專利名稱：虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于抗腫瘤藥物制備領域，涉及虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的新應用。近三十年來，全球惡性腫瘤發(fā)病數(shù)以年均3% 5%的速度遞增，世界衛(wèi)生組織報告 顯示，2020年全世界惡性腫瘤發(fā)發(fā)病率將比現(xiàn)在增加50%，全球每年新增惡性腫瘤發(fā)患者 人數(shù)將達到1500萬人，全球因惡性腫瘤發(fā)死亡的人數(shù)預計將達到700萬人/年，每5秒就 有1人死于癌癥。惡性腫瘤對人類健康和生命的威脅很大，它和心血管疾患已成為醫(yī)學上 的兩大難關，在全世界構成死亡原因的頭兩位。對惡性腫瘤的治療，傳統(tǒng)的方法包括手術、 放射治療和化學治療，目前化學治療是晚期惡性腫瘤的主要治療手段之一，雖然近年來分 子靶向藥物層出不窮，但大多數(shù)靶向藥物單藥有效率很低，常常需和化療藥物聯(lián)合才能取 得較好的療效，一些療效較好的分子靶向藥物在治療失敗后，仍需采用化療等治療手段，因 此，化療在惡性腫瘤治療中仍處于基礎地位，但目前臨床上廣泛使用的化療藥物療效有限， 毒性作用較大，經(jīng)幾次應用后還會發(fā)生耐藥，亟需尋找新的高效低毒的化療藥物。近年來，采用傳統(tǒng)中藥等植物提取物探討惡性腫瘤治療的新途徑引起了人們的關 注，從傳統(tǒng)中藥提取的抗腫瘤藥物如冬凌草甲素、黃連素、姜黃素的體外實驗表明可抑制多 種腫瘤細胞的增殖，動物實驗顯示該類藥物不良反應小，從植物中提取的紫杉醇、喜樹堿、 長春新堿等藥物已在臨床上廣泛應用。因此篩選新型抗腫瘤的植物藥，確定其抗腫瘤作用 并探討其機制，已成為當今腫瘤治療研究領域的熱點之一?；⒄溶帐菑幕⒄鹊母稍锔o中提取的第4種單體，故又名虎杖結晶4號，也可稱為 白藜蘆醇苷。分子式=C2tlH22O8，分子量390. 131468，化學結構如下所示現(xiàn)代藥理學研究表明虎杖苷對心肌細胞、血管平滑肌細胞、抗血小板聚集、改善微循環(huán) 等有顯著作用，此外還能減輕多種因素造成的組織器官損傷，具有保護肝細胞，降血脂及抗 脂質過氧化等作用，例如張霖等人發(fā)表的文章探討了虎杖苷對非酒精性脂肪肝大鼠胰島 素抵抗(IR)以及血清腫瘤壞死因子α (TNF-α)的影響，具體方法為健康雄性SD大鼠44 只，隨機分為正常組(A)和模型組(M)，模型組給予高脂飼料喂養(yǎng)8周，造模成功后將模型組 隨機分為5組空白模型組(B)、虎杖苷高劑量組(C_l)、虎杖苷中劑量組(CJ)、虎杖苷低 劑量組(C_3)、非諾貝特組(D)，每組7只，高脂飼料持續(xù)8周后，A組、B組予以生理鹽水灌 胃，5 ml/次，C_1、C_2、C_3分別以160、80、40 mg · kg—1 · cf1虎杖苷混懸液灌胃，D組以100 mg · kg"1 · cf1非諾貝特混懸液灌胃.持續(xù)4周后處死動物，分離血清，檢測、計算各組大鼠 空腹血糖(FBG)、空腹胰島素(FNS)、胰島素抵抗指數(shù)(頂1)、胰島素敏感指數(shù)(ISI) ,TNF-a背景技術水平。結果顯示虎杖苷高劑量組與模型組頂1、ISI、TNF-α水平存在顯著差異(Ρ<0. 05， Ρ<0. 01)，且在改善頂方面虎杖苷高劑量組優(yōu)于西藥對照組(Ρ<0. 01)，可知虎杖苷能改善 NAFLD大鼠體內(nèi)頂狀態(tài)，降低TNF- α水平，是其治療非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的可能 作用機制(參見張霖，呂志平.時珍國醫(yī)國藥.2010，21(4))?，F(xiàn)有技術書中，未見關于虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的應用的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供虎杖苷的新應用，即虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的應用。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術方案是虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的應用。本發(fā)明同時提供一種抗腫瘤藥物，所述抗腫瘤藥物的主要活性成分為虎杖苷。上述抗腫瘤藥物除了包括主要成分虎杖苷外，需要的時候還可以加入一種或多種 藥學上可接受的載體；所述載體包括藥學領域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤 劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等；所述藥物的劑型包括膠囊、片 劑或注射劑，均可按照藥學領域的常規(guī)方法制備。上述技術方案中，所述腫瘤包括乳腺癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、宮頸癌、鼻咽癌、白 血病。
上述抗腫瘤藥物可以以單藥的形式用于治療腫瘤，或者與其他化療藥物以及放射 治療聯(lián)合用于惡性腫瘤的綜合治療。由于上述技術方案的應用，本發(fā)明相對現(xiàn)有技術具有以下優(yōu)點1、本發(fā)明所述抗腫瘤藥物虎杖苷處理的乳腺癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、宮頸癌、鼻咽癌、 白血病等細胞的增殖均受到明顯的抑制，細胞周期分析則顯示細胞周期S期阻滯和細胞凋 亡；低濃度虎杖苷還具有抑制腫瘤細胞遷移和粘附的作用。2、本發(fā)明所述抗腫瘤藥物虎杖苷在增加惡性腫瘤治療效果、降低腫瘤患者復發(fā)、 轉移發(fā)生率的同時，較目前臨床常用的化療藥物毒副作用明顯減低，從而提高惡性腫瘤患 者的生存期和生活質量。


附圖1為實施例一中指數(shù)生長的乳腺癌和肺癌細胞在不同濃度虎杖苷作用下的 生長情況；附圖2為實施例二中虎杖苷對肺癌細胞Α549細胞周期和凋亡的影響。
具體實施例方式下面結合附圖及實施例對本發(fā)明作進一步描述 實施例一1. 1材料人乳腺癌細胞株MDA-MB-231及MCF-7，肺癌細胞株ΑΜ9、NCI-H1975,卵巢 癌細胞株SK0V3，肝癌細胞株SMMC-7721，宮頸癌細胞株Hela，白血病細胞株HL-60、K562， 鼻咽癌細胞株CNE-I購于美國細胞收藏中心(ATCC)，實驗室保存和培養(yǎng)；D-MEM、RPMI1640 培養(yǎng)基干粉，小牛血清，胰酶粉末購自Gibco公司；標準蛋白質分子量、SDS-PAGE上樣緩沖液、RIPA蛋白裂解液、TE電泳緩沖液、IOX轉膜液、30%Acry-BiS、TriS-Hcl、過硫酸銨(AP)、 SDS、四甲基乙二胺(TEMED)、碘化丙啶(PI)購自江蘇碧云天生物技術研究所；二甲基亞砜 (DMSO)、瓊脂糖和Tween-20來自上海高科技生物工程有限公司；bcl_2、bax, MMP-2、MMP-9 等抗體購自美國Santa Cruzs生物技術公司。RNase A和10 mg/mL proteinase K購自美 國 Sigma Aldrich 公司。1. 2細胞培養(yǎng)各細胞分別培養(yǎng)于含10%小牛血清，谷氨酸胺及100萬U/L青霉素 和鏈霉素的D-EME或RPMI1640培養(yǎng)基。細胞置于5%C02，37°C培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每2_3天傳 代1次，取對數(shù)生長期細胞用于實驗。1. 3 MTT法在藥物處理前M小時細胞(6 X 104/mL)接種至96孔板中，每個濃度 設6個平行孔。加入不同濃度的虎杖苷繼續(xù)培養(yǎng)M，48或72小時。細胞培養(yǎng)液中加入20 mLMTT (5 mg/mL)繼續(xù)培養(yǎng)4小時。吸棄培養(yǎng)液，每孔加入150 mL DMS0，搖床輕柔振蕩10 分鐘。最后采用酶標儀(A570 nm/A630 nm吸光值)檢測光密度，采用細胞存活率=加藥 組值/對照組值X 100%方式計算細胞存活率。采用上述方法，在指數(shù)生長的乳腺癌MDA-MB-231和肺癌A549細胞培養(yǎng)中加入同 濃度的虎杖苷，處理24，48和72小時后完成MTT法測定細胞生長，重復三次不同實驗，將結 果(平均值士誤差)繪制成圖，得圖1，圖1顯示不同濃度的虎杖苷對乳腺癌MDA-MB-231 和肺癌A549細胞的生長抑制率，并顯現(xiàn)劑量-效應和處理時間-效應的關系。采用上述方法，計算虎杖苷對不同腫瘤細胞的50%生長抑制濃度(IC5tl)，將結果繪 制成表，得表1。表1、虎杖苷對不同腫瘤細胞50%生長抑制濃度(IC5tl)
權利要求
1.虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的應用。
2.一種抗腫瘤藥物，其特征在于所述抗腫瘤藥物的主要活性成分為虎杖苷。
全文摘要
本發(fā)明屬于抗腫瘤藥物制備領域，涉及虎杖苷在制備抗腫瘤藥物中的新應用。本發(fā)明同時提供一種抗腫瘤藥物，所述抗腫瘤藥物的主要活性成分為虎杖苷。本發(fā)明所述抗腫瘤藥物虎杖苷處理的乳腺癌、肺癌、肝癌、卵巢癌、宮頸癌、鼻咽癌、白血病等細胞的增殖均受到明顯的抑制，細胞周期分析則顯示細胞周期S期阻滯和細胞凋亡；低濃度虎杖苷還具有抑制腫瘤細胞遷移和粘附的作用。本發(fā)明所述抗腫瘤藥物虎杖苷在增加惡性腫瘤治療效果、降低腫瘤患者復發(fā)、轉移發(fā)生率的同時，較目前臨床常用的化療藥物毒副作用明顯減低，從而提高惡性腫瘤患者的生存期和生活質量。
文檔編號A61P35/00GK102058609SQ20101061599
公開日2011年5月18日 申請日期2010年12月30日 優(yōu)先權日2010年12月30日
發(fā)明者張玉松, 樊賽軍 申請人:蘇州大學