專利名稱：抑制血管生成的化合物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及可有效地抑制血管生成的化合物，其因此可代替硫酸化多糖如肝素，用于預防再狹窄，促進傷口愈合，并抑制腫瘤細胞轉移。
背景技術：
現有技術中已公開了硫酸化多糖在抑制血管生成和治療與血管生成有關的病癥和疾病中的應用。國際專利申請No．PCT/GB95/00515(WO95/24907)，其內容結合在此作為參考，它討論了肝素和其他硫酸化多糖如戊聚糖多硫酸酯和葡聚糖硫酸酯在這些病癥和疾病的治療中的應用，還公開了另一種硫酸化多糖，昆布多糖硫酸酯的應用，它在通過抑制血管平滑肌細胞增殖而預防再狹窄，通過激活儲存在胞外基質中的活性生長因子的釋放而促進傷口愈合，以及通過抑制乙酰肝素酶活性而抑制腫瘤細胞轉移方面顯示出的抗凝活性僅為肝素的約30％。
國際專利申請No．PCT/AU95/00350(WO95/34595)公開了一類抗病毒化合物，它包含樹狀聚合物如聚酰氨基胺(polyamidoamine)或具有多個端基的賴氨酸樹狀聚合物，其中至少有一個端基具有鍵合或連接其上的含有陰離子或陽離子的部分，特別是含有磺酸、含有羧酸、或含有三甲基銨的部分。
本發(fā)明提供了通過將離子基連接到直鏈非糖類聚合物或樹狀聚合物上而形成的多離子物質在血管生成的抑制和相關疾病和病癥的治療中的應用。
發(fā)明概述按照本發(fā)明，它提供了預防性或治療性抑制人或非人類動物患者血管生成的方法，其包含給予該患者有效量的選自以下種類的化合物(ⅰ)具有多個側鏈基團的直鏈非糖類聚合物，其中所述側鏈基團中至少有一個具有鍵合或連接其上的含有陰離子或陽離子的部分；和
(ⅱ)具有多個端基的樹狀聚合物，其中所述端基中至少有一個具有鍵合或連接其上的含有陰離子或陽離子的部分。
特別優(yōu)選用于本發(fā)明方法的化合物是在其側鏈基團上連接有含有磺酸的部分、含有羧酸的部分、含有磷酸或膦酸的部分、含有硼酸的部分、含有神經氨酸或唾液酸的部分或含有在其4位或其他位置上有修飾的神經氨酸或唾液酸的部分的直鏈聚合物，和在其端基上連接有含有磺酸的部分、含有羧酸的部分、含有磷酸或膦酸的部分、含有硼酸的部分、含有神經氨酸或唾液酸的部分或含有在其4位或其他位置上有修飾的神經氨酸或唾液酸的部分的樹狀聚合物。
在本文中提到的用于本發(fā)明方法的化合物分別是直鏈多離子聚合物或多離子樹狀聚合物，在整個說明書以及隨后的權利要求書中所用的這些術語的含義不僅包括該聚合物或樹狀聚合物本身，而且包括它們的藥學上或獸醫(yī)可接受的鹽，例如堿金屬或堿土金屬鹽如鈉、鉀或鈣鹽。
發(fā)明詳述本發(fā)明優(yōu)選使用的化合物包括(ⅰ)通式Ⅰ的直鏈多離子聚合物
其中R是形成直鏈聚合物骨架的非糖類單體單元；X是非必需的單體單元R的側鏈基團上的連接基；和A是含有陰離子的部分；和(ⅱ)通式Ⅱ的多離子樹狀聚合物
其中Ⅰ是起始核心；Z是內部分支單元；n是整數，它表示生成的樹狀聚合物的數目；和A是含有陰離子的部分，它可以通過非必需的連接基X連接到內部分支單元Z上。
依照本發(fā)明，優(yōu)選的直鏈多離子聚合物是陰離子部分(A)，非必需地通過連接基(X)，軛合到直鏈非糖類聚合物骨架(由大量單體單元R組成)上而形成的多陰離子物質。所得多陰離子直鏈聚合物具有重復單元的重量范圍分布，由此得到所期望的分子量分布的中值。所期望的是，分子量分布的中值范圍是1,000-1,000,000，優(yōu)選為10,000-600,000。
單體單元R優(yōu)選為氨基或酰胺部分，更優(yōu)選為氨基酸部分。特別優(yōu)選的單體單元是賴氨酸部分。從Sigma化學公司可購得具有不同分子量范圍的聚-L-賴氨酸。
陰離子部分A可直接或經各種官能連接基X而連接到直鏈聚合物骨架上的活性側鏈基團上，官能連接基X諸如但不限于酯，酰胺，醚，硫醚，胺，脲，硫脲，甲氨酸酯和碳酸酯。
非必需的連接基X也可作為聚合物和陰離子部分A之間的間隔基，并可由烷基鏈(可選為取代的或分支的)，烷氧基、聚烷氧基、烷硫基或聚烷硫基鏈(可選被取代的)，或鏈烯基、多鏈烯基、炔基或多炔基鏈(可選被取代的)組成。合適的間隔基鏈包括式-(CH2)n-Z-(CH2)n-基團，其中Z是-CH2-,-CH=CH-,-C≡C-,-O-或-S-，而n是1-15的整數。
樹狀聚合物是大分子的高度分支的化合物，它是從最初的核心分子開始，通過反復的反應序列，在核心上連續(xù)地“生成”連續(xù)的層或級，從而形成的一個三維的高度有序的聚合化合物。樹狀聚合物具有下述特征Ⅰ．起始核心(Ⅰ)可以具有一個或多個反應部位并且是點狀的或者是相當大的以便影響該樹狀聚合物的最終布局；ⅱ．結合在起始核心上的分支的重復單元(Z)形成層；ⅲ．非必需地通過連接基(如上述連接基X)結合在樹狀聚合物表面上的官能端基(如陰離子部分A)。本發(fā)明以樹狀結構作為附著離子部分的骨架；本發(fā)明并不限于本文中詳細描述的球形樹狀聚合物，而是可以基于任何樹狀結構。形狀和結構不同的各種樹狀聚合物均是本領域技術人員熟知的。
樹狀聚合物的制備是已知的，例如在美國專利No.4,289,872和4,410,688中描述的(它們描述了基于賴氨酸單元成層的樹狀聚合物)，以及美國專利No.4,507,466,4,558,120,4,568,737和4,587,329中描述的(它們描述了基于其他單元包括聚酰氨基胺的樹狀聚合物或PAMAM樹狀聚合物)。在這些美國專利中公開的樹狀聚合物，記載它們適合用作如表面改性劑，金屬螯合劑，破乳化劑或水包油型乳劑，造紙中的濕強度劑，以及含水制劑如涂料中改良粘度的試劑。在美國專利No.4,289,872和4,410,688中也提出了基于賴氨酸單元的樹狀聚合物可用作藥劑制備的底物。
國際專利公開No.WO88/01178,WO88/01179和WO88/01180中公開了一些共軛物，其中樹狀聚合物與另一種物質如載帶藥物或農藥的物質軛合或締合。另外，國際專利申請公開No.WO95/24221公開了由至少一種樹狀聚合物與載體物質以及非必需的靶導向體締合而組成的樹狀聚合物共軛物，載體物質可以是生物反應調節(jié)物。這些專利出版物和上面所提到的美國專利一起較全面地公開了各種樹狀聚合物及其制備方法，這些出版物所公開的內容均結合在此作為參考。
本文中所用的術語“樹狀聚合物”應理解為其最寬的含義，并且在其范圍內包括如專利申請No.WO88/01178,WO88/01179和WO88/01180中公開的這些樹狀聚合物的所有形式和組合物。該術語還包括如在這些專利申請中公開的連接或橋接樹狀聚合物。
本發(fā)明的優(yōu)選的樹狀聚合物包含一個共價鍵合到至少兩個樹狀分支上的多價核心，并優(yōu)選通過至少兩個生長支而擴展。特別優(yōu)選的樹狀聚合物是聚酰氨基胺(PAMAM)樹狀聚合物，PAMAM(EDA)樹狀聚合物和聚賴氨酸樹狀聚合物。
按照本發(fā)明，至少有一個、并優(yōu)選有相當數量的直鏈聚合物上的側鏈基團或樹狀聚合物表面上的端基具有共價鍵合其上的含有陰離子或陽離子的部分。該直鏈聚合物的側鏈或該樹狀聚合物的分支可以氨基或其他官能活性基團如OH、SH或類似基團結尾，它們隨后可與陰離子或陽離子部分反應。當直鏈聚合物的側鏈基團或樹狀聚合物的端基為氨基時，含有陰離子或陽離子的部分可以通過各種官能基包括酰胺和硫脲鍵而連接到該樹狀聚合物上。可鍵合到直鏈聚合物的側鏈基團或樹狀聚合物的端基上的優(yōu)選的含有陰離子或陽離子的部分包括含有磺酸的部分，含有羧酸的部分(包括含有神經氨酸和唾液酸的部分和含有修飾的神經氨酸和唾液酸的部分)，含有硼酸的部分，含有磷酸和膦酸的部分(包括含有酯化磷酸和膦酸的部分)以及含有三甲基銨的部分。
合適的可鍵合或連接到氨基或其他側鏈或端基上的含有陰離子或陽離子的部分包括，例如以下基團(其中n為0或正整數，更具體地是n為0或1-20的整數)-NH(CH2)nSO3-(CH2)nSO3-Ar(SO3)n-CH2CH(SO3)COOH-CH(SO3)CH2COOH -ArX(CH2)nSO3X=O,S,NH+ + +-(CH2)nNMe3-Ar(NMe3)n-Ar(CH2NMe3)n
-ArXP(=O)(OR)2X=O,CH2,CHF,CF2R=烷基，芳基H,Na-ArXP(=O)(OR1)(NR2R3)x=O,CH2,CHF,CF2R1=烷基，芳基H,Na R2,R3=烷基，芳基-Ar[P(=O)(OR)2]nR=烷基，芳基H,Na n=1-3-Ar[B(OH)2]nn=1-3 -Ar[COOH]nn=1-3
按照本發(fā)明，除了上述基團外，各種含有神經氨酸或唾液酸的部分或含有修飾的神經氨酸或唾液酸的部分也可鍵合或連接到側鏈或端基上。這些部分包括神經氨酸的各種N-和O-取代的衍生物，特別是N-和O-?；苌锶鏝-乙酰基，O-乙?；蚇-羥乙酰基衍生物，以及其中神經氨酸基團被修飾，特別是通過在4-位被氨基、酰胺基、氰基、疊氮基或胍基取代而修飾的部分。
本發(fā)明的陰離子或陽離子直鏈聚合物和樹狀聚合物可以用本領域技術人員熟知的標準化學方法制備。在下文中的實施例部分利用實施例描述了合適的方法。
如前所述，已發(fā)現本發(fā)明的陰離子或陽離子直鏈聚合物和樹狀聚合物能抑制血管生成。因此，本發(fā)明的方法包括患者血管生成的抑制，與新血管的生長有關的疾病諸如慢性炎癥、糖尿病性視網膜病、銀屑病和類風濕性關節(jié)炎的治療，以及相關疾病和病癥的治療，包括但不限于通過抑制血管平滑肌細胞增殖而預防再狹窄，通過激活儲存在胞外基質中的活性生長因子的釋放而促進傷口愈合，以及通過抑制血管生成而抑制腫瘤細胞轉移。
因此，另一方面本發(fā)明提供了用于預防性或治療性抑制人或非人動物患者血管生成的藥物或獸醫(yī)組合物，它包含上文中已清楚描述的陰離子或陽離子直鏈聚合物或樹狀聚合物，以及至少一種藥學上或獸醫(yī)可接受的載體或稀釋劑。
這種組合物的制劑是本領域技術人員熟知的。合適的藥學上可接受的載體和/或稀釋劑包括所有任意的常規(guī)溶劑，分散介質，填充劑，固體載體，水溶液，包衣劑，抗細菌和抗真菌劑，等滲和吸收延遲劑等。這些介質和試劑對藥物活性物質的作用是本領域中熟知的，例如，在Remington’s藥物科學，第18版，Mack出版公司，賓西法尼亞州，美國中對它們進行了描述。除了與活性成分不相容的任何常規(guī)介質或試劑以外，其他均可考慮用于本發(fā)明的藥物組合物中。也可在該組合物中加入附加的活性成分。
為了易于給藥和使劑量均勻，尤為有利的是以劑量單位形式配制這些組合物。本文中所用的劑量單位形式是指適合作為單位劑量而用于要進行治療的病人的物理分散單位；每個單位含有計算好能產生預期治療效果的預定量的活性成分和所需的藥物載體和/或稀釋劑。本發(fā)明的新的劑量單位形式的規(guī)格取決并直接依賴于(a)活性成分的特有性能和要達到的特定治療效果，和(b)用于特定治療的活性成分的配制領域中的固有限制。
另一方面，本發(fā)明提供了如上文中已清楚描述的有效量的陰離子或陽離子直鏈聚合物或樹狀聚合物通過抑制血管生成而在人或非人動物患者的預防或治療中，或在用于預防或治療人或非人動物患者的藥劑的制備中的應用。
可使用各種給藥途徑。當然，所選擇的特定方式將依據要治療的特定病情和治療效果所需的劑量而定。一般來說，本發(fā)明的方法可利用醫(yī)學上可接受的任何給藥方式，也就是說能產生本發(fā)明活性成分的治療濃度而不會導致臨床上不可接受的負作用的任何方式來實施。這樣的給藥方式包括口服，直腸，局部，鼻，吸入，經皮或胃腸外(例如皮下，肌內和靜脈內)途徑。用于口服給藥的制劑包括諸如膠囊，片劑，錠劑等分散單元。其他途徑包括直接鞘內給藥到脊髓液中，利用諸如本領域普通技術人員熟知的各種導管和氣囊血管成形術設備直接加入，和實質組織內注射到靶向區(qū)域。
該組合物可方便地以單位劑型存在并可用制藥領域中熟知的任何方法制備。這樣的方法包括將活性成分加入相關的構成一種或多種輔助成分的載體中的步驟。一般說來，通過將活性成分均勻而緊密地摻入相關的液體載體、精細分離的固體載體、或二者中而制得該組合物，然后如果需要，將該產物成形。
適于口服給藥的本發(fā)明的組合物可以作為分散單元如膠囊，扁囊劑，片劑或錠劑存在，每個單元含有預定量的活性成分，在脂質體中或作為在含水液體或非含水液體中的懸液如糖漿，酏劑，或乳劑。
適于胃腸外給藥的組合物方便地包含活性成分的無菌含水制劑，其優(yōu)選與接受者的血液等滲。該含水制劑可以按照已知方法，利用那些合適的分散或濕潤劑和懸浮劑來配制。無菌注射制劑也可以是在無毒的胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌注射溶液或懸液，例如在聚乙二醇中的溶液?？梢詰玫目山邮艿馁x形劑和溶劑是水，Ringer’s溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，無菌固定油類可方便地用作溶劑或懸浮介質。出于這一目的，可應用任何溫和固定油包括合成的單甘油酯或二甘油酯。另外，可注射制劑中可應用脂肪酸如油酸。
該活性成分也可配制成用于將活性成分鼻內或通過吸入給藥的釋放系統(tǒng)，例如含有活性成分的精細分散的氣霧噴劑。
其他釋放系統(tǒng)可包括緩釋系統(tǒng)。優(yōu)選的緩釋系統(tǒng)是可使本發(fā)明的活性成分以緩釋的小丸或膠囊形式釋放的那些?？墒褂迷S多類型的緩釋系統(tǒng)。這些包括但不限于(a)浸蝕系統(tǒng)，其中活性成分包含在基質中，和(b)擴散系統(tǒng)，其中活性成分以可控速率滲透通過聚合物。另外，也可使用基于泵的硬件釋放系統(tǒng)，它們中的某些適于埋植。
活性成分以預防或治療有效量給藥。預防或治療有效量是指至少部分達到預期效果、或延遲所治療的特定疾病的發(fā)作、或抑制其發(fā)展、或完全終止其發(fā)作或發(fā)展所需的量。當然，這樣的量將依據所治療的特定疾病，該疾病的嚴重程度和患者個體狀況包括年齡、體質、大小、重量和并行的治療等而定。這些因素是本領域普通技術人員熟知的并可僅僅通過例行試驗確定。一般優(yōu)選使用最大劑量，也就是說，根據充分的醫(yī)學鑒定判斷出的最高安全劑量。不過，本領域普通技術人員將理解，出于醫(yī)學原因、心理原因或實際上任何其他原因，可以較低的劑量或容許的劑量給藥。
一般說來，活性成分的日口服劑量將是約0.01mg/kg/天到1000mg/kg/天。一開始可給予小劑量(0.01-1mg)，接著增加劑量到最多約1000mg/kg/天。如果這樣的劑量不能使患者產生足夠的應答，甚至可以使用更高的劑量(或者可以通過不同的更局限的釋放途徑使用有效的更高劑量)直到患者的容限。也可考慮每天多次給藥來達到化合物的合適的系統(tǒng)濃度。
按照本發(fā)明的活性成分也可以獸用組合物的形式存在，例如，它可用該領域中的常規(guī)方法制備。這樣的獸用組合物的實例包括適于以下給藥途徑的那些(a)口頭給藥，外用，例如獸用頓服藥(例如含水或非含水溶液或懸液)；片劑或大丸劑；用于與飼料混合的粉末、顆粒或小丸；用于舌頭的糊劑；(b)胃腸外給藥例如通過皮下、肌內或靜脈內注射，例如作為無菌溶液或懸液；或(合適時)通過乳房內注射給藥，由此懸液或溶劑經乳頭加入到乳房中；(c)局部應用，例如作為皮膚用的霜劑，油膏或噴霧劑；或(d)陰道內給藥，例如作為陰道栓劑，霜劑或泡沫。
除非在上下文中另有要求，否則在整個說明書以及后面的權利要求書中，詞語“包含”將理解為包括所宣稱的整數或整數組而不包括任何其他整數或整數組。
從以下實施例中將明顯看出本發(fā)明的其他特征，這些實施例是為了闡述而不是限制本發(fā)明的。在下述實施例中，PAMAM樹狀聚合物是指如美國專利No.4,507,466,4,558,120,4,568,737和4,587,329中詳細描述的基于氨核心的聚酰氨基胺樹狀聚合物；PAMAM(EDA)樹狀聚合物是指基于乙二胺核心的聚酰氨基胺樹狀聚合物；而BHAlysxlysylysz樹狀聚合物是指如美國專利No.4,289,872和4,410,688中描述的基于二苯甲基胺核心和賴氨酸分支單元的聚賴氨酸不對稱樹狀聚合物。如美國專利No.4289872,4410688,4507466,4558120,4568737和4578639以及國際專利申請No.WO88/01178,WO88/01179,WO88/01180和WO95/24221中所述制得的聚酰氨基胺樹狀聚合物PAMAM1.0,PAMAM2.0,PAMAM3.0,PAMAM4.0,PAMAM5.0或更高代產物，PAMAM4.0(EDA)，以及聚賴氨酸樹狀聚合物BHAlyslys2,BHAlyslys2lys4,BHAlyslys2lys4lys8和BHAlyslys2lys4lys8lys16,BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32,BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32lys64，或更高代產物分別相應于上述樹狀聚合物。
實施例1樹狀聚合物與2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反應得到以磺酸結尾的樹狀聚合物。A．PAMAM1.0將固體碳酸鈉(0.13g；1.0mmol)緩慢加入2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸(0.41g；2.0mmol)的攪拌的水(3ml)溶液中。當停止放出氣體后，該溶液的pH為8.0。然后向該溶液中加入PAMAM1.0(0.12g；0.33mmol)的水溶液(1ml)，接著加入四滴氫氧化芐基三甲銨的40％水溶液。然后在氮氣下在60℃加熱該溶液三天后將其濃縮。殘余物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖G10；水)純化，之后冷凍干燥得到磺化PAMAM1.0樹狀聚合物，為米色固體(0.51g)。1H和13C核磁共振譜顯示出二烷基化和一烷基化PAMAM1.0樹狀聚合物的混合物(約70∶30)。13C nmr(D2O):δ31.0,31.1,37.1,37.7,41.3,48.6,51.5,53.1,53.4,55.6,56.2,61.2,61.5,178.3,179.0,179.8。B．PAMAM2.0PAMAM2.0如上所述與2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反應。粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖G10；水)純化，之后冷凍干燥得到米色固體。1H和13C核磁共振譜顯示出二烷基化和一烷基化PAMAM2.0樹狀聚合物的混合物(約65∶35)。13C nmr(D2O):δ31.0,31.1,37.1,37.7,41.3,48.7,51.5,53.4,55.6,56.2,61.2,61.5,178.4,179.0,179.1,179.6。
當重復上述反應但略去氫氧化芐基三甲銨時，會得到類似結果。C．PAMAM3.0 BRI2783PAMAM3.0如上所述與2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反應，只是使用稍微過量的碳酸鈉并略去氫氧化芐基三甲銨。1H和13C核磁共振譜顯示出二烷基化和一烷基化PAMAM3.0樹狀聚合物的混合物(約50∶50)。13C nmr(D2O):δ31.0,31.1,36.9,37.4,41.1,48.6,51.5,53.4,55.7,56.2,61.1,61.5,178.2,178.9,179.0,179.8。D．PAMAM4.0 BRI2784PAMAM4.0如PAMAM3.0中所述與2-丙烯酰氨基-2-甲基丙磺酸反應。1H和13C核磁共振譜顯示出二烷基化和一烷基化PAMAM4.0樹狀聚合物的混合物(約35∶65)。13C nmr(D2O):δ31.0,31.1,36.9,37.3,41.1,48.5,51.5,53.5,55.7,56.2,61.1,61.5,178.1,178.9,179.0,179.8。
實施例2以磺乙酰胺鈉結尾的樹狀聚合物的制備。A．PAMAM1.0將4-硝基苯基溴乙酸酯(0.40g；1.5mmol)的無水DMF(1ml)溶液加入PAMAM1.0(0.18g；0.5mmol)的攪拌的DMF(3ml)溶液中。當茚三酮試驗為陰性時，所得黃色溶液在室溫下攪拌20小時。濃縮該溶液(30°/0.1mmHg)得到黃色油。該油在水和氯仿之間分配，分離水層并用氯仿洗滌(2×)，最后用乙酸乙酯洗滌。濃縮該水溶液(35°/25mmHg)得到溴乙?；疨AMAM1.0樹狀聚合物，為黃色油(0.36g；100％)。13C nmr(D2O):δ32.8,33.3,43.0,43.5,54.4,174.5,176.4。
將亞硫酸鈉(0.2g；1.6mmol)的水溶液(1ml)加入上述溴乙?；疨AMAM1.0樹狀聚合物(0.36g；0.5mmol)的水(5ml)溶液中,并將該溶液在室溫下放置11天。濃縮該黃色溶液得到黃色固體(0.60g)。13C nmr(D2O):δ34.4,43.1,43.4,54.0,61.7,171.3,177.2。
上述反應也可不分離溴乙酰化樹狀聚合物，而是通過簡單地將亞硫酸鈉溶液加入到第一個反應中得到的粗水提取物中而進行。B．PAMAM2.0方法1將4-硝基苯基溴乙酸酯(0.18g；0.7mmol)的無水DMF(1ml)溶液加入PAMAM2.0(0.10g；0.1mmol)的攪拌的DMF(3ml)溶液中。當茚三酮試驗為陰性時，所得黃色溶液在室溫下攪拌20小時。然后邊打旋邊將該溶液加入水(150ml)中，該混合物用氯仿(3X)和乙酸乙酯萃取。將亞硫酸鈉(0.1g；0.8mmol)的水(1ml)溶液加入粗溴乙酰化樹狀聚合物溶液中并使該混合物在室溫下放置三天。然后濃縮該黃色溶液得到黃色固體殘余物，其用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化得到以磺乙酰胺鈉結尾的PAMAM2.0樹狀聚合物(103mg)。13C nmr(D2O):δ33.0,35.7，36.0,37.7,40.3,43.0,43.2,53.4,53.7,56.0,61.6,171.2,174.6,178.5。方法2將固體乙?；虼宜徵牾啺滨?67mg；0.33mmol)加入PAMAM2.0(52mg；0.05mmol)的無水DMF(2ml)溶液中，所得溶液在室溫下攪拌2天。然后將該混合物濃縮(30°/10-3mmHg)得到油狀殘余物。該殘余物在水和氯仿之間分配，分離水層并濃縮得到粘性油(117mg)。1H和13C核磁共振譜顯示該油為乙酰化樹狀聚合物和N-羥基琥珀酰亞胺的混合物。凝膠過濾法(交聯葡聚糖G10；水)得到以乙?；虼阴０方Y尾的PAMAM2.0樹狀聚合物的純樣品(29mg)。13C nmr(D2O):δ34.0,34.2,37.3,43.0,43.1,43.3,53.5,54.0,56.3,175.4,177.2,177.5。
然后將上述官能化樹狀聚合物在40％甲酸水溶液(7ml)中的溶液加入冰冷的新鮮制備的過甲酸(1.6mmol)的甲酸溶液(2ml)中。該混合物在0℃攪拌1小時，然后在室溫下攪拌20小時。加入小量活性碳以分解任何過量的過酸，該混合物攪拌30分鐘后過濾并濃縮得到粘性油。
將粗產物溶于水，用碳酸氫鈉水溶液將pH調節(jié)到9.0，該物質通過交聯葡聚糖G10柱而脫鹽。冷凍干燥后得到白色固體(20mg)，其光譜表明其與用方法1得到的物質本質上相同。13C nmr (D2O):δ33.0,38.7,42.9,43.0,43.1,53.9,54.3,56.5,61.6,171.2,176.4,177.0。
實施例3以磺基琥珀酰胺酸鈉結尾的樹狀聚合物的制備。A．PAMAM1.0將固體馬來酐(0.11g；1.1mmol)加入PAMAM1.0(0.12g；0.33mmol)的攪拌的無水DMF(3ml)溶液中.當該酐溶解時該混合物變成棕色并輕微發(fā)熱，將所得溶液在室溫下攪拌過夜。然后將該溶液濃縮(30°/10-4mmHg)得到粘性油。1H和13C(D2O)核磁共振譜(D2O)顯示PAMAM1.0完全轉化為三酰胺和一些馬來酸。13C nmr(D2O):δ33.1,42.8,43.1,54.3,135.0,137.1,169.1,171.9,173.3。
然后將粗三酰胺溶于水(4ml)并加入固體亞硫酸鈉(0.20g；1.6mmol)。使所得溶液在室溫下放置4天，然后濃縮。1H和13C(D2O)核磁共振譜顯示為以區(qū)域異構的磺基琥珀酰胺酸鈉結尾的PAMAM1.0樹狀聚合物與一些磺基琥珀酸的1∶1混合物。該粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖G10；水)純化得到以磺基琥珀酰胺酸鈉結尾的PAMAM1.0樹狀聚合物的樣品(107mg)。13C nmr(D2O):δ33.3.39.6,40.0,42.9,43.1,54.0,67.9,69.4,173.8,176.3,177.6,181.8。B．PAMAM2.0如上所述制備以區(qū)域異構的磺基琥珀酰胺酸鈉結尾的PAMAM2.0樹狀聚合物的混合物。13C nmr PAMAM2.0馬來酰胺酸衍生物(D2O):δ32.8,33.0,38.7,42.9,53.8,54.3,56.5,135.2,136.8,169.2,171.9,173.5,174.6。13C nmr PAMAM2.0磺基琥珀酰胺酸鈉衍生物(D2O):δ37.0,40.1,41.1,43.0,43.2,43.9,53.0,53.3,55.5,68.0,69.4,173.8.177.6,179.1,179.5,179.8.182.3。C．PAMAM4.0 BRI6038將固體馬來酐(60mg；0.6mmol)加入PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的攪拌的無水DMF(2ml)溶液中。一開始該混合物變得混濁但很快得到澄清溶液，將其在室溫下攪拌過夜。然后將該溶液濃縮(35°/10-4mmHg)得到粘性油。1H和13C(D2O)核磁共振譜顯示PAMAM4.0完全轉化為聚酰胺和一些馬來酸。然后將該粗聚酰胺溶于水(2ml)并加入亞硫酸鈉(126mg；1.0mmol)水(2ml)溶液。使所得溶液在室溫下放置2天，然后濃縮。1H和13C(D2O)核磁共振譜顯示為以區(qū)域異構的磺基琥珀酰胺酸鈉結尾的PAMAM4.0樹狀聚合物與一些磺基琥珀酸的混合物。該粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化得到以24個區(qū)域異構的磺基琥珀酰胺酸基團結尾的PAMAM4.0的樣品(90mg)。1H nmr(D2O):δ2.4-2.6；2.7-3.1；3.2-3.4；3.9-4.0。13C nmr(D2O):δ36.2；39.8；40.5；43.0；43.2；53.5；55.8；68.1；69.5；173.8；177.4；177.6；178.7；182.3。
實施例4以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺鈉結尾的樹狀聚合物的制備。a．N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁基銨的制備將固體琥珀酐(0.5g；5.0mmol)加入2-氨乙基磺酸四丁基銨(1.83g；5.0mmol)的攪拌的無水二氯甲烷(30ml)溶液中。該琥珀酐緩慢溶解，并將所得混濁溶液在室溫下攪拌過夜。將該混合物過濾并濃縮濾液得到粘性油(2.41g)。13C核磁共振譜顯示完全轉化為預期的一酰胺和小量琥珀酸。通過將二氯甲烷溶液逐滴加入到大大過量的二乙醚中而使該產物重復沉淀，從而得到N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁基銨(1.762g；76％)，為白色固體，mp125-127℃。1H nmr(CDCl3):δ0.86(t,12h,4×CH3),1.28(m,8H,4×CH2),1.50(m,8H,4×CH2),2.33(m,2H,CH2COOH),2.44(m,2H,CH2CONH),2.76(m,2H,CH2NHCO),3.12(m,8H,4×CH2N),3.50(m,2H,CH2SO3),7.53(br t,1H,NH)。13C nmr(CDCl3):δ13.5,19.5,23.8,30.1,30.9,35.6,50.0,58.5,172.0,174.1。b．4-硝苯基N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁銨的制備將二環(huán)己基碳化二亞胺(45mg；0.22mmol)的無水二氯甲烷(1ml)溶液加入N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁銨(94mg；0.20mmol)的攪拌的二氯甲烷(2ml)溶液中，該混合物在室溫下攪拌過夜。將所得懸液過濾并濃縮濾液得到粗的活性酯，其不必進一步純化即可使用。A．以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺鈉結尾的PAMAM樹狀聚合物的制備PAMAM4.0 BRI2786將粗4-硝苯基N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁銨(0.30mmol)的無水DMF(1ml)溶液加入攪拌的PAMAM4.0(51.5mg；0.01mmol)的50％DMF水溶液(3ml)中，并將所得黃色溶液在室溫下攪拌過夜。然后濃縮該混合物(35°/10-5mmHg)，且黃色殘余物在水和氯仿之間分配。分離水層，用氯仿(2×)和乙酸乙酯洗滌，然后濃縮得到黃色油(134mg)。將該粗產物通過離子交換樹脂Amberlite IR120(Na)柱而將其轉化為85mg鈉鹽。將該物質通過凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)進一步純化得到以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺鈉結尾的PAMAM4.0樹狀聚合物(45mg)。13C nmr(D2O):δ33.2,33.6,35.5,39.0,39.5,42.8,43.2,53.8,54.1,54.4,56.6,176.5,176.9,177.2,178.9,179.4。
類似地制備相應的以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺鈉基團結尾的PAMAM1.0和PAMAM3.0(BRI2785)樹狀聚合物。13C nmr PAMAM3.0衍生物(D2O):δ33.4,35.5,39.0,39.5,42.9,43.2,53.8,54.1,54.3,56.5,176.4,176.9,177.4,178.9,179.4。13C nmr PAMAM1.0衍生物(D2O):δ34.9,35.5,39.5,42.9,43.1,53.7,54.1,179.0,179.1,179.3。B．以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺鈉結尾的聚賴氨酸樹狀聚合物的制備BHAlyslys2lys4lys8lys16BRI2789將三氟乙酸(1ml)加入BHAlyslys2lys4lys8DBL16(36.5mg；5.0μmol)的無水二氯甲烷(1ml)懸液中，并將所得溶液在氮氣下在室溫下攪拌2小時，然后濃縮。將殘余物溶于干燥DMSO(2ml)并用三乙胺將pH調節(jié)到8.5。然后滴加粗4-硝苯基N-(2-磺乙基)琥珀酰胺酸四丁銨(約0.2mmol)的DMSO溶液(1ml)并將該混合物在室溫下攪拌過夜。濃縮該黃色溶液(50°/10-5mmHg)，且黃色殘余物在水和氯仿之間分配。分離水層，用氯仿(3×)和乙酸乙酯洗滌，然后濃縮得到油(99mg)。將該粗產物通過離子交換樹脂AmberliteIR120(Na)柱而將其轉化為81mg鈉鹽。將該物質通過凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)進一步純化得到以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺鈉結尾的BHAlyslys2lys4lys8lys16樹狀聚合物(39mg)。13C nmr(D2O):δ27.0,32.3,35.2,35.3,35.6,35.7,39.5,43.5,54.1,58.5,131.5,132.0,133.3,145.1,177.8,178.0,178.4,178.8,178.9,179.2,179.7,179.8。
類似地制備相應的以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺鈉基團結尾的BHAlyslys2,BHAlyslys2lys4(BRI2787)和BHAlyslys2lys4lys8(BRI2788)樹狀聚合物。13C nmr BHAlyslys2lys4lys8衍生物(D2O):δ26.9,32.3,35.1,35.3,35.6,35.7,39.5,43.5,54.1,58.5,131.6,131.9,132.2,132.3,133.2,133.3,145.0,145.2,177.2,177.8,177.9,178.0,178.2,178.3,178.6,178.7,178.8,178.9,179.2,179.3,179.7,179.8。13C nmr BHAlyslys21ys4衍生物(D2O):δ26.9,32.3,35.1,35.4,35.7,35.8,39.5,43.5,54.1,58.5,61.8,131.7,132.0,132.2,132.3,133.2,133.3,145.0,145.1,177.3,178.0,178.3,178.4,178.7,178.9,179.0,179.3,179.7,179.8。13C nmr BHAlyslys2衍生物(D2O):δ26.9,27.1,32.2,32.3,34.7,34.8,35.1,35.3,35.6,35.7,39.5,43.4,54.1,58.6,61.8,131.7,131.9,132.2,132.3,133.3,144.9,145.0,177.7,178.4,178.8,179.0,179.3,180.0。
實施例5以4-磺苯基硫脲鈉結尾的樹狀聚合物的制備A．PAMAM4.0 BRI2791將固體4-磺苯基異硫氰酸鈉一水合物(500mg；1.96mmol)加入PAMAM4.0(300mg；0.0582mmol)的水(10ml)溶液中，并將所得溶液在氮氣下在53℃加熱2小時，然后冷卻。濃縮該溶液，黃色固體殘余物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化。合并純的級分并冷凍干燥得到以4-磺苯基硫脲鈉結尾的PAMAM4.0樹狀聚合物，為松散的白色固體(370mg)。1H nmr(D2O):δ2.28；2.52；2.69；3.15；3.27；3.60；7.32(d,J=9Hz)；7.72(d,J=9Hz)。13C nmr(D2O):δ36.9；41.1；43.1；48.3；53.6；55.8；129.0；131.1；144.4；178.5；179.1；184.4。
類似地制備相應的分別以3、6、12和48個4-磺苯基硫脲鈉基團結尾的PAMAM1.0,PAMAM2.0(BRI2790),PAMAM3.0和PAMAM5.0(BRI2991)樹狀聚合物。B．PAMAM4.0(EDA)BRI6045將固體4-磺苯基異硫氰酸鈉一水合物(130mg；0.5mmol)加入PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmo1)的水(4ml)溶液中，并將所得溶液在氮氣下在53℃加熱2小時，然后冷卻。濃縮該溶液，固體殘余物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化。合并純的級分并冷凍干燥得到以32個4-磺苯基硫脲鈉基團結尾的PAMAM4.0，為松散的白色固體(136mg)。1H nmr(D2O):δ2.30；2.50；2.70；3.18；3.62；7.35(d,J=9Hz)；7.72(d,J=9Hz)。13C nmr(D2O):δ36.8；41.0；43.1；48.4；53.6；55.7；128.9；131.0；144.3；178.5；179.0；184.5。C．BHAlyslys2lys4lys8lys16BRI2792在氮氣下，將三氟乙酸(4ml)加入BHAlyslys2lys4lys8DBL16(0.73g；0.1mmol)的無水二氯甲烷(4ml)懸液中。觀察到在短時間內有大量氣體放出，將所得溶液在室溫下攪拌2小時，然后濃縮。將殘余糊漿溶于水(5ml)，讓該溶液通過Amberlite IRA-401(OH)柱并將濾液濃縮得到BHAlyslys2lys4lys8lys16，為粘性油(0.49g)。將該油再次溶于水(5ml)并加入N,N-二甲基-N-烯丙胺緩沖液(pH9.5；3ml)。然后加入固體4-磺苯基異硫氰酸鈉一水合物(1.30g；5.1mmol)并將所得溶液在氮氣下在53℃加熱2小時，然后冷卻。濃縮該溶液，棕色固體殘余物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化。合并純的級分，通過Amberlite IR 120(Na)柱并冷凍干燥得到以4-磺苯基硫脲鈉結尾的BHAlyslys2lys4lys8lys16樹狀聚合物，為松散的白色固體(374mg)。1H nmr(D2O):δ1.40；1.72；3.08；3.42；4.24；4.60；7.30；7.40(d,J=9Hz)；7.78(d,J=9Hz)。13C nmr(D2O):δ27.3；32.5；35.9；43.7；48.9；58.6；63.3；128.8；131.0；143.7；144.7；145.1；177.7；178.1；183.8；185.2。
類似地制備相應的分別以16、64和128個4-磺苯基硫脲鈉基團結尾的BHAlyslys2lys4lys8,BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32(BRI2992)和BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32lys64(BRI2993)樹狀聚合物。
實施例6以3,6-二磺萘基硫脲鈉結尾的樹狀聚合物的制備A．PAMAM4.0 RRI2923
將固體3,6-二磺萘基異硫氰酸鈉(160mg；0.41mmol)加入PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的水(3ml)溶液中，并將所得溶液在氮氣下在53℃加熱2小時，然后冷卻。濃縮該溶液，棕色固體殘余物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化。合并純的級分并濃縮得到以3,6-二磺萘基硫脲鈉結尾的PAMAM4.0樹狀聚合物，為棕色固體(73mg)。
1H nmr(D2O):δ2.30；2.60；2.74；3.20；3.57；7.75；7.86；8.28。13C nmr(D2O):δ35.0；39.9；43.1；48.1；53.8；56.1；128.4；128.6；129.3；131.0；131.3；136.0；136.8；138.2；145.5；146.0；177.2；177.8；185.5。
類似地制備相應的以3,6-二磺萘基硫脲鈉基團結尾的PAMAM2.0樹狀聚合物。B．PAMAM4.0(EDA)BRI6046將固體3,6-二磺萘基異硫氰酸鈉(220mg；0.57mmol)加入PAMAM4.0(EDA)(74mg；0.01mmol)的水(4ml)溶液中，并將所得溶液在氮氣下在53℃加熱2小時，然后冷卻。濃縮該溶液，棕色固體殘余物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化。合并純的級分并濃縮得到以32個3,6-二磺萘基硫脲鈉基團結尾的PAMAM4.0，為黃褐色固體(148mg)。
1H nmr(D2O):δ2.30；2.80；3.20；3.54；7.74；7.85；8.25。13C nmr(D2O):δ36.0；40.8；43.1；48.3；53.6；55.9；128.5；129.4；131.0；131.3；136.0；136.8；138.3；145.5；146.0；178.2；185.6。C．BHAlyslys2lys4lys8lys16BRI2999在氮氣下，將三氟乙酸(2ml)加入BHAlyslys2lys4lys8DBL16(73mg；0.01mmol)的無水二氯甲烷(2ml)懸液中。觀察到在短時間內有大量氣體放出，將所得溶液在室溫下攪拌2小時，然后濃縮。將殘余糊漿溶于水(5ml)，讓該溶液通過Amberlite IRA-401(OH)柱并將濾液濃縮得到BHAlyslys2lys4lys8lys16，為粘性油。將該油再次溶于水(5ml)并加入N,N-二甲基-N-烯丙胺緩沖液(pH9.5；3ml)。然后加入固體3,6-二磺萘基異硫氰酸鈉(234mg；0.60mmol)并將所得溶液在氮氣下在53℃加熱2小時，然后冷卻。濃縮該溶液，棕色固體殘余物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化。合并純的級分，通過Amberlite IR 120(Na)柱并冷凍干燥得到以32個3,6-二磺萘基硫脲鈉基團結尾的BHAlyslys2lys4lys8lys16樹狀聚合物，為松散的米色固體(119mg)。1H nmr(D2O):δ1.0-2.0；3.18；3.43；4.31；7.22；7.80；7.89；8.25。13C nmr(D2O):δ27.2；32.4；35.3；43.7；49.0；58.5；63.6；128.4；129.1；131.4；136.1；136.6；138.6；139.0；145.1；145.6；178.4；184.8；186.7。
實施例7以4-磺萘基硫脲鈉結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0 BRI2997將固體4-磺萘基異硫氰酸鈉(180mg；0.5mmol)加入PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的水(5ml)溶液中，并將該混合物在氮氣下在53℃加熱2小時，然后冷卻。從所得懸液中減壓餾去水，米色固體殘余物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化。合并純的級分并冷凍干燥得到以4-磺萘基硫脲鈉結尾的PAMAM4.0樹狀聚合物，為松散的白色固體(60mg)。1Hnmr(D2O):δ2.20；2.60；3.14；3.48；7.23；7.47；7.56；7.77；7.93(d,J=6Hz)；8.56(d,J=6Hz)。13C nmr(D2O):δ 35.8；40.5；43.1；48.4；53.6；55.9；127.6；128.6；130.3；131.9；132.5；133.5；134.7；140.5；142.7；177.8；178.0；185.4。
實施例8以3,5-二磺苯基硫脲鈉結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0 BRI6039將固體3,5-二磺苯基異硫氰酸鈉(110mg；0.32mmol)加入PAMAM4.0(63mg；0.012mmol)的水(3ml)溶液中，并將所得溶液在氮氣下在53℃加熱2小時，然后冷卻。濃縮該溶液，棕色固體殘余物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖G25；水)純化。合并純的級分并濃縮得到以24個3,5-二磺苯基硫脲鈉基團結尾的PAMAM4.0，為米色固體(110mg)。1H nmr(D2O):δ2.53；3.08；3.36；3.66；7.90；7.95。13C nmr(D2O):δ 34.8；41.0；43.1；48.0；53.7；56.2；124.1；128.6；143.5；148.8；177.6；185.0。
實施例9以3,6,8-三磺萘基硫脲鈉結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0 BRI2998將固體3,6,8-三磺萘基異硫氰酸鈉(250mg；0.5mmol)加入PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)和N,N-二甲基-N-烯丙胺緩沖液(pH9.5；1ml)的水(2ml)溶液中，并將該混合物在氮氣下在53℃加熱2小時，然后冷卻。將該混合物減壓濃縮得到橙色固體。將殘余固體溶于水(2ml)并通過Amberlite IR-120(Na)短柱。然后濃縮濾液，殘余物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化。合并純的級分并冷凍干燥得到以3,6,8-三磺萘基硫脲鈉結尾的PAMAM4.0樹狀聚合物，為米色固體(102mg)。1H nmr(D2O):δ2.65；3.02；3.30；3.66；8.05；8.42；8.59；8.67。13C nmr(D2O):δ33.2；38.7；43.2；43.7；47.8；54.0；54.3；56.7；131.0；131.3；131.9；135.9；138.0；139.6；143.8；144.1；145.6；176.2；176.5；186.0。
實施例10以4-(磺甲基)苯甲酰胺鈉結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0 BRI6040將固體4-硝苯基4-(氯甲基)苯甲酸酯(200mg；0.68mmol)加入PAMAM4.0(70mg；0.014mmol)的攪拌的無水DMSO(4ml)溶液中，并將所得黃色溶液在室溫下攪拌2小時。然后濃縮(10-4mmHg；40℃)該溶液，殘余物用水和二氯甲烷(1∶1)的混合物萃取。將剩下的固體物質溶于DMSO(5ml)并加入亞硫酸鈉(130mg；1mmol)的水(3ml)溶液。將所得到的微混濁的混合物放置4天，之后加入水(2ml)，由此形成澄清的均質的黃色溶液。然后濃縮該溶液，首先在25mmHg和40℃條件下，然后在10-4mmHg和50℃條件下濃縮得到粗產物。粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖G25；水)純化得到以24個4-(磺甲基)苯甲酰胺鈉基團結尾的PAMAM4.0(24mg)。1H nmr(D2O):δ2.25；2.66；3.08；3.20；3.33；3.38；4.01；7.40(br d)；7.62(br d)。13C nmr(D2O):δ 36.7；40.9；43.0；43.6；53.5；55.5；61.0；131.6；135.0；137.2；140.4；174.5；178.6；179.2。
實施例11以4-磺基苯甲酰胺結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)BRI6116將固體N-羥基琥珀酰亞氨基4-磺基苯甲酸鉀(100mg；0.3mmol)加入PAMAM4.0(EDA)(35mg；0.005mmol)的0.1M pH8.5硼酸鹽緩沖溶液(5ml)中，并將該溶液在室溫下攪拌2小時。在此階段所得奶狀溶液的pH為4.5。然后加入1M碳酸鈉溶液(1ml)得到澄清溶液，將其濃縮得到白色固體粗產物。該粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖G25；水)純化得到以32個4-磺基苯甲酰胺鈉基團結尾的PAMAM4.0(EDA)(47mg)。1H nmr(D2O):δ2.25；2.42；2.63；3.05；3.18；3.31；3.38；7.72(d,J=8Hz)；7.78(d,J=8Hz)。13C nmr(D2O):δ36.0；40.4；43.0；43.7；53.7；55.8；130.2；132.2；140.4；150.1；173.6；178.0；178.5。
實施例12以N-(4-磺苯基)丙酰胺鈉結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)BRI6117將固體N-(4-磺苯基)丙烯酰胺鈉(250mg；1mmol)和固體碳酸鈉(106mg；1mmol)依次加入PAMAM4.0(EDA)(78mg；0.011mmol)的攪拌的水(4ml)溶液中。所得溶液在氮氣下攪拌4天，然后冷凍干燥得到松散的白色固體。該粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化得到以64個N-(4-磺苯基)丙酰胺鈉基團結尾的PAMAM4.0(EDA)(206mg)。13C核磁共振譜顯示有一烷基化末端氨基的弱痕跡。1H nmr(D2O):δ2.10；2.48；2.58；2.79；3.20；7.42(d,J=7Hz)；7.65(d,J=7Hz)。13C nmr(D2O):δ 36.5；37.9；41.1；53.4；55.6；124.8；130.9；143.0；144.2；177.4；178.5。
實施例13以4-磺苯基脲鈉結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)BRI6115將磺胺酸鈉(195mg；1mmol)的無水DMSO(3ml)溶液滴加到N,N’-二琥珀酰亞胺碳酸酯(530mg；2mmol)的無水DMSO溶液(4ml)中，并將所得棕色溶液在室溫下攪拌20小時。加入PAMAM4.0(EDA)(75mg；0.011mmol)的無水DMSO(1ml)溶液并將該溶液再攪拌18小時。然后在高真空下濃縮該溶液(10-5mmHg；35℃)得到黃色半固體。將該粗產物溶于DMSO(4ml)并將該溶液加入到200ml充分攪拌的乙酸乙酯中。通過過濾收集沉淀出的白色固體并用乙酸乙酯(2×)和乙醚(2×)洗滌，然后干燥得到白色粉末(275mg)。該物質進一步用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化得到以32個4-磺苯基脲鈉基團結尾的PAMAM4.0(EDA)(106mg)。1H nmr(D2O):δ2.31；2.55；2.75；3.19；7.32(d,J=9Hz)；7.63(d,J=9Hz)。13C nmr(D2O):δ36.3；40.7；43.3；43.8；53.7；55.7；123.3；130.9；140.9；146.0；161.4；178.2；178.6。
實施例14以N,N,N-三甲基氯化甘氨酰胺結尾的樹狀聚合物的制備BHAlyslys2lys4lys8lys16BRI2922將三氟乙酸(4ml)加入BHAlyslys2lys4lys8DBL16(220mg；30μmol)的無水二氯甲烷(2ml)懸液中，并將所得溶液在氮氣下在室溫攪拌2小時，然后濃縮。將殘余物溶于干燥DMSO(5ml)并用三乙胺將pH調節(jié)到85。然后加入固體4-硝苯基N,N,N-三甲基氯化甘氨酸酯(0.50g；1.8mmol)并將該混合物在室溫下攪拌過夜。然后濃縮該混濁溶液(50°/10-5mmHg)，殘余物在水和二氯甲烷之間分配。分離水層，用二氯甲烷(3×)和乙酸乙酯洗滌，然后濃縮得到油(1.128g)。該粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化得到以N,N,N-三甲基甘氨酰胺結尾的BHAlyslys2lys4lys8lys16樹狀聚合物(116mg)。13C nmr(D2O):δ25.5,30.5,30.8,33.4,42.1,56.5,57.1,67.5,68.1,166.7,167.0,167.1,176.0,176.2。
實施例15以4-三甲銨苯甲酰胺結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0 BRI6043將1,1’-羰基二咪唑(85mg；0.52mmol)加入4-三甲銨苯甲酸碘化物(154mg；0.5mmol)的無水DMF(4ml)溶液中并將該混合物在氬氣下在室溫攪拌2小時。在此期間有白色固體與該溶液分離。然后加入PAMAM4.0(58mg；0.011mmol)的無水DMF(2ml)溶液并將該混合物在室溫下攪拌過夜。這一階段后大部分沉淀已溶解,且該溶液的茚三酮試驗為陰性。濃縮該混合物(10-4mmHg；30℃)得到白色固體殘余物。粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；10％AcOH)純化得到以24個4-三甲銨苯甲酰胺基團結尾的PAMAM4.0,為乙酸鹽(89mg)。1H nmr(D2O):δ1.96；2.65-2.85；3.25-3.55；3.64；7.92。13C nmr(D2O):δ25.8；33.1；33.5；38.7；43.1；43.5；53.5；54.1；56.4；61.2；124.8；133.6；139.9；153.2；173.2；176.3；176.8；182.6。
類似地制備以6個4-三甲銨苯甲酰胺基團結尾的相應的PAMAM2.0樹狀聚合物。
實施例16以4-(三甲銨甲基)苯甲酰胺結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0 BRI6044將固體4-硝苯基4-(氯甲基)苯甲酸酯(150mg；0.5mmol)加入攪拌的PAMAM4.0(52mg；0.01mmol)的無水DMSO(3ml)溶液中。當茚三酮試驗為陰性(pH約8.5)時，將所得黃色溶液在室溫下攪拌20小時。然后濃縮該溶液(10-5mmHg；40℃)，殘余物用水和二氯甲烷的混合物(1∶1)振搖。通過過濾收集不溶的凝膠樣物質，用水(2×)和二氯甲烷(2×)洗滌，然后空氣干燥。將粗的以4-(氯甲基)苯甲酰胺結尾的樹狀聚合物溶于25％三甲胺水溶液(20ml)中并將該黃色溶液放置過夜。然后濃縮該溶液，殘余物溶于水(5ml)并讓該溶液通過Amberlite IRA-401(OH)柱。將無色的濾液濃縮得到粘性油，其用凝膠過濾法(交聯葡聚糖G10；10％AcOH)純化得到以24個4-(三甲銨甲基)苯甲酰胺基團結尾的PAMAM4.0(90mg)。
1H nmr(D2O):δ1.88；2.65-2.80；2.98；3.10-3.60；7.52(br d,J=9Hz)；7.72(br d,J=9Hz)。13C nmr(D2O):δ26.6；33.4；38.8；43.2；43.5；53.6；53.6；54.1；56.8；62.8；73.0；132.1；135.3；137.5；140.0；176.4；176.9；183.6。
實施例17以N-(2-乙酰氧基乙基)-N,N-(二甲銨)甲基羧酰胺結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0將固體1,1'-羰基二咪唑(85mg；0.52mmol)加入N-(2-乙酰氧基乙基)-N-(羧甲基)-N,N-二甲基溴化銨(135mg；0.5mmol)的無水DMF(3ml)溶液中并將所得溶液在氮氣下攪拌2小時。然后加入PAMAM4.0(60mg；0.012mmol)的DMF(2ml)溶液，這使得立即形成了絮狀沉淀，隨后又緩慢溶解。將該混合物攪拌2天，然后濃縮(10-4mmHg；40℃)得到粘性油。粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖G10；10％AcOH)純化得到以24個N-(2-乙酰氧基乙基)-N,N-(二甲銨)甲基羧酰胺基團結尾的PAMAM4.0(64mg)。1Hnmr(D2O):δ1.93；2.05；2.70；3.10-3.60；3.28；3.93(m)；4.14；4.48(m)。13C nmr(D2O):δ24.6；26.2；33.2；38.7；42.8；42.9；53.9；57.4；62.6；67.3；67.5；168.9；176.4；176.8；177.3；183.2。
實施例18以胍基結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0 BRI6042將PAMAM4.0(63mg；0.012mmol)和甲基硫代硫酸假脲(170mg；0.61mmol)的水(5ml)溶液(pH 10.5)在氮氣下在80℃加熱2小時。然后濃縮該溶液，殘余物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖G10；10％AcOH)純化得到以24個胍基結尾的PAMAM4.0，為乙酸鹽(107mg)。1H nmr(D2O):δ2.00；2.80(brt)；3.09(brt)；3.32,3.45(brt)；3.60(brt)。13C nmr(D2O):δ25.2；33.2；33.4；38.7；41.2；42.6；43.4；44.7；53.5；54.0；56.3；176.5；176.7；176.9；181.6。
類似地制備相應的以6個胍基結尾的PAMAM 2.0樹狀聚合物。
實施例19以4-([1,4,8,11-四氮雜環(huán)十四烷]甲基)苯甲酰胺結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0 BRI6041將1-(4-羧苯基)甲基-1,4,8,11-四氮雜環(huán)十四烷四鹽酸化物(120mg；0.25mmol),N-羥基琥珀酰亞胺(60mg；0.52mmol)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸化物(250mg；1.3mmol)在pH7磷酸鹽緩沖液(10ml)中的溶液在室溫下放置1小時，然后加入PAMAM4.0(32mg；0.006mmol)在pH7磷酸鹽緩沖液(10ml)中的溶液。將該混合物放置2天，然后濃縮。殘余物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；10％AcOH)純化得到用1H和13C核磁共振譜確定的以約12個4-([1,4,8,11-四氮雜環(huán)十四烷]甲基)苯甲酰胺基團結尾的PAMAM4.0(80mg)。然后將該產物溶于水并通過Amberlite IRA-401(Cl)樹脂柱，之后濃縮。將殘余物溶于水(1ml)，加入濃鹽酸(1ml)，該溶液用乙醇(30ml)稀釋以沉淀出白色固體。通過過濾收集該固體(68mg)。再次進行1H和13C核磁共振測定顯示了末端氨基的約50％官能化。1H nmr(D2O):δ2.17；2.36；2.50；2.78；2.85；3.25；3.40；3.50；3.60,3.62；4.49；7.63(br d)；7.78(br d)。13C nmr(D2O):δ22.7；23.1；33.2；38.8；39.9；40.2；40.3；41.0；41.2；42.0；42.9；43.2；43.6；45.5；46.1；49.1；52.2；53.9；54.3；56.6；62.7；132.5；135.7；137.1；139.7；174.3；176.2；176.3；176.7；177.0；178.2；178.5。
實施例20以4-羧基-3-羥基芐胺結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)BRI6119將氰基硼氫化鈉(32mg；0.5mmol)加入PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol),4-甲酰-2-羥基苯甲酸(83mg；0.5mmol)和碳酸氫鈉(42mg；0.5mmol)在水(4ml)中的混合物中。將該非均質的橙色混合物在室溫下攪拌4小時，在此期間其變?yōu)榫|的。然后濃縮該橙色溶液，殘余物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化得到以約32個4-羧基-3-羥基芐胺基團結尾的PAMAM4.0(EDA)(91mg)。1H和13C(D2O)核磁共振譜顯示末端氨基多數為一烷基化，但有一些表現為二烷基化，兩個譜均顯示為寬峰。13C nmr(D2O):δ37.0；41.1；50.9；53.4；55.5；55.8；61.5；120.9；122.2；122.4；132.3；132.7；135.0；135.8；163.5；163.7；169.0；178.6；179.3。1H nmr(D2O):δ 2.20；2.35；2.60；3.15；3.30；3.55；4.25；6.68；7.12；7.55。
實施例21以4-羧苯基酰胺結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)將固體4-羧苯基異硫氰酸鹽(86mg；0.48mmol)加入PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(20ml)溶液中。用飽和碳酸氫鈉溶液將所得混濁溶液的pH調節(jié)到9，然后在室溫下攪拌24小時。將該反應混合物過濾，濾液濃縮得到白色固體殘余物，其用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化，然后冷凍干燥得到白色松散固體產物(68mg)。
實施例22以3,5-二羧苯基酰胺結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)將固體3,5-二羧苯基異硫氰酸鹽(112mg；0.5mmol)加入PAMAM4.0(EDA)(70mg；0.01mmol)的水(5ml)溶液中。用1MNa2CO3溶液將所得混濁溶液的pH調節(jié)到10，然后在氮氣下在53℃加熱2小時。將該反應混合物過濾，濾液濃縮得到棕色固體殘余物，其用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化，然后冷凍干燥得到淡棕色固體產物(112mg)。
實施例23以4-膦酰氧基苯基硫脲鈉結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)將固體4-膦酰氧基苯基異硫氰酸鈉(251mg)加入PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(20ml)溶液中。將所得溶液(pH9)在氮氣下在室溫攪拌24小時。將該反應混合物濃縮得到白色固體殘余物，其用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化，然后冷凍干燥得到松散的白色固體產物(86mg)。
實施例24以4-(膦酰甲基)苯基硫脲鈉結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)將固體4-(膦酰甲基)苯基異硫氰酸鈉(97mg)加入PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(30ml)溶液中。所得溶液在氮氣下在室溫攪拌3天，定期加入飽和碳酸氫鈉溶液以維持pH為8。將該反應混合物濃縮得到白色固體殘余物，其用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化，然后冷凍干燥得到松散的白色固體產物(102mg)。
實施例25以4-(膦酰甲基)苯基硫脲乙酯鈉結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)將固體4-(膦酰甲基)苯基異硫氰酸乙酯鈉(109mg)加入PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的DMF(30ml)溶液中。所得溶液在氮氣下在室溫攪拌17小時，定期加入飽和碳酸氫鈉溶液以維持pH為8。將該反應混合物濃縮得到白色固體殘余物，其用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化，然后冷凍干燥得到松散的白色固體產物(30mg)。
實施例26以4-磺苯基硫脲鈉結尾的聚賴氨酸的制備將固體4-磺苯基異硫氰酸鈉一水合物(2.55g；10mmol)加入聚-L-賴氨酸(15-30K)(Sigma化學公司)(1.0g)在水(20ml)和N,N-二甲基-N-烯丙胺緩沖液(pH9.5；15ml)的混合物中的溶液中。當茚三酮試驗為陰性時，將所得混合物在氮氣下在53℃加熱3小時。將冷卻后的混合物過濾，濾液濃縮得到灰色固體殘余物。將該固體殘余物再溶于水并通過離子交換樹脂Amberlite IR 120(Na)柱，然后濃縮。粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化并冷凍干燥得到以4-磺苯基硫脲鈉結尾的聚-L-賴氨酸BRI2995，為白色松散固體(1.25g)。
類似地制備分子量級分1-4K BRI2994、4-15K BRI2967、150-300K BRI2996的以4-磺苯基硫脲鈉結尾的聚賴氨酸。
實施例27以3,6-二磺萘基硫脲鈉結尾的聚賴氨酸的制備。
將固體3,6-二磺萘基異硫氰酸鈉(200mg；0.51mmol)加入聚-L-賴氨酸(15-30K)(50mg)在水(2ml)和N,N-二甲基-N-烯丙胺緩沖液(pH9.5；2ml)的混合物中的溶液中。當茚三酮試驗為陰性時，將所得混合物在氮氣下在53℃加熱3小時。將冷卻后的混合物過濾，濾液濃縮得到棕色固體殘余物。將該固體殘余物再溶于水并通過離子交換樹脂Amberlite IR 120(Na)柱，然后濃縮。粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化并冷凍干燥得到以3,6-二磺萘基硫脲鈉結尾的聚-L-賴氨酸BRI6047，為白色松散固體(87mg)。
實施例28以Cn-烷基連接的2-硫代唾液糖苷(thiosialoside)結尾的樹狀聚合物和直鏈聚合物的制備用下述方法制備[(8-辛酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙?；?3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯。
向5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙?；?2-S-乙?；?3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖酸甲酯(Hasegawa等人，1986)(100mg)的無水二甲基甲酰胺(1ml)溶液中加入8-溴辛酸(41mg)和二乙胺(280mg)，該溶液在20℃攪拌17小時。真空除去溶劑，殘余物在乙酸乙酯和冰冷的5％鹽酸之間分配。有機層用水洗滌，用硫酸鈉干燥，并蒸發(fā)得到殘余物(130mg)。將其溶于乙酸乙酯(5ml)中并加入N-羥基琥珀酰亞胺(26mg)和二環(huán)己基碳化二亞胺(46mg)。該混合物在20℃攪拌17小時，然后濾除白色沉淀。將濾液濃縮并用快速硅膠色譜法純化，用乙酸乙酯洗脫。將含有產物的洗脫級分合并，蒸發(fā)得到白色泡沫97mg。71％。
類似地制備[(11-十一烷酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯。甲酯。甲酯。甲酯。A．PAMAM[EDA]4.0[[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6112在惰性氣氛下，向PAMAM[EDA]4.0(50mg)的無水二甲亞砜溶液(4ml)中加入[(8-辛酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙酰基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯(300mg)，并將該溶液在20℃攪拌60小時。真空除去溶劑，將殘余物溶于甲醇(2ml)。該溶液用交聯葡聚糖LH20進行體積排阻色譜，用甲醇洗脫。蒸發(fā)溶劑得到產物PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙?；?3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯]32，為白色粉末。182mg。93％用下述方法將其轉化為游離的唾液糖苷(sialoside)在氨氣下在20℃，向PAMAM[EDA]4.0[[(8-辛酰氨基)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙?；?3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯]32(182mg)的無水甲醇(3ml)溶液中加入新鮮制備的0.19M甲醇鈉的甲醇溶液(7ml)并將該混合物攪拌2.5小時。蒸除溶劑，將殘余物溶于水(10ml)并攪拌3小時。該溶液用交聯葡聚糖LH20進行體積排阻色譜，用水洗脫。冷凍干燥后得到產物PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32，為淡檸檬色粉末110mg。77％用類似方法制備PAMAM[EDA]4.0[(11-十一酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6147PAMAM[EDA]4.0[(乙酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6121PAMAM[EDA]4.0[(4-甲基苯甲酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6120B．BHAlyslys2lys4lys8lys16[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6169將BHAlyslys2lys4lys8lys16(t-Boc)32(20.3mg)在三氟乙酸(2ml)和二氯甲烷(2ml)的混合物中的溶液在20℃下攪拌2小時，然后真空除去溶劑。將殘余物溶于干燥的二甲亞砜(1ml)并加入二-異丙基乙胺(25mg)和[(8-辛酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙?；?3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯(78mg)。將該混合物在氬氣下在20℃攪拌60小時，然后真空除去溶劑。將殘余物溶于新鮮制備的甲醇鈉的0.1M甲醇溶液(2.5ml)并將該混合物在氬氣下在20℃攪拌3小時。蒸除溶劑，將殘余物溶于水(1ml)并攪拌17小時。該溶液用交聯葡聚糖LH20進行體積排阻色譜，用水洗脫。冷凍干燥后得到產物BHAlyslys2lys4lys8lys16[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32，為白色粉末44mg。86％。C．聚-L-賴氨酰[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]nBRI6150向聚-L-賴氨酸．HBr MW 150-300Kd(22mg)的無水二甲亞砜(1ml)溶液中加入二異丙基乙胺(15mg)和[(8-辛酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)5-乙酰氨基-4,7,8,9-四-O-乙?；?3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯(90mg)。該混合物在氬氣下在20℃攪拌60小時，然后真空除去溶劑。將殘余物溶于新鮮配制的甲醇鈉的0.5M甲醇溶液(4ml)并將該混合物在氫氣下在20℃攪拌48小時。蒸除溶劑，將殘余物溶于水(1.5ml)并攪拌24小時。該溶液用交聯葡聚糖LH20進行體積排阻色譜，用水洗脫。冷凍干燥后得到產物聚賴氨酰[(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]n，為白色粉末49mg。94％。
實施例29在唾液酸的4位有修飾的樹狀唾液糖苷的制備用下述方法制備4-疊氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙?；?2-S-乙酰基-3,4,5-三脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖酸甲酯。向4-疊氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙?；?2-氯-3,4,5-三脫氧-D-甘油基-β-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖酸甲酯(Sabesan,1994)(5g)的無水二氯甲烷溶液(150ml)中加入精細粉碎的硫羥乙酸鉀(5.8g)，并將該懸液在20℃用力攪拌48小時。將該混合物過濾并蒸發(fā)得到淺棕色泡沫(5.2g)。用制備型反相HPLC[C18,30％乙腈/水]分離出所需產物，為白色泡沫3.9g。72％用下述方法制備[(8-辛酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)4-疊氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙酰基-3,4,5-三脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯。
向4-疊氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙?；?2-S-乙酰基-3,4,5-三脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖酸甲酯(300mg)的無水二甲基甲酰胺(3.5ml)溶液中加入8-溴辛酸(115mg)和二乙胺(1.26ml)，該溶液在20℃攪拌17小時。真空除去溶劑，殘余物在乙酸乙酯和冰冷的10％鹽酸之間分配。有機層用水洗滌，用硫酸鈉干燥，并蒸發(fā)得到黃色泡沫(385mg)。將其溶于乙酸乙酯(20ml)中并加入N-羥基琥珀酰亞胺(95mg)和二環(huán)己基碳化二亞胺(175mg)。該混合物在20℃攪拌17小時，然后濾除白色沉淀。將濾液濃縮并用制備型反相HPLC[C18,30％乙腈/水]純化，得到白色泡沫340mg。83％。A．PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-疊氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6146在惰性氣氛下，向PAMAM[EDA] 4.0(72mg)的無水二甲亞砜溶液(5ml)中加入[(8-辛酸N-羥基琥珀酰亞胺酯)4-疊氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙?；?3,4,5-三脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯(318mg)，并將該溶液在20℃攪拌60小時。真空除去溶劑，將殘余物溶于甲醇(2ml)。該溶液用交聯葡聚糖LH20進行體積排阻色譜，用甲醇洗脫。蒸發(fā)溶劑得到產物PAMAM[EDA]4.0[[(8-辛酰氨基)4-疊氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙?；?3,4,5-三脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯]32，為白色泡沫。225mg。81％用下述方法得到游離的唾液糖苷在氬氣下在20℃，向PAMAM[EDA] 4.0[[(8-辛酰氨基)4-疊氮基-5-乙酰氨基-7,8,9-三-O-乙?；?3,4,5-三脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]甲酯]32(215mg)的無水甲醇溶液(1ml)中加入新鮮制備的甲醇鈉的1M甲醇溶液(1ml)并將該混合物攪拌3小時。蒸除溶劑，將殘余物溶于水(2ml)并攪拌17小時。該溶液用交聯葡聚糖LH20進行體積排阻色譜，用水洗脫。冷凍干燥后得到產物PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-疊氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32，為松散的白色粉末160mg。90％B．PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-氨基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32BRI6149在20℃下，將硫化氫氣流緩慢通入PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-疊氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32(25mg)在吡啶(40ml)和水(20ml)的混合物中的溶液中，持續(xù)5天。然后向該溶液中通入氮氣2小時以除去過量的硫化氫。將該溶液蒸發(fā)至干，殘余物溶于水(5ml)并通過0.45μm膜濾器過濾以除去硫。冷凍干燥后得到產物PAMAM[EDA]4.0[(8-辛酰氨基)-4-氨基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸]32，為松散的白色粉末23mg。96％實施例30以硼酸結尾的樹狀聚合物的制備。4-羧苯基硼酸N-羥基琥珀酰亞胺酯向4-羧苯基硼酸(500mg)的無水二甲基甲酰胺(5ml)溶液中加入N-羥基琥珀酰亞胺(380mg)和二環(huán)己基碳化二亞胺(680mg)，并將該混合物在20℃攪拌64小時，然后濾除白色沉淀。真空除去溶劑，殘余物溶于乙酸乙酯(100ml)。該溶液用水洗滌，用硫酸鈉干燥并蒸發(fā)得到白色固體，將其從乙腈/水中結晶，得到細針狀體730mg。92％PAMAM[EDA]4.0[4-苯甲酰氨基硼酸]32BRI6160在惰性氣氛下，向PAMAM[EDA]4.0(69mg)的無水二甲亞砜(5ml)溶液中加入4-羧苯基硼酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(130mg)，并將該溶液在20℃攪拌65小時。向該稠密的淤漿中加入1M碳酸鈉溶液(1ml)并將該澄清溶液再攪拌24小時。真空除去溶劑，將殘余物溶于10％氨溶液(5ml)。該溶液用交聯葡聚糖LH20進行體積排阻色譜，用10％氨溶液洗脫。蒸發(fā)溶劑得到產物PAMAM[EDA]4.0[4-苯甲酰氨基硼酸]32，為白色松散固體。110mg。94％實施例31以3,6-二磺萘基硫脲鈉結尾的樹狀聚合物的制備。BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32將三氟乙酸(2ml)加入BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(147mg)的攪拌的無水二氯甲烷(2ml)懸液中，并將所得溶液在氮氣下在室溫攪拌2小時，然后濃縮。將殘余物溶于N,N-二甲基-N-烯丙胺緩沖液(pH9.5；5ml)中，然后加入固體3,6-二磺萘基異硫氰酸鹽(400mg)。加入1M碳酸鈉將該混合物的pH調節(jié)到9.5，并將該溶液在氮氣下在53℃加熱3小時。濃縮該反應混合物，將殘余物再次溶于水并將該溶液通過Amberlite IR 120(Na)柱。將濾液濃縮得到粗產物，其用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化得到有64個3,6-二磺萘基脲鈉基團的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32，為白色松散固體(175mg)。
實施例32以3,5-二磺苯基硫脲鈉結尾的樹狀聚合物的制備BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32將三氟乙酸(3ml)加入BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(300mg；0.02mmol)的攪拌的無水二氯甲烷(3ml)懸液中，并將所得溶液在氮氣下在室溫攪拌2小時，然后濃縮。將殘余物溶于水并將該溶液通過Amberlite IRA 401(OH)柱，將濾液濃縮得到粘性油(187mg)。將該油溶于吡啶/水的1∶1混合物(8ml)中并加入固體3,5-二磺苯基異硫氰酸鈉(680mg；2mmol)。將所得溶液在氮氣下在53℃加熱3小時。然后濃縮該溶液得到白色固體殘余物。該粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化得到有64個3,5-二磺苯基脲鈉基團的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32，為白色松散固體。
實施例33以3,5-二羧苯基硫脲鈉結尾的樹狀聚合物的制備BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32將三氟乙酸(3ml)加入BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(300mg；0.02mmol)的攪拌的無水二氯甲烷(3ml)懸液中，并將所得溶液在氮氣下在室溫攪拌2小時，然后濃縮。將殘余物溶于水并將該溶液通過Amberlite IRA 401(OH)柱，將濾液濃縮得到粘性油(186mg)。將該油溶于吡啶/水的1∶1混合物(8ml)中并加入3,5-二羧苯基異硫氰酸鈉(450mg；2mmol)。將所得溶液在氮氣下在53℃加熱13小時。然后濃縮該溶液得到白色固體殘余物。該粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化得到有64個3,6-二羧苯基脲鈉基團的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32，為白色松散固體。
實施例34以4-膦酰氧基苯基硫脲鈉結尾的樹狀聚合物的制備BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32將三氟乙酸(2ml)加入BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(147mg；0.01mmol)的攪拌的無水二氯甲烷(2ml)懸液中，并將所得溶液在氮氣下在室溫攪拌2小時，然后濃縮得到粘性油。將該油溶于N,N-二甲基-N-烯丙胺緩沖液(pH9.5；5ml)中并加入固體4-膦酰氧基苯基異硫氰酸鹽(250mg)。用1M碳酸鈉將所得溶液的pH調節(jié)到10，并將該混合物在氮氣下在53℃加熱3小時。濃縮該溶液得到白色固體殘余物。將殘余物再次溶于水并將該溶液通過Amberlite IR 120(Na)柱，濃縮濾液。殘余物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化得到有64個4-膦酰氧基苯基脲鈉基團的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32，為白色松散固體(150mg)。
實施例35以4-膦酰苯基硫脲鈉結尾的樹狀聚合物的制備BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32將三氟乙酸(2ml)加入BHAlyslys2lys4lys8lys16DBL32(147mg；0.01mmol)的攪拌的無水二氯甲烷(2ml)懸液中，并將所得溶液在氮氣下在室溫攪拌2小時，然后濃縮得到粘性油。將該油溶于N,N-二甲基-N-烯丙胺緩沖液(pH9.5；5ml)中并加入固體4-膦酰苯基異硫氰酸鹽(250mg)。用飽和碳酸氫鈉溶液將所得溶液的pH調節(jié)到9，并將該混合物在氮氣下在53℃加熱3小時。濃縮該溶液得到白色固體殘余物。將殘余物再次溶于水并將該溶液通過Amberlite IR 120(Na)柱，濃縮濾液。殘余物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化得到有64個4-膦酰苯基脲鈉基團的BHAlyslys2lys4lys8lys16lys32BRI6196，冷凍干燥后為白色松散固體(152mg)。
實施例36以4,6-二膦酰萘基硫脲鈉結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0將4,6-二膦酰萘基異硫氰酸鈉(165mg)的水溶液(2ml)加入PAMAM4.0(51mg；0.01mmol)的水(2ml)溶液中。用飽和碳酸氫鈉溶液將該混合物的pH調節(jié)到9.5，并將該混合物在室溫下用力攪拌1小時，然后在氮氣下在53℃加熱3小時。將該混合物過濾，將濾液濃縮得到棕色固體殘余物。粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖G25；水)純化得到以24個4,6-二膦酰萘基硫脲鈉基團結尾的PAMAM4.0，冷凍干燥后為棕色固體(81mg)。
實施例37以熒光素硫脲結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)將固體熒光素異硫氰酸鹽(188mg)加入PAMAM4.0(EDA)(74mg；0.01mmol)的水(3ml)溶液中。加入飽和碳酸氫鈉溶液將pH調節(jié)到9，并將所得均質溶液在室溫下攪拌過夜，然后濃縮。橙色殘余物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化得到以21個熒光素硫脲基團結尾的PAMAM4.0(EDA)，冷凍干燥后為松散的橙色固體(193mg)。
實施例38以(苯基-3-硼酸)-硫脲鈉結尾的樹狀聚合物的制備PAMAM4.0(EDA)將固體(苯基-3-硼酸)異硫氰酸鹽(100mg；0.5mmol)加入PAMAM4.0(EDA)(69mg；0.01mmol)的水(5ml)溶液中。將1M碳酸鈉加入到溶解的異硫氰酸鹽中(pH約10)。然后該混合物在氮氣下在53℃加熱2小時，之后過濾并將濾液濃縮得到棕色固體殘余物。該粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化得到以32個(苯基-3-硼酸)硫脲基團結尾的PAMAM4.0(EDA)，冷凍干燥后為白色松散固體(87mg)。
實施例39以3,5-二羧苯基硫脲鈉結尾的聚賴氨酸的制備。
將聚-L-賴氨酸氫溴化物(4-15K)(Sigma化學公司)(50mg)的水(2ml)溶液加入3,5-二羧苯基異硫氰酸鈉(305mg)的水(3ml)溶液中，用碳酸氫鈉水溶液將所得溶液的pH調節(jié)到9。然后將該溶液在氮氣下在53℃加熱4小時。將該溶液冷卻并過濾，濾液濃縮得到米色固體殘余物。該粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化并冷凍干燥得到以3,5-二羧苯基硫脲鈉結尾的聚-L-賴氨酸，為白色松散固體(71mg)。
實施例40以4-(膦酰甲基)苯基硫脲鈉結尾的聚賴氨酸的制備。
將固體4-(膦酰甲基)苯基異硫氰酸鹽(231mg；1.0mmol)加入聚-L-賴氨酸氫溴化物(30-70K)(Sigma化學公司)(50mg)在吡啶/水的1∶1混合物中的溶液中。用1M碳酸鈉將該混合物的pH調節(jié)到9.5并將該溶液在氮氣下在53℃加熱過夜。將該混合物冷卻并過濾，濾液濃縮得到棕色固體殘余物。該粗產物用凝膠過濾法(交聯葡聚糖LH20；水)純化得到棕色固體(82mg)。
實施例41以1-膦酰-氧苯基-4-硫脲結尾的聚-L-賴氨酸的制備。
向在53℃加熱并攪拌的聚-L-賴氨酸氫溴化物(50mg,SigmaP2636,30-70千道爾頓)的水(10ml)溶液中加入4-膦酰氧基苯基異硫氰酸鹽(153mg)，并用1M碳酸鈉溶液將該混合物的pH調節(jié)到9.5-10。該混合物在53℃加熱并攪拌5小時，然后過濾。澄清溶液用交聯葡聚糖LH20凝膠過濾法純化，用水洗脫。洗脫液冷凍干燥得到白色泡沫產物。77mg。94％。
實施例42以苯甲酰氨基-4-硼酸結尾的聚-L-賴氨酸的制備。
在惰性氣氛下，向聚-L-賴氨酸氫溴化物(50mg,Sigma P2636,30-70千道爾頓)的DMSO(10ml)溶液中加入4-羧苯基硼酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(90mg)和1M碳酸鈉溶液(2ml)，該混合物在20℃攪拌60小時。真空除去溶劑，將殘余物溶于水(5ml)并過濾。澄清溶液用交聯葡聚糖LH20凝膠過濾法純化，用水洗脫。洗脫液冷凍干燥得到白色泡沫產物。50mg。90％。
實施例43Ⅰ．尿囊絨膜(CAM)測定本試驗中使用最初由Folkman(1985)描述并由Maragoudakis等人(1988)加以改進的體內CAM血管生成模型。簡言之，當在接觸CAM的卵殼上打開一個小口時，將新鮮的受精卵在37℃下培養(yǎng)4天。將此開口用玻璃紙帶覆蓋并將該卵放回到孵化箱中直到第9天應用受試化合物時為止。將該受試化合物置于無菌塑料盤(10mm)上并使之在無菌條件下干燥。將對照盤(含有PBS)置于距離含有受試物質的盤1cm遠的CAM上。在所有盤中均加入醋酸可的松的無菌溶液(100ug/盤，Sigma)以防止炎性應答。將加載并干燥后的盤反轉并置于CAM上，將開口覆蓋并培養(yǎng)這些卵直到第11天評定血管生成。CAM測定中血管生成的形態(tài)學評估如上處理這些卵以進行形態(tài)學評估。第11天時，將這些卵注滿10％緩沖的福爾馬林(Janssen Chimica,Geel,Belguim)，除去塑料盤并使這些卵在室溫下保持至少4小時。將盤周圍的大部分面積切去并置于玻璃載片上，用Harris-Hooker等人(1983)的方法測定血管密度指數(表示成血管數)。Ⅱ．大鼠主動脈測定本試驗中使用由Nicosia等人(1990)最初描述的大鼠主動脈環(huán)模型。簡言之，將瓊脂糖的1.5％無菌溶液(Pharmacia Biotech AB.Upppsala,Sweden)倒入培養(yǎng)皿中并使之成凝膠狀。在瓊脂糖凝膠中沖壓出兩個直徑分別為10和17mm的同心圈，從而得到瓊脂糖環(huán)。將這些環(huán)內外多余的瓊脂糖除去。將這些環(huán)轉移到6孔平板(Nuncion,Roskilde，丹麥)上，每孔中含有三個環(huán)。從3月齡的雄性Wistar大鼠得到胸主動脈。將這些主動脈立即轉移到含有無血清最低必需培養(yǎng)液(MEM)的培養(yǎng)盤中。仔細地除去主動脈周圍的纖維脂肪性組織以損害主動脈壁。切取主動脈環(huán)薄片(0.5mm厚)并用無血清培養(yǎng)基連續(xù)徹底沖洗12次。在將這些主動脈環(huán)轉移到培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基環(huán)中之前，將每個瓊脂糖孔的底部涂上150ul凝固纖維蛋白原。當纖維蛋白凝膠形成后，將主動脈環(huán)轉移到瓊脂糖孔中并置于瓊脂糖孔的中心。然后將瓊脂糖孔完全填充上凝固纖維蛋白原。將部分純化的牛纖維蛋白原(Sigma)溶于無血清培養(yǎng)基中使?jié)舛葹?mg/ml。將20ul 50μl/ml的牛凝血酶溶液(Sigma)加入到1ml纖維蛋白原溶液中使產生凝固。在室溫下在30秒內形成纖維蛋白凝膠。當纖維蛋白凝膠化后，向6孔板的每孔中加入6ml添加有20％FCS(Gibco)、10mM Hepes(Gibco)和1mM L-谷酰胺(Gibco)的MEM培養(yǎng)液，并將合適濃度的受試化合物加入該培養(yǎng)液中。大鼠主動脈環(huán)測定中血管生成的定量每日在倒置顯微鏡下檢查培養(yǎng)物并記分。用微脈管生長曲線代表微脈管的生長。由于微脈管網絡的空間復雜性，通常有200-250個以上的微脈管形成(Nicosia等人，1990)。對微脈管進行計數的觀測者的誤差范圍較高，因此，所形成的微脈管分為0(無脈管)到10(最多的脈管數)級打分。結果Ⅰ．CAM測定
已評估了更高濃度(50μg/cam)的BRI2995和BRI6112:BRI2995使50％胚胎死亡。存活的胚胎顯示脈管密度的抑制為73％。BRI6112在這一濃度未發(fā)現毒性。但僅觀測到對脈管密度的輕微抑制(-16％)。
試驗中用TNP-470(50μ/cam)和戊聚糖多硫酸酯(PPS)(50μg)這兩種用于臨床試驗的化合物作為對照化合物。它們使脈管密度分別降低了21％±16和42％±28。不過PPS在這一濃度導致80％胚胎死亡。Ⅱ．大鼠主動脈測定BRI2995,BRI2996和BRI2999在20μg/ml和100μg/ml的濃度下(幾乎)完全抑制了微脈管的形成。
BRI6196在20μg/ml和100μg/ml濃度下近似完全抑制，且在4μg/ml也有抑制作用。
BRI2923和BRI6039在100μg/ml濃度下減少了微脈管的生長。
參考文獻1．Folkman J.(1985)生物化學雜志267:10931-10934。2．Harris-Hooker S.A.等人(1983)細胞生理學雜志114:302-310。3．Hasegawa A.等人(1986)糖類化學雜志5(1):11-19。4．Maragoudakis M.E.等人(1988)組織細胞20:531-539。5．Nicosia R.F.和Ottinetti A.(1990)細胞生物學研究(Cell Dev.Bio.)26:119-128。6．Sabesan S.(1994)生物有機與醫(yī)藥化學快報4(20):2457-2460。
權利要求
1．預防性或治療性抑制人或非人動物患者血管生成的方法，它包含給予該患者有效量的選自下列的化合物?。哂卸鄠€側鏈基團的直鏈非糖類聚合物，其中所述側鏈基團中至少有一個具有鍵合或連接其上的含有陰離子或陽離子的部分；和ⅱ．具有多個端基的樹狀聚合物，其中所述端基中至少有一個具有鍵合或連接其上的含有陰離子或陽離子的部分。
2．按照權利要求1的方法，其中所述化合物為通式Ⅰ的直鏈多離子
R是形成直鏈聚合物骨架的非糖類單體單元；X是非必需的單體單元R的側鏈基團上的連接基；和A是含有陰離子的部分。
3．按照權利要求2的方法，其中所述直鏈聚合物的分子量分布的中值范圍是1,000-1,000,000。
4．按照權利要求3的方法，其中所述直鏈聚合物的分子量分布的中值范圍是10,000-600,000。
5．按照權利要求2的方法，其中在所述直鏈聚合物中所述單體單元R是胺或酰胺部分。
6．按照權利要求5的方法，其中在所述直鏈聚合物中所述單體單元R是賴氨酸或其他氨基酸部分。
7．按照權利要求2的方法，其中在所述直鏈聚合物中所述連接基X，當存在時，是選自下列組成的官能連接基酯，酰胺，醚，硫醚，胺，脲，硫脲，甲氨酸酯和碳酸酯。
8．按照權利要求2的方法，其中在所述直鏈聚合物中所述連接基X，當存在時，是選自下列組成的間隔基可選為取代的或分支的烷基鏈；可選被取代的烷氧基、聚烷氧基、烷硫基或聚烷硫基鏈，可選被取代的鏈烯基、多鏈烯基、炔基或多炔基鏈，和式-(CH2)n-2-(CH2)n-基團，其中C是-CH2-,-CH=CH-,-C≡C-,-O-或-S-，而n是1-15的整數。
9．按照權利要求1的方法，其中所述化合物是樹狀化合物，它包含一個共價鍵合到至少兩個樹狀分支上的多價核心，并通過至少兩個生長支擴展。
10．按照權利要求9的方法，其中所述樹狀聚合物是基于氨核心的聚酰氨基胺樹狀聚合物。
11．按照權利要求9的方法，其中所述樹狀聚合物是基于乙二胺核心的聚酰氨基胺樹狀聚合物。
12．按照權利要求9的方法，其中所述樹狀聚合物是基于二苯甲基胺或其他合適核心的聚賴氨酸樹狀聚合物。
13．按照權利要求9的方法，其中所述化合物是通式Ⅱ的多離子樹狀聚合物
其中I是起始核心；Z是內部分支單元；n是整數，它表示生成的樹狀聚合物的數目；和A是含有陰離子的部分，它可以通過非必需的連接基X連接到內部分支單元Z上。
14．按照權利要求1-13任一項所述的方法，其中在所述化合物中所述含有陰離子或陽離子的部分通過酰胺或硫脲鍵而鍵合到直鏈聚合物或樹狀聚合物的胺、巰基、羥基或其他活性官能側鏈或端基上。
15．按照權利要求1-14任一項所述的方法，其中在所述化合物中所述含有陰離子的部分選自下列成員含有磺酸的部分，含有羧酸的部分(包括含有神經氨酸和唾液酸的部分和含有修飾的神經氨酸和唾液酸的部分)，含有硼酸的部分，以及含有磷酸和膦酸的部分(包括含有酯化磷酸和膦酸的部分)。
16．按照權利要求1-15任一項所述的方法，其中在所述化合物中鍵合到直鏈聚合物或樹狀聚合物的氨基或其他活性官能側鏈或端基上的部分選自以下基團，其中n為0或正整數
-ArXP(=O)(OR)2X=O,CH2,CHF,CF2R=烷基，芳基H,Na-ArXP(=O)(OR1)(NR2R3)X=O,CH2,CHF,CF2R1=烷基，芳基H,Na R2,R3=烷基，芳基-Ar[P(=O)(OR)2]nR=烷基，芳基H,Na n=1-3-Ar[B(OH)2]nn=1-3-Ar[COOH]nn=1-3
17．按照權利要求1或2所述的方法，其中所述化合物選自下列成員Ⅰ．以4-磺苯基硫脲結尾的聚-L-賴氨酸；ⅱ．以3,6-二磺萘基硫脲結尾的聚-L-賴氨酸；ⅲ．以(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸結尾的聚-L-賴氨酸；ⅳ．以3,5-二羧苯基硫脲結尾的聚-L-賴氨酸；ⅴ．以4-(膦酰甲基)苯基硫脲結尾的聚-L-賴氨酸；ⅵ．以1-膦酰氧苯基-4-硫脲結尾的聚-L-賴氨酸；和ⅶ．以苯甲酰氨基-4-硼酸結尾的聚-L-賴氨酸。
18．按照權利要求1或權利要求9的方法，其中所述化合物選自下列成員Ⅰ．以烷基磺酸結尾的樹狀聚合物；ⅱ．以磺乙酰胺結尾的樹狀聚合物；ⅲ．以磺基琥珀酰胺酸結尾的樹狀聚合物；ⅳ．以N-(2-磺乙基)琥珀酰胺結尾的樹狀聚合物；ⅴ．以4-磺苯基硫脲結尾的樹狀聚合物；ⅵ．以3,6-二磺萘基硫脲結尾的樹狀聚合物；ⅶ．以4-磺萘基硫脲結尾的樹狀聚合物；ⅷ．以3,5-二磺苯基硫脲結尾的樹狀聚合物；ⅸ．以3,6,8-三磺萘基硫脲結尾的樹狀聚合物；ⅹ．以4-(磺甲基)苯甲酰胺結尾的樹狀聚合物；ⅹ?。?-磺基苯甲酰胺結尾的樹狀聚合物；ⅹⅱ．以N-(4-磺苯基)丙酰胺結尾的樹狀聚合物；ⅹⅲ．以4-磺苯基脲結尾的樹狀聚合物；ⅹⅳ．以N,N,N-三甲基甘氨酰胺結尾的樹狀聚合物；ⅹⅴ．以4-三甲銨苯甲酰胺結尾的樹狀聚合物；ⅹⅵ．以4-(三甲銨甲基)苯甲酰胺結尾的樹狀聚合物；ⅹⅶ．以N-(2-乙酰氧基乙基)-N,N-(二甲銨)甲基羧酰胺結尾的樹狀聚合物；ⅹⅷ．以胍基結尾的樹狀聚合物；ⅹ?、?-([1,4,8,11-四氮雜環(huán)十四烷]甲基)苯甲酰胺結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹ．以4-羧基-3-羥基-芐胺結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹⅰ．以4-羧苯基酰胺結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹⅱ．以3,5-二羧苯基酰胺結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹⅲ．以4-膦酰氧基苯基硫脲結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹⅳ．以4-(膦酰甲基)苯基硫脲結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹⅴ．以乙基-4-(膦酰甲基)苯基硫脲結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹⅵ．以(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹⅷ．以(11-十一酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹⅷ．以(乙酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹ?、?4-丁酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹⅹ．以(4-甲基苯甲酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹⅹ?。?8-辛酰氨基)-4-疊氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹⅹⅱ．以(8-辛酰氨基)-4-氨基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹⅹⅲ．以4-苯甲酰氨基硼酸結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹⅹⅳ．以3,5-二羧苯基硫脲結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹⅹⅴ．以4-膦酰苯基硫脲結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹⅹⅵ．以4,6-二膦酰萘基硫脲結尾的樹狀聚合物；ⅹⅹⅹⅶ．以熒光素硫脲結尾的樹狀聚合物；和ⅹⅹⅹⅷ．以(苯基-3-硼酸)硫脲結尾的樹狀聚合物。
19．按照權利要求1-18任一項所述的方法，其中所述治療包含抑制病人的血管生成，慢性炎癥、糖尿病性視網膜病、銀屑病和類風濕性關節(jié)炎以及涉及新血管的生長的其他疾病的治療，通過抑制血管平滑肌細胞增殖而預防再狹窄，通過激活儲存在胞外基質中的活性生長因子的釋放而促進傷口愈合，以及通過抑制血管生成而抑制腫瘤細胞轉移。
20．用于預防性或治療性抑制人或非人動物血管生成的藥物或獸醫(yī)組合物，它包含如權利要求1-18任一項所定義的陰離子或陽離子直鏈聚合物或樹狀聚合物，以及至少一種藥學上或獸醫(yī)可接受的載體或稀釋劑。
21．如權利要求1-18任一項所定義的陰離子或陽離子直鏈聚合物或樹狀聚合物在人或非人動物的血管生成的預防性或治療性抑制中，或在用于人或非人動物的血管生成的預防性或治療性抑制的藥劑的制備中的應用。
22．一種化合物，它包含具有多個端基的樹狀聚合物，其中所述端基中至少有一個具有鍵合或連接其上的含有陰離子的部分，所述含有陰離子的部分選自下列成員Ⅰ．含有神經氨酸和唾液酸的部分，而不是2-硫代唾液酸；ⅱ．含有修飾的神經氨酸和唾液酸的部分；ⅲ．含有硼酸的部分；和ⅳ．含有磷酸和膦酸的部分，包括含有酯化磷酸和膦酸的部分。
23．按照權利要求22的化合物，其中所述樹狀聚合物包含一個共價鍵合到至少兩個樹狀分支上的多價核心，并通過至少兩個生長支擴展。
24．按照權利要求22或23的化合物，其中所述樹狀聚合物是基于氨核心的聚酰氨基胺樹狀聚合物。
25．按照權利要求22或23的化合物，其中所述樹狀聚合物是基于乙二胺核心的聚酰氨基胺樹狀聚合物。
26．按照權利要求22或23的化合物，其中所述樹狀聚合物是基于二苯甲基胺或其他合適核心的聚賴氨酸樹狀聚合物。
27．按照權利要求22-28任一項所述的化合物，其中所述含有陰離子的部分通過酰胺或硫脲鍵而鍵合到所述樹狀聚合物的末端胺、巰基、羥基或其他活性官能端基上。
28．按照權利要求22的化合物，它選自下列成員Ⅰ．以4-膦酰氧基苯基硫脲結尾的樹狀聚合物；ⅱ．以4-(膦酰甲基)苯基硫脲結尾的樹狀聚合物；ⅲ．以乙基-4-(膦酰甲基)苯基硫脲結尾的樹狀聚合物；ⅳ．以(8-辛酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸結尾的樹狀聚合物；ⅴ．以(11-十一酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸結尾的樹狀聚合物；ⅵ．以(乙酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸結尾的樹狀聚合物；ⅶ．以(4-丁酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸結尾的樹狀聚合物；ⅷ．以(4-甲基苯甲酰氨基)-5-乙酰氨基-3,5-二脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸結尾的樹狀聚合物；ⅸ．以(8-辛酰氨基)-4-疊氮基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸結尾的樹狀聚合物；ⅹ．以(8-辛酰氨基)-4-氨基-5-乙酰氨基-3,4,5-三脫氧-2-硫代-D-甘油基-α-D-半乳糖-2-nonulo吡喃糖苷酸結尾的樹狀聚合物；ⅹⅰ．以4-苯甲?；鹚峤Y尾的樹狀聚合物；ⅹⅱ．以4-膦酰苯基硫脲結尾的樹狀聚合物；ⅹⅲ．以4,6-二膦酰萘基硫脲結尾的樹狀聚合物；和ⅹⅳ．以(苯基-3-硼酸)-硫脲結尾的樹狀聚合物。
全文摘要
預防性或治療性抑制人或非人類動物患者血管生成的方法,它包括給予該患者有效量的化合物,其選自:(i)有多個側鏈基團的直鏈非糖類聚合物,其中至少有一個側鏈基團具有鍵合或連接其上的含有陰離子或陽離子的部分;和(ii)具有多個端基的樹狀聚合物,其中至少有一個端基具有鍵合或連接其上的含有陰離子或陽離子的部分。
文檔編號A61P17/02GK1225654SQ97196452
公開日1999年8月11日 申請日期1997年7月17日 優(yōu)先權日1996年7月17日
發(fā)明者B·R·瑪蘇斯, G·浩蘭 申請人:生物分子研究所