專利名稱：一種復(fù)方黃芪多糖脂質(zhì)體長效注射液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)方黃芪多糖脂質(zhì)體長效注射液及其制備方法。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體主要由磷脂和膽固醇構(gòu)成。磷脂普遍存在于動植物細胞的原生質(zhì)和生物膜中，是構(gòu)成細胞膜的主要成分之一，對生物膜的生理活性和機體的正常代謝有重要的調(diào)節(jié)作用。
膽固醇是一種中性脂質(zhì)，在各類動物細胞中含量較高。它在膜中主要與磷脂結(jié)合起著改變磷脂層性質(zhì)的作用，它趨向于減弱膜中類脂類與蛋白質(zhì)之間的連接，作用主要是調(diào)節(jié)膜的流動性。脂質(zhì)體作為載體，其價值在于能包合各種物質(zhì)，其包合方式完全是物理性的，水溶性的物質(zhì)可包封在脂質(zhì)體的水層結(jié)構(gòu)中，而脂溶性物質(zhì)和兩親性的物質(zhì)，則結(jié)合于脂質(zhì)體雙分子層中。而對于在水相和有機相都不能溶解的物質(zhì)或者在兩相中都溶解非常好的物質(zhì)不易采用脂質(zhì)體進行包封。被包封的脂質(zhì)體能提高被包裹藥物的穩(wěn)定性，并且能達到緩釋的效果。黃芪為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根。其性甘、微溫，入肺、脾經(jīng)、具有補氣升陽、固表止汗、托毒排膿、利水消腫、斂瘡生肌等功效。它含有多糖、蛋白質(zhì)、生物堿、氨基酸、黃酮類、微量元素等多種生物活性物質(zhì)，其中黃芪多糖是其主要生物活性成分，它主要由葡萄糖、鼠李糖、阿拉伯糖和半乳糖組成。黃芪多糖可顯著增強非特異性免疫功能和體液免疫功能，顯著增強小鼠巨噬細胞的吞噬功能，促進血清溶血素形成，提高空斑形成細胞的溶血功能和明顯的碳粒廓清作用和明顯增加脾重量。另外黃芪多糖是一種干擾素誘導(dǎo)齊U，其抗病毒原理刺激巨噬細胞和T細胞的功能，使E環(huán)形成細胞數(shù)增加，誘生細胞因子，促進白細胞介素誘生，而使動物機體產(chǎn)生內(nèi)源性干擾素，從而達到抗病毒的目的。然而在實際應(yīng)用中黃芪多糖粉易吸潮，穩(wěn)定性差，難保存，而黃芪多糖注射液是03版《獸藥質(zhì)量標準》上常用于雞傳染性法氏囊病輔助治療的注射用藥品，使用方法為肌肉注射，每日一次，連用兩日，通過走訪了解到，連需兩日注射會帶來雞子嚴重的應(yīng)激反應(yīng)，引起產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋量的顯著下降。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種一次給藥就能有效控制疾病、有效提高生物利用度的復(fù)方黃芪多糖脂質(zhì)體長效注射液及其制備方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下
一種復(fù)方黃芪多糖脂質(zhì)體長效注射液，每IOOml注射液中，其有效成分是黃芪多糖I 2g、磷脂5 7g、膽固醇I 3g、磷酸二鯨臘酯0. I lg、螺內(nèi)酯0. 01 0. 02g。所述的磷脂為卵磷脂、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰甘油。優(yōu)選為卵磷脂和二硬脂酰磷脂酰甘油，最優(yōu)選為注射用卵磷脂。制備方法所述制法為薄膜分散法、逆向蒸發(fā)法、冷凍干燥法、超聲波分散法中的一種。優(yōu)選采用超聲分散法，即將黃芪多糖在PBS緩沖液中溶解，加至磷脂、膽固醇、磷酸二鯨蠟酯、螺內(nèi)酯共溶的有機溶劑制成的溶液中，蒸發(fā)除去有機溶劑，殘液經(jīng)超聲波分散，分離出脂質(zhì)體，重新混懸于100ml PBS緩沖液中，然后過濾、分裝，即得。所述的有機溶劑為氯仿、乙醚、乙醇、丙二醇、甲醇、丙醇的一種或者幾種。優(yōu)選為氯仿和乙醚，最優(yōu)選為氯仿。本發(fā)明制備出的復(fù)方黃芪多糖長效注射液是利用磷脂和膽固醇的固有的性質(zhì)，通過借助外界的一定手段，將黃芪多糖用脂質(zhì)體的方法進行包裹，得到了類似于生物膜的雙分子結(jié)構(gòu)，具有很好的組織相容性、細胞親和性、提高了黃芪多糖的穩(wěn)定性，并且擁有很好的緩釋性效果，在臨床應(yīng)用中，該注射液和原黃芪多糖注射液相比，在相同的用量下，黃芪多糖注射液僅使用一次即可達到常規(guī)注射液2次的良好的效果。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案做進一步地詳細介紹，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此。實施例I :lg黃芪多糖在PH7. 4磷酸鹽緩沖液中溶解，然后加至溶入5g注射用卵磷脂、Ig膽固醇、0. Ig磷酸二鯨蠟酯、0. Olg螺內(nèi)酯的氯仿制成的溶液中，蒸發(fā)除去氯仿，殘液經(jīng)超聲波分散，分離出脂質(zhì)體，重新混懸于100ml PH7. 4磷酸鹽緩沖液中得淡黃色的脂質(zhì)體混懸液，然后0. 45 u m微孔濾膜過濾2次，0. 22 u m無菌過濾后分裝，即得復(fù)方黃芪多糖長效注射液。實施例2 :1. 5g黃芪多糖在pH7. 4磷酸鹽緩沖液中溶解，然后加至溶入6g 二硬脂 酰磷脂酰甘油、2g膽固醇、0. 5g磷酸二鯨蠟酯、0.015g螺內(nèi)酯的乙醚制成的溶液中，蒸發(fā)除去乙醚，殘液經(jīng)超聲波分散，分離出脂質(zhì)體，重新混懸于100ml pH7. 4磷酸鹽緩沖液中得淡黃色的脂質(zhì)體混懸液，然后0. 45 u m微孔濾膜過濾2次，0. 22 u m無菌過濾后分裝，即得復(fù)方黃芪多糖長效注射液。實施例3 2g黃芪多糖在pH7. 4磷酸鹽緩沖液中溶解，然后加至溶入7g注射用卵磷脂、2g膽固醇、0. 5g磷酸二鯨蠟酯、0. 02g螺內(nèi)酯的氯仿制成的溶液中，蒸發(fā)除去氯仿，殘液經(jīng)超聲波分散，分離出脂質(zhì)體，重新混懸于100ml pH7. 4磷酸鹽緩沖液中得淡黃色的脂質(zhì)體混懸液，然后0. 45 u m微孔濾膜過濾2次，0. 22 u m無菌過濾后分裝，即得復(fù)方黃芪多糖長效注射液。以上實施例中，所述PBS緩沖液按本領(lǐng)域常規(guī)方法配制，例如1L、pH7. 4的PBS配方磷酸二氫鉀(KH2PO4) :0. 27g、磷酸氫二鈉(Na2HPO4) :1.42g、氯化鈉(NaCl) :8g、氯化鉀(KCl) 0. 2g,加去離子水約800mL充分攪拌溶解,然后加入濃鹽酸調(diào)pH至7. 4,最后定容到1L，高溫高壓滅菌后室溫保存。包封率測定
吸取0.5 mL本發(fā)明復(fù)方黃芪多糖長效注射液于10 mL錐形離心管中，添加0.5 mL魚精蛋白(10 mg ^mL-1)攪勻。靜置3 min,加入3 mL生理鹽水,在室溫條件下離心30 min(3000r/min)。上清液以生理鹽水定容至10 mL，取I mL此溶液，測定其多糖含量，即游離藥物量。沉淀以3 mL 10% triton-100溶解，并補充生理鹽水至10 mL。取I mL此溶液，測定其多糖含量，即包封藥物量 。計算公式為包封率=(l_Cf/C,e、)X 100%, Cf為游離藥物量;(&為包封藥物量與游離藥物之和。多糖含量的測定采用苯酚-濃硫酸法，經(jīng)測定，實施例1、2、3的包封率依次為26. 94%,45. 02%、56. 66%。為驗證本發(fā)明所述復(fù)方黃芪多糖長效注射液的特性，特進行如下試驗。I.試驗材料 試驗藥物
本發(fā)明實施例3制備的復(fù)方黃芪多糖長效注射液。黃芪多糖注射液，河南牧翔動物藥業(yè)有限公司，批號20111101。雞傳染性法氏囊病病毒診斷試劑盒，購自河南百奧生物科技有限公司，批號20120508。雞傳染性法氏囊病病毒抗體檢測試劑盒，購自河南百奧生物科技有限公司，批號20120508。雞傳染性法氏囊病毒IBDV強毒株(毒號BC_6/85)，法氏囊陽性，購自中國獸藥監(jiān)察所。試驗動物1日齡海蘭蛋雞雛共250只，購自河南雛鷹集團，均未經(jīng)法氏囊疫苗免疫，試驗前經(jīng)雞傳染性法氏囊病病毒診斷試劑盒檢測均為陰性。動物飼養(yǎng)動物飼料，購自鄭州市嘉吉飼料有限公司。試驗雞均飼養(yǎng)在標準雞舍，自由采食與飲水。2.方法
2.I疾病模型的預(yù)試
將IBDV強毒株BC-6/85按照菌種分發(fā)證書上的毒力用滅菌生理鹽水稀釋至1000BID(BID :法氏囊感染劑量)。取飼養(yǎng)至24日齡健康非免疫、體重接近的雞40羽，分4組，隨機分成低感組、中感染組、高感染組和健康對照組。感染組經(jīng)點眼共0. 05ml,0. 10ml、0. 15ml接種1000IBD病毒液。每天觀察記錄雞的精神狀態(tài)、臨床癥狀、發(fā)病情況及死亡情況，連續(xù)觀察5d，確定復(fù)制疾病模型的最佳條件為點眼共0. 05ml。2. 2試驗動物分組與處理
將30日齡的供試雞隨機分為4組，每組30只，自由采食與飲水。除健康對照組外，其余組通過點眼共接種IBD病毒液0. 05 mL的方式進行攻毒，攻毒24h后立即給藥，分組與給藥情況詳見表I。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)方黃芪多糖脂質(zhì)體長效注射液，其特征在于每IOOml注射液中，其有效成分是黃芪多糖I 2g、磷脂5 7g、膽固醇I 3g、磷酸ニ鯨蠟酯O. I lg、螺內(nèi)酯O. 01 O.02go
2.如權(quán)利要求I所述的復(fù)方黃芪多糖脂質(zhì)體長效注射液，其特征在于所述的磷脂為卵磷脂、ニ棕櫚酰磷脂酰膽堿、ニ硬脂酰磷脂酰膽堿、ニ棕櫚酰磷脂酰こ醇胺、ニ油酰磷脂酰膽堿、ニ硬脂酰磷脂酰甘油。
3.一種制備如權(quán)利要求I或2所述的復(fù)方黃芪多糖脂質(zhì)體長效注射液的方法，其特征在于所述制法為薄膜分散法、逆向蒸發(fā)法、冷凍干燥法、超聲波分散法中的ー種。
4.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于采用超聲分散法，即將黃芪多糖在PBS緩沖液中溶解，加至磷脂、膽固醇、磷酸ニ鯨蠟酷、螺內(nèi)酯共溶的有機溶劑制成的溶液中，蒸發(fā)除去有機溶劑，殘液經(jīng)超聲波分散，分離出脂質(zhì)體，重新混懸于100ml PBS緩沖液中，然后過濾、分裝，即得。
5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于所述的有機溶劑為氯仿、こ醚、こ醇、丙ニ醇、甲醇、丙醇的ー種或者幾種。
全文摘要
本發(fā)明屬于藥物制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種復(fù)方黃芪多糖脂質(zhì)體長效注射液及其制備方法。每100ml注射液中，其有效成分是黃芪多糖1～2g、磷脂5～7g、膽固醇1～3g、磷酸二鯨蠟酯0.1～1g、螺內(nèi)酯0.01～0.02g。本發(fā)明制備出的復(fù)方黃芪多糖長效注射液是利用磷脂和膽固醇的固有的性質(zhì)，通過借助外界的一定手段，將黃芪多糖用脂質(zhì)體的方法進行包裹，得到了類似于生物膜的雙分子結(jié)構(gòu)，具有很好的組織相容性、細胞親和性、提高了黃芪多糖的穩(wěn)定性，并且擁有很好的緩釋性效果，在臨床應(yīng)用中，該注射液和原黃芪多糖注射液相比，在相同的用量下，黃芪多糖注射液僅使用一次即可達到常規(guī)注射液2次的良好的效果。
文檔編號A61P31/12GK102973508SQ20121042642
公開日2013年3月20日 申請日期2012年10月31日 優(yōu)先權(quán)日2012年10月31日
發(fā)明者賀培益, 陳圓圓, 劉升, 柴保國, 高義 申請人:河南牧翔動物藥業(yè)有限公司