專利名稱：取代的2′，3′-二脫氧-5-三氟甲基尿嘧啶核苷類，它們的制備方法以及它們?cè)卺t(yī)藥方面 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及2′，3′-二脫氧-5-三氟甲基尿嘧啶核苷類、它們的制備方法以及它們作為藥物，尤其是作為抗肝炎藥物的應(yīng)用。
全世界約有3億人患有乙型肝炎，僅在美國(guó)和歐洲每年記錄的新患者就有1百萬(wàn)。
已知在2′和3′位置未被取代的某些2′，3′-二脫氧核苷類具有抗乙型肝炎病毒的作用(參見美國(guó)專利申請(qǐng)351502(1989年8月15日);歐洲專利302760)。在WO90/14，079中明確地?cái)⑹?′，3′-二脫氧胞嘧啶核苷(DDC)作為抗乙型肝炎的藥物。此外，由出版物(D.L.J.Tyrell等，Biochem.Biophys.Res.Commun.156，1144～1148(1988))已知，只是2′，3′-二脫氧嘌呤核苷類(不是2′，3′-二脫氧嘧啶核苷類)有抗DHBV(鴨肝炎乙型病毒)的作用。另外，要特別指出的是，歐洲專利217580中，用于其方法的唯一正確的起始化合物2′-脫氧-5-三氟甲基尿嘧啶核苷是以錯(cuò)誤的名稱2′，3′-二脫氧-5-三氟甲基尿嘧啶(實(shí)例34)公開的，并且在RN 108，441/81/2中以其錯(cuò)誤結(jié)構(gòu)載入化學(xué)文摘)(C.A.)，但以前并沒(méi)有將該化合物包括在公開申請(qǐng)或?qū)＠姆秶鷥?nèi)，也沒(méi)有作為實(shí)際的具有代表性的物質(zhì)提出。
本發(fā)明涉及具有通式(Ⅰ)的2′，3′-二脫氧-5-三氟甲基尿嘧啶核苷類及其生理上適用的鹽，
其中R1代表氫或羥基保護(hù)基，或者R1代表4-甲基苯甲?；蛴兄钡?8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的?；擋；梢杂婶然我獾娜〈蛘逺1代表由肽化學(xué)中常用的氨基保護(hù)基任意取代的氨基酸，或者R1代表在體內(nèi)能夠分解的酯基，或者R1代表下式基團(tuán)，
其中R2、R3和R4可以相同或不同，它們可以代表氫或堿金屬或堿土金屬原子，n代表整數(shù)1或2，R5代表可以有直到6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基，該烷基可以由鹵素任意的取代。
在本發(fā)明的范圍內(nèi)，優(yōu)先選用生理上適用的鹽。本發(fā)明化合物的生理上適用的鹽是本發(fā)明物質(zhì)與無(wú)機(jī)酸、羧酸或磺酸所形成的鹽。特別優(yōu)選的是例如與下述酸形成的鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、檸檬酸、富馬酸、馬來(lái)酸或苯甲酸。
所述的鹽還可以是與普通的堿所形成的鹽，例如堿金屬鹽(如鈉鹽或鉀鹽)、堿土金屬鹽(如鈣鹽或鎂鹽)，或者是由氨或有機(jī)胺如二乙胺、三乙胺、乙基二異丙基胺、普魯卡因、N-甲基嗎啉、N-甲基哌啶或二氫樅胺得到的銨鹽。
本發(fā)明化合物可以以立體異構(gòu)形式存在，該立體異構(gòu)形式可以表現(xiàn)為像與鏡像(對(duì)映體)，或者不為像與鏡像(非對(duì)映異構(gòu)體)的關(guān)系。本發(fā)明涉及對(duì)映體和外消旋形式以及非對(duì)映異構(gòu)體混合物。如同非對(duì)映異構(gòu)體一樣，可以將外消旋形式用已知的方法分離成立體異構(gòu)純的成分(參見E.L.Eliel，Stereochemistry of Carbon Compounds，McGraw Hill，1962)。
本發(fā)明范圍內(nèi)的氨基保護(hù)基是在肽化學(xué)中常用的氨基保護(hù)基。
所述保護(hù)基最好包括芐氧羰基、3，4-二甲氧基芐氧羰基、3，5-二甲氧基芐氧羰基、2，4-二甲氧基芐氧羰基、4-甲氧基芐氧羰基、4-硝基芐氧羰基、2-硝基芐氧羰基、2-硝基-4，5-二甲氧基芐氧羰基、甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、異丙氧羰基、丁氧羰基、異丁氧羰基、叔丁氧羰基、烯丙氧羰基、乙烯氧羰基、2-硝基芐氧羰基、3，4，5-三甲氧基芐氧羰基、環(huán)己基羰基、1，1-二甲基乙氧羰基、金剛烷基羰基、鄰苯二甲?；?、2，2，2-三氯乙氧羰基、2，2，2-三氯-叔丁氧羰基、
氧羰基、苯氧羰基、4-硝基苯氧羰基、芴基-9-甲氧羰基、甲?；?、乙?；⒈；⑿挛祯；?、2-氯乙酰基、2-溴乙?；?，2，2-三氟乙?；?，2，2-三氯乙?；⒈郊柞；?-氯苯甲?；?、4-溴苯甲?；?-硝基苯甲?；?、苯二甲酰亞氨基、異戊?；⑵S氧基亞甲基、4-硝基芐基、2，4-二硝基芐基或4-硝基苯基。
在上面定義的R1范圍內(nèi)，氨基酸(-NH-CHR-CO)通常代表選自以下系列的天然氨基酸丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、組氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、精氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、絲氨酸、色氨酸或纈氨酸，當(dāng)末端氨基以游離的NH2基團(tuán)存在時(shí)，或者末端氨基被上述一個(gè)保護(hù)基團(tuán)任意取代時(shí)，通過(guò)羰基連接通式(Ⅰ)中的氧(R′-O-)。
在上面定義的范圍內(nèi)，羥基保護(hù)基通常代表選自以下系列的保護(hù)基三甲基硅烷基、三乙基硅烷基、三異丙基硅烷基、叔丁基二甲基硅烷基、叔丁基二苯基硅烷基、三苯基硅烷基、三甲基硅烷基、乙氧基羰基、芐基、三苯基甲基(三苯甲基)、一甲氧基三苯甲基(MMTr)、二甲氧基三苯甲基(DMTr)、芐氧羰基、2-硝基芐基、4-硝基芐基、2-硝基芐氧羰基、4-硝基芐氧羰基、叔丁氧羰基、烯丙氧羰基、4-甲氧基芐基、4-甲氧基芐氧羰基、甲?；?、乙酰基、三氯乙酰基、2，2，2-三氯乙氧羰基、2，4-二甲氧基芐基、2，4-二甲氧基芐氧羰基、甲氧基甲基、甲硫基甲基、甲氧基乙氧基甲基、〔2-(三甲基硅烷基)乙氧基〕甲基、2-(甲硫基甲氧基)乙氧羰基、四氫吡喃基、苯甲?；?、4-甲基苯甲?；?、4-硝基苯甲?；?-氟苯甲?；?-氯苯甲?；?-甲氧基苯甲酰基。
在上面定義的R1范圍內(nèi)，在體內(nèi)容易消除的酯基代表在體內(nèi)容易消除并釋放出OH基團(tuán)(R＝H)的藥學(xué)上容許的酯基。該基團(tuán)的實(shí)例在歐洲專利357，495中已經(jīng)公開。
優(yōu)選的在體內(nèi)能夠分解的酯基是具有下式的基團(tuán)
根據(jù)基團(tuán)R1的具體定義，本發(fā)明的通式(Ⅰ)化合物可以起前藥的作用，即作為藥學(xué)上容許的化合物，在服用時(shí)或服用之后，由于改進(jìn)的藥理學(xué)和藥物動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，使得該前藥進(jìn)一步提供了可以應(yīng)用的本發(fā)明通式(Ⅰ)化合物，并且其中例如R1＝H，可以作為代謝產(chǎn)物或降解產(chǎn)物(參見J.Pharm.Sci.79，531(1990);歐洲專利357，495，362，967，366，386和WP 90/04，969)。
優(yōu)選的通式(Ⅰ)化合物是下述化合物及其生理上適用的鹽，其中R1代表氫、叔丁基二甲基硅烷基、三甲基硅烷基、三苯基甲基、苯甲?；?、4-甲基苯甲?；蛞阴；?，或者R1代表有直到16個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的?；?，該?；梢杂婶然我獾娜〈?，或者R1代表亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)、苯丙氨酸(Phe)、天冬氨酸(Asp)或谷氨酸，在它們的NH官能團(tuán)上任意被叔丁氧羰基(Boc)或芐氧羰基(Z)取代，或者R1代表在體內(nèi)容易分解的具有下式的酯基，
或者R1代表下式基團(tuán)，
這里R2、R3和R4可以相同或不同，并且它們可以代表氫或金屬鈉原子，n代表整數(shù)1或2，R5代表有直到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基，該烷基可以由氯任意的取代。
特別優(yōu)選的通式(Ⅰ)化合物是下述化合物及其生理上適用的鹽，其中R1代表氫、叔丁基二甲基硅烷基、4-甲基苯甲?；虮郊柞；?，或者R1代表有直到14個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的?；擋；梢杂婶然我獾娜〈?，或者R1代表亮氨酸(Leu)或天冬氨酸(Asp)，在其-NH官能團(tuán)上可以由保護(hù)基Boc任意的取代，或者R1代表在體內(nèi)容易分解的具有下式的酯基，
或者R1代表下式基團(tuán)，
其中R2、R3和R4可以相同或不同，它們可以代表氫或金屬鈉原子，n代表整數(shù)1或2R5代表甲基、乙基或氯甲基。
此外，本發(fā)明還提供制備本發(fā)明通式(Ⅰ)化合物的方法，該方法的特征在于，〔A〕首先使5-三氟甲基尿嘧啶(式Ⅱ)或通式(Ⅲ)化合物在惰性溶劑中與通式(Ⅳ)化合物反應(yīng)，如果必要，反應(yīng)在堿和/或輔助劑存在下進(jìn)行，得到通式(Ⅰa)化合物，它或者以α，β-異構(gòu)體混合物形式存在，或者以α-異構(gòu)體和β-異構(gòu)體的形式存在，
式(Ⅲ)中R6代表上述一種硅烷基羥基保護(hù)基，最好為三甲基硅烷基，
式(Ⅳ)中R7代表上述一種羥基保護(hù)基，T代表普通的離去基團(tuán)，如乙酰氧基、溴、氯、碘、疊氮基、4-硝基苯氧基、對(duì)溴苯磺酸酯、甲苯磺酸酯、甲磺酸酯、三氟甲磺酸酯或氟磺酸酯，最好為溴、氯或乙酰氧基，
式(Ⅰa)中R7的定義同上，或者〔B〕使通式(Ⅲ)化合物與通式(Ⅳa)化合物，或者使1-(β-D-呋喃核糖基)-5-三氟甲基-尿嘧啶(式Ⅴ)與通式(Ⅵ)化合物在惰性溶劑中反應(yīng)，如果有必要，加入堿和/或輔助劑，并且，如果是同時(shí)保護(hù)連-羥基官能團(tuán)和/或伯羥基官能團(tuán)的式(Ⅴ)化合物，隨后游離出連-羥基官能團(tuán)，得到通式(Ⅶ)化合物，
式(Ⅳa)中，R7和T的定義同上，
式(Ⅵ)中，R7的定義同上，并且W具有上述T的定義，并且與T可以相同或不同，
式(Ⅶ)中，R7的定義同上，并且在下一步中，使通式(Ⅶ)化合物與1，1′-硫代羰基二咪唑或原甲酸二甲酯反應(yīng)，通式(Ⅶ)化合物轉(zhuǎn)變成相應(yīng)的1，4-醛縮醇或1，3-硫代碳酸酯(通式Ⅷ)，
式(Ⅷ)中R8與上述R7的定義相同，或者R8代表氫，并且X代表式＝S或-OCH3基團(tuán)，反應(yīng)在惰性溶劑中和在還原劑存在下進(jìn)行，如有必要，加入一種催化劑，并且如果R8代表氫，那么與乙酸酐經(jīng)一步反應(yīng)先將伯羥基官能團(tuán)保護(hù)，同時(shí)消除醛縮醇基，并形成雙鍵，然后將雙鍵按通常的方法進(jìn)行氫化，并且如果X代表式＝S基團(tuán)，那么與三烷基亞磷酸酯，例如三甲基、三乙基或三丙基亞磷酸酯;最好是三乙基亞磷酸酯反應(yīng)，在脫除1，3-硫代碳酸酯基時(shí)，首先在還原劑和催化劑存在下進(jìn)行還原，再次與1，1′-硫代羰基二咪唑反應(yīng)，并且最后再次進(jìn)行還原，或者〔C〕按〔B〕所述方法，首先使通式(Ⅸ)化合物與1，1-硫代羰基二咪唑或硫代苯甲酰氯反應(yīng)，得到相應(yīng)的硫代羰基化合物(通式Ⅹ)，然后按〔B〕所述方法，將被保護(hù)的羥基消除，并使伯羥基官能團(tuán)脫保護(hù)，
式(Ⅸ)中，R7的定義同上，并且R9和R10可以相同或不同，它們可以代表氫或羥基，
式(Ⅹ)中，R7的定義同上，L代表下式基團(tuán)，
或者如果R1不代表氫或磷酸衍生物，那么〔D〕使α，β-2′，3′-二脫氧與三氟甲基尿嘧啶核苷(式Ⅰb)與通式(Ⅺ)化合物在惰性溶劑中反應(yīng)，如有必要，加入堿和/或輔助劑，
式(Ⅺ)中R11同上述R1的定義，但不代表氫或磷酸衍生物，Y有上述T的定義，并且與T可以相同或不同，或者如果R1代表上述一種磷酸基團(tuán)，那么首先按通常的方法，用三氯化磷、三咪唑基膦或三氯氧磷使通式(Ⅰb)化合物磷?；?，然后如有必要，與三丁銨二磷酸鹽或通式(Ⅻ)化合物反應(yīng)，反應(yīng)在惰性溶劑中進(jìn)行，如有必要，反應(yīng)在堿和堿金屬鹵化物如碘化鈉存在下進(jìn)行，
式(Ⅻ)中R12代表下式基團(tuán)，
其中R2、R3、R4、R5和n的定義同上，Z代表鹵素，最好為氯，并且在游離的羥甲基官能團(tuán)(R1＝H)的情況下，按照通常的方法消除有關(guān)的保護(hù)基和/或有選擇地進(jìn)行層析分離。
以下述反應(yīng)路線為例詳細(xì)敘述本發(fā)明的方法
本發(fā)明通式(Ⅰ)化合物的制備方法可以部分地按下列文獻(xiàn)中已知的類似方法進(jìn)行M.OKabe等，J.Org.Chem.53，4780(1980);V.Farina等，THL29，1239(1988);F.Seela等，Heterocycles 29，2193(1989);R.R.Webb等，Nucleosides Nucleotides 7，147(1988);EP 357，495;EP 199，451;EP 362，967;L.Vrang等，Antiviral Res.7.139(1987);EP366，385;EP 357，495;J.S.Driscoll，J.Med.Chem.30，862(1987);H.Shiragami，J.Org.Chem.53，5170(1988)。
本發(fā)明的方法〔A〕-〔D〕中合適的溶劑為在反應(yīng)條件下不變化的惰性有機(jī)溶劑。優(yōu)選的溶劑有醚類，如乙醚、二噁烷、四氫呋喃、乙二醇單甲醚或乙二醇二甲醚;鹵代烴類，如二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、三氯甲烷或四氯甲烷;酰胺類，如二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺或六甲基磷酸三酰胺;烴類，如苯、甲苯或二甲苯;或乙腈、硝基甲烷、四氫噻吩砜、二甲基亞砜、乙酸乙酯;或醇類，如甲醇、乙醇、異丙醇、丙醇或丁醇，乙二醇或吡啶。也可以應(yīng)用上述溶劑的混合液。對(duì)于方法〔A〕，優(yōu)選二氯甲烷和乙腈，對(duì)于方法〔B〕和〔C〕，優(yōu)選吡啶和二甲基甲酰胺，對(duì)于方法〔D〕，優(yōu)選二甲基甲酰胺和磷酸二甲酯。
用于通式(Ⅳ)或(Ⅳa)反應(yīng)的合適的輔助劑有例如三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯或三甲基硅烷基三氟乙酸酯，或路易斯酸如氯化錫(Ⅳ)、氯化鈦、氯化鋁(Ⅲ)、氯化汞(Ⅱ)或氯化鋅(Ⅱ)。三甲基硅烷基三氟甲磺酸酯、氯化錫(Ⅳ)、氯化鈦(Ⅳ)、氯化鋁(Ⅲ)或氯化汞(Ⅱ)是較好的。
相對(duì)于1mol通式(Ⅳ)或(Ⅳa)化合物，通常應(yīng)用的輔助劑的量為0.1mol～2.0mol較好。
合適的堿是常用的無(wú)機(jī)堿或有機(jī)堿。優(yōu)先選用的堿包括堿金屬氫氧化物，如氫氧化鈉或氫氧化鉀，或堿金屬碳酸鹽，如碳酸鈉或碳酸鉀，或堿金屬醇鹽，如甲醇鈉或甲醇鉀、乙醇鈉或乙醇鉀，或有機(jī)胺如三乙胺、吡啶、甲基吡啶、N-甲基嗎啉、N-甲基哌啶、三-〔2-(2-甲氧基乙氧基)乙基〕胺，1，8-二氮雜雙環(huán)〔5.4.0〕-十一碳-7-烯(DBU)或1，5-二氮雜雙環(huán)〔4.3.0〕壬碳-5-烯(DBN)或硫酸銨。
相對(duì)于1mol通式(Ⅳ)、(Ⅳa)、(Ⅵ)或(Ⅸ)化合物，在各個(gè)情況下通常堿的用量為1.0mol～3.0mol，最好為1.0mol～1.2mol。
關(guān)于具體操作步驟的反應(yīng)溫度可以在廣泛的范圍內(nèi)變化。一般來(lái)講，反應(yīng)可以在-40℃～+170℃，最好為-40℃～+150℃范圍內(nèi)進(jìn)行。
步驟〔A〕～〔D〕中所有的反應(yīng)可以在常壓、升高的壓力或減壓下進(jìn)行。反應(yīng)最好在0.5～5巴壓力下進(jìn)行。
在通式(Ⅲ)、(Ⅰa)和(Ⅶ)化合物中消除硅烷基羥基保護(hù)基(R6，如果有R7的話)可以按通常的方法，例如在氟鹽如氟化四丁銨的作用下進(jìn)行，如有必要，可加入乙酸和/或在上述一種溶劑(優(yōu)選四氫呋喃)中進(jìn)行，或在醇(優(yōu)選甲醇)中，在對(duì)甲苯磺酸存在下進(jìn)行。
在各種情況下相對(duì)于1mol通式(Ⅲ)和(Ⅰa)化合物，應(yīng)用氟鹽的量為1～3mol，應(yīng)用的乙酸量為1～5mol。
如果R7與氧原子一起形成酯基，那么消除反應(yīng)通常在上述一種醇，如甲醇或乙醇，最好在甲醇中、在氨存在下進(jìn)行。
消除反應(yīng)最好在溫度-10℃～+30℃范圍內(nèi)于常壓下進(jìn)行。
錫的氫化物(例如氫化三丁基錫、氫化三苯基錫)，或錫的氧化物(例如氧化四丁基錫)適用于還原通式(Ⅷ)和(Ⅹ)化合物。優(yōu)選氫化三丁基錫和氧化四丁基錫。
還原反應(yīng)在上述一種溶劑中，最好在二噁烷或甲苯中進(jìn)行。
還原反應(yīng)適用的催化劑有例如偶氮二異丁腈(AIBN)和過(guò)氧化二苯甲酰。優(yōu)選偶氮二異丁腈(AIBN)。
在各種情況下相對(duì)于1mol通式(Ⅷ)和(Ⅹ)化合物，應(yīng)用的催化劑量為0.005～0.5mol，優(yōu)選0.01～0.05mol。
氫化在上述一種醇例如甲醇、乙醇或丙醇中，于貴金屬催化劑例如鉑、鈀、鈀-動(dòng)物炭或阮內(nèi)鎳存在下，在0℃～+50℃，優(yōu)選在室溫～+40℃，于常壓或升高的壓力下進(jìn)行。
除上述溶劑外，制備本發(fā)明通式(Ⅰ)化合物相應(yīng)的一、二或三磷酸酯和烷基膦酸酯〔D〕合適的溶劑還有磷酸酯，例如磷酸三甲酯或磷酸三乙酯。
用于調(diào)節(jié)至pH7.5的合適的堿最好是堿金屬氫氧化物，例如氫氧化鈉或氫氧化鉀。
為了制備磷酸酯，最好用三乙銨碳酸氫鹽作為緩沖劑。
就制備通式(Ⅰ)的三磷酸酯而言，與三氯氧磷反應(yīng)生成的二氯磷酸酯中間體不會(huì)水解成一磷酸酯，但是與雙(三丁銨)焦磷酸鹽直接反應(yīng)，得到相應(yīng)的三磷酸酯。
通式(Ⅷ)化合物(X＝＝S)與三烷基亞磷酸酯的反應(yīng)按類似文獻(xiàn)(參見J.Org.Chem.1989，54，4780)已知的方法進(jìn)行。
消除或取代羥基保護(hù)基和氨基保護(hù)基的反應(yīng)一般按通常的方法，例如<Greene，Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley & Sons，1981，10 ff和218 ff>所述的方法進(jìn)行。
其中R1代表氨基酸基的本發(fā)明通式(Ⅰ)化合物的制備方法〔D〕可以按下法進(jìn)行消除相應(yīng)的保護(hù)基，如有必要，用肽化學(xué)中常用的方法(參見Houben Weyl，Eugen Müller，“Methoden der organischen Chemie(有機(jī)化學(xué)的方法法)，Volume XV/1和XV/2，Georg Thieme Verlag，Stuttgart，1974)，與相應(yīng)羧酸的活性衍生物反應(yīng)并與游離的羥甲基官能團(tuán)進(jìn)行酯化。在該情況下，最好用1，8-二氮雜雙環(huán)〔5.4.0〕十一碳-7-烯(DBU)作為堿。
5-三氟甲基尿嘧啶(式Ⅱ)是已知的。
通式(Ⅲ)化合物本身是已知的，或者可以按文獻(xiàn)已知的方法制備(例如參見Khim Geterotsikl.Soedin，(8)，1128～31，(1)，101～10和THL，22(11)，1029～32)。
通式(Ⅳ)和(Ⅳa)化合物本身是已知的，或者可以按文獻(xiàn)已知的方法制備(例如參見J.Org.Chem.53，4780(1988);THL 29，1239(1988)和Heterocycles 29，2193(1989);Khim.Geterotsikl.Soedin(1)，101～10和(8)，1128～31)。
通式(Ⅰa)和(Ⅰb)化合物是新的，可以按以上所述的方法制備。
通式(Ⅴ)、(Ⅶ)和(Ⅸ)化合物本身是已知的，或者可以按通常的方法制備(參見J.Med.Chem.30(2)，440～4;JP63，188，696)。
某些通式(Ⅹ)化合物以前已有報(bào)道，例如其中L代表-(C＝S)-C6H5的通式(Ⅹ)化合物(參見JP 028，408)，或者是新的，并可以按上述方法進(jìn)行制備。
通式(Ⅵ)化合物是已知的(參見Anal.Biochem.60，608(1974);MSD Book 2，371A)。
通式(Ⅺ)和(Ⅻ)化合物是已知的(參見Houben-Weyl，Engen-Müller，Methoden der organischen Chemie(有機(jī)化學(xué)的方法)，Volume XV/1和XV/2，Georg Thieme Verlag，Stuttgart 1974和Amino Acids，G.C.Barrett，London，New York，Chapman and Hall，1985)。
令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的式(Ⅰ)化合物具有非常強(qiáng)的特異性抗乙型肝炎病毒(HBV)作用。用乙型肝炎病毒DNA轉(zhuǎn)染的肝細(xì)胞瘤細(xì)胞(HEP G2.2.15)檢測(cè)本發(fā)明化合物的效果。
按參考文獻(xiàn)(Sells，M.A.;Chen，M.L.，Acs，G.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA PP.1005～1009，Vol.84(1987))所述的HBV試驗(yàn)體系測(cè)定以下所列實(shí)例化合物的效果。
轉(zhuǎn)染的肝細(xì)胞瘤細(xì)胞(HEP G2.2.15)與不同濃度的各個(gè)化合物一起進(jìn)行溫育。用本發(fā)明化合物處理轉(zhuǎn)染的肝細(xì)胞瘤細(xì)胞株HEPG2.2.15，可以證實(shí)在上清液中出現(xiàn)特異性HBV DNA病毒和乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平減少的情況。此外還發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物使肝炎病毒的復(fù)制中間體減少。在PEG沉淀之后測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)物上清液中HBV DNA的含量。用非放射性標(biāo)記的HBV基因組DNA標(biāo)本進(jìn)行測(cè)定〔Pauly，P.，1982，P.H.D.Thesis，University of G ttingen，F(xiàn).R.G.;K chel等，1990，EMBL，Accession No.X 51790〕。用市場(chǎng)上可以買到的Elisa試劑同時(shí)測(cè)定對(duì)HBsAg形成的影響。IC50值是在上述試驗(yàn)條件下引起上清液中50%HBV DNA抑制的底物濃度。
實(shí)例化合物號(hào) IC50(nM)2 0.015 ＞0.25采用結(jié)晶紫染色法或在細(xì)胞DNA中加入放射性標(biāo)記的胸苷，同時(shí)也可以證實(shí)本發(fā)明化合物可能存在的細(xì)胞毒作用。
此外，在比較試驗(yàn)中應(yīng)用的已知物質(zhì)DDA和DDC(參見Ueda等，Virology 169213～216(1989))表明，上述試驗(yàn)體系中DDA的IC50值＞100μM，DDC的IC50值等于5μM。
通過(guò)與HEL和MEF細(xì)胞一起溫育，檢驗(yàn)實(shí)例2化合物對(duì)其他細(xì)胞的作用。結(jié)果表明，實(shí)例2化合物的濃度高達(dá)250μM時(shí)對(duì)上述細(xì)胞的生存沒(méi)有影響。
在治療由Hepdna病毒，如乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒或丁型肝炎病毒所引起的病毒性肝炎，尤其是乙型肝炎病毒所引起的病毒性肝炎中，本發(fā)明化合物是人類用藥中的有效物質(zhì)。
作為人用藥物的適應(yīng)癥其范圍有例如治療慢性乙、丙和丁型病毒性肝炎感染，治療急性乙、丙和丁型病毒性肝炎感染，尤其適用于治療慢性和急性乙型病毒性肝炎感染。
本發(fā)明還包括藥用制劑，該制劑除了含有無(wú)毒的惰性藥用合適的賦形劑之外還含有一個(gè)或一個(gè)以上的式(Ⅰ)化合物，或者該制劑由一個(gè)或一個(gè)以上有效的式(Ⅰ)化合物構(gòu)成，本發(fā)明也包括制備上述制劑的方法。
在上述藥用制劑中應(yīng)該含有式(Ⅰ)化合物活性物質(zhì)，其含量占混合物總重量的0.1～99.5%較好，最好占混合物總重量的0.5～95%。
除了含式(Ⅰ)化合物之外，上述藥用制劑還可以含有其他藥學(xué)活性物質(zhì)。
可以按已知方法按通常的方式制備上述藥用組合物，例如將一種或一種以上的活性物質(zhì)與一種或一種以上的賦形劑混合。
為了獲得所希望的結(jié)果，在人用藥物和獸用藥物方面，給予以下劑量的一種或一種以上本發(fā)明的活性物質(zhì)一般證明是有利的每千克體重每24小時(shí)給予的總量為0.5～500mg，最好為1～100mg，如有必要，可以分成幾個(gè)單次劑量給藥。單次劑量含有一種或一種以上的活性物質(zhì)，其劑量為每千克體重1～80mg較好，最好為1～30mg。但是，偏離上述劑量范圍也是必然的，在根據(jù)下述因素確定給藥劑量時(shí)尤其如此需治療病體的情況和體重、疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度、制劑的類型、所用的藥物和服藥的時(shí)間以及給藥的間隔。
起始化合物實(shí)例Ⅰ1-〔2，3，5-三-(苯甲酰氧基)-β-D-呋喃核糖基〕-5-(三氟甲基)-尿嘧啶
將5.0g(27.8mmol)5-(三氟甲基)尿嘧啶的139ml(0.66mol)六甲基二硅烷基胺的攪拌混懸液與211mg(1.39mmol)無(wú)水硫酸銨一起反應(yīng)，并在氮?dú)饬飨录訜峄亓?小時(shí)。然后在低真空下蒸除六甲基二硅烷基胺，殘余物溶于370ml無(wú)水乙腈中。加入13.31g(26.40mmol)1-乙酰氧基-2，3，5-三(苯甲酰氧基)-β-D-呋喃核糖，將混合物冷卻至0℃，在30分鐘內(nèi)向其中滴加7.0ml(36.14mmol)三氟甲磺酸三甲基硅烷基酯。移去冷卻浴，接著將反應(yīng)溶液在室溫下再攪拌1小時(shí)。然后將其置于170ml飽和NaHCO3溶液和200ml乙酸乙酯組成的冷卻混合液中攪拌。分離兩相，水相用乙酸乙酯萃取2次，每次200ml。合并的萃取液經(jīng)MgSO4干燥，在真空下蒸除溶劑，殘余物經(jīng)200g硅膠層析(甲苯∶乙酸乙酯4∶1)。得到15.3g(88%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色泡沫狀物質(zhì)。
Rf＝0.35(甲苯∶乙酸乙酯 4∶1)MS(FAB)m/z＝625(M+H)+
實(shí)例Ⅱ1-(5-苯甲酰氧基-β-D-呋喃核糖基)-5-(三氟甲基)尿嘧啶
按S.N.Shino等，Tetrahedron 41，5503(1985)類似的方法，于0℃向2.36g(43.6mmol)甲醇鈉的200ml無(wú)水THF的攪拌混懸液中分次加入10.90g(17.50mmol)干燥的實(shí)例Ⅰ化合物。移去冷卻浴，然后將反應(yīng)混合物于0℃攪拌1小時(shí)，并通過(guò)加入Dowex 50W-X4離子交換劑(H+型)進(jìn)行中和(pH6.5)。濾除離子交換劑，用乙醇洗滌3次，每次20ml。濾液在真空下濃縮至干，并經(jīng)285g硅膠層析(二氯甲烷∶甲醇95∶5)。得到4.48g(62%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色結(jié)晶。m.p.186℃。
Rf＝0.40(二氯甲烷∶甲醇9∶1)MS(FAB)m/z＝417(M+H)+實(shí)例Ⅲ1-(5′-O-苯甲?；?β-D-呋喃核糖基)-5-三氟甲基-尿嘧啶-2′，3′-硫羰碳酸酯
將3.33g(8.0mmol)實(shí)例Ⅱ化合物的150ml無(wú)水乙腈溶液分次與3.60g(18.16mmol)1，1′-硫代羰基二咪唑反應(yīng)，并于室溫下攪拌2小時(shí)。然后在真空下蒸發(fā)溶劑，殘余物經(jīng)100g硅膠過(guò)濾純化(甲苯∶乙酸乙酯3∶2)。得到3.26g(理論值的89%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色粉末狀物。m.p.133℃(分解)。
Rf＝0.71(乙酸乙酯)IR(KBr)γ＝3188，3073，1697，1469，1379，1326，1270，1144，1097，1012，720cm-1.
MS(FAB)m/z＝459(M+H)+，475(M+Na)+實(shí)例Ⅳ5′-苯甲酰氧基-2′，3′-二脫氫-2′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷
在氮?dú)饬飨孪蛐抡麴s的并預(yù)熱至130℃的75ml(66當(dāng)量)亞磷酸三乙酯中一次加入3.00g(6.55mmol)1-(5′-苯甲酰氧基-β-D-呋喃核糖基)-5-三氟甲基-尿嘧啶-2′，3′-硫羰碳酸酯(實(shí)例Ⅲ)，混合物于130℃(精確！)加熱1.5小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物冷卻，加入10ml甲苯，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至干。該過(guò)程重復(fù)2次以上以除去最后殘余的亞磷酸三乙酯。向仍含有少量甲苯的殘留糊狀結(jié)晶中加入20ml乙醚，將其充分?jǐn)嚢瑁闉V法過(guò)濾，用少量乙醚洗滌并在高真空下經(jīng)Sicapent干燥。濃縮濾液又得到一定數(shù)量的標(biāo)題化合物?？偖a(chǎn)量為1.59g(63%)，為無(wú)色結(jié)晶。母液經(jīng)40g硅膠層析(甲苯∶乙酸乙酯7∶3)，又得到230mg(9%)標(biāo)題化合物。m.p.157℃。
Rf＝0.24(甲苯∶乙酸乙酯7∶3)MS(FAB-)m/e＝381(M-H)-.
IR(KBr)ν＝3434，3181，3065，1703，1462，1327，1280，1147，1120，1098，1043，708cm-1
實(shí)例Ⅴ2′-脫氧-5′-O-(4-甲基苯甲?；?-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷
在氮?dú)饬飨孪蚶鋮s至0℃的593mg(2.00mmol)2′-脫氧-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷(Trifluridin
)的12ml無(wú)水吡啶溶液中，在2小時(shí)內(nèi)滴加290μl(220mmol)對(duì)甲苯酰氯在12ml吡啶中的溶液。
混合物于0℃攪拌15分鐘，然后滴加10ml無(wú)水甲醇以破壞過(guò)量的對(duì)甲苯酰氯。移去冷卻浴，將反應(yīng)混合物在真空下濃縮，殘余物經(jīng)85g硅膠層析(二氯甲烷∶甲醇9∶1)，得到標(biāo)題化合物(71%)，為無(wú)色結(jié)晶。m.p.214℃。
Rf＝0.31(二氯甲烷∶甲醇9∶1)MS(FAB)m/e＝415(M+H)+實(shí)例Ⅵ2′-脫氧-3′-O-(咪唑基-硫代羰基)-5′-O-(4-甲基苯甲?；?-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷
將410mg(0.99mmol)實(shí)例Ⅴ化合物在15ml無(wú)水乙腈中的混懸液與353mg(1.98mmol)1，1′-硫代羰基二咪唑一起反應(yīng)，并在室溫下攪拌25小時(shí)。在真空下不經(jīng)加熱蒸發(fā)溶劑，將殘余物置于由10ml乙酸乙酯、10ml飽和NaCl溶液、5ml飽和NaHCO3溶液和5g冰組成的混合物中進(jìn)行攪拌。分出有機(jī)相，水相用10ml乙酸乙酯萃取。合并的萃取液經(jīng)MgSO4干燥，在真空下蒸發(fā)溶劑，將殘余物與少量乙醚一起研磨。得到474mg(91%)硫代羰基咪唑，為無(wú)色粉末狀物。m.p.87℃。
Rf＝0.30(二氯甲烷THF4∶1)MS(FAB)m/e＝525(M+H)+IR(KBr)ν＝3424，1700，1128cm-1。
制備實(shí)例實(shí)例1α，β-5′-(叔丁基二甲基硅烷基)-2′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷
(端基異構(gòu)體混合物)
在氮?dú)饬骱?0mg(0.15mmol)硫酸銨存在下，將0.54g(3.0mmol)5-(三氟甲基)-尿嘧啶(于80℃干燥24小時(shí))和21.1ml(100mmol)六甲基二硅烷基胺的攪拌混合物于140℃加熱1小時(shí)。使澄清的溶液冷卻，在真空下蒸除揮發(fā)性成分。用5ml無(wú)水甲苯處理殘余的油狀物，在真空下再次蒸除揮發(fā)性成分。將殘余的油狀物溶于40ml無(wú)水乙腈中，加入0.82g(3.0mmol)1-O-乙酰基-5-(叔丁基二甲基硅烷基)-2′，3′-二脫氧核糖〔M.Okabe等，J.Org.Chem.53，4780(1988)〕，將混合物冷卻至-10℃。向該混合物中滴加0.64ml(3.3mmol)新蒸餾的三氟甲磺酸酯三甲基硅烷基，接著于-10℃攪拌30分鐘。反應(yīng)液再于50ml飽和NaHCO3溶液和50ml乙酸乙酯的混合液中攪拌。分出有機(jī)相，水相用25ml乙酸乙酯萃取(2次)。合并的有機(jī)相經(jīng)MgSO4干燥。在真空下蒸發(fā)溶劑，得到1.15g(97%)標(biāo)題化合物，為油狀物(端基異構(gòu)體混合物)，無(wú)需進(jìn)一步純化就可進(jìn)行下一步反應(yīng)。
Rf＝0.83，0.76(乙酸乙酯)
MS(FAB)m/e＝395(M+H)+.
實(shí)例2和實(shí)例3β-2′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷(實(shí)例2)
α-2′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷(實(shí)例3)
將1.15g(3.0mmol)實(shí)例1得到的端基異構(gòu)體混合物和628mg(3.3mmol)對(duì)甲苯磺酸一水合物在8ml甲醇和1.2ml水中的溶液于室溫?cái)嚢?0分鐘。然后加入0.84ml(6.0mmol)三乙胺。在真空下蒸發(fā)溶劑，殘余物經(jīng)130g硅膠層析(甲苯∶乙酸乙酯1∶1)，得到303mg(36%)非極性的β-異構(gòu)體(實(shí)例2)，為無(wú)色結(jié)晶。m.p.165℃。
Rf＝0.46(乙酸乙酯);0.27(二氯甲烷∶甲醇9∶1)HPLC純度＞99.5%MS(DCI，NH3)m/e＝281(M+H)+，298(M+NH4)+IR(KBr)3466，3192，3074，1706，1461，1410，1334，1286，1141，1092，1066，1040，614cm-1.
1H-NMR(250MHz，CD3OD)δ＝1.90-2.50(m，4H，H-2′，H-3′);3.70，3.98(AB，2H，J＝12.5Hz，2.5Hz，H-5′);4.20(m，1H，H-4′);6.01(dd，1H，J＝7.0Hz，1.5Hz，H-1′);8.98(s，1H，H-6).
元素分析 C10H11F3N2O4(280.21)計(jì)算值C 42.87 H 3.96 N 10.00實(shí)測(cè)值C 42.7 H 4.0 N 9.9另外還得到270mg(32%)極性的α-異構(gòu)體(實(shí)例3)，為無(wú)色泡沫狀物。
Rf＝0.36(乙酸乙酯)HPLC純度＝99%MS(DCI，NH3)m/e＝281(M+H)+，298(M+NH4)+IR(KBr)3448，1702，1473，1412，1334，1276，1129，612cm-11H-NMR(250MHz，CD3OD)δ＝1.85-2.00(m，3H，H-2′，H-3′);2.51(m，1H，H-2′);3.54(dd，1H，J＝12.5Hz，6Hz，H-5′);3.66(dd，1H，J＝12.5Hz，3.5Hz，H-5′);4.50(m，1H，H-4′);6.00(dd，1H，J＝6.5Hz，5.5Hz，H-1′);8.00(s，1H，H-6).
另外按如下方法可以制得實(shí)例2化合物。
向25mg(0.45mmol)甲醇鈉的11ml無(wú)水甲醇溶液中加入150mg(0.4mmol)5′-O-苯甲酰基-2′，3′-二脫氧-5-三氟甲基尿嘧啶核苷，混合物于室溫?cái)嚢?.6小時(shí)。然后加入Dowex 50×4離子交換劑(H+型)使反應(yīng)混合物中和，濾除離子交換劑，濾液在真空下蒸發(fā)至干。將其與乙醚/戊烷一起研磨，得到104mg(93%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色結(jié)晶。m.p.165℃。
實(shí)例4β-5′-(2，2-二甲基丙酰氧基甲基)-2′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)尿嘧啶核苷
向冷卻至0℃的由18mg(0.59mmol)氫化鈉(濃度為80%的油分散體)和1ml無(wú)水DMF組成的攪拌混懸液中慢慢地滴加150mg(0.54mmol)β-2′，3′-二脫氧-5-三氟甲基尿嘧啶核苷的10ml無(wú)水DMF溶液。停止放出氫氣后(約2小時(shí))，加入89mg(0.59mmol)新戊酰氧基甲基氯的1ml無(wú)水DMF溶液，移去冷卻浴，接著將混合物于室溫下攪拌70小時(shí)。在真空下蒸除絕大部分的溶劑，小心操作使溫度不超過(guò)35℃。將殘余物溶于10ml水和10ml乙酸乙酯組成的混合液中。分出有機(jī)相，用10ml乙酸乙酯萃取水相(2次)，合并的有機(jī)萃取液經(jīng)MgSO4干燥。在真空下蒸發(fā)溶劑，殘余物經(jīng)24g硅膠層析(甲苯∶乙酸乙酯7∶3)，得到134mg(66%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色泡沫狀物。
Rf＝0.58(乙酸乙酯)MS(DCI，NH3)m/z＝395(M+H)+，412(M+NH4)+IR(KBr)γ＝3530，2983，1737，1685，1473，1288，1133，785cm-1.
實(shí)例5β-5′-(1-乙氧羰基氧基-乙-1-基)-2′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷
按實(shí)例4所述方法，由100mg(0.36mmol)β-2′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷和62mg(0.40mmol)1-氯-1-乙氧基羰氧基乙烷進(jìn)行反應(yīng)，粗產(chǎn)物經(jīng)8g硅膠層析(甲苯∶乙酸乙酯1∶1)后，得到62mg(47%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色結(jié)晶。m.p.114℃。
Rf＝0.33(甲苯∶乙酸乙酯1∶1)MS(DCI，NH3)m/z＝353(C13H15F3N2O6+H)+，370(M+NH4)+IR(KBr)γ3019，1704，1277，1220，1212cm-1.
實(shí)例6β-5-半琥珀?；?2′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷
將100mg(0.36mmol)β-2′，3′-二脫氧-5-三氟甲基尿嘧啶核苷的4ml無(wú)水吡啶溶液與54mg(0.54mmol)琥珀酐一起反應(yīng)，混合物于室溫下攪拌65小時(shí)。在真空下蒸發(fā)溶劑，粗產(chǎn)物經(jīng)30g硅膠層析(二氯甲烷∶甲醇9∶1)，得到96mg(70%)標(biāo)題化合物，為蒼白色固體。
Rf＝0.19(二氯甲烷∶甲醇)MS(FAB)m/z＝381(M+H)+.
實(shí)例75′-O-〔(叔丁氧羰基)-L-亮氨酰)〕2′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷
將150mg(0.54mmol)β-2′，3′-二脫氧-5-三氟甲基尿嘧啶核苷和634mg(1.08mmol)(叔丁氧羰基)-L-亮氨酸-4-硝基苯基酯〔Houben-Weyl 15/2 P.33〕的3ml無(wú)水DMF的攪拌溶液與162μl(1.08mmol)DBU反應(yīng)，并于室溫下攪拌48小時(shí)。然后在真空下蒸除大部分溶劑，將殘余物溶于40ml乙酸乙酯。有機(jī)相依次用10%Na2CO3溶液、水和飽和NaCl溶液各20ml洗滌，并經(jīng)MgSO4干燥。在真空下蒸發(fā)溶劑，殘余物經(jīng)40g硅膠層析(甲苯∶乙酸乙酯1∶1)，得到195mg(73%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色泡沫狀物。
Rf＝0.69(乙酸乙酯)MS(FAB)m/z＝494(M+H)+IR(KBr)γ＝2965，1703，1470，1369，1275，1162，1091，1036cm-1.
實(shí)例85′-O-(L-亮氨酰)-2′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷鹽酸鹽
將冷卻至+5℃的由99mg(0.2mmol)實(shí)例7化合物和1ml無(wú)水二噁烷組成的攪拌混懸液與1ml 4N氯化氫的無(wú)水二噁烷溶液慢慢地反應(yīng)，并于+5℃攪拌30分鐘，于室溫?cái)嚢?小時(shí)。然后加入5ml甲苯，并將混合物在真空下濃縮。重復(fù)該過(guò)程，然后將殘余物與5ml乙醚一起研磨，抽濾，并在高真空下用KOH干燥。得到76mg(96%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色粉末。
Rf＝0.44(乙腈∶水9∶1)MS(FAB)m/z＝394(M+H)+IR(KBr)∶γ＝3433，2965，1701，1472，1413，1276，1132，1090，1038，616cm-1.
實(shí)例92′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷-5′-磷酸酯鈉鹽
將冷卻至-10℃的由100mg(0.36mmol)β-2′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)尿嘧啶核苷(實(shí)例2)和1ml磷酸三甲酯組成的混懸液與67μl(0.71mmol，2當(dāng)量)三氯氧磷反應(yīng)，并于0℃攪拌24小時(shí)。接著將其倒入10ml冰水中，用2N NaOH調(diào)節(jié)pH為7.5。水溶液用二氯甲烷和乙醚萃取，直到水溶液不含有機(jī)物為止，在真空下濃縮至約1ml體積，經(jīng)40ml Diaion HP-20(水)層析。收集含產(chǎn)物的級(jí)份，冷凍干燥，溶于1ml水中，經(jīng)備用的低壓柱〔B型，(310～25)Lichroprep，RP-8(40-63μm)〕層析，用水洗脫。收集含產(chǎn)物的級(jí)份，并冷凍干燥。得到129mg(93%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色的冷凍干燥物。
Rf＝0.33(乙腈∶水8∶2)IR(KBr)γ＝3430，1702，1066，860，545cm-1.
實(shí)例102′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)尿嘧啶核苷-5′-三磷酸酯，三鈉鹽
將冷卻至0℃的150mg(0.54mmol)2′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷(實(shí)例1)的1ml磷酸三甲酯溶液與0.11ml(1.2mmol)三氯氧磷反應(yīng)，并于0℃攪拌18小時(shí)。然后于0℃滴加0.57ml(2.40mmol)三丁基胺和6.7ml(2.70mmol)0.4M雙-(三丁基銨)焦磷酸鹽的DMF溶液〔D.E.Hoard等，J.Am.Chem.Soc.，87 1785(1965)〕。于0℃經(jīng)25分鐘后通過(guò)加入9ml 1M三丁基銨碳酸氫鹽(TEAB)水緩沖液使反應(yīng)間斷，并將pH調(diào)至7.4。水相用二氯甲烷萃取5次，每次50ml，然后加入4ml Dowex 50 W-X4(H+型)將混合物調(diào)至pH1.5。濾去離子交換劑，經(jīng)用0.1M TEAB平衡的澄清濾液在40ml Sephadex A 25柱(Pharmacia)上層析。該柱用0.1M～0.5M TEAB緩沖液進(jìn)行遞增梯度洗脫(每20ml洗脫液，遞增0.1M)。將含產(chǎn)物的級(jí)份在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至干，用少量甲醇處理，再次濃縮至干。該過(guò)程再重復(fù)5次，然后將粗產(chǎn)物的3ml甲醇溶液用3ml(3mmol)1M碘化鈉的丙醇溶液處理，結(jié)果析出三磷酸酯鈉鹽。得到的沉淀用5ml丙酮洗滌3次(離心)，然后在高真空下經(jīng)P4O10(五氧化二磷)干燥。得到169mg(理論值的54%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色固體。
Rf＝0.18(乙腈∶水4∶1)IR(KBr)ν＝3433，1706，1478，1277，1103，997，896，769cm-1。
實(shí)例112′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷-5′-甲基磷酸酯
將冷卻到0℃的100mg(0.36mmol)2′，3′-二脫氧-5-三氟甲基尿嘧啶核苷(實(shí)例1)的1ml磷酸三甲酯溶液與71mg(0.54mmol)甲膦酰二氯反應(yīng)，于-22℃使其靜置28小時(shí)。反應(yīng)混合物再用8ml無(wú)水二氯甲烷處理，將其加到25ml冷水中，并加入1N NaOH溶液將pH調(diào)至8.0。水相用二氯甲烷萃取數(shù)次，然后冷凍干燥。粗產(chǎn)物經(jīng)Diaion HP 20(水)層析，將含產(chǎn)物的級(jí)份冷凍干燥，得到63mg(48%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色冷凍干燥物。
Rf＝0.32(乙腈∶水4∶1)
IR(KBr)γ＝3448，1629，1467，1201，1029，949，808cm-1MS(SIMS)m/z＝369(M+Na)+.
實(shí)例12β-2′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷鈉鹽
向冷卻至0℃的105mg(3.50mmol)氫化鈉(80%油溶液)的5ml無(wú)水THF的攪拌混懸液中滴加β-2′，3′-二脫氧-5-三氟甲基-尿嘧啶核苷的10ml THF溶液。移去冷卻浴，將混合物攪拌直至氣體完全逸出(約10min)。在真空下蒸發(fā)溶劑，殘余物溶于20ml蒸餾水中。水相用10ml乙酸乙酯萃取(3次)，在真空下蒸發(fā)，直至無(wú)殘余的溶劑，通過(guò)微孔膜過(guò)濾器(0.22μ)過(guò)濾，并冷凍干燥。得到971mg(90%)標(biāo)題化合物，為非常易溶于水的無(wú)色冷凍干燥物。
Rf＝0.46(乙酸乙酯)HPLC純度＞99%實(shí)例135′-O-苯甲?；?2′，3′-二脫氧-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷
其他可能的制備方法方法A向120mg預(yù)先氫化過(guò)的鈀炭(10%)在40ml THF(分析純)中的混懸液中一次加入410mg(1.07mmol)實(shí)例Ⅳ化合物，混合物在1個(gè)氫氣壓下于20℃氫化1小時(shí)(如果需要，再加入60mg催化劑，混合物于室溫再催化1小時(shí))。反應(yīng)結(jié)束后(以TLC檢測(cè))，經(jīng)約10g硅藻土濾除催化劑，并用THF洗滌，濾液在真空下濃縮，殘余物經(jīng)25g硅膠層析(甲苯∶乙酸乙酯3∶2)得到304mg(74%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色泡沫狀物，后者從乙醚/戊烷中緩慢地結(jié)晶。m.p.93℃。
Rf＝0.35(甲苯∶乙酸乙酯3∶2)Rf＝0.56(乙酸乙酯)MS(DCI，NH3)m/e＝385(M+H)+，402(M+NH4)+IR(KBr)ν＝3222，3084，1722，1466，1412，1278，1124，1084，1037，713cm-1
方法B將0.92g(2.00mmol)實(shí)例Ⅲ化合物在50ml無(wú)水甲苯中的混懸液與44mg(0.27mmol)α，α′-偶氮二異丁腈和3.90ml(14.50mmol)三-正丁基氫化錫反應(yīng)并加熱回流15分鐘。冷卻后反應(yīng)混合物在真空下濃縮至干，殘余物經(jīng)60g硅膠層析(甲苯∶乙酸乙酯1∶1)。得到494mg(理論值的62%)1-(5-O-苯甲?；?2和3-脫氧-β-D-呋喃核糖基)-5-三氟甲基尿嘧啶的混合物，為無(wú)色粉末狀物。
Rf＝0.46(乙酸乙酯)IR(KBr)ν＝3393，3062，1720，1677，1482，1282，1122，1056，710cm-1將上述產(chǎn)物溶于17ml無(wú)水乙腈中，與429mg(2.40mmol)1，1′-硫代羰基二咪唑反應(yīng)，并于室溫下攪拌20小時(shí)。在真空下蒸發(fā)溶劑，殘余物經(jīng)44g硅膠層析(甲苯∶乙酸乙酯1∶1)。得到417mg(理論值的68%)相應(yīng)的硫代羰基咪唑，為無(wú)色泡沫狀物。
Rf＝0.35(乙酸乙酯)MS(FAB)m/e＝511(M+H)+IR(KBr)ν＝1700，1468，1394，1338，1279，1189，1115，1040，970，752，710cm-1將上述產(chǎn)物懸浮于3ml無(wú)水甲苯中，與4mg(0.02mmol)α，α′-偶氮二異丁腈和293μl(1.09mmol)三正丁基氫化錫反應(yīng)，并加熱回流30分鐘。冷卻后在真空下蒸發(fā)溶劑，殘余物經(jīng)250g硅膠層析(甲苯∶乙酸乙酯1∶1)。得到262mg(理論值的85%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色泡沫狀物。物理常數(shù)與按照方法A所得化合物的物理常數(shù)相同。
實(shí)例142′，3′-二脫氧-5′-O-(4-甲基苯甲?；?-5-(三氟甲基)-尿嘧啶核苷
將347mg(0.66mmol)實(shí)例Ⅵ化合物在15ml無(wú)水甲苯中的混懸液與14mg(0.09mmol)α，α′-偶氮二異丁腈和1.30ml(4.80mmol)三正丁基氫化錫反應(yīng)，并加熱回流30分鐘。冷卻后在真空下將反應(yīng)混合物濃縮至干，殘余物經(jīng)20g硅膠層析(甲苯∶乙酸乙酯3∶2)。得到243mg(理論值的70%)標(biāo)題化合物，為無(wú)色泡沫狀物。
Rf＝0.30(甲苯∶乙酸乙酯3∶2)IR(KBr)ν＝3422，1720，1466，1281，1123，753，616cm-1。
MS(FAB)m/e＝399(M+H)+
權(quán)利要求
1.通式Ⅰ所示的2′，3′-二脫氧-5-三氟甲基尿嘧啶核苷類及其生理上適用的鹽，
其中R1代表氫或羥基保護(hù)基、4-甲基苯甲酰基，或者R1代表有直到18個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的?；?，該?；梢杂婶然我獾娜〈蛘逺1代表由肽化學(xué)中常用的氨基保護(hù)基任意取代的氨基酸，或者R1代表在體內(nèi)能夠分解的酯基，或者R1代表下式基團(tuán)，
其中R2、R3和R4可以相同或不同，并代表氫或堿金屬或堿土金屬原子，n代表整數(shù)1或2，R5代表有直到6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的烷基，該烷基可以由鹵素任意的取代。
2.權(quán)利要求1所述的通式(Ⅰ)化合物及其生理上適用的鹽，其中R1代表氫、叔丁基二甲基硅烷基、三甲基硅烷基、三苯基甲基、苯甲?；?、4-甲基苯甲酰基或乙?；?，或者R1代表有直到16個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的?；?，該?；梢杂婶然我獾娜〈蛘逺1代表亮氨酸(Leu)、纈氨酸(Val)、異亮氨酸(Ile)、苯丙氨酸(Phe)、天冬氨酸(Asp)或谷氨酸(Glu)，在其NH官能團(tuán)上可以由叔丁氧羰基(Boc)或芐氧羰基(Z)任意的取代，或者R1代表在體內(nèi)能夠分解的下述酯基，
或者R1代表下式基團(tuán)，
其中R2、R3和R4可以相同或不同，并代表氫或金屬鈉原子，n代表整數(shù)1或2，R5代表有直到4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，該烷基可以由氯任意的取代。
3.權(quán)利要求1所述的通式(Ⅰ)化合物及其生理上適用的鹽，其中R1代表氫、叔丁基二甲基硅烷基、4-甲基苯甲酰基或苯甲?；蛘逺1代表有直到14個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的?；?，該?；梢杂婶然我獾娜〈?，或者R1代表亮氨酸(Leu)或天冬氨酸(Asp)，在其-NH官能團(tuán)上可以由保護(hù)基Boc任意的取代，或者R1代表在體內(nèi)能夠分解的下述酯基，
或者R1代表下式基團(tuán)，
其中R2、R3和R4可以相同或不同，并代表氫或含金屬鈉原子，n代表整數(shù)1或2，R5代表甲基、乙基或氯甲基。
4.含有1種或多種權(quán)利要求1～3化合物的藥物。
5.含有1種或多種權(quán)利要求1～3化合物的、治療乙型肝炎病毒的藥物。
全文摘要
本發(fā)明公開了2＇，3＇-二脫氧-5-三氟甲基尿嘧啶核苷，它們的制備方法，以及它們作為藥物，尤其是抗肝炎藥物的應(yīng)用。
文檔編號(hào)A61K31/505GK1065462SQ92102448
公開日1992年10月21日 申請(qǐng)日期1992年4月4日 優(yōu)先權(quán)日1991年4月5日
發(fā)明者D·哈比希, R·諾伊曼 申請(qǐng)人:拜爾公司