專利名稱：鄰氨基苯甲酰胺和其作為vegf受體酪氨酸激酶抑制劑的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及新的鄰氨基苯甲酰胺衍生物、其制備方法、其在治療人或動物體的方法中的應用、其單獨或與一種或多種其它藥學活性化合物組合用于治療特別是腫瘤性疾病如腫瘤疾病、視網(wǎng)膜病和年齡相關性黃斑變性中的用途；治療動物、特別是人的上述疾病的方法以及單獨或與一種或多種其它藥學活性化合物組合的上述化合物在制備用于治療腫瘤性疾病、視網(wǎng)膜病或年齡相關性黃斑變性的藥物制品(藥物)中的用途。
已知某些疾病與血管生成失控有關，例如由眼部新血管化導致的疾病如視網(wǎng)膜病(包括糖尿病性視網(wǎng)膜病)、年齡相關性黃斑變性、銀屑病、成血管細胞瘤、血管瘤、動脈硬化、炎性疾病如類風濕性或風濕性炎性疾病，尤其是關節(jié)炎如類風濕性關節(jié)炎，或其它慢性炎性病癥如慢性哮喘、動脈或移植后動脈粥樣硬化、子宮內膜異位和尤其是腫瘤性疾病，例如所謂的實體瘤和液體瘤(如白血病)。
在胚胎發(fā)育、正常生長過程中和多種病理異常和疾病中，在調控血管系統(tǒng)及其組分的生長和分化的網(wǎng)絡中心存在稱為“血管內皮生長因子”(VEGF)的血管生成因子及其細胞受體，血管生長因子是分子量為46千道爾頓的通過二硫鍵結合的二聚體糖蛋白(參見Breier，G.等人，Trends inCell Biology6，454-6)。
VEGF受體是跨膜受體酪氨酸激酶。已知有各種類型的VEGF受體，例如VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3。
很多人腫瘤、特別是神經(jīng)膠質瘤和癌，可表達高水平的VEGF及其受體。這已導致了如下假設腫瘤細胞釋放的VEGF可以以旁分泌方式刺激毛細血管的生長和腫瘤內皮的增殖，從而通過改善血液供應加速腫瘤的生長。從VEGF活性被抗體抑制的研究中已經(jīng)獲得了VEGF在體內作為腫瘤血管生成因子的直接證據(jù)。
血管生成被視為那些生長超過約1-2毫米的最大直徑的腫瘤的絕對必要條件；達到此限，氧和營養(yǎng)物質可通過擴散供應至腫瘤細胞。
三種主要機制在抗腫瘤血管生成抑制劑的活性中發(fā)揮重要作用1)抑制血管、特別是毛細血管生長進入血管靜息(vascular-resting)腫瘤中，結果是由于凋亡和增殖之間達到平衡而沒有腫瘤凈生長；2)由于缺少出入腫瘤的血流而防止腫瘤細胞轉移；和3)抑制內皮細胞增殖，因此避免了由通常覆蓋血管內層的內皮細胞對周圍組織施加的旁分泌生長刺激作用。
在WO00/27820中述及了屬于鄰氨基苯甲酰胺類的化合物，據(jù)報道這些化合物可抑制VEGF受體酪氨酸激酶的活性、腫瘤的生長和VEGF-依賴性細胞增殖。
令人驚訝的是，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)下述式I的鄰氨基苯甲酰胺衍生物具有有利的藥理學特性并可抑制例如VEGF受體酪氨酸激酶的活性、腫瘤的生長和VEGF-依賴性細胞增殖。
式I的鄰氨基苯甲酰胺衍生物適合例如用于治療疾病，特別適用于在其治療和預防中對血管生成和/或VEGF受體酪氨酸激酶進行抑制表現(xiàn)出有益作用的疾病。
本發(fā)明涉及式I的鄰氨基苯甲酰胺、其N-氧化物和互變異構體， 其中R1代表H或低級烷基，R2代表H或低級烷基，R3代表全氟代低級烷基，且
X是O或S，以及上述鄰氨基苯甲酰胺、它們的N-氧化物和它們的互變異構體的鹽。
除非另外說明，上下文中所使用的一般術語在本公開內容中優(yōu)選具有以下含義前綴“低級”表示具有最多7個且包括7個碳原子、尤其是最多4個且包括4個碳原子的基團，所述基團是直鏈或具有一個或多個分支的支鏈。
當復數(shù)形式用于化合物、鹽等時，也表示單個化合物、鹽等。
任何不對稱碳原子(例如在其中R9是低級烷基的式I化合物中的不對稱碳原子)可以以(R)-、(S)-或(R，S)-構型存在，優(yōu)選以(R)-或(S)-構型存在。因此，化合物可以以異構體混合物或純異構體形式、優(yōu)選以對映異構體純的非對映異構體形式存在。
本發(fā)明還涉及式I化合物的可能的互變異構體。在此所用的術語“互變異構體”特別涉及其中R1代表H且X是O或S的式I化合物，這些化合物若非全部也在一定程度上以如下所示的互變異構形式(I-互變異構體)存在，其中其它基團和符號具有本文所定義的含義。
(I-互變異構體)在優(yōu)選實施方案中，烷基具有最多12個碳原子且特別地為低級烷基。
低級烷基優(yōu)選為具有1且包括1至7且包括7個碳原子、優(yōu)選1且包括1至4且包括4個碳原子的烷基，其為直鏈或支鏈；優(yōu)選地，低級烷基是丁基如正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、丙基如正丙基或異丙基、乙基或優(yōu)選甲基。
在此所用的術語“全氟代低級烷基”意指其中所有的氫原子均被氟原子取代的低級烷基。
鹵素特別地是氟、氯、溴或碘，特別是氟、氯或溴。
所述鹽是由具有堿性氮原子的式I化合物優(yōu)選與有機或無機酸以例如酸加成鹽、特別是可藥用鹽的形式生成。適宜的無機酸是例如氫鹵酸如鹽酸、硫酸或磷酸。適宜的有機酸是例如羧酸、膦酸、磺酸或氨基磺酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二酸、乙醇酸、乳酸、富馬酸、琥珀酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、氨基酸如谷氨酸或天冬氨酸、馬來酸、羥基馬來酸、甲基馬來酸、環(huán)己烷羧酸、金剛烷羧酸、苯甲酸、水揚酸、4-氨基水揚酸、苯二甲酸、苯乙酸、扁桃酸、肉桂酸、甲-或乙-磺酸、2-羥基乙磺酸、乙烷-1，2-二磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、1，5-萘二磺酸、2-，3-或4-甲基苯磺酸、甲基硫酸、乙基硫酸、十二烷基硫酸、N-環(huán)己基氨基磺酸、N-甲基-、N-乙基-或N-丙基氨基磺酸或其它有機質子酸如抗壞血酸。
對于分離或純化目的，也可能使用不可藥用的鹽，例如苦味酸鹽或高氯酸鹽。對于治療用途，只能使用可藥用的鹽或游離化合物(適合時以藥物制劑的形式使用)，因此優(yōu)選這些化合物。
鑒于游離形式的新化合物和其鹽形式、包括那些例如在新化合物純化或鑒別中可用作中間體的鹽之間的密切關系，上下文中任何對游離化合物的提及應理解為也同時提及相應的鹽為宜。
如上下文中所述，式I化合物和其N-氧化物具有重要的藥理學特性。
本發(fā)明的化合物作為VEGF-受體酪氨酸激酶活性抑制劑的功效可證實如下抗VEGF-受體酪氨酸激酶活性試驗。使用Flt-1 VEGF-受體酪氨酸激酶進行該試驗。詳細過程如下室溫下，將30μl激酶(10ng Flt-1激酶結構域，Shibuya等人，Oncogene 5，519-24)的20mM Tris·HClpH 7.5溶液、3mM二氯化錳(MnCl2)、3mM氯化鎂(MgCl2)、10μM釩酸鈉、0.25mg/ml聚乙二醇(PEG)20000、1mM二硫蘇糖醇和3μg/μl聚(谷氨酸，酪氨酸)4∶1(Sigma，Buchs，瑞士)、8μM[33P]-ATP(0.2μCi)、1％二甲亞砜和0至100μM供試化合物一起溫育10分鐘。然后通過加入10μl 0.25M乙二胺四乙酸鹽(EDTA)pH 7終止反應。用多道分液器(LAB SYSTEMS，美國)將20μl等分試樣通過Millipore微滴過濾器歧管加至PVDF(＝聚二氟乙烯)Immobilon P膜(Millipore，美國)上，并與真空連接。完全除去液體后，將膜在含有0.5％磷酸(H3PO4)的浴中連續(xù)洗滌4次并用乙醇洗滌一次，振搖下每次溫育10分鐘，然后置于Hewlett Packard TopCount Manifold中，加入10μl Microscint(β-閃爍計數(shù)液)后測定放射活性。通過對每種化合物在三個濃度(通常是0.01、0.1和1μmol)下的抑制百分比進行線性回歸分析確定IC50值。發(fā)現(xiàn)式I化合物的IC50值為0.001至1μM、優(yōu)選0.001至0.1μM。
本發(fā)明化合物的抗腫瘤功效可在體內證實如下裸鼠異種移植模型中的體內活性將雌性BALB/c裸鼠(8-12周齡，Novartis Animal Farm，Sisseln，瑞士)置于無菌條件下，自由飲水和進食。通過給小鼠皮下注射腫瘤細胞(例如Du 145前列腺癌細胞系(ATCCNo.HTB 81，參見Cancer Research37，4049-58(1978))或通過在異氟烷(Forene，Abbott，瑞士)麻醉下用13號套針在小鼠的左肋皮下植入腫瘤碎片(約25mg)以誘發(fā)腫瘤。一旦腫瘤的平均體積達到100mm3就立即開始供試化合物治療。每周2至3次并在末次治療后24小時通過測定兩個垂直軸的長度測量腫瘤的生長。按照已公開的方法計算腫瘤體積(參見Evans等人，Brit.J.Cancer45，466-8)。將抗腫瘤功效確定為治療動物腫瘤體積的平均增加除以未治療動物(對照)腫瘤體積的平均增加再乘以100，表示為T/C％。將最小平均腫瘤體積與治療開始時的平均腫瘤體積相比報道腫瘤消退(以％給出)。供試化合物每日管飼施用。
或者，也可以以相同方式使用其它細胞系，例如-MCF-7乳腺癌細胞系(ATCC No.HTB 22；參見J.Natl.Cancer Inst.(Bethesda)51，1409-16)；-MDA-MB 468乳腺癌細胞系(ATCC No.HTB 132；參見In Vitro14，911-15)；-MDA-MB 231乳腺癌細胞系(ATCC No.HTB 26；參見J.Natl.CancerInst.(Bethesda)53，661-74)；-Colo 205結腸癌細胞系(ATCC No.CCL 222；參見Cancer Res.38，1345-55)；-HCT 116結腸癌細胞系(ATCC No.CCL 247；參見Cancer Res.41，1751-6)；-DU 145前列腺癌細胞系DU 145(ATCC No.HTB 81；參見Cancer Res.37，4049-58)；和-PC-3前列腺癌細胞系PC-3(ATCC No.CRL 1435；參見Cancer Res.40，524-34)。
用另一種體外細胞實驗可確證VEGF-誘發(fā)的KDR-受體自磷酸化抑制作用在6-孔細胞培養(yǎng)板上，將固定表達人VEGF受體(KDR)的轉染CHO細胞接種于完全培養(yǎng)基(含有10％胎牛血清＝FCS)中，并于37℃、5％CO2下培養(yǎng)直至呈約80％的融合。然后將供試化合物用培養(yǎng)基(無FCS，含有0.1％牛血清白蛋白)稀釋并加至細胞中。(對照包含無供試化合物的培養(yǎng)基)。于37℃下培養(yǎng)2小時后，加入重組VEGF；VEGF的終濃度是20ng/ml。再于37℃下培養(yǎng)5分鐘后，將細胞用冰冷的PBS(磷酸鹽緩沖的鹽水)洗滌兩次并立即在每孔100μl的溶胞緩沖液中進行細胞溶解。然后將溶胞產(chǎn)物離心以除去細胞核，使用市售蛋白分析儀(BIORAD)測定上清液的蛋白濃度。之后，立即使用溶胞產(chǎn)物或必要時貯存于-20℃下。
用夾心ELISA法測定KDR-受體的磷酸化將針對KDR的單克隆抗體(例如Mab 1495.12.14；由H.Towbin制備)固定于黑色ELISA板(Packard的OptiPlateTMHTRF-96)上。然后洗板并用1％BSA的PBS溶液飽和剩余的游離蛋白結合位點。然后，將細胞溶解物(每孔20μg蛋白)在這些板中于4℃下與和堿性磷酸酯酶偶聯(lián)的抗磷酸酪氨酸抗體(得自TransductionLaboratories的PY20AP)一起培養(yǎng)過夜。然后(再次洗板并且)用發(fā)光AP底物(CDP-Star，即用，Emerald II，TROPIX)證明抗磷酸酪氨酸抗體與捕獲的磷酸化受體的結合。在Packard Top Count Microplate閃爍計數(shù)儀(Top Count)上測定發(fā)光。陽性對照(用VEGF激發(fā))信號和陰性對照(不用VEGF激發(fā))信號之差相當于VEGF-誘發(fā)的KDR受體磷酸化(＝100％)。計算供試物質的活性，以VEGF-誘發(fā)的KDR受體磷酸化的百分抑制率表示，其中誘發(fā)半數(shù)最大抑制作用的物質濃度定義為ED50(50％抑制的有效劑量)。
式I化合物或其N-氧化物也在不同程度上抑制其它由營養(yǎng)因子介導的參與信號轉導的酪氨酸激酶，例如Src家族的激酶，特別是c-Src激酶、Lck和Fyn；還有EGF家族的激酶，例如c-erbB2激酶(HER-2)、c-erbB3激酶、c-erbB4激酶；胰島素樣生長因子受體激酶(IGF-1激酶)，特別是PDGF受體酪氨酸激酶家族的成員如PDGF受體激酶、CSF-1受體激酶、Kit受體激酶和VEGF-受體激酶；還有絲氨酸/蘇氨酸激酶，所有這些均在哺乳動物細胞、包括人細胞的生長調控和轉化中發(fā)揮作用。
基于這些研究，本發(fā)明的式I化合物特別地對依賴于蛋白激酶的病癥、特別是增殖性疾病表現(xiàn)出治療功效。
式I化合物在治療炎性風濕性或類風濕性疾病例如關節(jié)炎中的有用性可證實如下用熟知的大鼠佐劑性關節(jié)炎模型(Pearson，Proc.Soc.Exp.Biol.91，95-101(1956))試驗式I化合物或其鹽的抗關節(jié)炎活性?？梢杂脙煞N不同的給藥方案治療佐劑性關節(jié)炎佐劑免疫化時開始給藥(預防給藥)；或自關節(jié)炎反應已經(jīng)建立時的第15天給藥(治療給藥)。優(yōu)選使用治療給藥方案。作為對比，在單獨的一組中施用環(huán)加氧酶-2抑制劑，如5-溴-2-(4-氟苯基)-3-[4-(甲基磺酰基)苯基]噻吩或雙氯芬酸。
具體而言，在雄性Wistar大鼠(每組5只動物，重約200g，供自IffaCredo，法國)的尾根部i.d.(皮內)注射0.1ml含有0.6mg凍干的熱滅活結核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis)的礦物油。從第15天至第22天用供試化合物(口服3、10或30mg/kg，每天一次)或賦形劑(水)治療大鼠(治療給藥方案)。實驗結束時，用千分尺測量跗關節(jié)腫脹。以用賦形劑治療的關節(jié)炎動物(0％抑制)和用賦形劑治療的正常動物(100％抑制)為參照，計算足腫脹抑制百分數(shù)。
基于這些研究，式I化合物驚人地適合用于治療炎性(尤其是風濕性或類風濕性)疾病。
基于其作為VEGF-受體酪氨酸激酶活性抑制劑的功效，式I化合物主要抑制血管的生長，因此例如對許多與血管生成失控相關的疾病有效，尤其是眼部新血管化導致的疾病，尤其是視網(wǎng)膜病如糖尿病性視網(wǎng)膜病或年齡相關性黃斑變性、銀屑病、成血管細胞瘤如血管瘤、腎小球膜細胞增殖疾病如慢性或急性腎病，例如糖尿病性腎病、惡性腎硬化、血栓性微血管病綜合征(thrombotic micro-angiopathy syndrome)或移植排斥，或尤其是炎性腎病如腎小球腎炎，尤其是腎小球膜增殖性腎小球腎炎、溶血性尿毒癥綜合征、糖尿病性腎病、高血壓性腎硬化(hypertensive nephrosclerosis)、動脈粥樣化、動脈再狹窄、自身免疫疾病、急性炎癥、纖維化疾病(例如肝硬變)、糖尿病、子宮內膜異位、慢性哮喘、動脈或移植后動脈粥樣硬化、神經(jīng)變性疾病以及尤其是腫瘤性疾病如白血病，尤其是急性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病和慢性髓性白血病，和其它“液體腫瘤”，尤其是那些表達c-kit、KDR或flt-1的液體瘤，以及實體腫瘤，尤其是乳腺癌、結腸癌、肺癌(尤其是小細胞肺癌)、前列腺癌或卡波西氏肉瘤。式I化合物(或其N-氧化物)可抑制腫瘤生長，且尤其適于預防腫瘤的轉移性擴散和微小轉移灶的生長。
式I化合物可單獨施用或與一種或多種其它治療劑組合施用，可能的組合治療采取固定組合的形式，或者本發(fā)明化合物和一種或多種其它治療劑交錯施用或彼此獨立地施用，或者固定組合與一種或多種其它治療劑組合施用。此外，式I化合物還可以與化學治療、放射治療、免疫治療、外科手術或它們的組合聯(lián)合施用尤其對于腫瘤的治療。如上所述，在其它治療方案中，長期治療與輔助治療同樣是可能的。其它可能的治療是在腫瘤消退后維持病人的狀態(tài)，或甚至例如在具有罹患腫瘤危險的患者中進行化學預防治療。
用于可能的組合的治療劑尤其為一種或多種細胞抑制或細胞毒性化合物，例如選自下組的一種或幾種化療劑，其包括但不限于多胺生物合成抑制劑、蛋白激酶抑制劑—尤其是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶如蛋白激酶C抑制劑或酪氨酸蛋白激酶如表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑—、細胞因子、負生長調節(jié)劑如TGF-β或IFN-β、芳香酶抑制劑、SH2結構域與磷酸化蛋白相互作用抑制劑、抗雌激素劑、拓撲異構酶I抑制劑、拓撲異構酶II抑制劑、微管活性劑、烷基化劑、抗腫瘤抗代謝劑、鉑化合物、其它抗血管生成化合物、促黃體生成素釋放素激動劑、抗雄激素劑、雙膦酸類化合物和曲妥單抗(trastuzumab)。
對于下文提及的優(yōu)選的式I化合物及其N-氧化物，可以合理地使用上文提及的通用定義的取代基定義，例如以便用更具體的定義或尤其是用具有優(yōu)選特征的定義代替更通用的定義。
此外，本發(fā)明涉及其中的基團和符號具有如上定義的含義的式I化合物或其N-氧化物或可藥用的鹽在制備用于治療視網(wǎng)膜病或年齡相關性黃斑變性的藥物產(chǎn)品中的用途。
此外，本發(fā)明涉及治療對抑制VEGF-受體酪氨酸激酶活性應答的腫瘤性疾病的方法，其包括向需要這種治療的溫血動物施用對所述疾病有效量的式I化合物或其N-氧化物或可藥用的鹽，其中的基團和符號具有如上定義的含義。
此外，本發(fā)明涉及治療視網(wǎng)膜病或年齡相關性黃斑變性的方法，其包括向需要這種治療的溫血動物施用對所述疾病有效量的式I化合物或其N-氧化物或可藥用的鹽，其中的基團和符號具有如上定義的含義。
本發(fā)明特別涉及式I化合物，其中R1代表H或低級烷基，R2代表H或低級烷基，R3代表三氟甲基，且X是O，其N-氧化物或互變異構體，以及上述化合物、其N-氧化物或其互變異構體的鹽。
優(yōu)選地，本發(fā)明特別涉及式I化合物，其中
R1代表H或甲基，R2代表H或甲基，R3代表三氟甲基，且X是O，其互變異構體，以及上述化合物或其互變異構體的鹽。
更具體而言，優(yōu)選以下式I化合物及其互變異構體2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺鹽酸鹽，2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺，2-[[(1，6-二氫-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺，和2-[[(1，6-二氫-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]-苯甲酰胺，或上述化合物或其互變異構體的鹽。
本發(fā)明的化合物可通過本身已知的方法制備，盡管所述方法至今尚未應用于本發(fā)明的新化合物，尤其使用特征如下的方法為了合成其中R1代表低級烷基，其余的符號R2和R3如式I化合物中所定義的式I化合物，在還原劑存在下，使式II化合物， 其中R2和R3如式I化合物中所定義，與式III的羰基化合物反應， 其中X代表O或S且R1是低級烷基，其中式II和III的起始化合物也可以以官能團被保護的形式存在，必要時和/或以鹽形式存在，條件是存在成鹽基團且鹽形式的反應是可能的；
其中式I化合物的被保護衍生物中的任何保護基團均被除去；并且如果需要，將可獲得的式I化合物轉化為另一種式I化合物或其N-氧化物，將游離的式I化合物轉化為鹽，將可獲得的式I化合物的鹽轉化為游離化合物或另一種鹽，和/或將式I化合物的異構體混合物拆分為單獨的異構體。
還原性烷基化詳述在以下更詳細的方法描述中，除非另外說明，R1、R2、R3和X如式I化合物中所定義。
式III的羰基化合物也可以以活性衍生物的形式存在；但是，優(yōu)選游離的醛或酮。
式III化合物的活性衍生物為例如相應的亞硫酸氫鹽加合物或尤其是式III化合物與醇例如低級烷醇形成的半縮醛、縮醛、半縮酮或縮酮；或式III化合物與硫醇例如低級鏈烷硫化物形成的硫縮醛或硫縮酮。
還原性烷基化優(yōu)選如下進行于常壓或0.1至10兆帕(Mpa)的壓力下、在催化劑存在下進行氫化，所述催化劑尤其是貴金屬催化劑如鉑或尤其是鈀，其優(yōu)選鍵合于載體材料如碳上，或重金屬催化劑如阮內鎳，或者在適宜的酸、優(yōu)選較弱的酸如低級鏈烷羧酸、尤其是乙酸或磺酸如對甲苯磺酸存在下，借助復合氫化物進行還原，如硼氫化物，尤其是堿金屬氰硼氫化物，例如氰基硼氫鈉；所述反應在有水或無水存在下、在常規(guī)溶劑中進行，例如醇如甲醇或乙醇，或醚例如環(huán)醚如四氫呋喃。
保護基如果式II或III化合物中有一個或多個其它官能團例如羧基、羥基、氨基或巰基由于不應參與反應而被保護或需要被保護，那么這些保護基是肽化合物合成和頭孢菌素和青霉素以及核酸衍生物和糖的合成中通常使用的基團。
保護基團可以已經(jīng)存在于前體中，應保護有關官能團不發(fā)生不必要的副反應如?；?、醚化、酯化、氧化、溶劑分解以及類似反應。保護基團的特征在于它們例如在類似于生理條件的條件下易于除去，即沒有不期望的副反應，通常是通過溶劑分解、還原、光解或者還通過酶活性除去，且不出現(xiàn)于終產(chǎn)物中。專業(yè)人員知道或可容易地確定哪些保護基團適用于上下文中所提及的反應。
用所述保護基團對上述官能團進行保護、保護基團本身以及它們的除去反應在以下文獻中述及例如標準參考書如J.F.W.McOmie，“有機化學中的保護基”，Plenum出版社，倫敦和紐約1973；T.W.Greene，“有機合成中的保護基”，Wiley，紐約1981；“肽”，第3卷(編輯E.Gross和J.Meienhofer)，Academic出版社，倫敦和紐約1981；“Methoden derorganischen Chemie”(有機化學方法)，Houben Weyl，第4版，第15/I卷，Georg Thieme Verlag，斯圖加特1974；H.-D.Jakubke和H.Jescheit，“Aminosuren、Peptide、Proteine”(氨基酸、肽、蛋白質)，Verlag Chemie，Weinheim，Deerfield Beach和Basel 1982；以及Jochen Lehmann，“Chemieder KohlenhydrateMonosaccharide und Derivate”(碳水化合物化學單糖及其衍生物)，Georg Thieme Verlag，斯圖加特1974。
其它方法步驟具有成鹽基團的式I化合物的鹽可以以本身已知的方法制備。因此，通過用酸或用適宜的陰離子交換試劑進行處理可獲得式I化合物的酸加成鹽。具有兩個酸分子的鹽(例如式I化合物的二鹵化物)也可轉化為每個化合物具有一個酸分子的鹽(例如單鹵化物)；這可以通過以下方法完成加熱至熔融，或例如在高真空、升高的溫度例如130至170℃下以固態(tài)形式進行加熱，從每分子式I化合物中消除1分子的酸。
鹽通?？赊D化為游離化合物，例如通過用適宜的堿性試劑處理，例如堿金屬碳酸鹽、堿金屬碳酸氫鹽或堿金屬氫氧化物，通常是碳酸鉀或氫氧化鈉。
由式II與式III化合物反應得到的式I的鄰氨基苯甲酰胺，其中R1代表低級烷基且其余的符號R2和R3如式I化合物中所定義，可按照以下方法進一步反應，得到其中R1代表H的式I的鄰氨基苯甲酰胺。在45℃至70℃的溫度下、在適宜的溶劑例如鹵代烷烴如氯仿中，用碘化三甲基硅烷將其中R1代表低級烷基的式I的鄰氨基苯甲酰胺處理約20至35小時，任選隨后用甲醇處理。
一般方法條件在此所述的所有方法步驟均可在已知的反應條件下進行，優(yōu)選在那些特別提及的條件下進行；不存在或通常存在優(yōu)選對所用試劑呈惰性且能溶解它們的溶劑或稀釋劑；不存在或存在催化劑、縮合劑或中和劑，例如離子交換劑，通常是例如H+形式的陽離子交換劑，這取決于反應和/或反應物的類型；溫度為降低、正常或升高的溫度，例如-100℃至約190℃、優(yōu)選約-80℃至約150℃，例如-80至-60℃下、室溫、-20至40℃或所用溶劑的沸點；壓力為大氣壓力下或在密閉容器中，其中有壓力為宜；和/或在惰性氣氛、例如在氬氣或氮氣下。
如果含有成鹽基團，所有起始化合物和過渡物均可以以鹽存在。在上述化合物的反應過程中也可以以鹽存在，只要反應不會因此受到干擾即可。
除非在方法描述中另外指明，可從中選擇的適于所述反應的溶劑包括例如水；酯，通常是低級烷基-低級鏈烷酸酯，例如二乙基乙酸酯；醚，通常為脂肪族醚，例如二乙醚，或環(huán)醚，例如四氫呋喃；液體芳香族烴，通常是苯或甲苯；醇，通常是甲醇、乙醇或1-或2-丙醇；腈，通常是乙腈；鹵代烴，通常是二氯甲烷；酰胺，通常是二甲基甲酰胺；堿，通常是雜環(huán)氮堿，例如吡啶；羧酸，通常是低級鏈烷羧酸，例如乙酸；羧酸酐，通常是低級鏈烷酸酐，例如乙酸酐；環(huán)狀、直鏈或支鏈烴，通常是環(huán)己烷、己烷或異戊烷，或這些溶劑的混合物，例如水溶液。上述溶劑混合物也可以用于例如色譜法或分配處理中。
式I化合物、包括它們的鹽也可以以水合物的形式獲得，或者它們的晶體可以包括例如結晶所用的溶劑(以溶劑合物存在)。
在優(yōu)選實施方案中，根據(jù)實施例中定義的方法和方法步驟或其類似方法和方法步驟制備了式I化合物。
活性成分的劑量取決于多種因素，包括患者的類型、種屬、年齡、體重、性別和醫(yī)學狀況；待治療病癥的嚴重性；施用途徑；患者的腎功能和肝功能以及所用的具體化合物。一般的內科醫(yī)生、臨床醫(yī)生或獸醫(yī)可容易地確定并開具預防、抵抗或抑制病癥發(fā)展所需的有效量的藥物。為了在使藥物濃度處于可產(chǎn)生功效但無毒性的范圍內的過程中獲得最佳精度，需要掌握藥物在靶部位的動力學。這包括藥物的分布、平衡和消除因素。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，其包含有效量的、尤其是治療以上提及的疾病之一有效量的式I的鄰氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互變異構體，以及適于局部、經(jīng)腸例如口服或直腸或經(jīng)胃腸外施用的、可為有機或無機、固體或液體的可藥用載體。
口服施用特別地使用片劑或明膠膠囊劑，其包含活性成分以及稀釋劑，例如乳糖、右旋糖、甘露醇和/或甘油，和/或潤滑劑和/或聚乙二醇。片劑還可以包含粘合劑，例如硅酸鎂鋁、淀粉如玉米、小麥或米淀粉、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮，并且如果需要還包含崩解劑，例如淀粉、瓊脂、藻酸或其鹽如海藻酸鈉，和/或泡騰混合物，或吸收劑、染料、矯味劑和甜味劑。也可能以胃腸外可施用的組合物形式或以輸液形式使用本發(fā)明的藥理學活性化合物。藥物組合物可以是無菌的和/或可包含賦形劑，例如防腐劑、穩(wěn)定劑、潤濕劑和/或乳化劑、增溶劑、調節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。本發(fā)明的藥物組合物，如果需要可包含其它藥理學活性物質，所述組合物可通過本身已知的方法制備，例如通過常規(guī)的混合、制粒、成型、溶解或凍干方法制備，且可包含約1％至95％、尤其是約1％至約20％的活性成分。
此外，本發(fā)明涉及用于治療溫血動物、包括人的腫瘤的藥物組合物，其包含抗腫瘤有效劑量的上述式I化合物或所述化合物的可藥用鹽以及藥用載體。
另外，本發(fā)明提供了在治療人或動物體的方法中使用的式I的鄰氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互變異構體，或所述化合物的可藥用鹽。
本發(fā)明還涉及式I的鄰氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互變異構體，或所述化合物的可藥用鹽的用途，用于制備用來治療腫瘤性疾病、視網(wǎng)膜病或年齡相關性黃斑變性的藥物產(chǎn)品。
除此之外，本發(fā)明還教導了治療對抑制VEGF-受體酪氨酸激酶活性應答的腫瘤性疾病的方法，其包括向需要這種治療的溫血動物施用抗所述疾病有效量的式I的鄰氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互變異構體，或所述鄰氨基苯甲酰胺、其N-氧化物或互變異構體的可藥用鹽。
起始原料新的起始原料和/或中間體及其制備方法也是本發(fā)明的主題。在優(yōu)選實施方案中，使用了所述起始原料，并選擇了能夠獲得優(yōu)選化合物的反應條件。
式III、IV和V的起始原料是已知的，其市售可得或可根據(jù)本領域已知的方法或類似方法合成。
例如，式II化合物可通過還原式IV的硝基化合物而制備， 其中R2和R3具有式I下所給出的含義。
還原優(yōu)選在適宜的還原劑如氯化亞錫(II)或氫存在下、在適合的催化劑如阮內鎳(那么優(yōu)選在壓力如2至20巴下使用氫)或PtO2存在下，于適合的溶劑例如醇如甲醇中進行。反應溫度優(yōu)選為0至80℃、尤其是15至30℃。
式IV的硝基化合物可通過使式VI的活化的酸衍生物，
其中Y是鹵素或另一種適宜的離去基團，與式V的胺反應而獲得， 其中R2和R3如式I下所定義，例如在偶聯(lián)劑如二環(huán)己基碳二亞胺存在下、在0℃至50℃、優(yōu)選室溫下進行。
所有其余的起始原料均是已知的、能夠根據(jù)已知方法制備或市售可得；具體而言，它們可用實施例中所述的方法進行制備。
在起始原料的制備中，必要時應對不參與反應的現(xiàn)有官能團進行保護。優(yōu)選的保護基、它們的引入和除去在“保護基”項下或實施例中述及。
所有其余的起始原料均是已知的、能夠根據(jù)已知方法制備或市售可得；具體而言，它們可用實施例中所述的方法進行制備。
以下實施例用于闡述本發(fā)明，但不限制本發(fā)明的范圍。
溫度以攝氏度(℃)計。除非另外說明，反應均在室溫下進行。
實施例參比實施例12-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[4-溴-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(未作權利要求)在25℃下、30分鐘內，向攪拌著的乙酸(3.8mL)、6-甲氧基-3-吡啶甲醛(Fluka，Buchs，瑞士；7.80g，57mmol)和2-氨基-N-(4-溴-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺(步驟1.2；13.65g，38mmol)于甲醇(380mL)中的混合物中逐份加入氰基硼氫鈉(95％，8.80g，133mmol)。將混合物攪拌16小時。減壓下蒸除溶劑，得到的殘余物用飽和碳酸氫鈉水溶液(500mL)處理并用二氯甲烷(3×150mL)萃取。將合并的萃取液干燥(Na2SO4)、過濾，減壓下蒸除溶劑，得到的粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜純化，用5％乙酸乙酯/二氯甲烷洗脫，并用乙醚-己烷重結晶，得到標題化合物，為米黃色結晶狀固體，m.p.101-103℃。
步驟1.12-硝基-N-(4-溴-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺在室溫下，將3-氨基-6-溴三氟甲苯(Fluka，Buchs，瑞士；24.0g，100mmol)的乙酸乙酯(240mL)溶液加入攪拌著的氫氧化鈉水溶液(1M，110mL)中。然后在30分鐘內向攪拌的溶液中滴加2-硝基苯甲酰氯(Fluka，Buchs，瑞士；14.5mL，110mmol)的乙酸乙酯(150mL)溶液進行處理。然后在環(huán)境溫度下將所得混合物攪拌30分鐘。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取混合物，隨后將合并的萃取液依次用鹽酸(2M，2×100mL)、水(2×100mL)、飽和碳酸氫鈉水溶液(2×100mL)和飽和氯化鈉水溶液(1×100mL)洗滌、干燥(MgSO4)、過濾并于減壓下蒸除溶劑，得到的粗產(chǎn)物經(jīng)乙酸乙酯-己烷重結晶純化，得到標題化合物，為米黃色結晶狀固體，m.p.157-158℃。
步驟1.22-氨基-N-(4-溴-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺在21℃、大氣壓下，將2-硝基-N-(4-溴-3-三氟甲基苯基)苯甲酰胺(中間體1a；32g，82mmol)的甲醇(1000mL)溶液用阮內鎳(6g)氫化。7小時后吸收了計算量的氫。過濾混合物并在減壓下蒸除溶劑，得到的粗產(chǎn)物經(jīng)乙醚-己烷重結晶純化，得到標題化合物，為無色結晶狀固體，m.p.142-144℃。
實施例22-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺鹽酸鹽通過類似于實施例1所述的方法、使用步驟2.2的中間體和6-甲氧基-3-吡啶甲醛(Fluka，Buchs，瑞士)制得標題化合物；m.p.133-135℃。
步驟2.12-硝基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺類似于步驟1.1、使用3-(三氟甲基)苯胺(Aldrich，Buchs，瑞士)制得標題化合物；m.p.134-135℃。
步驟2.22-氨基-N-[(3-三氟甲基)苯基]苯甲酰胺類似于步驟1.2、使用2-硝基-N-[(3-三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(步驟2.1)制得標題化合物；m.p.132-133℃。
實施例32-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]-苯甲酰胺通過類似于實施例1所述的方法、使用步驟3.2的中間體和6-甲氧基-3-吡啶甲醛(Aldrich，Buchs，瑞士)制得標題化合物；m.p.134-135℃。
步驟3.12-硝基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺類似于步驟1.1、使用2-甲基-3-(三氟甲基)苯胺(Fluorochem，Derbyshire，英格蘭)制得標題化合物；m.p.188-189℃。
步驟3.22-氨基-N-[2-甲基-(3-三氟甲基)苯基]苯甲酰胺類似于步驟1.2、使用2-硝基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(步驟3.1)制得標題化合物；m.p.128-129℃。
參比實施例42-[[(1，6-二氫-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[4-丙炔基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(未作權利要求)在60℃、氬氣氛下，將2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[4-(1-丙炔基)-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(步驟4.1；1.10g，2.5mmol)和碘化三甲基硅烷(Fluka，Buchs，瑞士；1.0mL，7.5mmol)在氯仿(30mL)中的混合物攪拌16小時。冷卻混合物，然后用甲醇(2mL)處理并在室溫下攪拌10分鐘。減壓下蒸除溶劑，殘余物用氨水溶液(5％，100mL)處理，用乙酸乙酯(3×100mL)萃取。將合并的萃取液用飽和氯化鈉水溶液(50mL)洗滌、干燥(MgSO4)、過濾并在減壓下蒸除溶劑，得到的粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜純化，用乙酸乙酯洗脫，用熱乙酸乙酯-己烷重結晶，得到標題化合物，為無色結晶狀固體；m.p.208-212℃。
步驟4.12-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[4-(1-丙炔基)-3-(三氟甲基)-苯基]苯甲酰胺在25℃下，向攪拌著的2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[4-溴-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(參比實施例1；3.98g，8.3mmol)的干燥甲苯(200mL)溶液中通氬氣20分鐘。然后加入三丁基-1-丙炔基錫烷(80％，4.1g，9.96mmol)和四(三苯基膦)鈀(O)(260mg)，所得混合物在氬氣氛下于100℃加熱17小時。然后將混合物冷卻、用氫氧化鈉水溶液(0.1M，85mL)處理并通空氣2小時。用乙酸乙酯(3×100mL)萃取所得混合物。將有機相依次用水(2×40mL)和飽和氯化鈉水溶液(1×40mL)洗滌、干燥(Na2SO4)、過濾并在減壓下蒸除溶劑，得到的粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜純化，用33％乙酸乙酯/己烷洗脫，用乙醚-己烷重結晶，得到標題化合物，為淺黃色結晶狀固體；m.p.123-124℃。
實施例52-[[(1，6-二氫-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺通過類似于實施例4所述的方法、使用2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(實施例2)制得標題化合物；m.p.171-172℃。
實施例62-[[(1，6-二氫-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺通過類似于實施例4所述的方法、使用2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(實施例3)制得標題化合物；m.p.191-192℃。
實施例7軟膠囊劑如下制備5000粒軟明膠膠囊，每粒包含0.05g以上實施例提及的式I化合物之一作為活性成分組成活性成分 250gLauroglycol2升制備方法將粉狀活性成分混懸于Lauroglycol(月桂酸丙二醇酯，GattefosséS.A.，里昂，法國)中并于濕法粉碎機中研磨，獲得約1至3μm的粒徑。然后用膠囊填充機將每份0.419g的混合物灌入軟明膠膠囊中。
權利要求
1.式I的鄰氨基苯甲酰胺， 其中R1代表H或低級烷基，R2代表H或低級烷基，R3代表全氟代低級烷基，且X是O或S，或其N-氧化物或互變異構體，或所述鄰氨基苯甲酰胺、其N-氧化物或其互變異構體的鹽。
2.權利要求1的式I的鄰氨基苯甲酰胺，其中R1代表H或低級烷基，R2代表H或低級烷基，R3代表三氟甲基，且X是O，或其N-氧化物或互變異構體，或所述鄰氨基苯甲酰胺、其N-氧化物或其互變異構體的鹽。
3.權利要求1的式I的鄰氨基苯甲酰胺，其中R1代表H或甲基，R2代表H或甲基，R3代表三氟甲基，且X是O，或其互變異構體，或所述鄰氨基苯甲酰胺或其互變異構體的鹽。
4.權利要求1的式I的鄰氨基苯甲酰胺，其選自2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺鹽酸鹽，2-[[6-甲氧基-3-吡啶基]甲基]氨基-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺，2-[[(1，6-二氫-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺，和2-[[(1，6-二氫-6-氧代-3-吡啶基)甲基]氨基]-N-[2-甲基-3-(三氟甲基)苯基]-苯甲酰胺，或其N-氧化物或互變異構體，或所述鄰氨基苯甲酰胺、其N-氧化物或其互變異構體的鹽。
5.權利要求1至4的任一項的式I的鄰氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互變異構體，或所述化合物的可藥用鹽，其用于治療人或動物體的方法中。
6.式I的鄰氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互變異構體或所述化合物的可藥用鹽的用途，其中的基團和符號具有權利要求1中所定義的含義，用于制備用來治療腫瘤性疾病的藥物產(chǎn)品。
7.式I的鄰氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互變異構體或所述化合物的可藥用鹽的用途，其中的基團和符號具有權利要求1中所定義的含義，用于制備用來治療視網(wǎng)膜病或年齡相關性黃斑變性的藥物產(chǎn)品。
8.治療對抑制VEGF-受體酪氨酸激酶活性應答的腫瘤性疾病的方法，其包括向需要這種治療的溫血動物施用有效對抗所述疾病量的式I的鄰氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互變異構體，或所述鄰氨基苯甲酰胺、其N-氧化物或其互變異構體的可藥用鹽，其中的基團和符號具有權利要求1中所定義的含義。
9.藥物制劑，其包含權利要求1至4的任一項的式I的鄰氨基苯甲酰胺或其N-氧化物或互變異構體，或所述化合物的可藥用鹽或其水合物或溶劑合物，以及至少一種可藥用載體。
10.制備式I的鄰氨基苯甲酰胺的方法， 其中R1代表低級烷基且其余的符號R2和R3如權利要求1所定義，其中在還原劑存在下，使式II化合物， 其中R2和R3如式I化合物中所定義，與式III的羰基化合物反應， 其中X代表O或S且R1是低級烷基，其中式II和III的起始化合物也可以以官能團被保護的形式存在，必要時和/或為鹽的形式，條件是存在成鹽基團且鹽形式的反應是可能的；其中式I化合物的被保護衍生物中的任何保護基均被除去；并且如果需要，將可獲得的式I化合物轉化為另一種式I化合物或其N-氧化物，將游離的式I化合物轉化為鹽，將可獲得的式I化合物的鹽轉化為游離化合物或另一種鹽，和/或將式I化合物的異構體混合物拆分成單獨的異構體。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)的鄰氨基苯甲酰胺衍生物，其中R
文檔編號A61P15/00GK1585750SQ02822209
公開日2005年2月23日 申請日期2002年11月7日 優(yōu)先權日2001年11月8日
發(fā)明者G·博爾德, P·菲雷, P·W·曼利 申請人:諾瓦提斯公司