專利名稱：烏金片在制備抑制pc-3細胞增殖藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中成藥的新用途，尤其涉及烏金片在制備抑制PC-3細胞增殖藥物中的應用。
背景技術：
前列腺癌就是發(fā)生于男性前列腺組織中的惡性腫瘤，是前列腺腺泡細胞異常無序生長的結果。前列腺癌的發(fā)病率具有明顯的地理和種族差異。在歐美等發(fā)達國家和地區(qū)，它是男性最常見的惡性腫瘤，其死亡率居各種癌癥的第二位；在亞洲，其發(fā)病率低于西方國 家，但近年來呈迅速上升趨勢。烏金片是云南永孜堂制藥有限公司的獨家產(chǎn)品，目前還沒有其抑制前列腺癌(PC-3)細胞增殖的文獻報道。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于提供烏金片在制備抑制PC-3細胞增殖藥物中的應用。技術方案烏金片在制備抑制PC-3細胞增殖藥物中的應用。烏金片處方為蒲黃、百草霜、益母草、熟地黃、艾葉(炭)、三棱、延胡索、香附、白芍、補骨脂、吳茱萸、川芎、莪術、木香、當歸、小茴香油，調(diào)經(jīng)化瘀，用于氣郁結滯，胸脅刺痛，產(chǎn)后瘀血，小腹疼痛，五心煩熱，面黃肌瘦，規(guī)格為每片O. 6g，口服，一次4片，一日2次，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其能抑制PC-3細胞增殖。有益效果烏金片抑制PC-3細胞增殖，效果良好。
具體實施例方式烏金片抑制PC-3細胞增殖的實驗研究資料I實驗材料I. I實驗用細胞株前列腺癌(PC-3)，來自本公司實驗室細胞庫，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。I. 2實驗藥物研究藥物烏金片，云南永孜堂制藥有限公司，批號20110423藥液儲液稱取IOOmg烏金片粉碎，溶于5ml無水乙醇中，O. 2 μ m濾器過濾，500 μ Idoff管分裝，-20°C存儲，同時O. 2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。I. 3實驗試劑DMEM (GIBC0 公司 Cat. No. 12100-061 Lot. No. 758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot. No. 100419) ；NaHC03 (上海久億化學試劑有限公司Cat.No. 11810-033Lot. No. 1088387) ;Trypsin (AMRESC0 公司批號2010/04) ；EDTA (AMRESCO公司批號2009/10) ；Penicillin G Sodium Salt (AMRESCO 公司批號2010242)；Streptomycin Sulfate (AMRESCO公司批號2010382);無水乙醇(南京化學試劑有限公司批號:080310182) ;MTT(Biosharp 批號0793) ;PBS (實驗室自配)；I. 4實驗器材萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號SPECTRAMAX 190) ;C02培養(yǎng)箱(FORMA型號3111);超凈臺(蘇凈集團安泰公司制造型號SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號S/N 020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANK)公司型號MLS-3020);臺式電熱鼓風干燥箱(上海精密實驗設備公司型號DHG9123A);冰箱(西門子公司型號KG18V21TI);液氮罐(CBS型號2001);低速離心機(上海安亭科學儀器廠型號ΚΑ-1000) ;0. 2μπι濾器(MILLIP0RE型號SLGP033RB) ;10cm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細胞計數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。2實驗方法
I) PC-3細胞用DMEM+10%FBS于37 °C、5%C02進行常規(guī)培養(yǎng)(IOcm培養(yǎng)皿)，當細胞生長至對數(shù)期時，收集細胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml O. 25%胰蛋白酶-O. 049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應，吹打細胞后將其轉入離心管中，IOOOrpm離心5min，調(diào)整細胞懸液濃度3X 104個/ml。2)將細胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細胞懸液180 μ 1，培養(yǎng)板放入細胞培養(yǎng)箱中(37 °C，5%C02 )常規(guī)培養(yǎng)。3)根據(jù)細胞生長情況，一般長至50%_70%，加入烏金片溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 O. 5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。6)同時設置本底(不加細胞，只加培養(yǎng)液)，對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設定6個復孔。7)結果以藥物對細胞的抑制率表示細胞增值抑制率(％)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實驗重復3次。3統(tǒng)計處理采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關分析和Student t檢驗，數(shù)據(jù)以mean+ S. D.表不。4實驗結果MTT法實驗后統(tǒng)計結果顯示，與對照組比較，當劑量達到5mg/ml時，對PC-3細胞增殖抑制有差異(p〈0. 05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P〈0. 01)，當劑量達到15-20mg/ml時有極顯著性差異(Ρ〈0· 001)。表I烏金片對PC-3細胞增殖抑制影響研究(XfSD)纖 11藥狗濃μ): (mg.iiil >|!plvri
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烏金片可以抑制PC-3細胞增殖，減少PC-3細胞的細胞生長數(shù)目，該作用呈時間和劑量依賴性。
權利要求
1.烏金片在制備抑制PC-3細胞增殖藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了烏金片在制備抑制PC-3細胞增殖藥物中的應用，烏金片處方為蒲黃、百草霜、益母草、熟地黃、艾葉(炭)、三棱、延胡索、香附、白芍、補骨脂、吳茱萸、川芎、莪術、木香、當歸、小茴香油，調(diào)經(jīng)化瘀，用于氣郁結滯，胸脅刺痛，產(chǎn)后瘀血，小腹疼痛，五心煩熱，面黃肌瘦，規(guī)格為每片0.6g，口服，一次4片，一日2次，現(xiàn)發(fā)現(xiàn)其能抑制PC-3細胞增殖。
文檔編號A61P35/00GK102824614SQ201210351540
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月20日 優(yōu)先權日2012年9月20日
發(fā)明者不公告發(fā)明人 申請人:南京正亮醫(yī)藥科技有限公司