一種治療黑色素瘤的中藥組合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及一種治療黑色素瘤的中藥組合物及其制備方法。為了克服現(xiàn)有技術(shù)中化學(xué)治療過(guò)程對(duì)黑色素瘤患者的副作用較大，本發(fā)明提供一種能夠治療黑色素瘤的中藥組合物，其主要由刺五加、黨參、山楂、地榆等多味中藥制備得到。其用于黑色素瘤治療時(shí)可以顯著抑制黑色素瘤細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,且藥物的副作用低，適合開發(fā)成黑色素瘤治療藥物。
【專利說(shuō)明】一種治療黑色素瘤的中藥組合物及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種用于治療黑色素瘤的中藥組合物及其 制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 惡性黑素瘤是由皮膚和其他器官黑素細(xì)胞產(chǎn)生的腫瘤。皮膚黑素瘤表現(xiàn)為色素 性皮損在數(shù)月或數(shù)年中發(fā)生明顯改變。雖其發(fā)病率低，但其惡性度高，轉(zhuǎn)移發(fā)生早，死亡率 高，因此早期診斷、早期治療很重要。惡性黑素瘤大多發(fā)生于成人，巨大性先天性色素痣繼 發(fā)癌變的病例多見(jiàn)于兒童。黑素瘤病因?qū)W尚未完全闡明。一些研宄資料提示，其發(fā)生與下 列危險(xiǎn)因素有關(guān)：基因、環(huán)境及基因/環(huán)境共同因素。比如不典型（發(fā)育不良）痣或黑色素 瘤家族史、光導(dǎo)致色素沉著的皮膚、不容易曬黑皮膚、紅色頭發(fā)人種、強(qiáng)的間斷日光暴露、日 曬傷、多發(fā)黑色素細(xì)胞痣等?；?環(huán)境多種因素導(dǎo)致黑素瘤惡性轉(zhuǎn)化。惡性轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵 細(xì)胞通路：Rb通路、p53通路、PI3K/AKT通路、RAS/MAPK通路（20?30% NRAS突變，55? 60% BRAF 突變）。
[0003] 皮膚惡性黑素瘤的臨床癥狀，包括出血、瘙癢、壓痛、潰瘍等，一般來(lái)講，黑素瘤的 癥狀與發(fā)病年齡相關(guān)，年輕患者一般表現(xiàn)為瘙癢、皮損的顏色變化和界限擴(kuò)大，老年患者一 般表現(xiàn)為皮損出現(xiàn)潰瘍，通常提示預(yù)后不良。皮膚惡性黑素瘤的皮損表現(xiàn)與解剖部位及腫 瘤的生長(zhǎng)方式相關(guān)，即與組織學(xué)類型相關(guān)，組織學(xué)類型又因年齡、型別、種族的不同而有很 大差異。不同類型的黑素瘤具有不同的病因和遺傳學(xué)背景，目前黑素瘤的臨床組織學(xué)分型 采用Clark分型，包括四型：惡性雀斑痣樣黑素瘤（LMM);淺表擴(kuò)散性黑素瘤；肢端雀斑樣 黑素瘤/黏膜黑素瘤；結(jié)節(jié)性黑素瘤（NM)。在患惡性黑素瘤的白種人中，約70%為SSM。但 在所有惡性黑素瘤的亞洲人中，發(fā)生于較少日光照射部位的ALM占72%。
[0004] 目前臨床對(duì)于黑色素瘤的治療原則為對(duì)早期未轉(zhuǎn)移的損害應(yīng)手術(shù)切除，應(yīng)根據(jù) Breslow深度確定切除皮損周邊正常皮膚的范圍，如果是指（趾）惡性黑素瘤，可采用截指 (趾）術(shù)。應(yīng)切除受累淋巴結(jié)，但預(yù)防性淋巴結(jié)切除仍有爭(zhēng)議。肢體動(dòng)脈灌注抗有絲分裂藥 物治療肢體黑素瘤有一定療效。雖然生物化學(xué)治療和分子靶向治療具有很大的前景，但對(duì) 于發(fā)生廣泛轉(zhuǎn)移的黑色素瘤患者采用聯(lián)合化療和放射治療仍是最主要的治療方式。本發(fā)明 旨在提供一種療效確切并且毒副作用低的黑色素瘤治療藥物。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 現(xiàn)有技術(shù)中化學(xué)治療過(guò)程對(duì)黑色素瘤患者的副作用較大，并且對(duì)于黑色素瘤細(xì)胞 的殺滅不能令人滿意。為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供一種能夠治療 黑色素瘤的中藥組合物，其可以顯著殺滅黑色素瘤細(xì)胞，適合開發(fā)成黑色素瘤治療藥物。
[0006] -種治療黑色素瘤的中藥組合物，其由以下重量份配比的原料制成：刺五加8-20 份、黨參5-15份、山楂5-15份、地榆3-10份、仙鶴草10-25份、淫羊藿5-15份、黃連10-20 份、漢黃芩3-10份、木通10-20份、黃柏8-20份、制何首烏5-12份、枸杞10-20份、知母3-10 份、姜黃5-15份、芡實(shí)3-10份、石斛3-10份、牛膝5-12份、五倍子10-15份、當(dāng)歸10-20份、 厚樸3-10份、黃芪5-15份、金銀花5-15份、天麻5-25份、茯苓10-20份；
[0007] 本發(fā)明上述中藥均為臨床常用中藥，其入藥部位均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知，所 述的中藥組合物經(jīng)過(guò)合理配伍后能夠顯著減輕黑色素瘤治療過(guò)程中的毒副作用，并增強(qiáng)療 效。根據(jù)中藥組合物對(duì)黑色素瘤藥物或放射治療過(guò)程中的黑色素瘤細(xì)胞殺滅的增強(qiáng)效果 以及對(duì)于治療過(guò)程中毒副作用的減輕效果的差異，發(fā)明人在上述中藥組合物基礎(chǔ)上優(yōu)選如 下：
[0008] (一）刺五加15份、黨參10份、山楂10份、地榆7份、仙鶴草18份、淫羊藿10份、 黃連15份、漢黃芩7份、木通15份、黃柏14份、制何首烏9份、枸杞15份、知母7份、姜黃 10份、芡實(shí)7份、石斛6份、牛膝8份、五倍子13份、當(dāng)歸15份、厚樸7份、黃芪10份、金銀 花10份、天麻20份、茯苓15份。
[0009] (二）刺五加8份、黨參5份、山楂5份、地榆3份、仙鶴草10份、淫羊藿5份、黃連 10份、漢黃芩3份、木通10份、黃柏8份、制何首烏5份、枸杞10份、知母3份、姜黃5份、芡 實(shí)3份、石斛3份、牛膝5份、五倍子10份、當(dāng)歸10份、厚樸3份、黃芪5份、金銀花5份、天 麻5份、茯苓10份。
[0010] (三）刺五加20份、黨參15份、山楂15份、地榆10份、仙鶴草25份、淫羊藿15份、 黃連20份、漢黃芩10份、木通20份、黃柏20份、制何首烏12份、枸杞20份、知母10份、姜 黃15份、芡實(shí)10份、石斛10份、牛膝12份、五倍子15份、當(dāng)歸20份、厚樸10份、黃芪15 份、金銀花15份、天麻25份、茯苓20份。
[0011] (四）刺五加12份、黨參12份、山楂10份、地榆5份、仙鶴草16份、淫羊藿18份、 黃連13份、漢黃芩6份、木通20份、黃柏10份、制何首烏8份、枸杞16份、知母6份、姜黃 10份、芡實(shí)5份、石斛8份、牛膝7份、五倍子8份、當(dāng)歸14份、厚樸10份、黃芪5份、金銀花 15份、天麻15份、茯苓17份。
[0012] 本發(fā)明的中藥組合物可以制備成臨床上常用的劑型。優(yōu)選地，本發(fā)明中藥組合物 按照常規(guī)制備工藝制備成散劑、合劑、片劑或膠囊劑。本發(fā)明還提供一種上述中藥組合物的 制備方法，其包括下述步驟：取處方量中藥材碎成粗粉，按照粗粉總重量的4?9倍加入體 積濃度為40%?95%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時(shí)間為2?5h，濾過(guò)，濾液合并后回 收乙醇，冷卻過(guò)濾，用水洗滌，干燥后即得中藥浸膏；本領(lǐng)域技術(shù)人員可在該制備方法技術(shù) 上制備得到臨床上常用中藥藥物劑型，如片劑、膠囊劑等。
[0013] 本發(fā)明還請(qǐng)求保護(hù)上述中藥組合物在制備治療黑色素瘤的藥物中的用途。本發(fā)明 中藥組合物具有顯著抑制黑色素瘤細(xì)胞增殖以及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用，本發(fā)明實(shí)施例7顯 示，本發(fā)明中藥組合物體外對(duì)三種黑色素瘤細(xì)胞株（B16、A375和SK-MEL-2)細(xì)胞增殖均顯 示了較強(qiáng)的抑制作用，以25-100mg/mL濃度最為顯著。采用AnnexinV和PI雙染流式細(xì)胞術(shù) 檢測(cè)表明，本發(fā)明中藥組合物對(duì)人黑色素瘤細(xì)胞株A375顯示了較強(qiáng)的誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡作用， 適宜開發(fā)成黑色素瘤治療藥物。
[0014] 本發(fā)明中藥組合物在治療黑色素瘤方面，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)勢(shì)：
[0015] 1)與當(dāng)前黑色素瘤治療藥物相比，本發(fā)明中藥組合物為天然純中藥制劑，不良反 應(yīng)和副作用顯著降低，且本發(fā)明中藥組合物作用全面，藥物治療效果更佳，顯著提高了黑色 素瘤患者的用藥依從性，并提高了患者的生活質(zhì)量。
[0016] 2)本發(fā)明中藥組合物中含有多種藥物組分，作用靶點(diǎn)眾多，藥理實(shí)驗(yàn)顯示其具有 顯著降低化學(xué)藥物治療過(guò)程中毒副作用的效果，提高其對(duì)黑色素瘤細(xì)胞的黑色素瘤抑制效 果。

【具體實(shí)施方式】
[0017] 以下通過(guò)具體實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該知曉，所述實(shí)施 例并不以任何方式限制本發(fā)明。
[0018] (一）制劑實(shí)施例部分
[0019] 實(shí)施例1本發(fā)明中藥組合物及制備工藝
[0020] 處方組成如下：刺五加 80g、黨參50g、山楂50g、地榆30g、仙鶴草100g、淫羊藿 50g、黃連100g、漢黃芩30g、木通100g、黃柏80g、制何首烏50g、枸杞100g、知母30g、姜黃 5〇g、芡實(shí)30g、石斛30g、牛膝50g、五倍子100g、當(dāng)歸100g、厚樸30g、黃芪50g、金銀花50g、 天麻50g、茯苳IOOg ;
[0021] 制備方法：取處方量中藥材碎成粗粉，按照粗粉總重量的4倍加入體積濃度為 40%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時(shí)間為5h，濾過(guò)，濾液合并后回收乙醇，冷卻過(guò)濾，用 水洗滌，干燥后即得中藥浸膏；將中藥浸膏粉碎并加入制劑常用輔料制備成片劑或膠囊劑。
[0022] 實(shí)施例2本發(fā)明中藥組合物及制備工藝
[0023] 處方組成如下：刺五加 200g、黨參150g、山楂150g、地榆100g、仙鶴草250g、淫 羊藿150g、黃連200g、漢黃芩100g、木通200g、黃柏200g、制何首烏120g、枸杞200g、知母 l〇〇g、姜黃150g、芡實(shí)100g、石斛100g、牛膝120g、五倍子150g、當(dāng)歸200g、厚樸100g、黃芪 150g、金銀花150g、天麻250g、茯苓200g ;
[0024] 制備方法：取處方量中藥材碎成粗粉，按照粗粉總重量的5倍加入體積濃度為 90%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時(shí)間為3h，濾過(guò)，濾液合并后回收乙醇，冷卻過(guò)濾，用 水洗滌，干燥后即得中藥浸膏；將中藥浸膏粉碎并加入制劑常用輔料制備成片劑或膠囊劑。
[0025] 實(shí)施例3本發(fā)明中藥組合物及制備工藝
[0026] 處方組成如下：刺五加 150g、黨參100g、山楂100g、地榆70g、仙鶴草180g、淫羊藿 l〇〇g、黃連150g、漢黃芩70g、木通150g、黃柏140g、制何首烏90g、枸杞150g、知母70g、姜 黃l〇〇g、芡實(shí)70g、石斛60g、牛膝80g、五倍子130g、當(dāng)歸150g、厚樸70g、黃芪100g、金銀花 100g、天麻 200g、茯苳 150g ;
[0027] 制備方法：取處方量中藥材碎成粗粉，按照粗粉總重量的5倍加入體積濃度為 70%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時(shí)間為4h，濾過(guò)，濾液合并后回收乙醇，冷卻過(guò)濾，用 水洗滌，干燥后即得中藥浸膏；將中藥浸膏粉碎并加入制劑常用輔料制備成片劑或膠囊劑。
[0028] 實(shí)施例4本發(fā)明中藥組合物及制備工藝
[0029] 處方組成如下：刺五加 80g、黨參150g、山楂150g、地榆30g、仙鶴草250g、淫羊藿 150g、黃連100g、漢黃苳100g、木通100g、黃柏160g、制何首烏120g、枸杞100g、知母30g、姜 黃50g、芡實(shí)100g、石斛100g、牛膝70g、五倍子100g、當(dāng)歸150g、厚樸30g、黃芪100g、金銀 花100g、天麻100g、茯苳IOOg ;
[0030] 制備方法：取處方量中藥材碎成粗粉，按照粗粉總重量的5倍加入體積濃度為 70%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時(shí)間為4h，濾過(guò)，濾液合并后回收乙醇，冷卻過(guò)濾，用 水洗滌，干燥后即得中藥浸膏；加入乙醇至含醇量為75% (v/v)，靜置24小時(shí)，取上清液，回 收乙醇濃縮，加水至1000ml，攪勻，分裝，流通蒸汽滅菌35min，即得合劑。
[0031] 實(shí)施例5本發(fā)明中藥組合物及制備工藝
[0032] 處方組成如下：刺五加120g、黨參120g、山楂100g、地榆50g、仙鶴草160g、淫羊藿 180g、黃連130g、漢黃苳60g、木通200g、黃柏100g、制何首烏80g、枸杞160g、知母60g、姜 黃l〇〇g、芡實(shí)50g、石斛80g、牛膝70g、五倍子80g、當(dāng)歸140g、厚樸100g、黃芪50g、金銀花 150g、天麻 150g、茯苳 170g ;
[0033] 制備方法同實(shí)施例4。
[0034] 實(shí)施例6本發(fā)明中藥組合物及制備工藝
[0035] 處方組成如下：刺五加140g、黨參100g、山楂130g、地榆60g、仙鶴草200g、淫羊藿 150g、黃連200g、漢黃苳30g、木通160g、黃柏110g、制何首烏70g、枸杞160g、知母70g、姜 黃110g、芡實(shí)50g、石斛100g、牛膝120g、五倍子150g、當(dāng)歸160g、厚樸100g、黃芪150g、金 銀花120g、天麻180g、茯苓170g ;
[0036] 制備工藝同實(shí)施例4。
[0037] (二）藥效實(shí)施例部分
[0038] 實(shí)施例7 :本發(fā)明中藥組合物對(duì)黑色素瘤細(xì)胞株的抑制作用
[0039] 1、細(xì)胞株：小鼠黑色素瘤細(xì)胞株（B16)，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。人黑色素瘤 細(xì)胞株仏375和51(-1^1^-2)購(gòu)自4了〇：。上述細(xì)胞株用含有10%胎牛血清的01^1培養(yǎng)基在 37°C、體積分?jǐn)?shù)為5 % C02、完全飽和濕度條件下常規(guī)培養(yǎng)，48h更換培養(yǎng)基，細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)飽 合狀態(tài)時(shí)，用0. 25%胰蛋白酶+0. 02% EDTA消化傳代，2?3d傳代1次，實(shí)驗(yàn)選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng) 期細(xì)胞。
[0040] 2、細(xì)胞增殖的檢測(cè)：
[0041] 分別調(diào)整B16、A375和SK-MEL-2細(xì)胞株細(xì)胞懸液濃度為I X 105/mL，加入96孔培 養(yǎng)板內(nèi)，每孔100μL，置37°C5%C02孵箱培養(yǎng)24h。吸除舊培養(yǎng)基，分別加入含本發(fā)明中 藥組合物的無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基（藥物濃度為100mg/mL，50mg/mL，25mg/mL，5mg/mL)，并設(shè) 空白對(duì)照組和調(diào)零組，每組均設(shè)3復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)24h。加入10 μ LWST-8溶液，培養(yǎng)2h。在 490nm處檢測(cè)各孔的吸光值。細(xì)胞增殖抑制率=〔1-(加藥組OD平均值-調(diào)零孔OD平均 值V (空白對(duì)照組OD平均值-調(diào)零孔OD平均值）〕X 100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3遍以上。
[0042] 3、細(xì)胞凋亡的檢測(cè)
[0043] 調(diào)整A375細(xì)胞懸液濃度為I X 106/mL，將細(xì)胞接種于6孔板，每孔1ml。待細(xì)胞 生長(zhǎng)達(dá)融合狀態(tài)后，吸棄原培養(yǎng)基，分別加入含本發(fā)明中藥組合物（藥物濃度為100mg/mL， 50mg/mL，25mg/mL，5mg/mL)的無(wú)血清DMEM培養(yǎng)基，空白組加含0. 1 % DMSO的培養(yǎng)基，藥物 作用24h后，將細(xì)胞上清吸至離心管內(nèi)，細(xì)胞經(jīng)胰酶消化后，移至與細(xì)胞上清相同的離心管 內(nèi)，1000rpm4°C離心5min，棄上清，用PBS洗1遍，棄上清，用Binding buffer洗1遍，并 以195 μ L Binding buffer重懸，5 μ L Annexin V-FITC混勻后室溫避光孵育10分鐘，用 Binding buffer洗1遍，并以190 μ L Binding buffer重懸，加10 μ LPI混勾后流式細(xì)胞儀 上機(jī)檢測(cè)。
[0044] 4實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0045] 4. 1本發(fā)明中藥組合物對(duì)三種黑色素瘤細(xì)胞株細(xì)胞增殖影響的檢測(cè)結(jié)果
[0046] 表1本發(fā)明中藥組合物對(duì)三種黑色素瘤細(xì)胞株細(xì)胞增殖影響的檢測(cè)結(jié)果
[0047]

【權(quán)利要求】
1. 一種治療黑色素瘤的中藥組合物，其特征在于，所述的中藥組合物主要由以下重量 份的原料制得：刺五加8-20份、黨參5-15份、山楂5-15份、地榆3-10份、仙鶴草10-25份、 淫羊藿5-15份、黃連10-20份、漢黃芩3-10份、木通10-20份、黃柏8-20份、制何首烏5-12 份、枸杞10-20份、知母3-10份、姜黃5-15份、芡實(shí)3-10份、石斛3-10份、牛膝5-12份、五 倍子10-15份、當(dāng)歸10-20份、厚樸3-10份、黃芪5-15份、金銀花5-15份、天麻5-25份、茯 苓10-20份。
2. 如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，所述的中藥組合物主要由以下重量 份的原料制得：刺五加15份、黨參10份、山楂10份、地榆7份、仙鶴草18份、淫羊藿10份、 黃連15份、漢黃芩7份、木通15份、黃柏14份、制何首烏9份、枸杞15份、知母7份、姜黃 10份、芡實(shí)7份、石斛6份、牛膝8份、五倍子13份、當(dāng)歸15份、厚樸7份、黃芪10份、金銀 花10份、天麻20份、茯苓15份。
3. 如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，所述的中藥組合物主要由以下重量 份的原料制得：刺五加8份、黨參5份、山楂5份、地榆3份、仙鶴草10份、淫羊藿5份、黃連 10份、漢黃芩3份、木通10份、黃柏8份、制何首烏5份、枸杞10份、知母3份、姜黃5份、芡 實(shí)3份、石斛3份、牛膝5份、五倍子10份、當(dāng)歸10份、厚樸3份、黃芪5份、金銀花5份、天 麻5份、茯苓10份。
4. 如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，所述的中藥組合物主要由以下重量 份的原料制得：刺五加20份、黨參15份、山楂15份、地榆10份、仙鶴草25份、淫羊藿15份、 黃連20份、漢黃芩10份、木通20份、黃柏20份、制何首烏12份、枸杞20份、知母10份、姜 黃15份、芡實(shí)10份、石斛10份、牛膝12份、五倍子15份、當(dāng)歸20份、厚樸10份、黃芪15 份、金銀花15份、天麻25份、茯苓20份。
5. 如權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，所述的中藥組合物主要由以下重量 份的原料制得：刺五加12份、黨參12份、山楂10份、地榆5份、仙鶴草16份、淫羊藿18份、 黃連13份、漢黃芩6份、木通20份、黃柏10份、制何首烏8份、枸杞16份、知母6份、姜黃 10份、芡實(shí)5份、石斛8份、牛膝7份、五倍子8份、當(dāng)歸14份、厚樸10份、黃芪5份、金銀花 15份、天麻15份、茯苓17份。
6. 如權(quán)利要求1-5任一所述的中藥組合物，其特征在于，所述的中藥組合物為散劑、合 劑、片劑或膠囊劑。
7. -種制備權(quán)利要求1-5任一所述中藥組合物的方法，其特征在于，所述制備方法 包括如下步驟：取處方量中藥材碎成粗粉，按照粗粉總重量的4?9倍加入體積濃度為 40%?95%的乙醇溶液，回流提取三次，回流時(shí)間為2?5h，濾過(guò)，濾液合并后回收乙醇，冷 卻過(guò)濾，用水洗滌，干燥后即得中藥浸膏；本領(lǐng)域技術(shù)人員可在該制備方法技術(shù)上制備得到 臨床上常用中藥藥物劑型。
8. 權(quán)利要求1-5任一所述的中藥組合物在制備治療黑色素瘤的藥物中的用途。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK104491766SQ201510042242
【公開日】2015年4月8日 申請(qǐng)日期:2015年1月27日 優(yōu)先權(quán)日:2015年1月27日
【發(fā)明者】胡學(xué)榮 申請(qǐng)人:鄒士東