專利名稱：鉤藤總生物堿的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥用植物有效部位提取和分離方法領(lǐng)域，具體來說是涉及一種鉤藤總生物堿的制備方法。
背景技術(shù)：
鉤藤(Uncaria rhyncchophylla(Miq. ) Jacks)為菌草科植物，以帶鉤莖枝入藥，傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為其具有清熱平肝，熄風(fēng)定驚之功效，用于小兒癲癇及成人血壓偏高，頭暈?zāi)垦５取，F(xiàn)代研究證明，鉤藤總生物堿對(duì)降低血壓、抗血小板聚集、抑制心肌收縮力等方面作用明顯。隨著鉤藤總生物堿的藥理作用的研究深入，其提取方法也越來越受到人們的重視。目前文獻(xiàn)中提取方法主要是大孔樹脂法和離子交換樹脂法。如中國專利200710098441. X，公開了一種從中藥鉤藤提取液中分離鉤藤總生物堿的方法、200710099900. 6公開了一種用離子交換樹脂分離鉤藤總生物堿的方法和200810011900. O公開了一種從鉤藤葉、帶鉤莖枝或全草中提取生物堿有效部位的方法及用途。其主要存在的問題是大孔樹脂法和離子交換樹脂法對(duì)于成分復(fù)雜的中藥提取液來說，樹脂再生困難，加之處理樹脂產(chǎn)生大量酸堿水，導(dǎo)致環(huán)境污染。本發(fā)明人采用酸水滲漉提取，提取物經(jīng)乙醇醇沉后，提取物拌入硅藻土分散處理，丙酮滲漉提取，提取物經(jīng)酸堿處理后，得鉤藤總生物堿。該鉤藤總生物堿具有純度高，吸收好，質(zhì)量穩(wěn)定，整個(gè)過程在常溫進(jìn)行，不需加熱，節(jié)約了能源，減少了加熱導(dǎo)致的溶媒揮散等安全問題，同時(shí)制備方法分離效果佳，工藝簡單，操作方便，成本低廉，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是開發(fā)出一種成本低、工藝簡單、對(duì)環(huán)境無污染、安全性高的鉤藤總生物堿的制備方法。取鉤藤藥材或全草粉碎成粗粉，用酸性水溶液進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，加氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至中性后濃縮成清膏，加入乙醇醇沉，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮成稠膏，加等量硅藻土減壓干燥，粉碎成粗粉，用丙酮進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，減壓回收丙酮，浸膏加稀鹽酸溶液加熱溶解，趁熱濾過，濾液冷卻至室溫，在攪拌下加氨水調(diào)調(diào)至堿性，室溫放置過夜，吸除上清液，沉淀減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，得鉤藤總生物堿。本發(fā)明的鉤藤總生物堿的制備方法，其特征包括以下步驟(I)取鉤藤藥材或全草粉碎成粗粉，用10 20倍O. I % O. 5%的鹽酸溶液進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，加氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至中性后濃縮至相至密度I. 10 I. 20 (800C )的清膏。(2)清膏加入乙醇使醇濃度達(dá)50 60%，充分?jǐn)嚢?，靜止24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，減壓濃縮成稠膏，加等量硅藻土減壓干燥，粉碎成粗粉。(3)粗粉用10 20倍丙酮進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，減壓回收丙酮，得鉤藤總生物堿浸膏。
(4)鉤藤總生物堿浸膏加I 2%鹽酸溶液加熱溶解，趁熱濾過，濾液冷卻至室溫，在攪拌下加氨水調(diào)調(diào)至堿性，室溫放置過夜，吸除上清液，沉淀減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，得鉤藤總生物堿。本發(fā)明中所制備的鉤藤總生物堿，加入適量的輔料，制成各種片劑、膠囊劑和滴丸
坐寸O下面通過有關(guān)具體藥效學(xué)試驗(yàn)對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的闡述。一、對(duì)原發(fā)性高血壓模型動(dòng)物(SHR)的影響I、血壓測(cè)定在穩(wěn)定的環(huán)境中，保持室溫28°C將大鼠置于(38±0.5°C)溫箱中預(yù)熱10分鐘，將大鼠尾穿過壓尾器，平放于傳感器上，適應(yīng)5分鐘向壓尾器充氣加壓，阻斷 尾部血流，待容積脈搏波消失后，緩慢而均勻地放氣，聽到容積脈搏波恢復(fù)有規(guī)律的聲音，此時(shí)的血壓表上指數(shù)即為收縮壓，注意在血壓測(cè)定過程中，動(dòng)作要輕，不要引起動(dòng)物過分激動(dòng)。2、分組、給藥及結(jié)果將購進(jìn)的自發(fā)性高血壓大鼠在新的環(huán)境中喂養(yǎng)一周后測(cè)其血壓。根據(jù)血壓將32只大鼠隨機(jī)分成四組模型組；降壓O號(hào)(北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn))10. 3mg/kg劑量給藥組；鉤藤總生物堿30. O、15. Omg/kg兩個(gè)劑量給藥組；另設(shè)一組空白對(duì)照組(9只)，共計(jì)五個(gè)實(shí)驗(yàn)組。每日灌胃給藥一次，連續(xù)三日，空白對(duì)照組及模型組同時(shí)給同體積蒸餾水10ml/kg。分別于第一次給藥后4小時(shí)及第二、三日給藥后I小時(shí)測(cè)大鼠尾動(dòng)脈血壓(BP)，最后斷關(guān)取血，分離血清，用放免法測(cè)血清中NO、ANP、ALD的含量或活性。見表I、表2。由表中結(jié)果可見，空白對(duì)照組血壓正常、平穩(wěn)；SHR血壓均在22-23Kpa，其BP與空白對(duì)照組比較明顯升高(P <0.001)。給藥后降壓O號(hào)組動(dòng)物BP下降明顯(實(shí)測(cè)值與模型相KP < 0.01、P < O. 001，給藥前后自身變化百分率與模型組比較P < 0.01、P < O. 001)，連續(xù)給藥后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)降壓幅度平均維持在26%左右；鉤藤總生物堿高劑量組給藥后BP下降明顯(實(shí)測(cè)值與模型組比P < O. 05，給藥前后自身變化百分率與模型組比較P < O. 05、P < O. 01)，連續(xù)給藥后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)降壓幅度平均維持在12%左右；低劑量組連續(xù)給藥后也顯示出明顯降壓效果(給藥前后自身變化百分率與模型組比較P < O. 05)。SHR比正常大鼠血漿中醛固酮(ALD)顯著升高(P < O. 05)，心鈉素(ANP)含量有降低趨勢(shì)，一氧化氮(NO)含量有降低趨勢(shì)；降壓O號(hào)組給藥后ALD有降低趨勢(shì)，而ANP和NO無明顯變化；鉤藤總生物堿高劑量給藥后明顯降低ALD含量，但對(duì)NO、ANP影響不明顯。二、對(duì)腎性高血壓模型動(dòng)物(RHR)的影響I、模型制備Mstar大鼠在固定的環(huán)境中飼養(yǎng),5日后測(cè)基礎(chǔ)血壓三次,取平均血壓作為手術(shù)前動(dòng)物正常血壓。然后施二腎一夾手術(shù)，以3%水合氯醛腹腔注射(10ml/kg)麻醉，消毒后，游離左腎動(dòng)脈，用內(nèi)徑O. 2_的銀夾夾閉，使左腎動(dòng)脈部分狹窄，右腎不觸及，逐層縫合皮膚，手術(shù)在10分鐘內(nèi)完成。術(shù)后為了避免感染，腹腔注射青霉素3ml/日(250萬單位/15ml)，連續(xù)7日。第二周開始以1% NaCl浴液代飲用水，第三周起以2% NaCl溶液代飲用水正常喂養(yǎng)，術(shù)后第三、四周測(cè)血壓，觀察血壓變化，待血壓平均升高30mmHg汞柱以上，認(rèn)為模型成功。2、血壓測(cè)定方法同前。3、分組、給藥及結(jié)果術(shù)后第四周根據(jù)血壓升高程度將40只大鼠隨機(jī)分為五組模型組，降壓O號(hào)10. 3mg/kg劑量給藥組，鉤藤總生物堿30. O、15. 0,7. 5mg/kg三個(gè)劑量給藥組。每日灌胃一次，連續(xù)三日，對(duì)照組同時(shí)給同體積蒸餾水10ml/kg。分別于第一次給藥后4小時(shí)、8小時(shí)、12小時(shí)及第二日給藥后I小時(shí)、第三日給藥后th、24小時(shí)測(cè)尾動(dòng)脈血壓。末次測(cè)血壓后將動(dòng)物斷頭取血，分離血清，用放免法測(cè)血清中的ET和AII的活性。見表3、表4。由表中實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見,手術(shù)(造模后)第四周血壓較手術(shù)前升高5Kpa (約30mmHg)視為模型成功。模型組BP —直維持在18Kpa左右；降壓O號(hào)第一次給藥后BP明顯下降(與對(duì)照組比P < O. 05，P < O. 01)，BP下降一直持維到12小時(shí)以上，連續(xù)給藥后血壓下降幅度平均維持在21%左右；鉤藤總生物堿高劑量組給藥后BP降低明顯(與模型對(duì)照組比較P < O. 05)，第一次給藥后12小時(shí)血壓下降與對(duì)照組比具有明顯差異，連續(xù)給藥后血壓下降幅度平均維持在15%左右；中劑量給藥組給藥后BP明顯下降(與對(duì)照組比P < O. 05);低劑量組給藥后血壓也逐漸下降。鉤藤總生物堿給藥后降壓效果明顯，持續(xù)時(shí)間長。降壓O號(hào)和鉤藤總生物堿高劑量給藥組均能使血漿中的AII和ET含量有降低趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。三、連續(xù)多次給藥對(duì)清醒狀態(tài)下正常大鼠血壓的影響取Wistar大鼠50只隨機(jī)分成五組空白對(duì)照組，降壓O號(hào)10. 3mg/kg劑量給藥組，鉤藤總生物堿30. O、15. 0,7. 5mg/kg三個(gè)荊量給藥組。給藥前在穩(wěn)定的環(huán)境中適應(yīng)三天，于大鼠尾動(dòng)脈血壓測(cè)定儀上測(cè)其正常血壓。然后開始給藥，每天一次，連續(xù)給藥十天，空白對(duì)照組給蒸餾水10ml/kg，并分別于第三、七、十天給藥后I小時(shí)測(cè)清醒狀態(tài)下大鼠血壓。結(jié)果見表5。由表5結(jié)果可見，連續(xù)給藥后空白對(duì)照組血壓基本穩(wěn)定，而降壓O號(hào)及鉤藤總生物堿各給藥組，血壓較空白組明顯下降，降壓幅度維持在10%左右。
權(quán)利要求
1.鉤藤總生物堿的制備方法，其特征包括以下步驟 取鉤藤藥材或全草粉碎成粗粉，用酸性水溶液進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，加氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至中性后濃縮成清膏，加入乙醇醇沉，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮成稠膏，加等量硅藻土減壓干燥，粉碎成粗粉，用丙酮進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，減壓回收丙酮，浸膏加稀鹽酸溶液加熱溶解，趁熱濾過，濾液冷卻至室溫，在攪拌下加氨水調(diào)調(diào)至堿性，室溫放置過夜，吸除上清液,沉淀減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，得鉤藤總生物堿。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種鉤藤總生物堿的制備方法，其特征在于，取鉤藤藥材或全草粉碎成粗粉，用10 20倍O. I % O. 5%的鹽酸溶液進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，加氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH至中性后濃縮至相至密度I. 10 I. 20 (800C )的清膏。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種鉤藤總生物堿的制備方法，其特征在于，清膏加入乙醇使醇濃度達(dá)50 60%，充分?jǐn)嚢?，靜止24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇，減壓濃縮成稠膏，加等量娃藻土減壓干燥,粉碎成粗粉。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種鉤藤總生物堿的制備方法，其特征在于，粗粉用10 20倍丙酮進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，減壓回收丙酮，得鉤藤總生物堿浸膏。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種鉤藤總生物堿的制備方法，其特征在于，鉤藤總生物堿浸膏加I 2%鹽酸溶液加熱溶解，趁熱濾過，濾液冷卻至室溫，在攪拌下加氨水調(diào)調(diào)至堿性，室溫放置過夜，吸除上清液，沉淀減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，得鉤藤總生物堿。
全文摘要
本發(fā)明公開一種從中藥鉤藤全草中提取鉤藤總生物堿的方法，屬于中藥領(lǐng)域。該方法包括的技術(shù)方案取鉤藤藥材或全草粉碎成粗粉，用酸性水溶液進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，加氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至中性后濃縮成清膏，加入乙醇醇沉，取上清液，回收乙醇，減壓濃縮成稠膏，加等量硅藻土減壓干燥，粉碎成粗粉，用丙酮進(jìn)行滲漉，收集滲漉液，減壓回收丙酮，浸膏加稀鹽酸溶液加熱溶解，趁熱濾過，濾液冷卻至室溫，在攪拌下加氨水調(diào)調(diào)至堿性，室溫放置過夜，吸除上清液，沉淀減壓干燥，粉碎成細(xì)粉，得鉤藤總生物堿。該方案整個(gè)過程在常溫進(jìn)行，不需加熱，節(jié)約了能源，減少了加熱導(dǎo)致的溶媒揮散等安全問題，同時(shí)制備方法分離效果佳，工藝簡單，操作方便，成本低廉，適合工業(yè)化生產(chǎn)。也克服了現(xiàn)有的多采用樹脂法提取鉤藤總生物堿的弊端。
文檔編號(hào)A61K36/74GK102626453SQ20111026653
公開日2012年8月8日 申請(qǐng)日期2011年9月9日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月9日
發(fā)明者仲崇琳, 楊美林, 許康 申請(qǐng)人:吉林省博時(shí)藥物新技術(shù)開發(fā)有限公司