專利名稱：一種絲素蛋白微載體及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種高分子微載體及其制備方法，特別涉及一種采用蠶絲絲素為主要 原料，并載有水溶性藥物的絲素蛋白微載體及其制備方法，屬生物醫(yī)學材料技術領域。
背景技術：
高分子微球具有其它材料所不具備的特殊功能，是當前的研究熱點之一。微球用 途廣泛，可用于藥物載體、酶和細胞的固定化、生物活性物質的分離純化和細胞培養(yǎng)載體等 方面，其中將微球作為細胞生長、增殖載體(微載體)的研究逐漸受到人們的關注。微載體是 指直徑在60 250 μ m，用于貼壁依賴型細胞生長的微珠，其巨大的比表面積可增大細胞 培養(yǎng)面積，實現(xiàn)大規(guī)模的細胞培養(yǎng)。此外，利用微載體進行細胞培養(yǎng)，可用簡單的顯微鏡觀 察細胞在微球表面的生長情況，并簡化了細胞生長各種環(huán)境因素的檢測和檢控，同時可高 效利用培養(yǎng)基，并兼有單層培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)的優(yōu)勢，是一種先進的細胞培養(yǎng)技術。早期微載體多采用合成聚合物制成，如聚羥乙基丙烯酸甲酯、葡聚糖、聚苯乙烯 等。合成聚合物制備的微載體重復性和力學性能較好，但缺乏細胞識別位點，影響細胞在其 表面的黏附、生長。因此，生物相容性好、價格低廉的天然高聚物逐漸成為微載體原料的首 選。目前，常用的有膠原、明膠、纖維素、甲殼質及其衍生物以及海藻酸鹽等。蠶絲絲素蛋白 作為一種天然高聚物，具有優(yōu)良的生物學性能及一定的生物可降解性，是較理想的制備微 載體的原料。生長因子是一種可刺激細胞生長和增殖的細胞外多肽信號分子。將生長因子裝載 到生物材料上可明顯促進細胞的生長和增殖，是生物醫(yī)學領域的研究熱點之一。然而生長 因子半衰期短，極易失活，因此如何在制備微球過程中保持藥物活性仍然有待于進一步探 討。載有生長因子的芯-殼結構絲素微載體具有其他材料所沒有的優(yōu)點，是一種具有發(fā)展 潛力的新型細胞微載體。在本發(fā)明作出之前，中國發(fā)明專利(CN 1556202A)公開了一種動物細胞培養(yǎng)用 微載體及其制備方法，該發(fā)明利用脫脂棉銅氨溶液制備微球，以硫酸為致孔劑，用2-二 乙氨基氯乙烷鹽酸鹽修飾微球表面。這種多孔微載體具有非常大的比表面積，為細胞 提供了生長空間。在中國發(fā)明專利(CN 1641017A) “一種用于大規(guī)模培養(yǎng)細胞的微載 體”中，采用明膠和殼聚糖溶液為原料制備實心與多孔微載體。該微載體可以支持細胞 生長并能長其月維持細胞功能。在“Gas foamed open porous biodegradable polymeric microspheres" [Biomaterials, 2006，27(2) : 152-159]文獻中，報道了以碳酸氫銨為致 孔劑，采用雙乳化法制備了 PLGA微載體，且OTH3T3細胞在其上黏附、分化效果良好。文獻 "Employing human keratinocytes cultured on macroporous gelatin spheres to treat full thickness-wounds: an in vivo study on athymic rats" [Burns, 2007, 33 (6): 726-735]中公開了一種制備直徑為133 321 μ m明膠微載體的技術方案，其角化細胞能 在載體表面及孔內(nèi)部較好的黏附與分化。大量研究表明，高分子微球在細胞培養(yǎng)領域具有 廣闊的發(fā)展前景，各種新材料制備的微球層出不窮。
4
蠶絲蛋白是由蠶絹絲腺內(nèi)壁上的內(nèi)皮細胞分泌的高純度蛋白質，由乙氨酸、丙氨酸、絲氨酸等二十多種氨基酸組成，具有良好的生物相容性和優(yōu)良的理化性能且可被生物 降解。在非紡織領域，家蠶絲素纖維已長期用作外科手術縫合線。近年來，將絲素蛋白應用 于人工皮膚、人工血管、人工骨、藥物緩釋載體以及酶固定材料的大量研究結果表明，絲素 蛋白材料無毒性、無刺激作用，對細胞的黏附、生長、增殖以及分化的支持作用良好，其優(yōu)良 的理化性質以及獨特的生物相容性，是一種應用前景廣闊的生物材料。然而，將蠶絲絲素蛋 白制備成為細胞微載體的技術至今未見報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種載藥率高，比表面積大，生物相容性好，適合于細胞培養(yǎng) 的絲素蛋白微載體及其制備方法。為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術方案是一種絲素蛋白微載體，它為 芯-殼結構的微球狀，微球直徑為100 500 μ m;其殼層呈多孔結構，孔徑為5 20 μ m, 殼層的成分為絲素蛋白，所述絲素蛋白的分子結構中，無歸卷曲構象為80% 90%，其余為 Silk I和Silk II構象；其芯核的成分為水溶性藥物。本發(fā)明還提供上述絲素蛋白微載體的制備方法將蠶絲脫膠、溶解、透析處理后得 到濃度為1% 10%/wt的絲素蛋白溶液，其特征在于再進行如下步驟的加工
1、將嗎啉-乙磺酸、N-羥基丁二酰亞胺和1-乙基_3 (3- 二甲基氨丙基)碳化二亞胺 溶解于絲素蛋白溶液中，得到殼層溶液；按質量比，絲素蛋白嗎啉-乙磺酸N-羥基丁二 酰亞胺1-乙基_3 (3- 二甲基氨丙基)碳化二亞胺為1 :0. 05 0. 25 0. 05 0. 2 0. 1 0. 35。或者采用將京尼平溶解于絲素蛋白溶液中，按質量比，絲素蛋白京尼平為1 0. 1 0. 40，得到殼層溶液。2、將水溶性藥物溶解后得到濃度為lOOng/ml lOOOng/ml的水溶性藥物芯層溶液。3、采用高壓靜電方法，將絲素殼層溶液和水溶性藥物芯層溶液經(jīng)兩個噴頭噴出微 米級的液滴，以液氮為凝固浴，得到具有芯_殼結構的固化液滴；所述的兩個噴頭為同軸套 裝在一起，其中外層的一個為殼層溶液噴頭，內(nèi)層的一個為芯層溶液噴頭。4、采用冷凍干燥法將固化的液滴干燥，得到一種芯_殼結構微球狀的絲素蛋白微 載體。本發(fā)明技術方案中所述的絲素蛋白為天然家蠶、柞蠶或天蠶絲素蛋白；所述的水 溶性藥物為酸性成纖維細胞生長因子、堿性成纖維細胞生長因子、血管內(nèi)皮生長因子、轉化 生長因子- β、轉化生長因子- α、神經(jīng)生長因子、胰島素樣生長因子、血小板衍生因子等細 胞生長因子中的一種或它們的任意組合。本發(fā)明技術方案中采用的高壓靜電工藝條件為電源電壓3 15 kV;芯核溶液的 推注速度為0. 1 1 ml/h，殼層溶液的推注速度為0. 1 5ml/h。本發(fā)明技術方案中，殼層溶液噴頭的噴針內(nèi)徑為1 2mm;芯層溶液噴頭的噴針外 徑為0. 45 1. 6mm,內(nèi)徑為0. 1 1. 2_。本發(fā)明的原理是將直流高壓電源施加于聚合物溶液或熔體與收集裝置之間，使聚合物溶液或熔體帶上幾千伏至上萬伏高壓靜電，帶電液滴在電場力的作用下在注射器或 毛細管頂點被加速，當電場力足夠大時，聚合物液滴可克服表面張力形成噴射細流。當聚合 物溶液濃度較低，粘度較小時，其在一定范圍內(nèi)的高壓電場作用下會分化成連續(xù)的小液滴， 噴入凝固浴中即可得到粒徑均勻的微球。本發(fā)明采用的裝置具有兩個注射器，內(nèi)層針頭套在外層針頭內(nèi)并保持同軸，兩個 針頭之間留有一定的空隙，保證外層絲素溶液能夠順利流出與芯成分的生長因子溶液匯 合。在高壓電場的作用下，兩液體在噴口處匯合時，由于時間極短，液滴固化前不會融合為 一體，從而形成具有芯-殼結構的絲素蛋白微球。同時由于生長因子溶液在電場作用下噴 出后全部包埋于微球內(nèi)部，基本無損失，因此這種芯_殼結構的絲素微球具有較高的藥物 包埋率。將EDC加入絲素溶液中后，其首先與蛋白質羧基側鏈偶合形成一種中間產(chǎn)物?；?異脲，然后受到蛋白質上伯胺基團的親核試劑進攻而形成酰胺交聯(lián)，從而使蛋白質水溶液 迅速形成凝膠。參與反應的基團有天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸等。當加入NHS及MES可以 提高交聯(lián)效果。而當京尼平加入到絲素溶液中時，絲素分子上的自由氨基可對京尼平上的 3-C原子發(fā)起親核攻擊，使六元環(huán)發(fā)生開環(huán)形成新的醛基，新生成的二級胺可與醛基形成新 的分子內(nèi)共價鍵。同時京尼平自身在一定條件下可以發(fā)生聚合反應，再與絲素分子上的自 由氨基發(fā)生反應形成分子間的共價鍵，達到交聯(lián)效果。絲素微球中的孔是其中的冰升華后留下的空隙。在絲素溶液冷凍過程中，當絲素 溶液中的水的溫度低于冰點而過冷卻時，由于熱交換而產(chǎn)生了微小的冰核，只要過冷卻的 程度足以使不穩(wěn)定相(絲素溶液相)中水的化學勢比冰核高，冰核便可以成為較大的冰粒 子。而周圍的絲素溶液則相應的被濃縮，使處于無歸卷曲結構的絲素分子間距離縮短，不同 線團上的鏈段相互貫穿，形成了連續(xù)的絲素溶液相。其后將分散在絲素相中的冰升華后，便 得到了多孔絲素材料。經(jīng)冷凍干燥制備的絲素微球表面及內(nèi)部均呈多孔結構，孔之間的連 通性較好，非常適合用于細胞載體或藥物緩釋系統(tǒng)。本發(fā)明具有以下明顯優(yōu)點
1、由于絲素蛋白材料無毒性、無刺激作用，因此，本發(fā)明提供的微載體對細胞的黏附、 生長、增殖以及分化的支持具有良好的作用，特別適用于作為細胞培養(yǎng)的微載體；同時，該 微球表面及內(nèi)部呈多孔結構，增大了比表面積，為細胞提供了生長空間；還由于生長因子 被包埋在絲素微球的內(nèi)部，可較好的保持其活性，并可靠微孔通道實現(xiàn)藥物的持續(xù)、緩慢釋 放。本發(fā)明技術方案提供的絲素蛋白微球除了可用做細胞培養(yǎng)載體外，還可用做藥物緩釋 載體、酶固定材料等。2、利用同軸高壓靜電技術和冷凍干燥法，可以得到粒徑可控、具有芯-殼結構的 多孔再生絲素微球。該法工藝過程簡單、設備簡易、微球載藥率和包埋率較高、粒徑分布均 勻并且尺寸可控，方便選擇最適合細胞生長的微球大小，是一種制備絲素微球的新方法。3、采用再生絲素水溶液制備絲素微球，整個工藝過程無需添加引發(fā)劑、表面活性 劑、有毒試劑或有機溶劑等，不會引起絲素蛋白生物相容性的降低。


圖1是本發(fā)明實施例提供的絲素微球殼層的紅外吸收光譜圖。
6
圖2和圖3分別是本發(fā)明實施例提供的絲素微載體的電子顯微鏡照片。圖4是本發(fā)明實施例提供的絲素微載體橫截面的電子顯微鏡照片。
具體實施例方式下面結合實施例和附圖對本發(fā)明做進一步描述 實施例一
將150 g家蠶生絲放入6 L質量濃度為0. 05%的Na2CO3水溶液中，于98 100°C處理 30min,重復3次，使蠶絲脫膠，充分洗滌干燥后得到純絲素纖維。將純絲素纖維加入三元溶 液中(由CaCl2/水/乙醇摩爾比為1:8:2配成)溶液中，在72°C攪拌溶解成絲素蛋白混合 溶液。將所得到的絲素混合溶液裝入透析袋中，用去離子水透析4天，以除去雜質(Li、Br 等)，得到純的絲素蛋白溶液。調(diào)節(jié)絲素蛋白溶液的質量濃度為3%，將絲素質量20%的EDC、10%的NHS、20%的MES 均勻加入絲素溶液中，得到絲素殼層溶液。將血管內(nèi)皮生長因子配置為濃度為800ng/ml的水溶性藥物芯層溶液。將絲素殼層溶液與水溶性藥物芯層溶液分別加入到殼層和芯層的注射器內(nèi)，采用 高壓靜電方法，將絲素殼層溶液和水溶性藥物芯層溶液經(jīng)兩個噴頭噴出微米級的液滴，以 液氮為凝固浴，得到具有芯_殼結構的固化液滴。采用高壓靜電的具體方法是高壓靜電 發(fā)生器的正極與兩個噴頭連接，所述的兩個噴頭為同軸套裝在一起，其中外層的一個為殼 層溶液噴頭，內(nèi)層的一個為芯層溶液噴頭；高壓靜電發(fā)生器的負極與收集裝置連接，收集裝 置用鋪有鋁箔的塑料盒做成。接通電源后，在電場力的牽伸作用下，芯、殼層溶液經(jīng)兩個同 軸的噴頭噴出微米級的液滴，用液氮作為凝固浴使液滴凝固，得到具有芯-殼結構的固化 液滴。液滴直徑可通過調(diào)整絲素溶液濃度、高壓靜電發(fā)生器的工作電壓、噴頭噴針的直徑 及芯、殼溶液的推注速度等方法控制。在本實施例中，高壓靜電發(fā)生器的工作固定電壓為 9 kV，極距10 cm,殼層溶液噴頭的內(nèi)徑為1. 6mm,芯層溶液噴頭噴針的外徑為1mm，內(nèi)徑為 0. 7mm，芯層溶液的推注速度為0. 1 ml/h，殼層溶液的推注速度為lml/h。將上述固化液滴進行冷凍干燥，冷凍干燥的工藝條件為在-60°C的溫度條件下 以2°C /min的升溫速度升至室溫，再干燥處理12h，得到難溶于水的芯-殼結構的絲素微 球。參見附圖1，它是本實施例提供的絲素微球殼層的紅外吸收光譜圖，由圖1可以看 到，其分子構象以無歸卷曲為主，約占90%，同時還含有少量的silk I和silk II結構。參見附圖2和3，它們分別是本實施例提供的絲素微載體的電子顯微鏡照片，由圖 2可以看到，所提供的絲素微載體為微球狀，微球平均直徑為452. 8 μ m ；由圖3可以清楚地 看到，絲素微載體的殼層呈多孔結構，孔徑為5 20 μπι。參見附圖4，它是本實施例提供的絲素微載體橫截面的電子顯微鏡照片，由圖4可 以看到，其芯核與殼層的結構不同，殼層為絲素蛋白，呈多孔結構，芯核的成分為水溶性藥 物，結構致密。實施例二
將100 g柞蠶生絲放入5 L質量濃度為0. 25%的Na2CO3水溶液中，于98 100°C處理 45 min，重復3次，使蠶絲脫膠，充分洗滌干燥后得到柞蠶絲素纖維。將柞蠶絲素纖維加入熔融的四水合硝酸鈣中，在105°C攪拌溶解成柞蠶絲素蛋白混合溶液。將所得到的混合溶 液裝入透析袋中，用去離子水透析4天，去除雜質得到純的柞蠶絲素蛋白溶液。調(diào)節(jié)柞蠶絲素溶液的質量濃度為1. 5%，將絲素質量20%的EDC、10%的NHS、20%的 MES均勻加入絲素溶液中，得到絲素殼層溶液。將胰島素樣生長因子配置為濃度為500ng/ ml的水溶性藥物芯層溶液。將殼層和芯層兩種溶液分別倒入注射器內(nèi)，固定 電壓6 kV，極距10 cm，芯層溶液 的推注速度0. 2ml/h，殼層溶液的推注速度為2ml/h，外噴針的內(nèi)徑為2mm，內(nèi)噴針的外徑為 1. 2mm,內(nèi)徑為0. 9mm，用液氮作為凝固浴使液滴凝固。將上述固化液滴進行冷凍干燥，冷凍干燥的工藝條件為在-20°C的溫度條件下 以速度為0. 2V /min升溫至室溫，再干燥處理72h，得到難溶于水的絲素微球。經(jīng)檢測，微球表面及內(nèi)部呈多孔結構，平均直徑為523. 6 μ m，不溶于水。實施例三
用煮沸的濃度為3. 5%。的Na2CO3溶液處理天蠶繭共三次，每次30 min,使蠶絲脫膠，充 分洗滌干燥后得到天蠶絲素纖維。將天蠶絲素纖維加入熔融的四水合硝酸鈣中，在90°C攪 拌溶解成天蠶絲素蛋白混合溶液。將所得到的混合溶液裝入透析袋中，用去離子水透析4 天，去除雜質得到純的天蠶絲素蛋白溶液。 調(diào)節(jié)天蠶絲素溶液濃度為2%，將絲素質量20%的EDC、10%的NHS、20%的MES均勻 加入絲素溶液中，得到殼層溶液。將神經(jīng)生長因子配置為濃度為200ng/ml的水溶性藥物芯層溶液。將殼層和芯層兩種溶液分別倒入注射器內(nèi)，固定電壓10 kV，極距10 cm,芯層溶液 的推注速度0. 15 ml/h，殼層溶液的推注速度為3ml/h，外噴針的內(nèi)徑為1mm，內(nèi)噴針的外徑 為0. 45mm,內(nèi)徑為0. 2mm，用液氮作為凝固浴使液滴凝固。將上述固化液滴進行冷凍干燥，冷凍干燥的工藝條件為在_30°C的溫度條件下 以速度為l°c /min升溫至室溫，再干燥處理40 h，得到難溶于水的絲素微球。經(jīng)檢測，該微球表面及內(nèi)部呈多孔結構，平均直徑為128. 3 μ m，不溶于水。實施例四
將150 g家蠶生絲放入6 L質量濃度為0. 05%的Na2CO3水溶液中，于98 100°C處理 30 min，重復3次，使蠶絲脫膠，充分洗滌干燥后得到純絲素纖維。將純絲素纖維加入9. 3 mol/1的LiBr水溶液中，在65士2°C攪拌溶解成絲素蛋白混合溶液。將所得到的絲素混合 溶液裝入透析袋中，用去離子水透析4天，以除去LiBr等雜質，得到純的絲素蛋白溶液。調(diào)節(jié)絲素溶液的質量濃度為6%，將絲素質量10%的京尼平均勻加入絲素溶液中， 37°C反應12 h，得到殼層溶液。將堿性成纖維細胞生長因子配置為濃度為600ng/ml的水 溶性藥物芯層溶液。將殼層和芯層兩種溶液分別倒入注射器內(nèi)，固定電壓llkV，極距10 cm，芯層溶液 的推注速度0.5 ml/h，殼層溶液的推注速度為1.5ml/h，外噴針的內(nèi)徑為1.2mm，內(nèi)噴針的 外徑為0. 9mm,內(nèi)徑為0. 6mm，用液氮作為凝固浴使液滴凝固。將上述固化液滴進行冷凍干燥，冷凍干燥的工藝條件為在_50°C的溫度條件下 以速度為1. 5°C /min升溫至室溫，再干燥處理20h，得到難溶于水的絲素微球。經(jīng)檢測，微球表面及內(nèi)部呈多孔結構，平均直徑為363. 6 μ m，不溶于水。
實施例五
將150 g家蠶生絲放入6 L質量濃度為0. 05%的Na2CO3水溶液中，于98 100°C處理 30 min，重復3次，使蠶絲脫膠，充分洗滌干燥后得到純絲素纖維。將純絲素纖維加入9. 3 mol/1的LiBr水溶液中，在65士2°C攪拌溶解成絲素蛋白混合溶液。將所得到的絲素混合 溶液裝入透析袋中，用去離子水透析4天，以除去LiBr等雜質，得到純的絲素蛋白溶液。調(diào)節(jié)絲素溶液濃度為5%，將絲素質量20%的京尼平均勻加入絲素溶液中，37°C反 應12 h，得到殼層溶液。將轉化生長因子-β配置為濃度為300ng/ml的水溶性藥物芯層溶 液。將殼層和芯層兩種溶液分別倒入注射器內(nèi)，固定電壓12 kV，極距10 cm,芯層溶液 的推注速度0. 7ml/h，殼層溶液的推注速度為2ml/h，外噴針的內(nèi)徑為1mm，內(nèi)噴針的外徑為 0. 8mm,內(nèi)徑為0. 5mm，用液氮作為凝固浴使液滴凝固。對固化液滴采用冷凍干燥處理，工藝 條件可以為在溫度為_60°C _20°C的條件下，以速度為0. 2V 2V /min升溫至室溫，再 在室溫條件下干燥處理12h 72h，得到難溶于水的絲素微球。經(jīng)檢測，微球表面及內(nèi)部呈 多孔結構，平均直徑為216.4 μ m，不溶于水。
9
權利要求
一種絲素蛋白微載體，其特征在于它為芯 殼結構的微球狀，微球直徑為100～500 μm；其殼層呈多孔結構，孔徑為5～20 μm，殼層的成分為絲素蛋白，所述絲素蛋白的分子結構中，無歸卷曲構象為80%～90%，其余為 SilkⅠ和SilkⅡ構象；其芯核的成分為水溶性藥物。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種絲素蛋白微載體，其特征在于絲素蛋白為天然家蠶、 柞蠶或天蠶的絲素蛋白。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種絲素蛋白微載體，其特征在于所述水溶性藥物為下述 細胞生長因子中的一種或它們的任意組合酸性成纖維細胞生長因子、堿性成纖維細胞生 長因子、血管內(nèi)皮生長因子、轉化生長因子-β、轉化生長因子-α、神經(jīng)生長因子、胰島素 樣生長因子、血小板衍生因子。
4.一種制備如權利要求1所述的絲素蛋白微載體的方法，將蠶絲脫膠、溶解、透析處 理后得到濃度為1% 10%/wt的絲素蛋白溶液，其特征在于再進行如下步驟的加工(1)將嗎啉-乙磺酸、N-羥基丁二酰亞胺和1-乙基-3(3-二甲基氨丙基)碳化二亞胺 溶解于絲素蛋白溶液中，得到殼層溶液；按質量比，絲素蛋白嗎啉-乙磺酸N-羥基丁二 酰亞胺1-乙基_3 (3- 二甲基氨丙基)碳化二亞胺為1 :0. 05 0. 25 0. 05 0. 2 0. 1 0. 35 ；(2)將水溶性藥物溶解，制備濃度為lOOng/ml lOOOng/ml的芯層溶液；(3)采用高壓靜電方法，將殼層溶液和芯層溶液經(jīng)兩個噴頭噴出微米級的液滴，以液氮 為凝固浴，得到具有芯-殼結構的固化液滴；所述的兩個噴頭為同軸套裝在一起，其中外層 的一個為殼層溶液噴頭，內(nèi)層的一個為芯層溶液噴頭；(4)采用冷凍干燥法將固化的液滴干燥，得到一種芯_殼結構微球狀的絲素蛋白微載體。
5.根據(jù)權利要求4所述的一種制備絲素蛋白微載體的方法，其特征在于高壓靜電方 法的工藝條件為電源電壓3 15 kV ；芯核溶液的推注速度為0. 1 1 ml/h，殼層溶液的 推注速度為0. 1 5ml/h。
6.根據(jù)權利要求4所述的一種制備絲素蛋白微載體的方法，其特征在于殼層溶液噴 頭的噴針內(nèi)徑為1 2mm ；芯層溶液噴頭的噴針外徑為0. 45 1. 6mm,內(nèi)徑為0. 1 1. 2mm。
7.一種制備如權利要求1所述的絲素蛋白微載體的方法，將蠶絲脫膠、溶解、透析處 理后得到濃度為1% 10%/wt的絲素蛋白溶液，其特征在于再進行如下步驟的加工(1)將京尼平溶解于絲素蛋白溶液中，按質量比，絲素蛋白京尼平為1:0. 1 0. 40，得 到殼層溶液；(2)將水溶性藥物溶解，制備濃度為lOOng/ml lOOOng/ml的芯層溶液；(3)采用高壓靜電方法，將殼層溶液和芯層溶液經(jīng)兩個噴頭噴出微米級的液滴，以液氮 為凝固浴，得到具有芯-殼結構的固化液滴；所述的兩個噴頭為同軸套裝在一起，其中外層 的一個為殼層溶液噴頭，內(nèi)層的一個為芯層溶液噴頭；(4)采用冷凍干燥法將固化的液滴干燥，得到一種芯-殼結構微球狀的絲素蛋白微載體。
8.根據(jù)權利要求7所述的一種制備絲素蛋白微載體的方法，其特征在于高壓靜電方 法的工藝條件為電源電壓3 15 kV ；芯核溶液的推注速度為0. 1 1 ml/h，殼層溶液的推注速度為ο. 1 5ml/h。
9.根據(jù)權利要求7所述的一種制備絲素蛋白微載體的方法，其特征在于殼層溶液噴 頭的噴針內(nèi)徑為1 2mm ；芯層溶液噴頭的噴針外徑為0. 45 1. 6mm,內(nèi)徑為0. 1 1. 2讓。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高分子微載體及其制備方法，屬于生物醫(yī)學技術領域。本發(fā)明采用同軸高壓靜電技術和冷凍干燥法，將絲素溶液與藥物溶液在高壓電場的作用下分化成具有芯-殼結構的微米級液滴，經(jīng)液氮凝固后，再經(jīng)冷凍干燥制得難溶于水的微載體。該微載體為芯-殼結構的微球狀，微球直徑為100～500μm；其殼層成分為絲素蛋白，所述絲素蛋白分子，其中無歸卷曲構象為80%～90%；殼層呈多孔結構，孔徑為5～20μm；其芯核成分為水溶性藥物。這種絲素微載體在細胞培養(yǎng)、藥物緩釋等領域具有廣泛的應用前景。
文檔編號A61P43/00GK101972481SQ20101054018
公開日2011年2月16日 申請日期2010年11月11日 優(yōu)先權日2010年11月11日
發(fā)明者盧神州, 呂強, 李明忠, 王璐 申請人:蘇州大學