡包或或小袋，每個(gè)氣泡和小袋含有上述一個(gè)單位劑量的，凝膠、霜?jiǎng)┗蜍浉唷？商峁┮环N劑量計(jì)量器，例如泵裝置，給予預(yù)先定好量的局部給藥組合物，例如霜?jiǎng)?、軟膏或凝膠。用作眼睛擴(kuò)瞳的擴(kuò)瞳劑時(shí)，提供一滴單位計(jì)量?？商峁┏掷m(xù)釋放的制劑為儲(chǔ)存制劑或粘貼劑。
已經(jīng)知道上述多種類型的藥物組合物和適合于上述給藥途徑的其他組合物，這些組合物的配方及其制備方法。文獻(xiàn)包括手冊(cè)，例如，EW Martin的Remington’s藥物科學(xué)。綜述和文獻(xiàn)描述了標(biāo)準(zhǔn)和更復(fù)雜的配方及設(shè)備，例如，各種類型的粘貼劑。
如以上所指出，1R，2S-甲氧胺的給藥途徑，適當(dāng)?shù)乃幬锝M合物，和適宜的劑量取決于其用途。在臨床治療中，一般宜采用可達(dá)到所需效果的最低劑量。1R，2S-甲氧胺比甲氧胺消旋物至少?gòu)?qiáng)四倍，就是說(shuō)具有四種異構(gòu)體等摩爾混合物的效力。因此，當(dāng)用于治療甲氧胺消旋物以往治療的適應(yīng)癥時(shí)，一般應(yīng)減少1R，2S-甲氧胺的劑量，例如，至多應(yīng)為原劑量的一半，例如，為原劑量的四分之一。甚至可用更低的劑量。
當(dāng)用作增壓劑，治療低血壓時(shí)，1R，2S-甲氧胺一般為全身給藥。例如，當(dāng)用于麻醉期間維持血壓時(shí)，1R，2S-甲氧胺是注射或輸注給藥，一般是靜脈注射或輸注。
商業(yè)上適合于用作增壓劑以維持麻醉期間的血壓，以異構(gòu)體混合物形式的推薦劑量為含有20毫克/毫升甲氧胺溶液，靜脈給藥時(shí)，為0.15到0.25毫升，肌肉給藥時(shí)為1毫升，即靜脈給藥的推薦劑量為3到5毫克，而肌肉給藥的推薦劑量為20毫克。作為增壓劑維持麻醉期間血壓的1R，2S-甲氧胺的劑量可以是比劑量的一半或更低，例如，四分之一劑量或更低，例如，靜脈給藥時(shí)為1毫克或更低，肌肉給藥時(shí)為5毫克或更低。
作為鼻減充血?jiǎng)┦褂脮r(shí)，1R，2S-甲氧胺一般是鼻粘膜局部給藥，例如，以滴鼻劑、噴霧劑或氣霧劑形式給藥。
1R，2S-甲氧胺可以作為眼科血管收縮劑使用，例如，用于治療眼發(fā)紅，例如，由過(guò)敏反應(yīng)、干燥、灰塵或煙霧環(huán)境，不能正常眨眼，或疲勞引起的眼發(fā)紅。1R，2S-甲氧胺還可用作擴(kuò)瞳劑，用來(lái)擴(kuò)大眼睛瞳孔。作為眼科用藥，1R，2S-甲氧胺可眼表面局部給藥，例如，以滴眼劑、眼霜或眼膏形式給藥。
對(duì)于大便失禁治療，1R，2S-甲氧胺可局部給藥，例如，在肛門和臀部區(qū)域。適合于這類局部給藥的藥物組合物包括凝膠、霜?jiǎng)?、軟膏、糊劑和泡沫劑；液體組合物，特別是濃縮液；皮下儲(chǔ)存制劑；和透皮貼劑。
本發(fā)明的1R，2S-甲氧胺的體表局部給藥，即具有局部作用的體表局部給藥，具有降低甲氧胺全身作用例如對(duì)血壓的影響的優(yōu)點(diǎn)。
1R，2S-甲氧胺肛門區(qū)局部給藥可能是有利的，就是說(shuō)，對(duì)所有或部分肛門、肛門腔和肛門周圍區(qū)域(稱為肛周區(qū))給藥；例如，對(duì)一部分或所有肛膜、肛門腔、肛門內(nèi)括約肌和臀部給藥。例如，可以用涂藥器或手指將霜?jiǎng)?、軟膏、凝膠或泡沫劑涂抹在肛門腔或肛門周圍皮膚上。
另一種給藥方法為直接將1R，2S-甲氧胺注射到肛門括約肌中或肛門區(qū)域的其他組織中。在臀部具體在肛門區(qū)附近施加全身給藥的透皮貼劑的，除了全身作用外，還有局部作用。
當(dāng)局部制劑為管裝軟膏、霜?jiǎng)?、凝膠或糊劑時(shí)，用藥說(shuō)明書可推薦適當(dāng)?shù)挠盟巹┝?，例如，從管中擠出約2-3厘米的制劑。局部制劑可放在一種帶泵和計(jì)量裝置的容器中提供使用，計(jì)量裝置可幫助提供正確的給藥劑量。一般而言，從0.5到約3毫升，例如，約1毫升，是霜?jiǎng)?、凝膠或軟膏局部給藥的合適體積。然而，當(dāng)施加局部制劑時(shí)，特別是當(dāng)用手指給藥時(shí)，要給予精確的劑量常常是困難的。采用涂藥器可給予更精確的藥量。
用藥說(shuō)明書應(yīng)標(biāo)明給藥的推薦部位，例如，該制劑是否應(yīng)該施加在肛周皮膚，或是否還應(yīng)塞到肛門里。
為有效治療大便失禁，必須使用30-40％濃度的去氧腎上腺素局部制劑，例如凝膠，通常為1毫升，給予的去氧腎上腺素劑量為400毫克。去氧腎上腺素的總劑量和高濃度，將產(chǎn)生全身性和局部副作用，特別是心血管副作用，例如血壓升高和局部皮膚刺激。相反，在豬試驗(yàn)中，使用含量1％的1R，2S-甲氧胺凝膠，和含量為0.3％的1R，2S-甲氧胺凝膠0.5毫升，發(fā)現(xiàn)可提高肛門內(nèi)括約肌壓而對(duì)血壓無(wú)影響。
根據(jù)本發(fā)明，治療大便失禁最好采用適合局部給藥的藥物組合物，例如凝膠、霜?jiǎng)┗蜍浉?，一般含有量不?0％重量的1R，2S-甲氧胺，且通常不到10％，包括8％，包括5％，包括4％，3％，2％或1％的1R，2S-甲氧胺。可以使用含1％或更低重量的甲氧胺制劑，例如，0.8％或更低，0.5％或更低，0.3％或更低，或0.1％重量的1R，2S-甲氧胺。約0.5到約2毫升，最好約1毫升，這是霜?jiǎng)?、凝膠或軟膏局部用藥的適合體積。
該組合物可每天給藥一次或多次，例如，每天兩到三次，甚至更頻繁，例如，每天四到五次。局部給藥的單位劑量通常為1毫升凝膠、軟膏或霜?jiǎng)?，例如，含有上述量?R，2S-甲氧胺。1R，2S-甲氧胺的每次給藥劑量，可根據(jù)所給組合物的體積和該組合物中1R，2S-甲氧胺的濃度計(jì)算出來(lái)。例如，1毫升含量為1％的1R，2S-甲氧胺凝膠可提供10毫克劑量的1R，2S-甲氧胺。作為實(shí)施例，可給予的藥物劑量范圍從0.5毫克到40毫克。應(yīng)認(rèn)識(shí)到相關(guān)部位的實(shí)際給藥劑量，可能低于理論劑量，因?yàn)樵诮o藥過(guò)程中存在損耗。
用于提高胃腸道平滑肌伸縮力，和用于治療因胃腸道平滑肌失去伸縮力而導(dǎo)致的紊亂和疾病，以及用于提高胃腸道括約肌伸縮力，和用于治療因胃腸道括約肌失去伸縮力而導(dǎo)致的紊亂和疾病時(shí)，1R，2S-甲氧胺最好局部給藥，例如，采用上述藥物組合物以避免不良的全身副作用?？刹捎眠m合緩釋或靶向給藥的組合物。例如，用于提高胃食管括約肌伸縮力，和用于治療反流(例如Barnett’s病)時(shí)，1R，2S-甲氧胺可以濃縮液形式例如粘膠，或漿液給藥。用于提高幽門括約肌伸縮力和治療胃源性腹瀉時(shí)，1R，2S-甲氧胺可以濃縮液形式例如粘膠，或漿液給藥，或是靶向胃中釋放的固體口服組合物。
用于預(yù)防或治療心功能紊亂或疾病，例如心律紊亂或疾病時(shí)，1R，2S-甲氧胺采用全身性給藥，具體是注射或輸注，例如，以上述適當(dāng)?shù)乃幬锝M合物形式。
作為一般原則，需要局部作用時(shí)，例如治療鼻塞，用于眼科和治療大便失禁，理想的是獲得局部作用而無(wú)全身作用，例如不影響血壓。事實(shí)上1R，2S異構(gòu)體較其他異構(gòu)體或消旋物本身具有更強(qiáng)的活性，意味著可以低得多的劑量達(dá)到同樣的藥理作用，同時(shí)降低了不良副作用的程度。
至于全身使用1R，2S-甲氧胺，可用較低的劑量而達(dá)到與用較高劑量甲氧胺消旋物的同樣效果。
如上所述的，我們發(fā)現(xiàn)用Fujita和Hiyama的方法只能生產(chǎn)非常少量的1R，2S-甲氧胺20，例如，達(dá)到約1克，這種生產(chǎn)量對(duì)于實(shí)際應(yīng)用實(shí)在太小。因此，宜采用本發(fā)明的工藝生產(chǎn)異構(gòu)體，這使得能以大得多的規(guī)模批量生產(chǎn)至少30到50克。
本發(fā)明的工藝包括向含有二甲基苯基硅烷和(S)-氨基-1-(2，5-二甲氧-苯基)-1-丙酮的溶液中滴加三氟醋酸，其氨基基團(tuán)受到保護(hù)，并從所得到的氨基受保護(hù)的(1R，2S)-2-氨基-1-(2，5-二甲氧基-苯基)-1-丙醇上除去該保護(hù)基團(tuán)。所述保護(hù)基團(tuán)可以是，例如烷氧基或芳氧基羧基，例如甲氧基羧基或叔丁氧羧基。所用的保護(hù)基團(tuán)，一般最好相對(duì)于其他保護(hù)基團(tuán)而言。小而不龐大，以最大限度地減小保護(hù)基團(tuán)對(duì)反應(yīng)立體特性的影響。一般優(yōu)選甲氧基羧基保護(hù)基團(tuán)。硅烷和丙酮溶液的溶劑具體是氯化烴，例如，二氯甲烷。二氯甲烷較其他氯化烴(例如氯仿)，具有低毒性的優(yōu)點(diǎn)。用二甲基苯基硅烷還原丙酮，應(yīng)在冷卻條件下進(jìn)行，因?yàn)樵摲磻?yīng)時(shí)會(huì)產(chǎn)熱。反應(yīng)一般在冰致冷條件下進(jìn)行，例如，區(qū)域溫度為0℃，此時(shí)加入三氟醋酸，產(chǎn)生的反應(yīng)混合物最好保持在該溫度，例如約1小時(shí)。
反應(yīng)可通過(guò)加入堿例如氫氧化鈉來(lái)停止。如有需要，產(chǎn)品可用結(jié)晶法純化。用還原法，最好用堿，例如氫氧化鉀在反流條件下約20個(gè)小時(shí)，除去產(chǎn)品上的保護(hù)基團(tuán)，將其轉(zhuǎn)變?yōu)?R，2S-甲氧胺。
本發(fā)明還提供生產(chǎn)(1R，2S)-2-氨基-1-(2，5-二甲氧基-苯基)-1-丙醇的工藝，如上所述，其氨基基團(tuán)得到保護(hù)，該工藝包括向一種包含有二甲基苯基硅烷和(S)-氨基-1-(2，5-二甲氧-苯基)-1-丙酮的溶液中滴加三氟醋酸，如上所述，使其氨基基團(tuán)得到保護(hù)。試劑和反應(yīng)條件最好如上所述。
氨基基團(tuán)得到保護(hù)的(S)-氨基-1-(2，5-二甲氧-苯基)-1-丙酮，可用Fujita和Hiyama描述的方法由L-丙氨酸產(chǎn)生20?？傊?，該方法包括保護(hù)L-丙氨酸的氨基，通過(guò)與胺反應(yīng)，將N-受保護(hù)的丙氨酸的羧基原位轉(zhuǎn)變?yōu)槁然；?，產(chǎn)生出N-受保護(hù)的(S)-丙氨酰胺，并在正丁鋰或鎂試劑(例如，Grignard或Grignard類試劑)存在下，將該化合物與氯化2，5-二甲氧基苯偶聯(lián)，產(chǎn)生(S)-氨基-1-(2，5-二甲氧基-苯基)-1-丙酮，使其氨基得到保護(hù)。在Fujita和Hiyama所描述的方法中，氨基保護(hù)基團(tuán)為甲氧基羧基，胺是二甲基胺，氯化2，5-二甲氧基苯為溴-2，5-二甲氧基苯，偶聯(lián)反應(yīng)所用的試劑為正丁鋰。反應(yīng)步驟如下
Fu.jita和Hiyama給出了以上所列的反應(yīng)步驟中各種中間產(chǎn)生的詳細(xì)生產(chǎn)方案。然而，F(xiàn)ujita和Hiyama反應(yīng)步驟中的任何中間體，都可用不同的或改良工藝產(chǎn)生。例如，不必要遵循那些方案的每一個(gè)細(xì)節(jié)。試劑和/或反應(yīng)條件可以不同。例如，F(xiàn)ujita和Hiyama在偶聯(lián)步驟用了3當(dāng)量的溴-2，5-二甲氧基苯。然而，當(dāng)將該工藝規(guī)模從每批約1克擴(kuò)大到每批約30克到50克時(shí)，發(fā)現(xiàn)很難純化所產(chǎn)生的(S)-[(甲氧基羧基)氨基]-1-(2，5-二甲氧基-苯基)-1丙酮。還發(fā)現(xiàn)，改用1.5當(dāng)量的溴-2，5-二甲氧基苯和正丁鋰，產(chǎn)品的純化要容易得多，而且，出人意料的是，得率并無(wú)損失，按丙氨酸起始原料計(jì)算得率高達(dá)98％。在以下實(shí)施例中會(huì)給出更詳細(xì)的內(nèi)容。
反應(yīng)試劑和反應(yīng)條件可根據(jù)需要而不同，例如，如上所述。例如，可買用不同的氨基保護(hù)基團(tuán)，例如叔丁氧羧基。除了二甲基胺，還可用甲氧基甲基胺。氯-或碘-2，5-二甲氧基苯可用于替代溴-2，5-二甲氧基苯。然而，這種變化可能導(dǎo)致得率下降和/或反應(yīng)立體特性的減弱。因此，最好還是采用所推薦的試劑和反應(yīng)條件。
生產(chǎn)1R，2S-甲氧胺的另外一種方法，是甲氧胺消旋物或甲氧胺異構(gòu)體混合物的層析分離法。然而，用傳統(tǒng)層析法分離幾乎是不可能的。手性高壓液相層析法(hplc)是唯一可行的方法，采用該技術(shù)需要特殊的改進(jìn)。
宜采用設(shè)計(jì)的用于分離異構(gòu)體的層析介質(zhì)來(lái)進(jìn)行手性層析分離。例如，采用含有β-環(huán)糊精R，S-羥基丙醚的層析介質(zhì)。這種介質(zhì)具有形成包涵體復(fù)合物的特性。例如，可采用Cyclobond 1 2000 RSP，(得自Advanced Seperation Technologies，1 Blake Street，Congelton，Cheshire，England)。該介質(zhì)是一種用通過(guò)共價(jià)鍵將β-環(huán)糊精結(jié)合到二氧化硅顆粒的反相層析介質(zhì)。環(huán)糊精的一些仲位羥基可用消旋性(R，S)羥丙基衍生，能使其與溶質(zhì)發(fā)生進(jìn)一步的氫鍵相互作用。將該溶質(zhì)以反相包含在環(huán)糊精空隙內(nèi)，并與羥丙基側(cè)鏈相互作用，產(chǎn)生對(duì)映選擇性。環(huán)糊精層析技術(shù)的綜述，例如，可參見Ward & Armstrong21?？刹捎煤?.1％三乙基胺水溶液的流動(dòng)相進(jìn)行層析。例如，可用冰醋酸將0.1％三乙基胺水溶液的pH調(diào)整至4.1。
采用Cyclobond 1 RSP可使兩種甲氧胺異構(gòu)體從甲氧胺消旋物中以很高的純度分離出來(lái)。為分離其它兩種異構(gòu)體，最好將含有兩種異構(gòu)體的洗脫液作進(jìn)一步的層析分離，例如，采用含有經(jīng)導(dǎo)入十八烷基(C18)到乙烯醇的羥基上，產(chǎn)生的乙烯醇共聚物基質(zhì)的層析介質(zhì)。例如，這種介質(zhì)C18柱也得自Advanced Seperation Technologies，1 Blake Street，Congelton，Cheshire，England。C18柱可濃縮流動(dòng)相的樣品。用水洗滌可去除緩沖液。用甲醇洗脫層析柱可回收純化的對(duì)映體。
Cyclobond 1 RSP后接著用C18，可得到所有四種異構(gòu)體的純樣品。在下面的實(shí)施例中給予更詳細(xì)的描述。其他類似的層析介質(zhì)可用于替代Cyclobond 1 RSP和C18，例如，含有相同或相似化學(xué)組成和/或相同或相似理化層析性質(zhì)的層析介質(zhì)。
雖然適用于分析目的，但層析法不能生產(chǎn)出足夠大規(guī)模量的1R，2S-甲氧胺供實(shí)際應(yīng)用，例如臨床應(yīng)用。
即使采用手性層析法，也不可能明確地將層析組分與異構(gòu)體化學(xué)結(jié)構(gòu)聯(lián)系起來(lái)。需聯(lián)合使用nmr分光鏡和單晶X線衍射分析，方能明確鑒定甲氧胺的1R，2S異構(gòu)體，又稱1R，2S-甲氧胺。
如上所述，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，1R，2S-甲氧胺體外誘導(dǎo)肛門內(nèi)括約肌收縮的能力較去氧腎上腺素至少?gòu)?qiáng)四倍。在豬體內(nèi)試驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)含1％重量的和甚至低至0.1％的1R，2S-甲氧胺(L-紅-甲氧胺)凝膠能提高肛門內(nèi)括約肌壓力，而對(duì)血壓無(wú)任何影響。該發(fā)現(xiàn)具有極其重要的意義，因?yàn)楦亻T腔壓升高的數(shù)量級(jí)類似于采用去氧腎上腺素時(shí)所見的數(shù)量級(jí)，但只需去氧腎上腺素濃度的幾分之一。故認(rèn)為1R，2S-甲氧胺是通過(guò)括約肌上的α-腎上腺素能受體而作用于肛門內(nèi)括約肌的。
下面通過(guò)非限制性實(shí)施例闡明本發(fā)明實(shí)施例1甲氧胺異構(gòu)體對(duì)肛內(nèi)括約肌作用的體外研究方法從當(dāng)?shù)匾煌涝讏?chǎng)獲得雌性大白豬的組織。將肛內(nèi)括約肌切片并立即轉(zhuǎn)入4℃克萊博斯(Crebs)溶液中(120毫摩爾氯化鈉，5.9毫摩爾氯化鉀，15.4毫摩爾碳酸氫二鈉，1.2毫摩爾磷酸二氫鈉，2.5毫摩爾氯化鈣，1.2毫摩爾氯化鎂，1.5毫摩爾葡萄糖，用97％的氧和3％的二氧化碳平衡保持pH在7.4±0.05)。將肛門腔上皮沿著粘膜下層去掉。肛內(nèi)括約肌(IAS)切割成條，每條尺度約1×1×7毫米，重2毫克到8毫克并且含有平行的肌束。5-0號(hào)細(xì)絲繩捆扎每個(gè)末端并將這些肌肉條以相等張力固定在如圖1所示的超級(jí)融合器官槽中(容積0.2毫升)19。肌肉條1用繩子2將其固定在有機(jī)玻璃套3內(nèi)部。通過(guò)流入口4和流出口5，用克萊博斯(Crebs)溶液(37℃)以1毫升/分鐘的速度連續(xù)灌注這些肌肉條。這個(gè)裝置可以同時(shí)研究六條肌肉條。這些肌肉條最初負(fù)載1克張力并得以平衡至少90分鐘。通過(guò)包括張力轉(zhuǎn)換器6和環(huán)形電極7和7a的皮爾頓(Pioden)動(dòng)力計(jì)UF1轉(zhuǎn)換器(Pioden Controls，Canterbury，England)測(cè)定張力，并記錄在六通路Tekman900筆式記錄器(Tekman Electronics，Leamington Spa，UK)上，并采用Chart v3.6和MacLab數(shù)據(jù)庫(kù)獲取系統(tǒng)(AD Instruments，Australia)。
將苯福林(Sigma chemical.Co.，Poole，UK)甲氧胺消旋物和四種甲氧胺異構(gòu)體溶于克萊博斯(Crebs)溶液中并測(cè)試它們對(duì)IAS伸縮力的作用。甲氧胺消旋物，即四種異構(gòu)體的等摩爾混合物，是Prosyth Limited，Acton，Sudbury，Suffolk生產(chǎn)的。按實(shí)施例3所述分離這四種異構(gòu)體(稱為峰1到4)。峰2是1R，2S甲氧胺。1R，2S甲氧胺也可以按實(shí)施例4所述合成。通過(guò)結(jié)晶圖證實(shí)峰2即是1R，2S甲氧胺。
在平衡期IAS肌肉條發(fā)揮了其內(nèi)在伸縮力。平衡后，將遞增每種濃度的各測(cè)試化合物依次加入20秒，當(dāng)中的洗滌時(shí)間至少10分鐘，直到伸縮力回復(fù)到基線。
結(jié)果用均值(均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差)和產(chǎn)生這些肌肉條的手術(shù)標(biāo)本編號(hào)來(lái)表示。每種測(cè)試化合物用每頭豬的最多六條肌肉測(cè)試。
測(cè)試化合物-誘導(dǎo)的伸縮力提高通過(guò)施加測(cè)試化合物后獲得的伸縮力峰值減去基礎(chǔ)伸縮力值而計(jì)算出來(lái)。這個(gè)數(shù)字表示為在所用(10-2M到10-8M)劑量范圍內(nèi)見到的伸縮力最大提高的百分比。所有的分析都用Chart v3.6軟件來(lái)執(zhí)行。
ECso值通過(guò)繪制每條肌肉條的濃度-反應(yīng)曲線計(jì)算。引起50％最大收縮的劑量用線性回歸計(jì)算。不同藥的EC50值的比較采用two-tailed t檢驗(yàn)，假設(shè)方差不等，和p＜0.05時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)果甲氧胺消旋物和苯福林甲氧胺消旋物和苯福林都引起了IAS平滑肌肌肉條的劑量-依賴性收縮。甲氧胺消旋物和苯福林的EC50值沒有顯著差異(5.8×10-5M對(duì)7.5×10-5M；p＝0.44)。濃度-反應(yīng)曲線見圖2，n＝24(4)。
甲氧胺立體異構(gòu)體所有異構(gòu)體(峰1到4)引起了IAS平滑肌的劑量-依賴性收縮。EC50值見表1。
表1

峰2為1R，2S異構(gòu)體，顯然比峰1、3和4(p＜0.001)更強(qiáng)。四種異構(gòu)體的濃度-反應(yīng)曲線見圖3。峰2為1R，2S異構(gòu)體，也顯然比甲氧胺消旋物和苯福林(p＜0.01)更強(qiáng)，如圖4濃度-反應(yīng)曲線所示。
化學(xué)合成的1R，2S甲氧胺(峰2)按實(shí)施例4所述化學(xué)合成的1R，2S甲氧胺，也引起了肛門內(nèi)括約肌肉條的劑量依賴性收縮。其EC50為10.5(1.97)μM。EC50與峰2的沒有顯著差異，它與從消旋物(p＝0.10)中層析分離獲得的異構(gòu)體是相同的，見圖5?；瘜W(xué)合成的1R，2S異構(gòu)體也明顯比甲氧胺消旋物(p＜0.01)，苯福林(p＜0.001)，及峰1、3和4更強(qiáng)。見圖3和4。
實(shí)施例2甲氧胺異構(gòu)體的層析分離分析純化在以下層析條件下，將從Prosynth Limited獲得的甲氧胺消旋物樣品，見實(shí)施例2，分析解析成四種對(duì)映體用流動(dòng)相5/95；v/v；乙腈/0.1％三乙胺乙酸pH4.1調(diào)節(jié)Cyclobone 1 2000 RSP(AdvancedSeperation Technologies Ltd Astec 37 Leslie Court，P.0.Bo×297，Whippany，NJ07981USA)，直至達(dá)到穩(wěn)定的基線。甲氧胺消旋物樣品(1毫克/毫升)用甲醇配制。將10微升制備好的樣品注入層析柱，流速0.6毫升/分鐘。UV檢測(cè)器波長(zhǎng)設(shè)置為254納米，監(jiān)測(cè)層析柱流出物。觀察到4個(gè)峰，見圖6。當(dāng)用激光偏振儀監(jiān)測(cè)層析柱流出物時(shí)，觀察到前面兩個(gè)峰是非對(duì)映體，這意味峰1和3及峰2和4是對(duì)映體對(duì)。
制備性純化每種對(duì)映體純化100毫克，先跑手性固定相并收集峰1和2。作為非對(duì)映體，這兩個(gè)峰用Astec C18柱進(jìn)一步純化(精提)。同樣跑RSP柱，收集純的峰3和純的峰4。因?yàn)榕蹸18分辨峰1和2，以及跑Cyclobone 12000RSP都含有非揮發(fā)性緩沖液，因此開發(fā)了一種將已分離的甲氧胺對(duì)映體吸附到C18固定相的方法。C18柱可濃縮流動(dòng)相中的樣品來(lái)，通過(guò)用水洗滌去除緩沖液。最后，用甲醇洗脫C18柱得以回收純化的對(duì)映體。
制備性純化方法1.制備乙酸三乙胺攪拌0.1％的HPLC級(jí)三乙酸水溶液，用試劑級(jí)冰醋酸調(diào)節(jié)PH至4.1。
2.為了純化每種對(duì)映體100毫克，必須將800毫克甲氧胺消旋物溶解于80毫升流動(dòng)相中。用上述分析柱所用的流動(dòng)相，以20ml/分調(diào)節(jié)用5微米Cyclobone 12000RSP AstecCatalog#20344)裝填22.1×250毫米層析柱。該柱用254納米波長(zhǎng)紫外光監(jiān)測(cè)，每隔20分鐘注入2.5毫克，共注入320毫克。圖7剖視圖的箭頭指示的為收集的分離峰。分別削減峰1和峰2的小部分并合并，而峰3和4則單獨(dú)采集并合并。
用C18柱回收分離的峰1.水洗滌裝填了5微米固定相的22.1×250毫米C18柱洗。將合并溶液的pH值用三乙胺調(diào)節(jié)至7.0，用HPLC級(jí)水使體積增加一倍。
2.將調(diào)節(jié)過(guò)pH的樣品以10毫升/分鐘泵入C18柱。
3.水清洗燒瓶，且將清洗液過(guò)柱。加水過(guò)柱直至洗去注中所有的三乙胺乙酸，在254納米紫外線檢測(cè)下，回復(fù)至穩(wěn)定基線。泵入甲醇通過(guò)柱洗脫樣品。通過(guò)254納米波長(zhǎng)監(jiān)測(cè)觀察是否洗脫已完全。
4.洗脫后，柱子再用水洗滌準(zhǔn)備加工下一個(gè)樣品。峰1、2、3和峰4按此方法分別處理。
5.甲醇中回收的樣品在40℃水浴中濃縮至干燥。
峰3和峰4的處理將甲醇/C18處理的殘余物，用20毫升甲醇化JCL(0.1％)重新溶解，并重蒸發(fā)。殘余物用醚(~15毫升)磨成粉末。圖8是峰3(140毫克)的純度分析，圖9是峰4(105毫克)的純度分析。
峰1和2的進(jìn)一步純化1.用流動(dòng)相20/80；0.1％TEAA，pH4.1平衡250×30毫米，5微米C18柱，流速35毫升/分鐘。
2.將C18柱回收的合并峰1和2的殘余物溶解于流動(dòng)相中，并制備1毫克注射原液。峰1和峰2的回收1.用HPLC級(jí)水調(diào)節(jié)22.1×250毫米層析柱。
2.收集并合并的峰1和峰2組分用三乙胺調(diào)節(jié)pH至7.0，并用HPLC級(jí)水使體積增加一倍。
3.將合并組分別泵入C18柱，用水洗滌該柱洗去緩沖液，最后用甲醇洗脫。
4.40℃水浴濃縮甲醇至干燥。
5.將甲醇?xì)堄辔镏厝苡诩状蓟腍CL中，并再濃縮。
6.這樣處理的殘留物用乙醚磨成粉末，峰1(44毫克)和峰1的產(chǎn)量為44毫克，峰2的產(chǎn)量為29毫克。
第二次跑峰1和2峰1和峰2的第一次樣品產(chǎn)量低且純度比目標(biāo)低，并且粉末顏色深(淡綠色)。據(jù)信重復(fù)第一次跑柱的方法可能導(dǎo)致某種程度的自氧化。因此決定先將所有消旋物重跑RSP柱。在這個(gè)例子中峰1和2很接近，因此不必重層析。
用上述方法處理的峰1和峰2的回收結(jié)果實(shí)質(zhì)上提高了，并且顏色也更淺。圖10顯示了峰1的純度(45毫克)，圖11顯示了峰2的純度(34毫克)。
用NMR光譜學(xué)特征分析異構(gòu)體四個(gè)組分(峰1到4)在二甲硫氧(d6-DMS0)中的質(zhì)子nmr光譜是在室溫下用BrikerDRX 500MHz nmr光譜儀獲得的，見圖12到15。雖然共振可以歸因于這些結(jié)構(gòu)中的特殊質(zhì)子環(huán)境，但卻沒有方法可確定相關(guān)的立體化學(xué)結(jié)構(gòu)。
峰1(圖12)和峰3(圖13)的光譜幾乎相同，特別是兩種結(jié)構(gòu)及nmr光譜在4.8ppm(標(biāo)為b)特征峰和6.0ppm(d)特征峰，形成了對(duì)映體對(duì)。同樣，峰2(圖14)和峰4(圖15)的光譜也在b和d的位置彼此十分相似，又使他們形成對(duì)映體對(duì)，但與峰1和3不同。甚至可以同樣匹配7.5ppm(c)以上的胺類蛋白質(zhì)?？苫Q的環(huán)境比如那些由于胺類或醇類共振而致的環(huán)境往往不如它們的化學(xué)變換位那樣可靠依賴于濃度和溫度。醇類0H共振在3.3ppm時(shí)不能借助化學(xué)交換效應(yīng)與殘余的水共振相鑒別。因此，峰1和3是峰2和4的非對(duì)映體。
實(shí)施例31R，2S-甲氧胺的合成(S)-N-甲氧基羧基丙氨酸在0℃冰浴條件下，向攪拌著的L-丙氨酸溶液(300克，3.37摩爾氫氧化鈉(1N，1800立方厘米))中，用2小時(shí)以上的時(shí)間，逐滴加入甲基氯仿(274立方厘米，3，54摩爾)。通過(guò)加入氫氧化鈉(5N)使溶液的pH維持在9。反應(yīng)混合物在0℃攪拌3小時(shí)，向其加入磷酸溶液(15％)使之酸化至pH為1，并用乙醚萃取(5×1000立方厘米)。合并的有機(jī)萃取物經(jīng)干燥(硫酸鎂)和減壓濃縮產(chǎn)生粘性綠色油狀產(chǎn)物(386克，78％)。1H NMR(250MHZ；C2HCl3)1.48(3H，d，J7.25，CH3)，3.72(3H，s，COCH3)，4.40(1H，五重峰，J7.25，CH)，5.31(1H，bs，NH)。
(S)-N-甲氧基羧基丙氨酰二甲胺在0℃條件下，用2小時(shí)以上的時(shí)間，向攪拌的MeOC-丙氨酸(227克，1.54摩爾)和干燥二氯尿烷(DCM)(2000立方厘米)中的二甲基甲酰胺(DMF)(25立方厘米)的溶液中逐滴加入草酰氯(146立方厘米，1.62摩爾)。0℃攪拌溶液直至停止產(chǎn)生氣體，向其加入以氫氧化鈉(3N，2000立方厘米)配的二甲胺(676克，7.70摩爾)堿性溶液。用乙醚(2×500立方厘米)萃取含水層，干燥合并的有機(jī)層(硫酸鎂)，并減壓濃縮，得到的產(chǎn)品為一種白色晶狀固體，不再需要進(jìn)一步的純化(230克，86％)。1H NMR(250NHz；C2HCl3)1.33(3H，d，J6.75，CH3)，2.99(3H，s，OCH3)，3.08(3H，s，OCH3)，3.66(3H，s COCH3)，4.66(H，五重峰，J7.00，CH)，5.75(1H，d，J5.75，NH)。
(S)-2-[(甲氧基羧基)氨基]-1-(2，5-二甲氧苯基)-1-丙酮。
在氮?dú)?20℃條件下，向溴-2，5-二甲氧基苯(55克，0.25摩爾)的THF(1000立方厘米)溶液中加入正丁鋰(100立方厘米，溶于己烷中2.5M，0.25摩爾)。-20℃攪拌0.75小時(shí)，通過(guò)插管向其中加入胺(30克，0.17摩爾)的THF(100立方厘米)溶液。-20℃攪拌溶液2小時(shí)，接著回暖至室溫1小時(shí)以上，加入氯化銨溶液(700立方厘米)終止反應(yīng)。用乙醚(1000立方厘米)稀釋該溶液，干燥有機(jī)層(硫酸鎂)，減壓濃縮，得到一種黃色油。該產(chǎn)物通過(guò)干性快速二氧化硅層析法純化(洗脫液4∶1已烷/醋酸乙酯，然后3∶2已烷/醋酸乙酯)，得到一種白色晶狀固體產(chǎn)品(45克，98％)。1H NMR(250MHz，；C2HCl3)1.36(3H，d，J7.0，CH3)，3.70(3H，s，OCH3)，3.82(3H，s，OCH3)，3.92(3H，s，OCH3)，5.43(1H，五重峰，J7.3，H-2)，5.80(1H，bs，NH)，6.94(1H，d，J9.0，ArH)，7.10(1H，dd，J9.0，3.3，ArH)，7.32(1H，d，J3.3，ArH)。
(1R.2S)-2-[(甲氧基羧基)氨基]-1-(2，5-二甲氧苯基)-1-丙醇。
在0℃冰浴條件下，向攪拌的酮，即(S)-2-[(甲氧基羧基)氨基]-1-(2，5-二甲氧苯基)-丙酮(20克，74.9毫摩爾)和溶于干性DCM(500立方厘米)中的二甲苯基硅烷(10.7克，78.6毫摩爾)溶液中，逐滴加入三硫醋酸(TFA)(50立方厘米)。0℃攪拌該溶液1小時(shí)，然后加入氫氧化鈉(500立方厘米，1N)終止反應(yīng)。干燥有機(jī)層并減壓濃縮，得到一種在靜止?fàn)顟B(tài)凝固的黃色油。該固體經(jīng)乙醚/己烷結(jié)晶后得到一種白色晶狀固體產(chǎn)品(15.6克，75％)。1H NMR(250MHz；C2HCl3)1.03(3H，d，J7.0，CH3)，3.04(1H，d，J4.3，OH)，3.68(3H，s，COCH3)，3.78(3H，s，OCH3)，3.80(3H，s，OCH3)，3.94-3.99(1H，m，H-2)，5.05-5.15(2H，m，H-1 and NH)，6.72-6.85(2H，m，ArH)6.97(1H，d，J 2.0，ArH)。
(1R，2S)-甲氧胺向攪拌的甲氧基羧基(MeOC)保護(hù)的醇，即溶于甲醇(175立方厘米)的(1R，2S)-2[(甲氧基羧基)氨基]-1-(2，5，-二甲苯基)-丙醇(4.0克，14.9摩爾)溶液中，加入氫氧化鉀(4.06克，72.8毫摩爾)(溶于60立方厘米水)。冷卻此溶液，并用磷酸(15％，容積比)酸化。用DCM(2×50立方厘米)萃取溶液，加入碳酸鉀堿化含水層。用乙醚(5×50立方厘米)萃取含水層，干燥合并的乙醚萃取物(硫酸鎂)，減壓濃縮，得到一種清澄的黃色油(1.9克，61％)。1H NMR(250MHz；C2HCl3)0.84(3H，d，J7.0，CH3)，3.19-3.22(1H，m，H-2)，3.71(6H，s，2×OCH3)，4.67(1H，d，J5.0，H-1)，6.66-6.72(2H，m，ArH)，6.92(1H，d，J2.5，ArH)。
(1R，2S)-鹽酸甲氧胺向溶于無(wú)水乙醚(30立方厘米)的(1R，2S)-甲氧胺(1.9克，9.00毫摩爾)冰冷卻溶液中，通入干燥的鹽酸氣流45分鐘。抽濾反應(yīng)沉淀物，用冷乙醚洗滌，在氮?dú)庵懈稍?，產(chǎn)生白色固體標(biāo)題化合物。(1.5克，68％)。1H NMR(250MHz；[C2H3]2SO)0.89(3H，d，J6.8，CH3)，3.37-3.42(1H，m，H-2)，3.71(3H，s，OCH3)，3.75(3H，s，OCH3)，5.12(1H，s，H-1)，5.92(1H，d，J4.3，OH)，6.84(1H，dd，J8.8，3.0，ArH)，6.92-7.00(2H，m，ArH)；高壓液相。
甲氧胺的分析方法用以下方法分析甲氧胺樣品。
方法層析柱 Cyclobond I RSP 250×4.6mm柱溫度 23℃流動(dòng)相 0.1％四乙基銨，pH4.1*，95％容積比 乙腈5％容積比流速 0.6毫升/分鐘溶液濃度 5毫克/升注射體積 2.5微升到20微升檢測(cè) 紫外線230納米*pH4.1四乙基銨醋酸鹽需每天新鮮配置。
實(shí)施例4經(jīng)單晶X線分析1R，2S-甲氧胺的立體化學(xué)特征單晶X線分析是確定結(jié)構(gòu)的確切工具。用實(shí)施例3所描述的方法，合成推測(cè)的甲氧胺1R，2S異構(gòu)體(又稱為L(zhǎng)-紅異構(gòu)體)的鹽酸鹽。按照改良的Fujita和Hyama方法合成推測(cè)的1R，2R(D-蘇異構(gòu)體)鹽酸鹽，其中用氫硼化鈉作還原劑，產(chǎn)生1R，2R-(D-蘇)和1R，2S-(D-紅)異構(gòu)體的混合物。用二氧化硅柱快速層析法純化1R，2R-異構(gòu)體。
在己烷霧氣中下，從甲醇/醋酸乙酯溶液結(jié)晶兩種化合物。所產(chǎn)生的晶體為非常精細(xì)的片狀物，可以得到絕佳的數(shù)據(jù)，從中獲得的可靠精確系數(shù)能解決其結(jié)構(gòu)問(wèn)題。用NoniusKappaCCD進(jìn)行X線晶體圖制作。原子配價(jià)鍵和等價(jià)各向同性置換參數(shù)見表2。晶體數(shù)據(jù)和結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)見表3。鍵的長(zhǎng)度和角度見表4。雙折射置換參數(shù)見表5，氫配價(jià)鍵和單折射置換參數(shù)見表6。
表2.nb0103.U(eq)的原子配價(jià)鍵[×104]和等價(jià)各向同性置換參數(shù)[2×103]。U(eq)定義為互相垂直的Uij張量軌跡的三分之一量。
x y z U(eq)Cl(1) -3293(1) 5351(1) 670(1) 29(1)O(1) -889(3)2022(2) 957(1) 28(1)O(2) 2949(3)4524(2) 3752(1) 38(1)O(3) -4256(3) -221(2) 3208(1) 30(1)N(1) -1904(3) -935(2) 408(1) 24(1)C(1) 1183(4)3350(3) 3583(2) 28(1)C(2) 583(4) 2757(3) 2715(1) 25(1)C(3) -1260(4) 1583(3) 2599(1) 23(1)C(4) -2503(4) 969(3) 3369(1) 24(1)C(5) -1909(4) 1570(3) 4237(1) 27(1)C(6) -105(4)2762(3) 4335(1) 29(1)C(7) -2078(4) 1072(3) 1638(1) 23(1)C(8) -1501(4) -703(3) 1421(1) 24(1)C(9) 1147(4)-1230(3)1640(2) 38(1)C(10) 4470(4)5030(3) 3006(2) 37(1)C(11) -5712(4) -746(3) 3969(2) 33(1)
表3.nb0103晶體數(shù)據(jù)和結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)鑒定密碼 nb0103經(jīng)驗(yàn)分子式 C11H18ClNO3化學(xué)式分子量 247.1溫度 180(2)K波長(zhǎng) 0.7107晶體系統(tǒng) 單斜晶空間基團(tuán) P21單位晶格尺寸 a＝3.3331(3)α＝90°b＝8.2342(6)β＝90.195(4)°c＝14.6198(7)γ＝90°體積 642.01(7)3Z2密度(計(jì)算所得) 1.281毫克/立方米吸收系數(shù) 0.291毫米-1F(000) 264晶體大小 0.23×0.18×0.01毫米數(shù)據(jù)收集的θ范圍 3.73到27.44°指數(shù)范圍 -6≤h≤6，-10≤k≤9，-17≤1≤18收集的反射光 4436獨(dú)立反射光 2536(Rint＝0.0288)吸收校正 等價(jià)半經(jīng)驗(yàn)式最大和最小透射光 0.997和0.957細(xì)致方法 F2上的全矩陣最小平方數(shù)據(jù)/約束/參數(shù) 2536/1/153F2適合特性 1.099最終R指數(shù)[I＞2σ(I)] R1＝0.0331，wR2＝0.0832R指數(shù)(所有數(shù)據(jù)) R1＝0.0379，wR2＝0.0861絕對(duì)結(jié)構(gòu)參數(shù) 0.00(6)最大差別峰和孔 0.188和-0.212e-3
表6.nb0103鍵的長(zhǎng)度[]和角度[°]O(1)-C(7)1.417(2) O(1)-H(1) 0.86(3)O(2)-C(1)1.372(3) O(2)-C(10)1.423(3)O(3)-C(4)1.375(3) O(3)-C(11)1.426(3)N(1)-C(8)1.509(2) N(1)-H(1A)0.9100N(1)-H(1B) 0.9100 N(1)-H(1C)0.9100C(1)-C(6)1.386(3) C(1)-C(2) 1.396(3)C(2)-C(3)1.388(3) C(2)-H(2A)0.9500C(3)-C(4)1.401(3) C(3)-C(7) 1.529(3)C(4)-C(5)1.398(3) C(5)-C(6) 1.381(3)C(5)-H(5A) 0.9500 C(6)-H(6A)0.9500C(7)-C(8)1.527(3) C(7)-H(7A)1.0000C(8)-C(9)1.511(3) C(8)-H(8A)1.0000C(9)-H(9A) 0.9800 C(9)-H(9B)0.9800C(9)-H(9C) 0.9800 C(10)-H(10A) 0.9800C(10)-H(10B) 0.9800 C(10)-H(10C) 0.9800C(11)-H(11A) 0.9800 C(11)-H(11B) 0.9800C(11)-H(11C) 0.9800C(7)-O(1)-H(1) 104.6(18) C(1)-O(2)-C(10) 117.49(17)C(4)-O(3)-C(11) 117.06(17) C(8)-N(1)-H(1A) 109.5C(8)-N(1)-H(1B) 109.5 H(1A)-N(1)-H(1B) 109.5C(8)-N(1)-H(1C) 109.5 H(1A)-N(1)-H(1C) 109.5H(1B)-N(1)-H(1C) 109.5 O(2) -C(1)-C(6)116.45(19)O(2)-C(1)-C(2) 24.41(19) C(6)-C(1)-C(2)119.1(2)C(3)-C(2)-C(1) 120.92(18) C(3)-C(2)-H(2A) 119.5C(1)-C(2)-H(2A) 119.5 C(2)-C(3)-C(4)119.34(18)C(2)-C(3)-C(7) 120.18(17) C(4)-C(3)-C(7)120.27(19)O(3)-C(4)-C(5) 124.01(18) O(3)-C(4)-C(3)116.32(18)C(5)-C(4)-C(3) 119.7(2) C(6)-C(5)-C(4)120.07(18)C(6)-C(5)-H(5A) 120.0 C(4)-C(5)-H(5A) 120.0C(5)-C(6)-C(1) 120.84(19) C(5)-C(6)-H(6A) 119.6C(1)-C(6)-H(6A) 119.6 O(1)-C(7)-C(8)106.94(16)O(1)-C(7)-C(3) 111.52(18) C(8)-C(7)-C(3)113.41(18)O(1)-C(7)-H(7A) 08.3 C(8)-C(7)-H(7A) 108.3C(3)-C(7)-H(7A) 108.3 N(1)-C(8)-C(9)107.55(17)N(1)-C(8)-C(7) 107.30(17) C(9)-C(8)-C(7)114.8(2)
N(1)-C(8)-H(8A) 109.0C(9)-C(8)-H(8A) 109.0C(7)-C(8)-H(8A) 109.0C(8)-C(9)-H(9A) 109.5C(8)-C(9)-H(9B) 109.5H(9A)-C(9)-H(9B) 109.5C(8)-C(9)-H(9C) 109.5H(9A)-C(9)-H(9C) 109.5H(9B)-C(9)-H(9C) 109.5O(2)-C(10)-H(10A) 109.5O(2)-C(10)-H(10B)109.5H(10A)-C(10)-H(10B) 109.5O(2)-C(10)-H(10C)109.5H(10A)-C(10)-H(10C) 109.5H(10B)-C(10)-H(10C) 109.50(3)-C(11)-H(11A) 109.5O(3)-C(11)-H(11B)109.5H(11A)-C(11)-H(11B) 109.5O(3)-C(11)-H(11C)109.5H(11A)-C(11)-H(11C) 109.5H(11B)-C(11)-H(11C) 109.5用對(duì)稱轉(zhuǎn)化產(chǎn)生等價(jià)原子。
表4.nb0103的雙折射置換參數(shù)[2×103]雙折射置換因子指數(shù)采取以下形式-2π2[(ha*)2U11+…+2hka*b*U12。
U11 U22 U33 U23U13 U12C1(1) 32(1)21(1)33(1)1(1) 0(1) -2(1)O(1)43(1)19(1)21(1)1(1) 8(1) 2(1)O(2)41(1)43(1)30(1) -13(1) 7(1)-15(1)O(3)36(1)34(1)21(1)1(1) 6(1)-10(1)N(1)28(1)19(1)24(1) -2(1) -1(1) 0(1)C(1)29(1)26(1)30(1) -5(1) 3(1) 1(1)C(2)29(1)24(1)23(1) -2(1) 5(1) 2(1)C(3)28(1)20(1)20(1)0(1) 2(1) 2(1)C(4)24(1)24(1)23(1)0(1) 1(1) 2(1)C(5)30(1)33(1)19(1)1(1) 6(1) 2(1)C(6)34(1)34(1)20(1) -5(1) 2(1) 2(1)C(7)29(1)22(1)18(1)2(1) 2(1) 0(1)C(8)33(1)20(1)20(1)3(1) 0(1) -1(1)C(9)44(1)34(1)35(1) -6(1) -13(1) 14(1)C(10) 36(1)33(2)41(1) -3(1) 7(1) -4(1)C(11) 32(1)39(1)28(1)7(1) 5(1) -3(1)
表5.nb0103的氫配價(jià)鍵(×104)和單折射置換參數(shù)(2×103)x y z U(eq)H(1) -1670(50) 2940(40)968(18) 40(8)H(1A) -3403 -494 242 36H(1B) -1905 -2015275 36H(1C) -648 -437 95 36H(2A) 1447 31622196 30H(5A) -2747 11584760 33H(6A) 257 31844926 35H(7A) -3930 12381584 27H(8A) -2700 -14121762 29H(9A) 1427 -23281403 56H(9B) 1398 -12262304 56H(9C) 2335 -478 1355 56H(10A) 5757 57853227 55H(10B) 3423 55732547 55H(10C) 5279 40802731 55H(11A) -6911 -15753768 49H(11B) -6623 181 4225 49H(11C) -4602 -12064438 49這些結(jié)果能夠明確地鑒定出實(shí)施例3中合成的異構(gòu)體，和實(shí)施例2中峰2用層析法分離出來(lái)的異構(gòu)體，為甲氧胺的1R，2S-異構(gòu)體。
該異構(gòu)體的結(jié)構(gòu)見圖17。
晶體圖法的結(jié)果和基于上述實(shí)施例2所述的nmr光譜學(xué)推斷，使甲氧胺異構(gòu)體的完整結(jié)構(gòu)可顯示如下
1R，2R-甲氧胺1S，2R-甲氧胺(D-蘇-甲氧胺)(D-紅-甲氧胺) 1S，2S-甲氧胺1R，2S-甲氧胺(L-蘇-甲氧胺)(L-紅-甲氧胺)實(shí)施例5測(cè)試對(duì)麻醉的豬局部肛膜給予1R，2S-甲氧胺后對(duì)幾種心血管參數(shù)和平均肛門靜態(tài)壓(MARP)的影響方法按下列方案進(jìn)行該研究測(cè)試物a)安慰劑以4％w/w凝膠配制b)0.3％重量的1R，2S-甲氧胺以4％w/w凝膠配制c)1％重量的1R，2S-甲氧胺以4％w/w凝膠配制d)3％重量的1R，2S-甲氧胺以4％w/w凝膠配制4％w/w凝膠是在96毫升0.5M1％的醋酸緩沖液中含有4克羥丙甲基纖維素。
含1％重量1R，2S-甲氧胺的4％w/w凝膠是在99g4％凝膠中含有1克1R，2S-甲氧胺。
動(dòng)物/動(dòng)物飼養(yǎng)此項(xiàng)研究采用從Ellegaard G ttingen Minipigs ApS(Soro Landevej 302，DK-4261Dalmose，丹麥)獲得的Gottingen-小型豬。這些動(dòng)物為4-5月齡，每頭豬在研究開始時(shí)的體重在6.9到8.7公斤。用了4頭雄性動(dòng)物。第2號(hào)動(dòng)物被第4號(hào)動(dòng)物代替，見下。
飲食和飲水小型豬的飲食由Ellegaard G ttingen Minipigs ApS提供。在適應(yīng)期每頭豬每天兩次提供200克/公斤體重的食物。鑒于動(dòng)物食欲差，延長(zhǎng)進(jìn)食時(shí)間(多達(dá)8小時(shí))。給藥前一天小型豬不吃食物。飲水不限。
住所豬單獨(dú)養(yǎng)在室內(nèi)柵欄里，面積大約3平方米，鋪上稻草保持溫度在22℃±3℃(最大范圍)和自然的光照循環(huán)。
麻醉這些小型豬用氯醛糖-氨基甲酸乙酯混合物(比率1+5)麻醉。需要時(shí)增加麻醉量。為了確保小型豬處于穩(wěn)定的常規(guī)條件，試驗(yàn)開始前從右側(cè)或者左側(cè)股動(dòng)脈獲得血液用血?dú)夥治鰞xABL70(Radiometer，Copenhagen，Denmark)測(cè)定其血?dú)夂蚿H值。為了補(bǔ)償液體流失，持續(xù)供給林格氏溶液(5毫升/公斤體重/小時(shí))。通過(guò)外部供暖在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中維持動(dòng)物體溫在38℃。
測(cè)試物的給藥測(cè)試物以0.5毫升/每只動(dòng)物的體積肛膜局部給藥。間隔20分鐘觀察一次。給藥采用1毫升注射器插入肛門腔約1厘米來(lái)完成。旋轉(zhuǎn)注射器同時(shí)緩慢給予測(cè)試物。準(zhǔn)備及使得循環(huán)功能穩(wěn)定至少15分鐘后，用安慰劑或者所選劑量水平的測(cè)試物通過(guò)肛膜給藥治療動(dòng)物。
第一次給藥前和給藥后適當(dāng)時(shí)間，靜脈注射給予異丙腎上腺素以作為對(duì)照。只有在完成用于毒理學(xué)的血樣品收集后，該研究結(jié)束時(shí)，才經(jīng)動(dòng)脈(鹽酸腎上腺素，也稱為L(zhǎng)-去甲腎上腺素)給藥以作為對(duì)照。
劑量水平本研究使用了下列劑量

2號(hào)豬被4號(hào)豬替代是因?yàn)?號(hào)豬給藥前水平超出正常范圍。
參數(shù)測(cè)量準(zhǔn)備在麻醉下，將小型豬背部固定在操作臺(tái)上。
外周動(dòng)脈血壓將動(dòng)脈內(nèi)內(nèi)在導(dǎo)管(尺寸0.8×1.4毫米，B.Braun Melsungen AG，D-34212 Melsungen，德國(guó))連接到壓力轉(zhuǎn)換器(DTX，Pfrimmer-Viggo，Erlangen，德國(guó))上，記錄右側(cè)或者左側(cè)股動(dòng)脈的收縮壓和舒張壓。信號(hào)通過(guò)Hellige Servomed SMV 178 T擴(kuò)增儀(Hellige GmbH，D-79100 Freiburg，德國(guó))增強(qiáng)。血壓通過(guò)Hellige心電圖儀EK 512P(紙速2.5mm/秒)記錄和監(jiān)測(cè)。測(cè)定收縮壓和舒張壓并且根據(jù)下列公式計(jì)算平均血壓平均血壓[mmHg]＝(收縮壓+(2×舒張壓))/3。
心率和心電圖ECG記錄用標(biāo)準(zhǔn)肢體導(dǎo)聯(lián)I，II和III和放大的肢體導(dǎo)聯(lián)aVR，aVL和aVF進(jìn)行。采用標(biāo)準(zhǔn)的10毫米/1毫伏及50毫米/秒紙速。記錄用HELLIGE Marquette mac 5000 12SL進(jìn)行。肉眼觀察這些記錄有無(wú)心率不齊和復(fù)合波異常。此外，評(píng)估肢體導(dǎo)聯(lián)II的以下參數(shù)心率[跳/分鐘]；P段[毫秒]；P-Q間隔[毫秒]；QRS復(fù)合波[毫秒]；Q-T間隔[毫秒]。QTc值按范德法特(van de Water)-公式計(jì)算QTc＝QT-0.087(R-R距離-1000)。
均值和靜態(tài)壓肛門靜態(tài)壓通過(guò)持一個(gè)壓力測(cè)量探頭(Unisensor Microtipcatheter 814-00-9409-D；Medical Measurement System b.v.，Collosseum 25，NL-7521 P.V.Enschede，TheNetherlands)插入直腸測(cè)定三次。取三次測(cè)量值的均值作為肛門靜態(tài)壓(MARP)用Rikadenki多頭記錄儀記錄。
取血樣品在給藥前即刻和給藥后10、20、40、60、90和120分鐘時(shí)采取血樣品(5毫升/每時(shí)間點(diǎn))，并收集到鋰-肝素容器中。用IsoTherm-Rack系統(tǒng)(Eppendorf-Netheler-HinzGmbH，D-22331 Hamburg，德國(guó))立即將血樣品冷卻到2℃到8℃。加工全血獲得EDTA-血漿。該血漿通過(guò)離心(5分鐘，4000rpm，5℃)分成大約每份1毫升等份。血漿等份立即至少-80℃冷凍并儲(chǔ)存于這個(gè)溫度直到需要取一份置于干冰上用于分析。
給這些樣品標(biāo)上研究編號(hào)，種類，動(dòng)物編號(hào)，取樣時(shí)間，樣品類型，日期和劑量水平。分析樣品的甲氧胺血漿水平。結(jié)果見附錄3。
肉眼觀察實(shí)驗(yàn)中對(duì)肛膜進(jìn)行肉眼觀察。記錄較低pH值測(cè)試物所引起的明顯刺激和/或紅斑。
*評(píng)估及記錄時(shí)間在給藥前刻和給藥后5、10、15、20、40和60分鐘每次測(cè)量持續(xù)30秒的心率、ECG及股動(dòng)脈血壓，此后每隔20分鐘檢測(cè)一次直至其效應(yīng)減退。
統(tǒng)計(jì)將每只動(dòng)物的每種劑量、獲得的值與初始值作比較，用Student’s配對(duì)t檢驗(yàn)(Colquhoun，Lectures on Biostatistis，10.6，167-9(1971)，Clarendon Press，牛津，英格蘭)比較安慰劑對(duì)照組的平均值。使用下列限制p＝0.010 t＝4.604(4級(jí)自由度)。表中顯示與初始值相比有顯著性差異(p≤0.01)。所有的計(jì)算都盡可能地高精度并在記錄時(shí)小數(shù)位數(shù)四舍五入，四舍五入的結(jié)果最多可能引起1％的偏差。
研究結(jié)束實(shí)驗(yàn)結(jié)束處死動(dòng)物。
結(jié)果外周動(dòng)脈血壓任何測(cè)試劑量水平的1R，2S甲氧胺對(duì)舒張壓、收縮壓或者平均血壓沒有影響。所有測(cè)試濃度的1R，2S-甲氧胺在個(gè)別動(dòng)物中記錄到血壓的變化。但這些變化認(rèn)為與所測(cè)物質(zhì)不相關(guān)，而在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)所用兩口動(dòng)物長(zhǎng)時(shí)間麻醉所致的正常變動(dòng)范圍內(nèi)。
圖17到19給出了個(gè)別值及平均值。圖17顯示外周動(dòng)脈舒張壓。圖18顯示外周動(dòng)脈收縮壓，圖19顯示外周動(dòng)脈平均血壓。
平均肛門靜態(tài)壓(MARP)用濃度為0.3％的1R，2S-甲氧胺的治療，在兩頭豬給藥后5分鐘起算的110分鐘里引起MARP劑量-相關(guān)的增加至平均50毫米汞柱(與初始值相比增加了73％)。1％的凝膠在給藥后的20分鐘里引起MARP進(jìn)一步平均增加到64毫米汞柱(227％的增長(zhǎng))。3％凝膠給藥引起MARP劑量相關(guān)增加到大約70毫米汞柱。兩個(gè)動(dòng)物受影響的程度相似。
圖20給出了個(gè)別值及平均值。
心率和ECG心率和ECG參數(shù)評(píng)估顯示在任何測(cè)試劑量水平對(duì)P-段、P-Q間隔、Q-T間隔QTc值、以及QRS復(fù)合波沒有所測(cè)物質(zhì)相關(guān)的影響。特別是，沒有QT-間隔延長(zhǎng)的證據(jù)。
肉眼評(píng)估ECG記錄沒有顯示任何心室早搏復(fù)合波群。
在1％和3％濃度的1R，2S-甲氧胺使用后2小時(shí)觀察到豬1和豬3的心率增加到大約平均100跳/分鐘(29％增加)。此后逐漸回復(fù)常態(tài)。這些變化認(rèn)為與所測(cè)物質(zhì)無(wú)關(guān)，而在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)所用兩頭動(dòng)物長(zhǎng)時(shí)間麻醉所致的正常變動(dòng)范圍內(nèi)。
同樣，該研究個(gè)別動(dòng)物中記錄到的所有其它變化認(rèn)為也與所測(cè)物質(zhì)無(wú)關(guān)，而在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)所用兩頭動(dòng)物長(zhǎng)時(shí)間麻醉所致的正常變動(dòng)范圍內(nèi)。
圖21給出了心率的個(gè)別值及平均值。
循環(huán)功能的反應(yīng)對(duì)去甲腎上腺素或者異丙腎上腺素的預(yù)期反應(yīng)沒受到任何1R，2S-甲氧胺凝膠的影響。
肉眼觀察在使用了0.3％、1％、或者3％的1R，2S-甲氧胺后沒有觀察到病理變化。
甲氧胺血漿水平分析3樣品的甲氧胺血漿水平。在所有的動(dòng)物中記錄到了甲氧胺的劑量相關(guān)血漿水平劑量水平為0.3％的凝膠在40分鐘后達(dá)到4.90和6.97納克/毫升的平均峰值血漿水平。
劑量水平為1％的凝膠在20分鐘到40分鐘時(shí)達(dá)到9.88和11.0納克/毫升的平均峰值血漿水平。
劑量水平為3.0％的凝膠在40分鐘到60分鐘時(shí)達(dá)到50.4和61.3納克/毫升的平均峰值血漿水平。
豬之間幾乎沒有差異。
結(jié)論本實(shí)驗(yàn)的目的是評(píng)估麻醉的微型豬在肛膜局部給藥1R，2S-甲氧胺后對(duì)幾種心血管參數(shù)及平均肛門靜態(tài)壓(MARP)的影響。
每個(gè)動(dòng)物肛膜給予0.5毫升的測(cè)試物劑，即安慰劑、0.3％、1％或者3％的1R，2S甲氧胺(w/w)，每次給藥間隔至少2個(gè)小時(shí)。結(jié)果與對(duì)應(yīng)的給藥前值作比較。
在此實(shí)驗(yàn)條件下，用0.3％、1％或者3％的1R，2S甲氧胺治療沒有引起心血管參數(shù)的變化。在三種濃度下都記錄到了MARP的劑量相關(guān)性增加。
濃度0.3％的1R，2S-甲氧胺引起MARP與初始值相比增加到50毫米汞柱，1％的濃度引起MARP增加到64毫米汞柱，3％的濃度引起MARP增加到70毫米汞柱。兩個(gè)動(dòng)物受影響的程度類似。
沒有記錄到對(duì)心率和ECG參數(shù)P段、P-Q間隔、Q-T間隔、QRS復(fù)合波，和QTc值的影響。特別是，沒有記錄到Q-T間隔延長(zhǎng)的證據(jù)。去甲腎上腺素或者異丙腎上腺素的預(yù)期反應(yīng)沒有受影響。
在肉眼觀察中沒有記錄到病理變化。
0.3％、1％或者3％制劑的最大血漿水平分別為6、10和56ng甲氧胺/ml血漿，反應(yīng)出甲氧胺的血漿水平是劑量相關(guān)的。給藥后約40分鐘觀察到最大血漿水平。豬之間幾乎沒有差異。
豬是一種已知的與人類特別相關(guān)的動(dòng)物模型。以上獲得的結(jié)果，證明了低濃度及低劑量的1R，2S-甲氧胺局部給藥可增加肛門內(nèi)括約肌靜態(tài)壓，而沒有局部或全身副作用，特別是沒有局部刺激及對(duì)血壓無(wú)影響，預(yù)計(jì)人身上結(jié)果相似，并可預(yù)計(jì)局部1R，2S-甲氧胺給藥對(duì)大便失禁及類似癥狀的治療有效，尤其對(duì)需要增加括約肌緊張度的那些疾病。
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權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于，該組合物含有1R，2S甲氧胺或其生理性可耐受的鹽與一種藥學(xué)上適合的運(yùn)載體的混合物或者結(jié)合物。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其劑型適合于以全身或者非全身給藥。
3.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其劑型適合于肛門區(qū)域局部給藥。
4.如權(quán)利要求3所述的藥物組合物，其劑型是凝膠、霜、油膏、糊劑、泡沫劑、粘貼劑。
5.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其劑型適合于口服、直腸或者非腸胃道給藥。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其劑型是緩釋口服組合物。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，所述緩釋口服組合物可靶向結(jié)腸釋放。
8.如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于，該組合物是一種緩釋組合物，能在結(jié)腸pH下釋放活性物質(zhì)的組合物，或是含有易被結(jié)腸細(xì)菌降解的包衣的組合物。
9.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其劑型適合于鼻粘膜給藥。
10.如權(quán)利要求9所述的藥物組合物，其劑型是液滴劑、噴霧劑或氣霧劑。
11.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其劑型適合于眼表面給藥。
12.如權(quán)利要求11所述的藥物組合物，其劑型是液滴、霜或者油膏。
13.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其劑型適合于注射或者輸液給藥。
14.如權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，該組合物為單位劑量的形式。
15.如權(quán)利要求1至14中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其含有的1R，2S甲氧胺重量小于等于10％。
16.如權(quán)利要求3或4所述的藥物組合物，其含有的1R，2S甲氧胺重量小于等于10％，例如，所含1R，2S甲氧胺的重量小于等于8％，小于等于5％。
17.如權(quán)利要求3或4所述的藥物組合物，其含有的1R，2S甲氧胺的重量小于等于4％，小于等于3％。
18.如權(quán)利要求3或4所述的藥物組合物，其含有的1R，2S甲氧胺重量小于等于10％，例如，所含1R，2S甲氧胺的重量小于等于1％，小于等于0.5％。
19.如權(quán)利要求3或4所述的藥物組合物，其含有的1R，2S甲氧胺重量小于等于0.3％，小于等于0.1％。
20.用作藥物的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
21.用作α-腎上腺素激動(dòng)劑的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
22.用于治療大便失禁的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
23.如權(quán)利要求22所述的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽為如權(quán)利要求3或4中所述的藥物組合物形式。
24.如權(quán)利要求23所述的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽，其特征在于，所述藥物組合物含有的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽的重量小于等于10％，以甲氧胺計(jì)算。
25.如權(quán)利要求23所述的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽，其特征在于，所述藥物組合物是如權(quán)利要求16所述的藥物組合物。
26.如權(quán)利要求22至25中任一項(xiàng)所述的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽可對(duì)肛門、肛門腔和肛門周圍區(qū)域的全部或者部分區(qū)域給藥。
27.如權(quán)利要求22至25中任一項(xiàng)所述的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽可對(duì)包括肛膜、肛門腔、肛內(nèi)括約肌肛門周圍區(qū)域，和臀部的全部或者部分區(qū)域給藥。
28.如權(quán)利要求22所述的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽的藥物組合物劑型為權(quán)利要求5至8中任何一項(xiàng)所述的劑型。
29.用作血管收縮劑的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
30.用作鼻減充血?jiǎng)┑?R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
31.如權(quán)利要求30所述的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽為如權(quán)利要求9或10所述的藥物組合物的劑型。
32.用作眼科的血管收縮劑的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
33.用作擴(kuò)瞳藥的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
34.如權(quán)利要求32或33所述的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽為如權(quán)利要求11或12所述的藥物組合物劑型。
35.用作增高血壓制劑的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
36.用于預(yù)防或者治療低血壓的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
37.如權(quán)利要求28所述的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽，用于在麻醉過(guò)程中維持血壓。
38.如權(quán)利要求35至37中任何一項(xiàng)所述的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽為權(quán)利要求13所述的藥物組合物劑型。
39.1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽，用于提高胃腸道平滑肌的伸縮性，或者用于治療因胃腸道平滑肌喪失伸縮性而導(dǎo)致的紊亂或疾病。
40. 1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽，用于提高胃腸道括約肌的伸縮性，或者用于治療因胃腸道括約肌喪失伸縮力而導(dǎo)致的紊亂或疾病。
41.如權(quán)利要求40所述的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽，用于提高幽門括約肌的伸縮力或者可用于治療或者預(yù)防胃腸道腹瀉。
42.用于預(yù)防或者治療心臟功能紊亂或疾病的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
43.用于預(yù)防或者治療心率失調(diào)或疾病的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
44. 1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽在制造藥物中的用途，使用如權(quán)利要求20至43任何一項(xiàng)所確定的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
45.如權(quán)利要求20至43中任何一項(xiàng)所述的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽，或者如權(quán)利要求44所述的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽的用途，其特征在于，所述用途是用于人的治療。
46.一種治療需要用α-腎上腺素激動(dòng)劑治療的哺乳動(dòng)物的方法，其特征在于，該方法包括給予受治療者治療有效量的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
47.如權(quán)利要求46所述的方法，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽可全身或局部給藥。
48.一種治療大便失禁的方法，包括給予需要治療的哺乳動(dòng)物治療有效量的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
49.如權(quán)利要求48所述的方法，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽可對(duì)肛門區(qū)域局部給藥。
50.如權(quán)利要求48所述的方法，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽可對(duì)包括肛門，肛門腔和肛門周圍區(qū)域的全部或者部分區(qū)域局部給藥。
51.如權(quán)利要求48所述的方法，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽可對(duì)包括肛膜，肛門腔，肛門內(nèi)外括約肌，肛門周圍區(qū)域，和臀部的全部或者部分區(qū)域局部給藥。
52.如權(quán)利要求48所述的方法，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽可配制成凝膠、霜、油膏、糊劑、泡沫劑或者粘貼劑。
53.如權(quán)利要求54所述的方法，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽劑型適合于口服、直腸或者非腸胃道給藥。
54.如權(quán)利要求53所述的方法，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽可配制成緩釋口服組合物。
55.如權(quán)利要求53所述的方法，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽可配制成靶向結(jié)腸釋放的緩釋口服組合物。
56.如權(quán)利要求53所述的方法，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽可配制成選自以下的組合物延時(shí)釋放組合物；在結(jié)腸pH下釋放1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽的組合物；和含有易被結(jié)腸細(xì)菌降解的包衣的組合物。
57.一種治療需要接受血管收縮制劑治療的哺乳動(dòng)物的方法，該方法包括給予哺乳動(dòng)物治療有效量的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
58.一種治療鼻充血的方法，該方法包括給予需要所述治療的哺乳動(dòng)物鼻粘膜治療有效量的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
59.如權(quán)利要求58所述的方法，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽可配制成適合鼻粘膜給藥的滴劑，噴霧劑或氣霧劑。
60.一種治療需要眼科血管收縮的哺乳動(dòng)物的方法，該方法包括給予哺乳動(dòng)物的眼睛治療有效量的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
61.如權(quán)利要求60所述的方法，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽可配制成為適合眼表面給藥的滴劑、霜或油膏。
62.一種擴(kuò)大哺乳動(dòng)物眼睛瞳孔的方法，該方法包括給予哺乳動(dòng)物的眼睛治療有效量的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
63.如權(quán)利要求62所述的方法，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽可配制成適合眼表面給藥的滴劑。
64.一種治療或者預(yù)防低血壓的方法，該方法包括給予需要所述治療或者預(yù)防的哺乳動(dòng)物治療有效量的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
65一種在麻醉過(guò)程中和/或之后維持哺乳動(dòng)物血壓的方法，該方法包括給予麻醉過(guò)程中的哺乳動(dòng)物治療有效量的1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽。
66.如權(quán)利要求71所述的方法，其特征在于，所述1R，2S甲氧胺或其生理學(xué)可耐受的鹽通過(guò)注射或者輸液給藥。
67.一種增加哺乳動(dòng)物胃腸道平滑肌伸縮力的方法，該方法包括給予哺乳動(dòng)物治療有效量的1R，2S甲氧胺。
68.一種治療由于胃腸道平滑肌喪失伸縮力而導(dǎo)致的紊亂或疾病的方法，該方法包括給予需要所述治療的哺乳動(dòng)物治療有效量的1R，2S甲氧胺。
69.一種提高哺乳動(dòng)物胃腸道括約肌伸縮力的方法，該方法包括給予哺乳動(dòng)物治療有效量的1R，2S甲氧胺。
70.一種治療由于胃腸道括約肌喪失伸縮力而導(dǎo)致的紊亂或疾病的方法，該方法包括給予需要所述治療的哺乳動(dòng)物治療有效量的1R，2S甲氧胺。
71.如權(quán)利要求70所述的方法，其特征在于，所述所述紊亂或疾病是胃腸道腹瀉。
72.一種預(yù)防或者治療哺乳動(dòng)物心臟功能紊亂或疾病的方法，該方法包括給予需要所述預(yù)防或治療的哺乳動(dòng)物治療有效量的1R，2S甲氧胺。
73.如權(quán)利要求72所述的方法，該方法用于治療心率失調(diào)或者紊亂。
74.如權(quán)利要求46至73中任何一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述所述哺乳動(dòng)物是人。
75.一種生產(chǎn)1R，2S甲氧胺的工藝，該工藝包括將三氟醋酸逐滴加入到含有其氨基基團(tuán)受保護(hù)的(S)-氨基-1-(2，5-二甲氧基-苯基)-1-丙酮和二甲基苯基硅烷的溶液中，以及從獲得的氨基受保護(hù)的(1R，2S)-2-氨基-1-(2，5-二甲氧基-苯基)-1-丙醇上去掉該保護(hù)基團(tuán)。
76.如權(quán)利要求75所述的工藝，其特征在于，所述第一步驟須在冷卻狀態(tài)下進(jìn)行。
77.如權(quán)利要求75或76所述的工藝，其特征在于，獲得的1R，2S甲氧胺被轉(zhuǎn)變成其鹽。
78.如權(quán)利要求74至78中任何一項(xiàng)所述的工藝，其特征在于，其氨基基團(tuán)受保護(hù)的(S)-氨基-1-(2，5-二甲氧基-苯基)-1-丙酮是通過(guò)轉(zhuǎn)變氨基基團(tuán)受保護(hù)的(S)-N-丙氨酸二甲胺成為酸性氯化物，并使獲得的酸性氯化物原位與1.5當(dāng)量的正丁鋰和1.5當(dāng)量的溴-2，5二甲氧基苯反應(yīng)而產(chǎn)生的。
79.如權(quán)利要求78所述的工藝，其氨基基團(tuán)受保護(hù)的(S)-N-丙氨酸二甲胺是通過(guò)L-丙氨酸與甲基氯甲酸酯反應(yīng)產(chǎn)生的。
80.一種將甲氧胺的1R，2S-異構(gòu)體從甲氧胺異構(gòu)體混合物中分離出來(lái)的方法，該方法包括將所述異構(gòu)體混合物通過(guò)高壓液相層析，采用的層析介質(zhì)含有固定于硅膠上的β-環(huán)糊精R，S-羥丙基醚。
81.如權(quán)利要求80所述的方法，其特征在于，所述洗脫液要通過(guò)反相層析，所用的層析介質(zhì)含有一種乙烯醇共聚物基質(zhì)，該基質(zhì)是通過(guò)在乙烯醇共聚物的羥基上引入十八烷基(C18)基團(tuán)而產(chǎn)生的。
全文摘要
1R，2S－甲氧胺局部低劑量使用可有效治療大便失禁，且沒有局部或全身副作用，例如，不影響血壓。1R，2S－甲氧胺可用于治療其它胃腸道紊亂和疾病，可用作提高血壓的制劑，用作鼻減充血?jiǎng)┖脱劭疲蛣┝渴褂脮r(shí)沒有副作用。
文檔編號(hào)A61K9/22GK1604773SQ02825324
公開日2005年4月6日 申請(qǐng)日期2002年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月21日
發(fā)明者諾曼·巴雷斯, 杰弗里·馬丁·湯普森 申請(qǐng)人:諾金歐洲公司