專利名稱：減少患有缺血性心臟病患者的梗塞范圍的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種減少患有缺血性心臟病患者的梗塞范圍的方法，其中所述的方法使用喹諾酮衍生物作為活性劑。I、喹諾酮類用下面通式(1)所代表的喹諾酮衍生物，以及其鹽是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的(美國(guó)專利4,415,572，在此全部引用為參考文獻(xiàn))
其中R為苯甲酰基，它可任意選擇在苯環(huán)上有低級(jí)烷氧基作為取代基，且喹諾酮結(jié)構(gòu)3和4位上的C-C鍵是單鍵或雙鍵。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)這些喹諾酮是一種影響肌收縮力的口服藥劑，即增強(qiáng)模型系統(tǒng)中的心肌收縮力而對(duì)心率或心肌氧消耗影響很少(Feldman等N.Engl.J.Med.，329149-155(1993))，并用于治療充血性心臟衰竭的病人(美國(guó)專利4,415,572；and Hori等Jpn.Circ.J.，50659-666(1986))。幾項(xiàng)研究表明上述的喹諾酮類能提高血流動(dòng)力學(xué)指數(shù)和充血性心力衰竭病人的運(yùn)動(dòng)能力(Inoue等，HeartVessels，2166-171(1986)；Sasayama等，Heart Vessels，223-28(1986)；和Feldman等，Am.Heart J.，116771-777(1988))。另外，在日本和美國(guó)多個(gè)中心隨機(jī)空白對(duì)照試驗(yàn)均證明這些喹諾酮類能提高充血性心衰病人的生活質(zhì)量并減少死亡的危險(xiǎn)(OPC-8212 Multicenter Research Group，Cardiovasc.Drugs Ther.，4419-425(1990)；Feldman等，Am.J.Cardiol.，681203-1210(1991)；和Feldman等，N.Engl.J.Med.，329149-155(1993))。
有關(guān)這些喹諾酮類影響肌收縮力特性的作用機(jī)理包括減少鉀電流(Iijima等，J.Pharmaool.Exp.Ther.，240657-662(1987))，輕度抑制磷酸二酯酶和增加內(nèi)部鈣電流(Yatami等，J.Cardiovasc.Pharmacd.，13.812-819(1989)；和Taira等，Arzneimittelforschung，34347-355(1984))。但是，喹諾酮類減少死亡率最為有效的劑量(每天60mg)對(duì)血流動(dòng)力學(xué)沒(méi)有或很少起作用，這表明此藥可能是通過(guò)另一種機(jī)理，而不是其增加肌收縮力的作用，來(lái)減少死亡率的(Feldman等，N.Engl.J.Med.，329149-155(1993)；和Packer，N.Engl.J.Med.，329201-202(1993))。
現(xiàn)在還已知上述的喹諾酮類通過(guò)刺激脂多糖的外周血單核細(xì)胞(PBMC)以劑量依賴的方式抑制各種細(xì)胞因子的產(chǎn)生，包括α-腫瘤壞死因子和白介素-6(Maruyama等，Biochem.Biophys.Res.Commcc.，1951264-1271(1993)；和Matsumori等，Circul.，89955-958(1994))。
而且，它們可導(dǎo)致伴有培養(yǎng)基集落形成單位減少的可逆的中性白細(xì)胞減少癥(Feldman等，Am.Heart J.，116771-777(1988)；OFC-8212Multicenter Research Group，Cardiouasc.Drugs.Ther.，4419-425(1990)；Feldman等，Am.J.Cardio1.，681203-1210(1991)；和Feldman等，N.Engl.J.Med.，329149-155(1993))。
另外，發(fā)現(xiàn)上述的喹諾酮類可用于調(diào)節(jié)下垂蛋白(編制細(xì)胞死亡程序)治療癌癥、抑制腫瘤轉(zhuǎn)移和RNA病毒復(fù)制(美國(guó)專利接序申請(qǐng)?zhí)?7/989,028,1993年4月30日申請(qǐng)的，與歐洲專利公開(kāi)號(hào)0552373一致，在此把二者全部引作參考文獻(xiàn)；Nakai等，JPn.J.Cancer Res.，摘要，和Proc.Jpn.Cancer Assoc.，等581頁(yè)(1993)；和Maruyama等，Biochem.Biophgs.Res.Comm.，1951264-1271(1993))。
上面的喹諾酮類也用于抑制DNA病毒復(fù)制，并且當(dāng)與抗-RNA病毒組合物一同使用時(shí)，在抑制RNA病毒復(fù)制方面能產(chǎn)生協(xié)同作用(美國(guó)專利接序申請(qǐng)?zhí)?8/282,707，1994年8月1日申請(qǐng)的；和PCT/US95/09141，1995年7月28日申請(qǐng)的)。
并且，還發(fā)現(xiàn)上述的喹諾酮類可用于以劑量依賴方式抑制哺乳動(dòng)物細(xì)胞中存在的核苷和核堿基的轉(zhuǎn)運(yùn)，例如，腺嘌呤核苷，并用于擴(kuò)大核苷類似物特別是3’-疊氮脫氧胸苷的磷酸化(美國(guó)專利接序申請(qǐng)?zhí)?8/283,707,1994年8月1日申請(qǐng)的；和PCT/US 95/09141，1995年7月28日申請(qǐng)的)。另一方面，只有高濃度(超出治療范圍)的雙嘧啶氨醇(10-100μm)即另一種核苷轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑，可抑制腺嘌呤核苷轉(zhuǎn)運(yùn)(Scholtissec等Biochem.Biophys.Acta，158435-447(1968)；和Plagemann等，J.Membr.Biol.，81255-262(1984))。
雙嘧啶氨醇是通過(guò)阻制腺(嘌呤核)苷轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞而使腺(嘌呤核)苷濃度局部升高(Plagemann等，Biochem.Biophys.Acta，947405-443(1988))。目前已知腺(嘌呤核)苷通過(guò)激活腺苷酸環(huán)化酶或通過(guò)抑制磷酸二酯酶能導(dǎo)致心肌細(xì)胞環(huán)腺苷酸的增加(Fox等Ann.Rev.Biochem.，47655-686(1978)；和Takeya等，Dryg Res.，34364-370(1984))，通過(guò)與細(xì)胞表面膜上的特殊腺(嘌呤核)苷受體結(jié)合擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈(Fox等，Ann.Rev.Biochem.，47655-686(1978))，增加腦血流(Heisted等，Am.J.physiol.，240775-780(1981))，減少α-腫瘤不死因子的產(chǎn)生(Parmely等，J.Jmmunol.，151389-396(1993))，和減少血小板凝集(Dawicki等，Biochem.Pharmacol.，343965-3972(1985))。
一般認(rèn)為由喹諾酮導(dǎo)致的(腺嘌呤核)苷轉(zhuǎn)運(yùn)的抑制是其作用的另一新方面。也即是說(shuō)，通過(guò)抑制腺(嘌呤核)苷轉(zhuǎn)運(yùn)，上述的喹諾酮可增加腺(嘌呤核)苷的血液濃度，這樣解釋了維納啉酮充血性心臟疾病的某些治療作用(Feldman等，N.Engl.J.Med.329149-155(1993)；和Packer，N.Engl.J.Med.，329201-202(1993))或者減少α-腫瘤壞死因子的產(chǎn)生(Marugame等，Biochem.Biophys.Res.Comm.，1951264-1271(1993)；和Matsumori等，Circul.，89955-958(1994))。II.缺血性心臟病雖然慢性心衰和缺血性心衰的病人均可出現(xiàn)心室機(jī)能障礙，但這兩種心臟病的病理生理學(xué)是完全不同的。也即是說(shuō)，對(duì)慢性心衰，由于交感神經(jīng)調(diào)節(jié)的損傷以及血管緊張肽原酶-血管緊張肽和細(xì)胞因子系統(tǒng)的損害降低肌絲對(duì)Ca2+的應(yīng)答。另一方面，對(duì)于缺血性心臟病，細(xì)胞的厭氧代謝產(chǎn)生可逆的和不可逆的細(xì)胞損傷，導(dǎo)致心室機(jī)能障礙。厭氧心肌代謝主要?dú)w因于冠脈血流調(diào)節(jié)的損傷。
已知喹諾酮能增加缺血區(qū)域內(nèi)的冠狀動(dòng)脈血流，這或許是由于增加了主動(dòng)脈血壓和冠狀動(dòng)脈擴(kuò)張功能(Maruyama等，J.Cardiovasc.Pharmacol.，8161-169(1986))。然而，主動(dòng)脈血壓的增加可引起冠狀動(dòng)脈血流增加，且可導(dǎo)致需氧量增多。這會(huì)減弱冠狀血管舒張的有益效果。
但是，也發(fā)現(xiàn)喹諾酮在不改變心率或收縮壓的情況下能改善運(yùn)動(dòng)所致的缺血，和阻止缺血的進(jìn)一步發(fā)展(Kinoshita等，Respir.Circ.，361199-1203(1988))。雖然冠狀動(dòng)脈血流的增加暗示了心肌缺血的減輕，由于心肌缺血的程度是血流依賴性的，故梗塞范圍不是由冠狀血管舒張的能力所決定的。這是因?yàn)樵谛募∪毖^(guò)程中冠狀動(dòng)脈是完全閉合的。心肌梗塞的進(jìn)展歸因于ATP耗盡的速度，和缺血過(guò)程中的側(cè)支血液的范圍，和血小板與中性白細(xì)胞的活性、Ca+2和兒萘酚胺超載，以及氧自由基的生成。因此，由于冠狀血管舒張而致的心肌缺血減弱不一定表示梗塞范圍局限。
還發(fā)現(xiàn)喹諾酮能改善冠狀動(dòng)脈疾病患者運(yùn)動(dòng)過(guò)程中的ST段壓低(Kinoshita等，見(jiàn)上所述)。心電圖上ST-T水平的變化緣于細(xì)內(nèi)外的Ca2+、K+、H+和Na+的平衡，心臟搏動(dòng)、心室壁運(yùn)動(dòng)和缺血的出現(xiàn)(Noble等Cardiovasc.Res.，1213-17(1978))。因此，那并不表示喹諾酮能改善心肌缺血。即使由于喹諾酮引起冠狀血管舒張而改善缺血范圍內(nèi)的心肌功能，缺血的減少并不表示梗塞范圍的減少。這是因?yàn)椴灰蕾嚩喙跔顟B(tài)動(dòng)脈血流的心肌壞死的病理的緣故。
本發(fā)明中，意外地發(fā)現(xiàn)喹諾酮能減輕心肌缺血和減少硬塞范圍。令人驚訝的是喹諾酮屬于增強(qiáng)肌收縮力劑，而眾所周知增強(qiáng)肌收縮力劑會(huì)增大缺血的損害(Blaiklogk等，J.Mol.Cell.Cardiol.，10499-509(1987))。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種減少患有缺血性心臟病的患者梗塞范圍的方法。
從下文提供的本發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明書中可以發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的其它目的，通過(guò)使用下面通式(1)所代表的喹諾酮衍生物，及其鹽可以看出
其中R為苯甲?；?，它任意選擇在苯環(huán)上有低級(jí)烷氧基作為取代基，且喹諾酮結(jié)構(gòu)3和4位上的C-C鍵為單鍵或雙鍵。
在通式(1)中，在苯環(huán)上可有低級(jí)烷氧基作為取代基的苯甲?；ㄈ芜x1至3直鏈或支鏈C1-6烷氧基取代苯環(huán)的苯甲?；?，如苯甲?；?、2-甲氧苯甲酰基、3-甲氧苯甲?；?-甲氧苯甲?；?、2-乙氧苯甲?；?、3-乙氧苯甲?；?、4-乙氧苯甲酰基、4-異丁氧苯甲酰基、4-己氧苯甲?；?，4-二甲氧苯甲酰基、3，4-二乙氧苯甲?；?，4，5-三甲氧苯甲?；?、2，5-二甲氧苯甲?；?，等。
本發(fā)明的活性成分化合物(1)中最佳優(yōu)選為3，4-二氫-6-[4-(3，4-二甲氧苯甲?；?-1-哌嗪基]-2(1氫)-喹啉，如維納啉酮。
上述的喹諾酮容易形成常用酸的一種鹽。這種酸，可以是已提及的無(wú)機(jī)酸，例如硫酸、硝酸、鹽酸和氫溴酸；和有機(jī)酸，如醋酸、對(duì)甲苯磺酸、乙烷磺酸、草酸、馬來(lái)酸(順丁烯二酸)、富馬酸(反丁烯二酸)、檸檬酸、琥珀酸和苯甲酸。這些鹽可以用作本發(fā)明的活性劑，正如總結(jié)構(gòu)式(1)的自由化合物。
結(jié)構(gòu)式(1)的化合物及其鹽通?？膳渲瞥沙Ｓ玫乃巹W(xué)制制。使用常用的填充物、補(bǔ)充劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、表面活性劑、潤(rùn)滑劑以及類似稀釋劑或賦形劑制備這種制劑。根據(jù)治療的目的不同，這些藥學(xué)制劑可以有不同選擇的劑型，其典型的例子為片劑、丸劑、粉末、溶液、懸浮劑、乳劑、顆粒劑、膠囊、栓劑、注射劑(溶液、懸浮液等)和滴眼液。
對(duì)于制造片劑，可以使用本領(lǐng)域迄今眾所周知的各種載體。因而，其使用包括，例如，賦形劑如乳糖、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、淀粉、碳酸鈣、白陶土、結(jié)晶纖維素和硅酸；粘合劑如水、乙醇、丙醇、單糖漿、葡萄糖溶液、淀粉溶液、明膠溶液、羧甲基纖維素、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀和聚乙烯吡咯烷酮；崩解劑如干淀粉、藻酸鈉、粉末狀瓊脂、粉末狀昆布多糖、碳酸氫鈉、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯、月桂基硫酸鈉、硬脂酸單酸甘油酯、淀粉和乳糖；崩解抑制劑如蔗糖、硬脂糖、可可脂和氫化油；吸收促進(jìn)劑如季銨堿和月桂基硫酸鈉；濕潤(rùn)劑如甘油和淀粉；吸附劑如淀粉、乳糖、白陶土、膨脹潤(rùn)土和膠態(tài)硅石；以及潤(rùn)滑劑如精制滑石、硬脂酸鹽、粉末狀硼酸和聚乙二醇。需要時(shí)，片劑還可使用常用的包衣，如糖衣片，明膠衣片，腸衣片、涂膜片，或雙包衣片或多層片。
對(duì)于制造丸劑，可以使用本領(lǐng)域眾所周知的各種載體。實(shí)例有、賦形劑如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、硬化菜油、白陶土和滑石；結(jié)合劑如粉末狀阿拉伯樹(shù)膠、粉末狀黃蓍膠、明膠和乙醇；以及崩解劑如昆布多糖和瓊脂。
對(duì)于制造栓劑，可以使用已知的各種載體。例如，可以是上述的聚乙二醇、可可脂、高級(jí)醇、高級(jí)醇酯、明膠和半合成單酸甘油酯。
在制備注射劑時(shí)，優(yōu)選經(jīng)滅菌且與血液等滲的溶液或懸浮液，為了制備這種劑型，可以使用本領(lǐng)域常用的所有稀釋劑。例如，可用水、乙醇、丙烯乙二醇、乙氧基異硬脂基醇、聚氧基異硬脂基醇和聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯。在此情況下，藥學(xué)制劑可包括數(shù)量足以形成等滲溶液的氯化鈉、葡萄糖或甘油。也有可能加入常用的加溶劑、緩沖液、潤(rùn)膚劑或局麻劑等。
而且，需要時(shí)，本藥劑學(xué)制劑可包含著色劑、防腐劑、芳香劑、增香劑、甜味劑等，以及其它藥物。
本發(fā)明所使用的這些藥劑學(xué)制劑中的活性成分化合物的比例并不是關(guān)鍵的，可以在較寬的范圍內(nèi)適當(dāng)?shù)剡x擇。但是一般地，建議可以在約1.0至70％wt的范圍內(nèi)選擇此比例，優(yōu)選約1.0至約30％wt。
本發(fā)明的藥劑學(xué)制劑的使用方法也不是關(guān)鍵的，但它是依據(jù)劑型，患者年齡、性別和其它因素，以及所治疾病的輕重而選擇的。因此，例如當(dāng)所提供的劑型為片劑、丸劑、溶液、懸浮劑、乳劑、顆粒劑或膠囊時(shí)，本制劑為口服使用。注射液為靜脈內(nèi)給藥，或單獨(dú)使用或者與用于非腸道注射的常用液體包括葡萄糖、氨基酸等混合使用。如需要，這些溶液也可按肌內(nèi)、皮內(nèi)、皮下或腹膜內(nèi)的途徑給藥。栓劑為直腸給藥，滴眼液是向眼中滴洗液。
由于上述藥學(xué)制劑的用量是依據(jù)給藥方法、患者的年齡、性別和其它因素、疾病的輕重等而決定，通常建議每天每公斤體重給予約0.5至30mg活性成分，即化合物(1)。包含在每個(gè)劑量單位中的活性成分的數(shù)量約為10至1000mg。劑型實(shí)例13，4-二氫-6-[4-(3，4-二甲氧苯甲?；?-1-哌嗪基]-2(1氫)-喹啉 150gAvicel(商標(biāo)，Asahi Chemical Indutry，Co.，Ltd)40g玉米淀粉 30g硬脂酸鎂 2g羥丙基甲基纖維素 10g聚乙二醇6000 3g蓖麻油40g甲醇 40g將上面的活性成分Avicel、玉米淀粉和硬脂酸鎂混合并一同研磨，用半徑為10mm的糖衣丸沖壓機(jī)將所得的混合物壓模。這樣得到的片劑被一層膜包衣組合物包著，這種組合物包括形成涂膜片劑的羥丙基甲基纖維素、聚乙二醇6000、蓖麻油和甲醇。劑型實(shí)例23，4-二氫-6-[4-(3，4-二甲氧苯甲?；?-1-哌嗪基]-2(1氫)-喹啉150g檸檬酸 1g乳糖33.5g磷酸二鈣70gPluronic F-68 30g月桂基硫酸鈉15g聚乙烯吡咯烷酮 15g聚乙二醇(Carbowax 1500) 4.5g聚乙二醇(Carbowax 6000) 45g玉米淀粉30g干燥月桂基硫酸鈉3g干燥硬脂酸鎂3g甲醇 適量將上面的活性成分檸檬酸、乳糖、磷酸二鈣、Pluronic F-68和月桂基硫酸鈉混合。
用60孔篩選粒后，用含聚乙烯吡咯烷酮、Carbowax 1500和Carbowax 6000的乙醇溶液經(jīng)濕法使混合物粒化。需要時(shí)，加入乙醇以使粉末形成糊狀塊。然后，加入玉米淀粉，繼續(xù)混和直至形成均一的顆粒。然后將混合物通過(guò)一個(gè)10孔篩，放在盤中并置于保護(hù)100℃的烤箱中干燥12-14小時(shí)。將干燥的顆粒徑16孔篩篩濾，然后加入干燥月桂基硫酸鈉和干燥硬脂酸鎂，混和后，將混合物壓成所需大小并用制片機(jī)使成形。
將上述的藥心用涂劑處理并用滑石覆蓋以避免吸潮，然后制備內(nèi)涂層。重復(fù)使用涂劑包衣數(shù)次足以用作內(nèi)服使用。通過(guò)使用更深一層的內(nèi)涂層和光滑包衣使片劑變得完全圓滑。使用著色劑直至得到所需的顏色。干燥后，包衣片被磨光成均一光滑的片劑。
下面的實(shí)施例僅供舉例說(shuō)明本發(fā)明的目的，決不是要限定本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1維納啉酮對(duì)血液中腺苷濃度的影響靜脈內(nèi)給予30mg/kg的戊巴比妥鈉使重量為15-20kg的雜種狗麻醉。然后，給動(dòng)物的氣管插管，并用混有氧氣的室內(nèi)氣給動(dòng)物換氣。接著，經(jīng)過(guò)左側(cè)第五肋間隙打開(kāi)胸腔，其心臟懸浮在心包支架中。給每只動(dòng)物的左前降支冠狀動(dòng)脈(LAD)插套管，并通過(guò)體外旁通管經(jīng)左側(cè)頸動(dòng)脈使其充滿血液。
在冠狀動(dòng)脈套管頂端監(jiān)視冠狀動(dòng)脈灌流壓(CPP)。
用系在旁通管上的電磁流動(dòng)探針測(cè)定灌流區(qū)域的冠狀動(dòng)脈血流(CBF)。
將一小而短的收集管(直徑1.0mm和長(zhǎng)7.0cm)插入灌流區(qū)域中央的小冠狀靜脈中，以取冠狀血液的樣。將排出的靜脈血收集在與左心房在同一高度的池中，并使其返回頸靜脈。
用酶測(cè)定法(Bergmeyer，Methods of EnzymaticAnalysis，Academic Press，New York(1963)，第266-270頁(yè))測(cè)定血液中的乳酸濃度，計(jì)算乳酸浸出率，根據(jù)增加100倍且被動(dòng)脈乳酸濃度分開(kāi)的冠狀動(dòng)靜脈的乳酸濃度的不同來(lái)計(jì)算。
為監(jiān)視狗的狀況，用AP-641G血壓放大器(Nihon Koden)測(cè)量其血壓，對(duì)全身的血液取樣用ABL300氣體分析儀(Radiometer，Copenhagen)分析，包括PH值和氧分壓。
用一咬合器使灌流管產(chǎn)生一定量的狹窄，限定狹窄的程度為使冠狀動(dòng)脈血流減少至對(duì)照血流的33％和60％。此過(guò)程之后，合緊此咬合器產(chǎn)生穩(wěn)定的灌流減少共10分鐘，在開(kāi)始夾緊冠狀動(dòng)脈泵后20分鐘進(jìn)行各變量的測(cè)定。
上述測(cè)定后，將維納啉酮的賦形劑(1.0％(V/V)二基亞砜，DMSO)注入左前降支冠狀動(dòng)脈中5分鐘，測(cè)定上述所有的血流動(dòng)力學(xué)和代謝參數(shù)。
如此，使用輸注泵將0.54mg/ml維納啉酮注入左前降支冠狀動(dòng)脈，注入速率為0.2-0.5ml/min以便達(dá)到15μg/ml。注入后5分鐘和10分鐘再次測(cè)定上述所有的血流動(dòng)力學(xué)和代謝參數(shù)。
通過(guò)將1.0ml血吸入一注射器中測(cè)定腺苷的血液濃度，此注射器含有0.5ml的0.02％(w/v)雙嘧啶氨醇和100μl的500mM依地酸中的0.1mg/ml 2’-脫氧助間型霉素的溶液，以阻止血紅細(xì)胞攝取腺苷和腺苷的降解。離心過(guò)濾后(3000xg)，收集上清液并用放射免疫法測(cè)定其腺苷濃度。特別地，用含40mg琥珀酸酐和0.4mg三乙胺的100μl二噁烷使100μl血漿中的腺苷琥珀一?；Ｔ?℃孵育20分鐘后，用100μl稀釋的抗腺苷血清(Yamasa-Shyoyu，Chiba，Japan)和100μl的0.5pmol腺苷2’，3’-氧-二琥珀酰 -3[125I]碘酪氨酸甲基酯稀釋此混合物。將混合物置于冷水浴(4℃)中18小時(shí)，然后加入500μl第二抗體溶液(山羊抗兔Ig G)抗血清。于4℃溫育60分鐘后，通過(guò)以3000rpm(2,500xg)于4℃離心過(guò)濾20分鐘去除未反應(yīng)的物質(zhì)。用r計(jì)算器計(jì)算留在管中的放射活性。據(jù)報(bào)道在這種血液取樣過(guò)程中的腺苷降解可以忽略不計(jì)(Yamane，J.Immunol.，12501-519(1991)；Sato等，Ann.Biochem.，121409-420(1982)；Hori等，Am.J.Physiol.，25014509-14518(1986)；和Kitakaze等，Circ.Res.，60631-630(1987))。使用特殊抗體，測(cè)定5.0pmol/ml如此低的腺苷此方法也很敏感。觀察到內(nèi)測(cè)定和間測(cè)定的可變系數(shù)分別為1.3-3.1％和4.1-4.9％。這種用于腺苷測(cè)定的敏感放免測(cè)定法不需去除蛋白，它通常用在腺苷的高壓液相層析測(cè)定中。一只代表性狗的結(jié)果如下表1所示。
表1時(shí)間(分)冠狀動(dòng)脈血流(ml/min)乳酸濃度(mg/dl) 腺苷濃度(pmol/ml)021 16.4 9.3灌流減少開(kāi)始20 12 17.1 15.0二基亞砜25 12 17.0 14.0維納啉酮30 12 16.7 23.8維納啉酮35 12 16.7 24.2如上表1所示，當(dāng)冠狀動(dòng)脈灌流壓從96降至53mmHg，冠狀動(dòng)脈血流則減至基線血流的60％，冠狀靜脈血中的腺苷濃度增高了。另一方面，由于整個(gè)研究過(guò)程中冠狀動(dòng)脈灌流壓減少，冠狀動(dòng)脈血中的乳酸濃度(19.5mg/dl)和腺苷濃度(7.2pmol/ml)并不改變。此后，冠狀動(dòng)脈血流保持恒定。冠狀動(dòng)脈灌流減小過(guò)程中的二基亞砜的注入并不引起冠狀動(dòng)脈灌流壓或冠狀靜脈血中的乳酸和腺苷濃度的任何改變。
但是，如上表1所示，在注入維納啉酮過(guò)程中，盡管冠狀靜脈血中的冠狀血流和乳酸濃度無(wú)改變，而冠狀靜脈血中的腺苷濃度升高了。雖然，由于腺苷的冠狀血管舒張作用冠狀動(dòng)脈灌流壓降低了(從53至51mmHg)。這些結(jié)果表明維納啉酮有提高缺血心肌的腺苷釋放的作用。
實(shí)施例2維納啉酮對(duì)冠狀動(dòng)脈血流的影響用咬合器夾在上述狗的體外旁通管上，減小冠狀灌流壓以使冠狀動(dòng)脈血流減至對(duì)照的冠狀動(dòng)脈血流的60％。測(cè)定低冠狀動(dòng)脈灌流壓后，調(diào)節(jié)咬合器使冠狀動(dòng)脈灌流壓保持恒定在低水平。開(kāi)始灌流減少10分鐘后測(cè)定上述所有血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)，以及冠狀動(dòng)脈和靜脈血的代謝參數(shù)。這些測(cè)量之后，將維納啉酮的賦形劑(1.0％(v/v)二基亞砜DMSO)注入左前降支冠狀動(dòng)脈，注入后5分鐘測(cè)定上述所有的血流動(dòng)力學(xué)和代謝參數(shù)。接著，用一輸注泵，將0.54mg/ml維納啉酮注入左前降支冠狀動(dòng)脈，注入速率為0.2-0.5ml/分，以便達(dá)到15μg/ml。注入后5分鐘和10分鐘再次測(cè)定所有血流動(dòng)力學(xué)和代謝參數(shù)。一只代表性狗的結(jié)果如下表2所示。
表2乳酸濃度(mg/dl)時(shí)間(分)冠狀血流冠狀靜脈血冠狀動(dòng)脈血(ml/分)0 20 10.6 13.1灌流減小開(kāi)始10 12 13.8 13.1二基亞砜15 12 14.0 12.9維納啉酮20 13 11.5 13.2維納啉酮25 14 10.8 13.2如上表2所示，當(dāng)冠狀動(dòng)脈灌流壓狀93減至59mmHg時(shí)，冠狀動(dòng)脈血流減至基線血流的60％，冠狀靜脈血的乳酸濃度增加了，但冠狀動(dòng)脈血中的乳酸濃度無(wú)變化。此后，冠狀動(dòng)脈灌流壓保持恒定。二基亞砜不改變冠狀動(dòng)脈血流或冠狀動(dòng)脈血的乳酸濃度。但是，維納啉酮增加冠狀動(dòng)脈血流，并減少冠狀靜脈血的乳酸濃度。這些結(jié)果表明維納啉酮能增加缺血心肌的冠狀動(dòng)脈血流，例如冠狀血管舒張，并減少缺血的嚴(yán)重性。
實(shí)施例3維納啉酮對(duì)梗塞范圍的影響用腺苷灌注可顯著限定梗塞范圍(Olafsson，Circ.，761135-1145(1987))，如上面實(shí)施例1所述，維納啉酮能增加腺苷的血液濃度。因此，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以確定維納啉酮是否也能引起梗塞范圍減小。
更為具體地，分離上述狗的左前降支冠狀動(dòng)脈并將一條潮濕臍帶經(jīng)繞冠狀動(dòng)脈管以形成閉塞。通過(guò)將臍帶放進(jìn)一根小塑料管并給塑料管施壓完成冠狀動(dòng)脈閉塞。為了測(cè)定局部血流，將導(dǎo)管插入左心房以便微球體注射。
用微球體技術(shù)測(cè)定局部冠狀動(dòng)脈血流，它使用由以不同的穩(wěn)定重元素標(biāo)記的惰性塑料組成的無(wú)放射活性的微球體(S ekisui Plaztic Co.，Ltd.，Tokyo，Japan)，如Mori等，Am.，J.Physiol.，263141946-141957(1992)所述。
更為特別地，使用平均直徑為15μm以溴或鋯標(biāo)記的微球體。溴的特別重力為1.34，鋯為1.36。微球體懸浮在含0.01％(v/v)吐溫80的等滲鹽水中以防凝聚。注射前，將微球體超聲處理5分鐘，接著立即渦旋5分鐘。將1.0ml微球體懸浮液(2-4×106球體)注入左心房，然后注入5.0ml溫(37℃)鹽水。冠狀動(dòng)脈閉塞開(kāi)始后80分鐘給予微球體。給予微球體之前，以8.0ml/分的不變速率從股動(dòng)脈收集參比血流樣本2分鐘。用PW1480波長(zhǎng)分散光譜計(jì)(Phillips Co.，Lte.，Almelo，The Netherlands)測(cè)定穩(wěn)定重元素的X線螢光。當(dāng)微球體被原發(fā)X線光束照射時(shí)，電子落回到較低的軌道并發(fā)出帶有每個(gè)元素的特征性X線熒光能量含量的可測(cè)能量。因此，可以鑒別單一混合物中數(shù)種標(biāo)記的球體的X線熒光。根據(jù)下面公式計(jì)算局部冠狀動(dòng)脈血流時(shí)間流動(dòng)＝(組織計(jì)數(shù))×(參比流動(dòng))/(參比計(jì)數(shù))，且表示為ml/分/克凈重。
作為對(duì)照，血流動(dòng)力穩(wěn)定20分鐘后，將左前降支冠狀動(dòng)脈閉塞90分鐘井再灌流6小時(shí)。使用一種灌注泵，冠狀動(dòng)脈閉塞前20分鐘，和冠狀動(dòng)脈閉塞90分鐘后1小時(shí)的再灌流過(guò)程中，以0.2-0.5ml/分的灌流速率灌流0.90mg/ml維納啉酮，以便達(dá)到15μg/ml。
再灌流6小時(shí)后，當(dāng)左前降支冠狀動(dòng)脈再閉塞并用自身血液灌流時(shí)，將偶氮藍(lán)染料注入全身靜脈中以確定心臟解剖的危險(xiǎn)區(qū)域和非缺血區(qū)域。然后立即摘除心臟，切片成寬度為6-7mm的連續(xù)橫向切片。非缺血區(qū)域以藍(lán)染色鑒別，將缺血區(qū)域放在0.1M磷酸緩沖液(PH7.4)的1.0％(w/v)2，3，5-氯化三苯基四唑(TTC，Sigma Chemical Co.)中于37℃溫育20-30分鐘。TTC使非梗塞心肌染成磚紅色，表明有甲析出，這是可見(jiàn)組織中的脫氫酶使TTC減少的結(jié)果。梗塞范圍以危險(xiǎn)區(qū)域的面積百分比計(jì)算。結(jié)果如表3所示。
表3治療 側(cè)支血流危險(xiǎn)區(qū)域(％)梗塞范圍(％)(ml/分/100克)二基亞砜7.2±1.1 40.2±2.3 43.5±3.2(n＝5)維納啉酮7.8±1.3 41.1±2.4 6.9±3.9(n＝3)維納啉酮6.9±1.8 40.9±3.8 35.0±4.3(n＝5)鹽水 8.2±2.0 41.8±3.3 45.0±4.2(n＝5)8-磺苯基萘堿7.2±1.7 38.9±2.1 48.1±4.5(n＝5)如表3所述，盡管缺血過(guò)程中的側(cè)支血流和二基亞砜組與維納啉酮組的危險(xiǎn)區(qū)域沒(méi)有顯著性差異，而給予維納啉酮能顯著減少梗塞范圍。
在給用維納啉酮治療的狗的冠狀動(dòng)脈內(nèi)灌注25μg/kg/分的8-磺苯基萘堿后20分鐘，維納啉酮的這種限制梗塞范圍的作用則完全消失了。8-磺苯基萘堿是一種腺苷受體拮抗劑。因而，通過(guò)增加缺血心臟的腺苷釋放可以介導(dǎo)維納啉酮的限制梗塞范圍的作用。
另一方面，當(dāng)冠狀動(dòng)脈閉塞前20分鐘，和冠狀動(dòng)脈閉塞90分鐘后的1小時(shí)再灌流過(guò)程中，以0.2-0.4ml/分的灌注速率灌注10μg/kg/分的核苷轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑雙嘧啶氨醇時(shí)，發(fā)現(xiàn)梗塞范圍顯著地減小。
上述結(jié)果清楚地表明，影響肌收縮力劑維納啉酮意外且顯著減小梗塞范圍。
已知雙嘧啶氨醇增加缺血心臟的腺苷釋放，減少梗塞范圍較維納啉酮少。雖然，和維納啉酮一樣雙嘧啶氨醇是一種腺苷核苷轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑，這些結(jié)果似乎表示維納啉酮和雙嘧啶氨醇的作用部位和組織親和性是不同的，這可解釋未預(yù)料的限定梗塞范圍作用的效價(jià)不同。
由于本發(fā)明已詳細(xì)并根據(jù)特別的實(shí)例進(jìn)行了說(shuō)明。顯然對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在沒(méi)有脫離本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和范圍的情況下可以對(duì)其作不同的變化和改進(jìn)。
權(quán)利要求
1 一種以結(jié)構(gòu)式(1)所代表的喹諾酮衍生物或其藥劑上可接受的鹽用于制備減小患有缺血性心臟病患者的梗塞范圍的藥劑。
其中R的苯甲?；?，它可任意選擇在苯環(huán)上有低級(jí)烷氧基作為取代基，且喹諾酮結(jié)構(gòu)3和4位上的C-C鍵是單鍵或雙鍵。
2 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中結(jié)構(gòu)式(1)中的R為在苯環(huán)上可以選擇1-3直鏈或支鏈C1-6烷氧基的苯甲?；?br> 3 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其中所述的喹諾酮的3，4-二氫-6-[4(3，4-二甲氧苯甲酰基)-1-哌嗪基]-2(1氫)-喹啉或其藥劑上可接受的鹽。
4 一種用于減小患有缺血性心臟病患者的梗塞范圍的藥物組合物，它包括藥學(xué)有效量的權(quán)利要求1所述的結(jié)構(gòu)式(1)所代表的喹諾酮衍生物，或其藥學(xué)上可接受的鹽和稀釋劑或賦形劑。
5 根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其中結(jié)構(gòu)式(1)中的R為在苯環(huán)上可以選擇含1-3直鏈或支鏈C1-6烷氧基的苯甲酰基。
6 根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥組合物，其中所述的喹諾酮為3，4-二氫-6-[4-(3，4-二甲氧苯甲?；?-1-哌嗪]-2(1氫)-喹啉或其藥劑上可接受的鹽。
7 權(quán)利要求1所述的結(jié)構(gòu)式(1)所代表的喹諾酮衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽，用于減小患有缺血性心臟病患者的梗塞范圍。
8 根據(jù)權(quán)利要求7所述的喹諾酮衍生物，其中結(jié)構(gòu)式(1)中的R為在苯環(huán)上可以任意選擇含1-3直鏈或支鏈C1-6烷氧基的苯甲酰基。
9 根據(jù)權(quán)利要求7所述的喹諾酮衍生物，它是3，4-二氫-6-[4-(3，4-二甲氧苯甲?；?-1-哌嗪基]-2(1氫)-喹啉或其藥劑上可接受的鹽。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種用于減小患有缺血性心臟病的患者的梗塞范圍的方法，其中所述的方法使用喹諾酮衍生物作為活性劑。
文檔編號(hào)A61P9/10GK1157718SQ9612135
公開(kāi)日1997年8月27日 申請(qǐng)日期1996年12月12日 優(yōu)先權(quán)日1995年12月12日
發(fā)明者北風(fēng)政史 申請(qǐng)人:大制藥株式會(huì)社