專(zhuān)利名稱(chēng)：鐵皮石斛在制備治療幽門(mén)螺桿菌感染的藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及鐵皮石斛的新的應(yīng)用，尤其涉及鐵皮石斛在制備治療幽門(mén)螺桿菌感染的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
慢性萎縮性胃炎(Chronic atrophic gastritis, CAG)是一種常見(jiàn)病，多發(fā)病，以胃黏膜上皮和腺體萎縮，黏膜變薄，黏膜下肌層增厚及腸化生、不典型性增生為特點(diǎn)，病程遷延，常反復(fù)發(fā)作，嚴(yán)重影響患者的工作和身心健康。更為重要的是，由于CAG腸化生和不典型性增生極易進(jìn)一步發(fā)展成胃癌，因此，于1978年世界衛(wèi)生組織(WHO)將CAG的胃黏膜萎縮、腸化生和不典型性增生列為胃癌的癌前病變。據(jù)統(tǒng)計(jì)，在我國(guó)CAG的發(fā)病率在7. 2% 以上，居各種胃病之首，發(fā)展成胃癌的占2%-8%。目前，全世界胃癌的發(fā)病率和死亡率居惡性腫瘤的第二位，居消化道腫瘤的第一位。所以，開(kāi)發(fā)治療CAG藥物的研究，有效控制 CAG,不僅具有重大的社會(huì)意義，而且還具有重大的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。CAG病因復(fù)雜，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為CAG與生物因素、理化因素、免疫因素以及遺傳因素密切相關(guān)。自1983年Warren和Masball首次從胃黏膜中分離幽門(mén)螺桿菌(Hp)以來(lái)，CAG 病因?qū)W得到快速發(fā)展。同時(shí)隨著分子生物學(xué)、電子胃鏡等新技術(shù)不斷在基礎(chǔ)和臨床研究中的廣泛應(yīng)用，以及Hp研究的不斷深入，使得CAG病因病機(jī)研究和臨床治療手段等方面均有了較大進(jìn)展。目前研究證明，Hp是CAG主要病因之一，其產(chǎn)生的尿素酶、過(guò)氧化物酶、蛋白水解酶、磷脂酶A對(duì)胃黏膜均有破壞作用。CagA基因型和VacA基因型Hp菌株還能分泌CagA 和VacA細(xì)胞毒素，二者均可導(dǎo)致胃黏膜細(xì)胞空泡樣變性壞死。而且二者還有很強(qiáng)的免疫原性，引起宿主產(chǎn)生抗體和宿主胃黏膜局部產(chǎn)生IL-1、IL-8等多種細(xì)胞因子，進(jìn)而引起炎癥反應(yīng)、黏膜損傷，最終導(dǎo)致黏膜萎縮。鑒此，控制Hp感染，根治Hp是當(dāng)前治療CAG的重要手段。目前對(duì)于治療Hp感染方法有多種，抗生素治療占有重要地位，應(yīng)用抗生素能很好地達(dá)到減輕臨床癥狀和胃黏膜修復(fù)的效果。近10年來(lái)，臨床研究證實(shí)，任何單一藥物都不能將 Hp根除，常常需要兩種以上藥物聯(lián)合治療。在聯(lián)合治療方案中，已經(jīng)建立了標(biāo)準(zhǔn)劑量質(zhì)子泵抑制劑(PPI)/枸櫞酸雷尼替丁(RBC) +兩中抗生素的一線(xiàn)治療方案和PPI+鉍劑+兩種抗生素的二線(xiàn)治療方案。隨著抗生素的廣泛應(yīng)用，Hp耐藥菌株在不斷增加，臨床研究發(fā)現(xiàn)， 在用于控制Hp感染的抗生素中，甲硝唑耐藥菌株已高達(dá)80%，克拉霉素耐藥菌株也已接近 10%。近十年來(lái)，中醫(yī)從辨證、治則、方藥等方面對(duì)CAG進(jìn)行了廣泛而卓有成效的研究。 中醫(yī)藥通過(guò)保護(hù)胃黏膜，改善胃黏膜血液循環(huán)，增強(qiáng)胃黏膜上皮細(xì)胞的再生和修復(fù)功能，提高患者的胃蛋白酶活性，改變胃內(nèi)環(huán)境，促進(jìn)幽門(mén)螺桿菌(HP)轉(zhuǎn)陰，然而，至目前，這類(lèi)研究仍無(wú)突破性進(jìn)展。因此，研究開(kāi)發(fā)此類(lèi)藥物有其重要臨床價(jià)值
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的問(wèn)題是，克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種鐵皮石斛在制備治療幽門(mén)螺桿菌感染的藥物中的應(yīng)用。為解決技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的解決方案是提供一種鐵皮石斛在制備治療幽門(mén)螺桿菌感染的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的藥物是摻有西洋參的鐵皮楓斗顆粒，該藥物通過(guò)下述方法制備獲得(1)將鐵皮石斛炮制為鐵皮楓斗后與西洋參備用，備用的鐵皮楓斗與西洋參重量比為 0. 67 1. 50 1 ；(2)將鐵皮楓斗用30倍溫水浸泡半小時(shí)后熱提取3次，每次提取8小時(shí)，每次提取后均將提取液離心、過(guò)濾，合并3次濾液得提取液；將提取液減壓濃縮為60 70°C下時(shí)相對(duì)密度為1. 00 1. 20的濃縮液，備用；(3)將西洋參用70%乙醇回流提取3次，每次3小時(shí)，合并提取液；減壓回收乙醇， 減壓濃縮為20 25°C下時(shí)相對(duì)密度為1. 00 1. 15的濃縮液，備用；(4)將上述鐵皮楓斗提取濃縮液和西洋參提取濃縮液合并、混勻，將葡萄糖置于沸騰床上，噴霧制粒，得到鐵皮楓斗顆粒；所述葡萄糖為輔料，其在鐵皮楓斗顆粒中的含量為藥學(xué)上可接受的輔料用量。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明提供了鐵皮石斛的一種用途，即用于制備鐵皮楓斗顆粒應(yīng)用于治療HP感染中，為HP感染性慢性萎縮性胃炎的治療提供一種新手段。動(dòng)物預(yù)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的鐵皮楓斗顆粒能明顯增加大鼠胃液量、總酸排出量與胃蛋白酶排出量，促進(jìn)大鼠胃腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)，軟化大便，但不增加濕糞數(shù)量，并有鎮(zhèn)痛作用。推測(cè)，鐵皮楓斗顆粒增加大鼠胃液量、總酸排出量與胃蛋白酶排出量這一作用，這不僅有利于能夠有效改善胃內(nèi)微環(huán)境，抑制胃內(nèi)HP生長(zhǎng)，進(jìn)而有效抑制HP分泌蛋白溶解酶、過(guò)氧化物酶、磷脂酶A、VagA細(xì)胞毒素、VacA空泡毒素，而且還有利于降低抗HP抗體的形成， 抑制HP抗體所造成的胃自身免疫性損傷。人體受試研究發(fā)現(xiàn)，鐵皮楓斗顆粒對(duì)慢性萎縮性胃炎有明顯的治療效果，對(duì)伴有 HP感染患者，促進(jìn)HP轉(zhuǎn)陰，對(duì)HP轉(zhuǎn)陰率達(dá)62. 50%，療效顯著。
具體實(shí)施例方式石斛為蘭科植物，它分鐵皮、金釵、馬鞭、黃草、銅皮等幾十種。同為石斛，同科同屬但不同種，其藥效和市場(chǎng)價(jià)格也往往有著天壤之別。石斛中以鐵皮石斛最為稀有名貴，它因外表呈深綠色或鐵青色而得名，中藥界有“北有人參，南有楓斗”的說(shuō)法。謗語(yǔ)稱(chēng)“野山人參壯陽(yáng)氣，像太陽(yáng)；鐵皮石斛滋陰精，似月亮”。新鮮石斛不能久存，人們經(jīng)整理、烘焙、加箍、干燥四個(gè)步驟將其炮制成螺旋狀的干品，即楓斗。鐵皮石斛(其幼莖粗壯、粘汁濃厚、纖維較少)加工后被稱(chēng)為鐵皮楓斗。鐵皮楓斗的外觀(guān)飽滿(mǎn)、堅(jiān)實(shí)，外表光亮、耐泡，由于鐵皮石斛多糖分子量較其它品種的石斛高得多，因而滋陰效果最佳，價(jià)格也最貴。實(shí)施例1鐵皮楓斗顆粒(P)的制備(1)按處方比例稱(chēng)取鐵皮楓斗1670g，西洋參1330g，備用。(2)將鐵皮楓斗藥材用30倍溫水浸泡半小時(shí)，熱提取3次，每次提取8小時(shí)。每次提取后提取液離心、過(guò)濾，合并3次濾液，得提取液。提取液減壓濃縮，濃縮至相對(duì)密度為 1. 00-1. 20 (60-700C )的濃縮液，備用。(3)將西洋參置于多功能提取罐中，用70%乙醇回流提取3次，每次3小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.00-1. 15(20-25°c )濃縮液，備用。(4)將上述鐵皮楓斗提取濃縮液和西洋參提取濃縮液合并，混勻，將適量葡萄糖置于沸騰床上，噴霧制粒，制成IOOOg顆粒，即得。實(shí)施例2鐵皮楓斗顆粒(L)的制備(1)按處方比例稱(chēng)取鐵皮楓斗1200g，西洋參1800g，備用。(2)將鐵皮楓斗藥材用30倍溫水浸泡半小時(shí)，熱提取3次，每次提取8小時(shí)。每次提取后提取液離心、過(guò)濾，合并3次濾液，得提取液。提取液減壓濃縮，濃縮至相對(duì)密度為 1. 00-1. 20 (60-700C )的濃縮液，備用。(3)將西洋參置于多功能提取罐中，用70%乙醇回流提取3次，每次3小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.00-1. 15(20-25°C )濃縮液，備用。(4)將上述鐵皮楓斗提取濃縮液和西洋參提取濃縮液合并，混勻，將適量葡萄糖置于沸騰床上，噴霧制粒，制成IOOOg顆粒，即得。實(shí)施例3鐵皮楓斗顆粒(H)的制備(1)按處方比例稱(chēng)取鐵皮楓斗1800g，西洋參1200g，備用。(2)將鐵皮楓斗藥材用30倍溫水浸泡半小時(shí)，熱提取3次，每次提取8小時(shí)。每次提取后提取液離心、過(guò)濾，合并3次濾液，得提取液。提取液減壓濃縮，濃縮至相對(duì)密度為 1. 00-1. 20 (60-700C )的濃縮液，備用。(3)將西洋參置于多功能提取罐中，用70%乙醇回流提取3次，每次3小時(shí)，合并提取液，減壓回收乙醇，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.00-1. 15(20-25°c )濃縮液，備用。(4)將上述鐵皮楓斗提取濃縮液和西洋參提取濃縮液合并，混勻，將適量葡萄糖置于沸騰床上，噴霧制粒，制成IOOOg顆粒，即得。以下通過(guò)試驗(yàn)實(shí)施例證明本發(fā)明所述藥物鐵皮楓斗顆粒在治療幽門(mén)螺桿菌感染中的應(yīng)用，這些實(shí)施例包括臨床前動(dòng)物藥效學(xué)試驗(yàn)和臨床療效觀(guān)察試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)例1鐵皮楓斗顆粒治療小鼠HP感染的實(shí)驗(yàn)研究1、實(shí)驗(yàn)樣品鐵皮楓斗顆粒(P)、鐵皮楓斗顆粒(L)、鐵皮楓斗顆粒(H)由浙江天皇藥業(yè)有限公司提供；麗珠胃三聯(lián)廣州麗珠公司產(chǎn)品。2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物=Wistar大鼠，上海史萊克動(dòng)物中心提供。SSl螺桿菌菌株，國(guó)家疾控饋贈(zèng)。3、實(shí)驗(yàn)方法3. 1分組實(shí)驗(yàn)用6周齡的雌雄各半Wistar大鼠120只，體重180_200g，隨機(jī)分正常對(duì)照組，模型組，鐵皮楓斗顆粒(P)高、中、低劑量組，鐵皮楓斗顆粒(L)組，鐵皮楓斗顆粒 (H)，麗珠胃三聯(lián)對(duì)照組，共8組，每組15只。3. 2造模除正常對(duì)照組外，每組大鼠禁食12小時(shí)，給予5. 0%的碳酸氫鈉2ml灌胃，10分鐘后給予從培養(yǎng)基上沖洗下來(lái)的HP菌液(1 X IO8Cfu) 1. 5ml灌胃，半小時(shí)后恢復(fù)飲食，每周感染1次，重復(fù)感染5次。3. 3給藥HP重復(fù)感染5次造模成功后，正常對(duì)照組和模型對(duì)照組均給予等體積的生理鹽水；鐵皮楓斗顆粒(P)高、中、低劑量組分別給予1. 2,0. 6,0. 3g生藥/kg的鐵皮楓斗顆粒；鐵皮楓斗顆粒(L)組給予0. 6g生藥/kg的鐵皮楓斗顆粒(L)；鐵皮楓斗顆粒(H)組給予0.6g生藥/kg的鐵皮楓斗顆粒(H)；麗珠胃三聯(lián)陽(yáng)性對(duì)照組給予0.2g/kg麗珠胃三聯(lián)。 每組動(dòng)物每天給藥1次，連續(xù)給藥4周。3. 4處理分析于最后1次給藥后，動(dòng)物禁食過(guò)夜，乙醚麻醉處死。取出大鼠胃，然后用無(wú)菌生理鹽水沖洗胃內(nèi)容物，收集沖洗液，離心，取上清液在微需氧條件下培養(yǎng)1周， 培養(yǎng)液涂片，在光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察有無(wú)HP細(xì)菌生長(zhǎng)；另從大鼠胃幽門(mén)環(huán)部位取5塊2 X 3mm 組織，勻漿后行尿素酶活力檢測(cè)；另沿胃大彎從賁門(mén)至胃竇剪5條條形組織，10%甲醛固定，石蠟包埋、切片，行HE染色，觀(guān)察粘膜炎癥情況。4、結(jié)果4. 1對(duì)HP生長(zhǎng)的影響鐵皮楓斗顆粒灌胃4周后，取胃內(nèi)容物按上述方法體外培養(yǎng)檢測(cè)；結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，鐵皮楓斗顆粒處理各組HP陽(yáng)性率明顯下降，其中，高劑量組與麗珠胃三聯(lián)陽(yáng)性對(duì)照組接近，該結(jié)果與尿素酶檢測(cè)的結(jié)果基本一致，結(jié)果見(jiàn)表1。表1.鐵皮楓斗顆粒對(duì)HP生長(zhǎng)情況的影響
HP陽(yáng)性率(%)
組別動(dòng)物數(shù)(只)培養(yǎng)法尿素酶法正常組150模型對(duì)照組1586.67%(13/15)80.00%(12/15)鐵皮楓斗顆粒(P)低劑量組(0. 3g/Kg)1553.33%(8/15)66.67%(10/15)鐵皮楓斗顆粒(P)中劑量組(0. 6g/Kg)1546. 67%(7/15)Φ60. 00%(9/15)鐵皮楓斗顆粒(P)高劑量組(1.2g/Kg)1540. 00% (6/15) Φ46.67 %(7/15) Φ鐵皮楓斗顆粒(L)組(0. 6g/Kg)1560. 00%(9/15)66. 67%(10/15)鐵皮楓斗顆粒(H)組(0. 6g/Kg)1546.67%(7/15)Φ53. 33%(8/15)Φ麗珠胃三聯(lián)組(0. 2g/Kg)1533. 33% (5/15)**40. 00% (6/15)**注*與模型組比較，ρ < 0. 05 與模型組比較，ρ < 0. 01。4. 2對(duì)胃炎模型炎癥的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將上述切片置于光學(xué)顯微鏡下，觀(guān)察并比較每組動(dòng)物胃組織炎癥情況。炎癥情況檢查方法采用半定量法，即在低倍顯微鏡下觀(guān)察胃粘膜，然后在胃竇部取10 個(gè)視野，參照1994年美國(guó)休士頓胃炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，按炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)程度分為0-3七個(gè)級(jí)別。具
6體分級(jí)方法為0級(jí)無(wú)炎癥；0. 5級(jí)鏡下觀(guān)察炎癥介于0與1之間；1級(jí)在胃小凹區(qū)或固有腺底部可見(jiàn)多個(gè)慢性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；1.5級(jí)鏡下觀(guān)察炎癥介于1-2之間；2級(jí)在胃小凹至粘膜肌層均有較多炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；2. 5級(jí)鏡下觀(guān)察炎癥介于2與3之間；3級(jí)胃粘膜內(nèi)可見(jiàn)成堆炎癥細(xì)胞集聚灶。研究證實(shí)，按照本法經(jīng)5次HP反復(fù)感染后，模型組感染成功率達(dá)86. 67%，結(jié)果表明，采用本法建造HP感染模型方法可行；在此基礎(chǔ)上的研究發(fā)現(xiàn)，鐵皮楓斗顆粒各組經(jīng)4周的治療，胃粘膜水腫、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)情況均明顯改善，炎癥指數(shù)較模型組亦有不同程度的下降，結(jié)果如下表2。表2.鐵皮楓斗顆粒對(duì)大鼠HP感染性胃炎炎癥的影響
權(quán)利要求
1.鐵皮石斛在制備治療幽門(mén)螺桿菌感染的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的鐵皮石斛在制備治療幽門(mén)螺桿菌感染的藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物是摻有西洋參的鐵皮楓斗顆粒，該藥物通過(guò)下述方法制備獲得(1)將鐵皮石斛炮制為鐵皮楓斗后與西洋參備用，備用的鐵皮楓斗與西洋參重量比為 0. 67 1. 50 1 ；(2)將鐵皮楓斗用30倍溫水浸泡半小時(shí)后熱提取3次，每次提取8小時(shí)，每次提取后均將提取液離心、過(guò)濾，合并3次濾液得提取液；將提取液減壓濃縮為60 70°C下時(shí)相對(duì)密度為1. 00 1. 20的濃縮液，備用；(3)將西洋參用70%乙醇回流提取3次，每次3小時(shí)，合并提取液；減壓回收乙醇，減壓濃縮為20 25°C下時(shí)相對(duì)密度為1. 00 1. 15的濃縮液，備用；(4)將上述鐵皮楓斗提取濃縮液和西洋參提取濃縮液合并、混勻，將葡萄糖置于沸騰床上，噴霧制粒，得到鐵皮楓斗顆粒；所述葡萄糖為輔料，其在鐵皮楓斗顆粒中的含量為藥學(xué)上可接受的輔料用量。
全文摘要
本發(fā)明涉及鐵皮石斛的新用途，旨在提供鐵皮石斛在制備治療幽門(mén)螺桿菌感染的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明揭示了鐵皮石斛在制備治療幽門(mén)螺桿菌感染的藥物中的應(yīng)用，和基于鐵皮石斛在制備治療幽門(mén)螺桿菌感染的藥物的制備方法。本發(fā)明為幽門(mén)螺桿菌感染性慢性萎縮性胃炎的治療提供了一種新手段。本發(fā)明的鐵皮楓斗顆粒對(duì)慢性萎縮性胃炎有明顯的治療效果，對(duì)伴有HP感染患者，促進(jìn)HP轉(zhuǎn)陰，對(duì)HP轉(zhuǎn)陰率達(dá)62.50％，療效顯著。
文檔編號(hào)A61K36/8984GK102327489SQ20111028243
公開(kāi)日2012年1月25日 申請(qǐng)日期2011年9月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月21日
發(fā)明者吳人照, 夏克中, 張旭峰, 楊兵勛, 楊芳亮, 樓正家, 沈春香, 陳武兵, 陳立鉆 申請(qǐng)人:浙江天皇藥業(yè)有限公司