專利名稱：一種丹參的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥提取的方法，具體涉及一種丹參的提取方法。
背景技術(shù)：
丹參，《雷公炮制藥性解》,I曰“其味苦，性微寒，無毒，入心經(jīng)。養(yǎng)神定志，破結(jié)除俊，清癰散腫，排膿止痛，生肌長肉，治風(fēng)邪留熱，眼赤狂悶，四肢不遂，破宿血，補新血，安生胎，落死胎，理婦人經(jīng)脈不調(diào)，血崩帶下，諸般血證?！苯箻涞隆队盟幮牡檬M》，2謂活瘀血，生新血，涼血，安神。有“一味丹參飲，功同四物湯”之說?，F(xiàn)將其臨床應(yīng)用報告如下。
丹參是傳統(tǒng)中藥，主要用于胸肋脅痛，風(fēng)濕痹痛，癥瘕結(jié)塊，瘡瘍腫痛，跌仆傷痛，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)，產(chǎn)后瘀痛等。治療胸肋疼痛、癥瘕結(jié)塊，以及月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉經(jīng)痛具有良效，常與川芎配伍應(yīng)用。在治療胸腹疼痛屬于氣滯血瘀方面，往往配合砂仁、檀香等藥同用。丹參成分很多，水溶性成份有丹參素、丹酚酸等，脂溶性成份有丹參酮2A、隱丹參酮、次甲基丹參酮、丹參酮等，根據(jù)自己的目標成分不同，方法不同，常規(guī)的是乙醇提取，柱層析分離。

發(fā)明內(nèi)容
為了確保丹參提取時有效成分的流失，本發(fā)明的目的在于一種丹參的提取方法，本發(fā)明提取方法簡單，提取得到的有效成分丹酚酸B由三分子丹參素與一分子咖啡酸縮合而成，是目前研究較多的丹酚酸之一，對心、腦、肝、腎等器官均具有重要藥理作用。為了實現(xiàn)上述目的本發(fā)明采用如下技術(shù)方案
丹參的提取方法，其特征在于包括以下步驟
(1)丹參藥材粉碎，置提取罐中，第一次加4.5-5. 5倍量乙醇，確保乙醇濃度> 92%，先浸泡2. 8-3. 2小時，測罐內(nèi)含醇度彡90%，加熱回流提取I. 3-1. 8小時，汽壓0. 03-0. 05Mpa,溫度 70-80°C ；
(2)第二次加4.5-5. 5倍量濃度45-55%的乙醇加熱回流提取I. 3-1. 8小時，汽壓
0.03-0. 05Mpa，溫度75-85°C，藥渣再加4-5倍量的水煎煮I. 8-2. 2小時，放液，濾液濃縮，收膏相對密度I. 20-1. 24 ；
(3)第一次醇液濃縮時，每2小時以內(nèi)出一次藥液，濃縮結(jié)束后進行總混；第二次醇液濃縮時，每2小時以內(nèi)出一次藥液，濃縮比重I. 22-1. 26，濃縮結(jié)束后進行總混；
(4)一遍液、二遍液和水提膏按23-25:30-35:5比例混合，進行噴霧干燥，控制噴霧干燥參數(shù)進口溫度180-210°C，出口溫度90-110°C，粉碎整粒，混合即得。本發(fā)明提取物的功效
I、抗氧化作用
丹酚酸B具有很強的抗氧化作用，體內(nèi)外實驗證明，丹酚酸B能清除氧自由基、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，其作用強度高于維生素C、維生素E、甘露醇，是目前已知的抗氧化作用最強的天然產(chǎn)物之一.藥理學(xué)研究表明，注射用丹參酚酸具有明顯的抗氧化作用，抑制血小板聚集，及抑制血栓形成的作用，并能延長缺氧條件下動物的存活時間。試驗表明，注射用丹參酚酸(60 15mg/kg)能明顯改善腦缺血再灌損傷大鼠的神經(jīng)功能缺陷，表現(xiàn)為改善行為障礙，明顯縮小腦梗死面積，高、中劑量(60、30mg/kg)有統(tǒng)計學(xué)差異；注射用丹參酚酸在藥后I、 2、24hr明顯改善FeC13所致的大鼠腦缺血造成的動物神經(jīng)功能損傷，表現(xiàn)為行為障礙的改善，并能縮小腦梗死面積；注射用丹參酚酸40mg/kg明顯抑制ADP、花生四烯酸、膠原誘導(dǎo)的家兔血小板的聚集反應(yīng)，抑制率分別為81. 5%,76. 7%,68. 9%。注射用丹參酚酸60、30mg/kg明顯抑制大鼠血栓的形成；注射用丹參酹酸60、30mg/kg明顯延長小鼠在缺氧條件下的存活時間。2、對心臟的保護作用
2.I對心肌缺血再灌注損傷的保護作用
急性心肌缺血后正常血液的再灌注可導(dǎo)致缺血心肌的進一步損害，其表現(xiàn)為再灌注后的早期可出現(xiàn)嚴重的細胞損害、頑固性心律失常和明顯的心功能減退，成為急性心肌缺血再灌注損傷。心肌缺血再灌注時，大量自由基產(chǎn)生，細胞膜脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強，膜流動性和通透性發(fā)生變化，導(dǎo)致電生理活動異常，誘發(fā)和促進心律失常的產(chǎn)生；心肌細胞脂質(zhì)過氧化反應(yīng)增強，致使心肌缺血區(qū)的過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)含量增多、冠脈流出液中乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CPK)升高、心肌組織中超氧化物岐化酶(SOD)減少。動物實驗研究顯示丹酚酸B能減輕缺血再灌注損傷模型動物的心肌缺血程度，減小心肌梗死范圍，減少LDH、CPK從胞體的溢出、降低缺血心肌組織中MDA的含量，提高SOD的活力，對抗氧自由基對心肌細胞的毒害作用，保護心肌細胞.
2.2對心臟微血管內(nèi)皮細胞的延遲保護作用
心肌預(yù)先反復(fù)缺血后，可增強對后續(xù)較長時間缺血的耐受性，稱為缺血預(yù)處理，是一種內(nèi)源性保護機制，其心肌保護作用在預(yù)處理后即刻出現(xiàn)，持續(xù)2 4小時消失，24小時后重現(xiàn)，持續(xù)數(shù)日，后者稱為延遲保護作用。心肌缺血預(yù)處理的發(fā)生機制主要是機體內(nèi)源性物質(zhì)激活中間環(huán)節(jié)，引發(fā)終末效應(yīng)物質(zhì)的活化進而產(chǎn)生保護作用。內(nèi)皮細胞除在血管內(nèi)外物質(zhì)交換、維持凝血和抗凝血的平衡中起著重要作用外，并可產(chǎn)生和分泌多種生物活性物質(zhì)，在調(diào)節(jié)血管舒縮運動及維持血細胞的正常功能方面具有無可替代的生物學(xué)效應(yīng)，冠狀動脈內(nèi)皮細胞還有調(diào)節(jié)心肌收縮力的作用.
腫瘤壞死因子a(TNF_a)是由激活的巨噬細胞分泌的一類具有多種生物學(xué)效應(yīng)的細胞因子。病理狀態(tài)下TNF-a可損傷心功能，誘導(dǎo)心肌細胞凋亡，而且TNF-a血清水平的變化與多種心臟疾病有關(guān)。心臟缺血缺氧時，心臟微血管內(nèi)皮細胞首先和最易損傷。實驗研究表明丹酚酸B預(yù)處理可抑制大鼠心肌缺血再灌注損傷過程中的鈣離子超載、減少內(nèi)皮素(ET)及腫瘤壞死因子a(TNF-a)的釋放、改善血栓素/前列環(huán)素(TXA2 / PGI2)系統(tǒng)的平衡狀態(tài)、降低缺氧/復(fù)氧損傷后內(nèi)皮細胞細胞間粘附分子的表達，起到保護內(nèi)皮細胞的作用. 預(yù)處理保護心肌的過程涉及多種因素的參與，蛋白激酶C(PKC)作為一種細胞內(nèi)信息傳遞的主要物質(zhì)和媒介，在心臟預(yù)處理保護心肌過程中起著關(guān)鍵作用。PKC的激活可引發(fā)底物蛋白質(zhì)磷酸化、細胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)、離子通道、腺苷、緩激肽、受體的信息傳遞等一系列變化，調(diào)控著預(yù)處理過程。通過對大鼠缺氧/復(fù)氧的心臟微血管內(nèi)皮細胞損傷模型，采用分子生物學(xué)方法，觀察到丹酚酸B預(yù)處理能增強蛋白激酶CmRNA、熱休克蛋白70 mRNA的表達，具有與缺氧預(yù)適應(yīng)相類似的細胞保護效應(yīng)，可增強細胞對隨后較長時間缺氧/復(fù)氧損傷的耐受性，這可能是丹酚酸B預(yù)處理的細胞保護機制。2. 3對動脈粥樣硬化的防治作用
低密度脂蛋白(LDL)氧化修飾是動脈粥樣硬化發(fā)生的一個重要原因，氧化修飾的LDL(OX-LDL)具有細胞毒性作用，易于被巨噬細胞識別并大量攝取形成泡沫細胞，影響單核細胞的遷移，從而促使動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。實驗研究發(fā)現(xiàn)丹酚酸B能有效抑制Cu抖誘導(dǎo)的LDL氧化修飾，對防治動脈粥樣硬化有重要意義，其作用機制可能與清除自由基、整合Cu有關(guān)。泡沫細胞是動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)出現(xiàn)的特征性病理細胞。血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)也稱血管通透性因子(VPF)，是一種高度特異的、強烈的血管內(nèi)皮促分裂因子和血管生成因子。體內(nèi)的動脈粥樣硬化斑塊中VEGF表達顯著升高，以斑塊中泡沫細胞的表達最為明顯。在體外培養(yǎng)的U937泡沫細胞模型中，丹酚酸B和銀杏葉提取物一樣可呈劑量依賴性的抑制泡沫細胞VEGF的表達，對動脈粥樣硬化有預(yù)防和治療作用.
溶血磷脂酰膽堿(LPC)是由OX-LDL或質(zhì)膜的磷脂酰膽堿(PC)經(jīng)磷脂酶A2(PLA2)水解或脂質(zhì)氧化而來，是OX-LDL的主要活性成分，能模擬OXLDL的主要作用，因此LPC與動脈粥樣硬化的發(fā)生密切相關(guān)。丹酚酸B能抑制LPC刺激內(nèi)皮細胞產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)、抑制內(nèi)皮細胞表達血管內(nèi)皮生長因子，防治動脈粥樣硬化。另有研究顯示丹酚酸B能減少動脈粥樣硬化家兔血漿血栓素(TXB2)、ET濃度，增加前列腺素Fla(6-keto-PGFD濃度，具有明確的內(nèi)皮細胞保護效應(yīng).
2.4對細胞凋亡的影響
在血管成形術(shù)的兔子模型中，丹酚酸B能誘導(dǎo)新血管內(nèi)膜細胞凋亡，而凋亡在再狹窄中對細胞的數(shù)量起到穩(wěn)定作用。為考察抗氧化劑能否影響血管細胞的凋亡，Hung HH等測定了動脈粥樣硬化和膽固醇喂養(yǎng)的兔子再狹窄損害模型中凋亡細胞死亡的頻率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)用丹酚酸B處理的一組兔子的凋亡細胞的百分率顯著高于其他組，同時丹酚酸B能顯降低新血管內(nèi)膜的厚度，這與凋亡細胞的數(shù)量一致，這些結(jié)果表明，丹酚酸B能誘導(dǎo)新血管內(nèi)膜細胞的凋亡，從而可以防止新血管內(nèi)皮的增厚。2. 5預(yù)適應(yīng)的心臟細胞保護作用。3、對腦的保護作用
3.I對腦缺血損傷的保護作用 血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)是內(nèi)皮細胞特異性的有絲分裂原，具有促進內(nèi)皮細胞增殖，提高血管通透性等生物學(xué)特性。腦缺血后，低氧可激活VEGF及其受體(VEGFR)系統(tǒng)，促使半影區(qū)VEGF表達，VEGF誘導(dǎo)大量新生血管形成，促進血管增生，增加受累組織的血流灌注和供氧量，減少神經(jīng)元的凋亡和死亡，減輕腦損傷程度。實驗研究顯示丹酚酸B與冰片、三七等配伍可顯著提高VEGFmRNA表達，促進新生血管形成，并能較好地抑制VEGF誘導(dǎo)血管通透性增加的作用，這些作用對缺血性中風(fēng)的治療具有非常重要的積極意義。丹酚酸可通過血腦屏障，具有改善腦血流量而無竊血，抗血小板聚集，抗血栓，抑制細胞內(nèi)鈣含量增高，清除自由基，促進腦血管生成等作用，可以認為丹參總酚酸是一個比較理想的有抗腦缺血作用的藥物，3.2對學(xué)習(xí)記憶功能的影響
采用大鼠、小鼠等動物腦缺血實驗?zāi)Ｐ脱芯孔C明，丹酚酸B靜脈注射對大鼠、小鼠腦缺血和缺血再灌注引起的腦損傷具有保護作用，可縮小缺血區(qū)面積，減少腦組織中MDA〃含量，緩解由于腦缺血引起的行為學(xué)障礙，對由此引起的記憶功能障礙有明顯的改善作用。作用機制可能與丹酚酸B的抗氧化作用有關(guān)。4、抗肝臟纖維化作用
肝星狀細胞(HSC)的激恬是肝纖維化形成的核心環(huán)節(jié)，轉(zhuǎn)化生長因子-131 (TGF-131)是最重要的促HSC活化與肝纖維化形成的細胞因子。肝貯脂細胞(FSC)是一種肝臟實質(zhì)細胞，在病理條件下被激活后大量增殖，同時產(chǎn)生細胞外基質(zhì)的能力增長數(shù)十倍，因此，F(xiàn)SC在肝纖維化形成過程中也起到了重要作用。丹酚酸B能抑制TGF-I的HSC胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及其受體蛋白的表達，從而拮抗TGF-Bl的促HSC活化，并能抑制活化FSC增殖，抑制FSC生成細胞外基質(zhì)而減少膠原纖維在肝內(nèi)的沉積。另有研究表明，丹酚酸B鎂鹽具有抗脂質(zhì)過氧化抗肝損害的作用，有減輕肝組織纖維化程度的功能，臨床用于治療慢性乙型肝炎肝纖維化取得滿意效果.
肝纖維化是肝臟對各種慢性損傷的修復(fù)應(yīng)答過程，HSC獲得增殖能力并活化為肌成纖維細胞樣細胞，被認為是肝纖維化形成的關(guān)鍵，丹酚酸的抗肝纖維化效果與Y干擾素的結(jié)果相似，體外研究發(fā)現(xiàn)它可抑制傳一代培養(yǎng)的HSC的增殖，抑制轉(zhuǎn)化生長因子I(TGF-^ I)在HSC中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。5、抗腫瘤作用
研究證明丹酚酸B不僅可以通過抗氧化作用保護神經(jīng)細胞，而且可以通過減少NO的釋放，改善J3-淀粉樣蛋白對神經(jīng)元的毒性作用，并能增強老化紅細胞提高T淋巴細胞分泌IL-238，具有抗衰老、抗腫瘤作用。體內(nèi)、體外實驗表明丹酚酸B鎂鹽對多種腫瘤細胞株的生長具有較好的抑制作用。體外MTT實驗中，丹酚酸B鎂鹽對人腎癌(786-0)、小鼠乳腺癌(C127)、人乳腺癌(MCF-7)、人肝癌(Ifep G2)、小鼠黑色素瘤(B16)、人胃癌(SGC-7901，AGS)、人食管癌(Eca-109)等細胞株的最大抑制率皆達到40%以上，其中對肝癌細胞株H印G2的最大抑制率可達到90%以上。中空纖維實驗進一步證實丹酚酸B鎂鹽對于裸鼠體內(nèi)生長的H印G2細胞也具有較好的抑制率，其最大抑制率可達到30. 11%。丹酚酸B(500ii g/ml)具有抗前列腺腫瘤的作用，其作用從6h左右變得非常明顯，臺盼藍拒染實驗和MTT結(jié)果均顯示細胞活力大大減少，P〈0. 01;流式細胞儀檢測到丹酚酸B作用12、24h的BPH1-C5細胞的凋亡率分別高到46. 23%和57. 87%，在流式細胞圖中形成明顯的凋亡峰。據(jù)此推測，丹酚酸B可能通過誘導(dǎo)前列腺腫瘤細胞的凋亡起到抗腫瘤的作用。6、其他作用
骨髓基質(zhì)細胞是一類具有多向分化潛能的組織干細胞，體外培養(yǎng)的骨髓基質(zhì)細胞已被廣泛應(yīng)用于組織損傷疾病的治療。取大鼠股骨及脛骨骨干骨髓基質(zhì)細胞培養(yǎng)，保留貼壁細胞進行傳代純化，一組加入誘導(dǎo)劑(5-氮胞苷)，一組在加入誘導(dǎo)劑基礎(chǔ)上加入丹酚酸B，誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細胞向心肌樣細胞轉(zhuǎn)化。結(jié)果顯示加入丹酚酸B組與未誘導(dǎo)組及加入5-氮胞苷誘導(dǎo)組比較，長方形及多角形細胞增多，細胞凋亡數(shù)量減少，證明丹酚酸B能促進體外誘導(dǎo)骨髓基質(zhì)細胞向心肌樣細胞轉(zhuǎn)化，可作為細胞外科的一種良好細胞來源，為細胞性心肌成形術(shù)探索一條新的途徑。 影響鈉鉀ATP酶、H+、K+-ATP酶活性
此外，丹酚酸B鎂鹽還可用于預(yù)防或治療腎炎、腎衰竭、脈管炎、靜脈栓塞、老年性癡呆疾病、抗衰老、影響鈉鉀ATP酶、H+、K+-ATP酶活性等。本發(fā)明具有活血化瘀，通經(jīng)活絡(luò)之功效，主治因瘀血阻滯經(jīng)絡(luò)所致缺血性中風(fēng)，癥見半身肢體麻木，虛弱無力，拘攣疼痛，或運動不遂，口眼歪斜等。
I、血證
臨床對治療血證，尤其是冠心病、心肌缺血，其滴丸、注射液、草藥均有明顯改善其臨床心悸、胸悶、氣短諸癥的作用。2、老年性癡呆
因動脈硬化致心、腦、腎諸臟器供血不足，尤其是腦動脈硬化與老年性癡呆癥的發(fā)生有著密切的關(guān)系。經(jīng)臨床辨證，配以“丹參”療效顯著。3、乙肝治療
丹參與黃芪配伍能起到較快持續(xù)的療效。知肝之病必先實脾，方中黃芪、黨參、白術(shù)、茯苓、山藥、焦三仙補中益氣，溫土健脾。久病必瘀，丹參養(yǎng)血、涼血、祛瘀。4、討論
現(xiàn)代研究證明，丹參內(nèi)含有丹參酮、異丹參酮等呋喃并菲醌類和丹參新酮，丹參新醌、鼠尾草酚等菲醌、菲酚類以及維生素E等。丹參注射液能降低血壓，增加冠脈血流量，減慢心率，縮短實驗性心肌缺血的持續(xù)時間，還有抑制血小板聚集及抗凝作用。對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有鎮(zhèn)靜、安定作用。對小鼠實驗性結(jié)核病有治療效果，能降低兔血糖。對晚期肝炎及血吸蟲病的肝、脾腫大，有促進肝臟生理機能好轉(zhuǎn)，并使腫大的肝、脾縮小變軟的作用。丹參含有碘的成分，故對缺碘引起的甲狀腺腫大有一定療效。丹參，其味苦，其性微寒，具有養(yǎng)神定志，祛瘀血，生新血，涼血之功，配伍得當，內(nèi)、夕卜、術(shù)后，一切血證均可隨證施用。本發(fā)明的有益效果
本發(fā)明提取方法簡單，水提、醇結(jié)合，可以提取丹參中水溶性與酯溶性成分，提取率提高，提取得到的有效成分丹酚酸B由三分子丹參素與一分子咖啡酸縮合而成，是目前研究較多的丹酚酸之一，對心、腦、肝、腎等器官均具有重要藥理作用。
具體實施例方式實施例I :丹參的提取方法，包括以下步驟
(1)丹參藥材粉碎，置提取罐中，第一次加4.5-5. 5倍量乙醇，確保乙醇濃度> 92%，先浸泡2. 8-3. 2小時，測罐內(nèi)含醇度彡90%，加熱回流提取I. 3-1. 8小時，汽壓0. 03-0. 05Mpa,溫度 70-80°C ；
(2)第二次加4.5-5. 5倍量濃度45-55%的乙醇加熱回流提取I. 3-1. 8小時，汽壓
0.03-0. 05Mpa，溫度75-85°C，藥渣再加4-5倍量的水煎煮I. 8-2. 2小時，放液，濾液濃縮，收膏相對密度I. 20-1. 24 ；
(3)第一次醇液濃縮時，每2小時以內(nèi)出一次藥液，濃縮結(jié)束后進行總混；第二次醇液濃縮時，每2小時以內(nèi)出一次藥液，濃縮比重I. 22-1. 26，濃縮結(jié)束后進行總混；
(4)一遍液、二遍液和水提膏按23-25:30-35:5比例混合，進行噴霧干燥，控制噴霧干 燥參數(shù)進口溫度180-210°C，出口溫度90-110°C，粉碎整粒，混合即得。
權(quán)利要求
1.一種丹參的提取方法，其特征在于包括以下步驟 (1)丹參藥材粉碎，置提取罐中，第一次加4.5-5. 5倍量乙醇，確保乙醇濃度> 92%，先浸泡2. 8-3. 2小時，測罐內(nèi)含醇度彡90%，加熱回流提取I. 3-1. 8小時，汽壓0. 03-0. 05Mpa,溫度 70-80°C ； (2)第二次加4.5-5. 5倍量濃度45-55%的乙醇加熱回流提取I. 3-1. 8小時，汽壓0. 03-0. 05Mpa，溫度75-85°C，藥渣再加4-5倍量的水煎煮I. 8-2. 2小時，放液，濾液濃縮，收膏相對密度I. 20-1. 24 ； (3)第一次醇液濃縮時，每2小時以內(nèi)出一次藥液，濃縮結(jié)束后進行總混；第二次醇液濃縮時，每2小時以內(nèi)出一次藥液，濃縮比重I. 22-1. 26，濃縮結(jié)束后進行總混； (4)一遍液、二遍液和水提膏按23-25:30-35:5比例混合，進行噴霧干燥，控制噴霧干燥參數(shù)進口溫度180-210°C，出口溫度90-110°C，粉碎整粒，混合即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種丹參的提取方法，包括以下步驟取丹參藥材粉碎，進行兩次醇取，制成水提膏，然后和兩次的遍液進行混合，進行噴霧干燥，最后粉碎整粒，混合即得。本發(fā)明提取方法簡單，提取得到的有效成分丹酚酸B由三分子丹參素與一分子咖啡酸縮合而成，是目前研究較多的丹酚酸之一，對心、腦、肝、腎等器官均具有重要藥理作用。
文檔編號A61P1/16GK102614254SQ20121008403
公開日2012年8月1日 申請日期2012年3月27日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月27日
發(fā)明者宋杏花, 李宏良, 王守旭 申請人:安徽華佗國藥股份有限公司