專利名稱：一種人工合成的g4噬菌體及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及噬菌體領(lǐng)域，尤其是關(guān)于一種人工合成的噬菌體。
背景技術(shù)：
隨著微生物抗藥性的不斷增強(qiáng)，抗生素的發(fā)展已經(jīng)越來(lái)越不能滿足要求，因此，開(kāi)發(fā)一種新的抗菌療法已經(jīng)變得越來(lái)越迫切。噬菌體對(duì)一些細(xì)菌具有高度的專一性，當(dāng)噬菌體侵染細(xì)菌時(shí)，可在細(xì)菌中繁殖并殺死細(xì)菌；而對(duì)動(dòng)植物沒(méi)有毒性。因此，噬菌體以其特有的自然特征有望成為較好的抗菌藥。
合成生物學(xué)“后基因組時(shí)代”生命科學(xué)研究的新興領(lǐng)域。該學(xué)科通過(guò)對(duì)多種天然的或人工設(shè)計(jì)的生物學(xué)元件進(jìn)行合理、系統(tǒng)的組裝，實(shí)現(xiàn)生命系統(tǒng)的重構(gòu)。該技術(shù)將“結(jié)構(gòu)基因時(shí)代”的DNA建構(gòu)發(fā)展為“后基因組時(shí)代”的生命建構(gòu)。由于它以解決人類社會(huì)中的重大問(wèn)題為出發(fā)點(diǎn)，具有不可估量的潛在價(jià)值。許多國(guó)家對(duì)其非?？春茫⒄谕度刖薮罅α窟M(jìn)行研發(fā)。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種能夠治療大腸埃希菌引起的感染性疾病的人工合 成的G4噬菌體及其應(yīng)用。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案一種人工合成的G4噬菌體，所述 G4噬菌體的DNA序列為SEQ ID NO :1所示的第一序列。
進(jìn)一步的，所述第一序列由SEQ ID NO :2所示的第二序列突變而成，所述突變位點(diǎn)位于所述第二序列從5’端起的第3016個(gè)核苷酸、第3328個(gè)核苷酸、第3358個(gè)核苷酸，其突變結(jié)果分別為由t突變?yōu)閍、由t突變?yōu)镃、由t突變?yōu)镃。
一種所述的G4噬菌體在治療大腸埃希菌引起的感染性疾病上的應(yīng)用。
一種所述的G4噬菌體在防控食品中大腸埃希菌污染上的應(yīng)用。
一種所述的G4噬菌體在消殺大腸埃希菌病原菌上的應(yīng)用。
一種組合物，包括所述的G4噬菌體作為活性成分。
進(jìn)一步的，所述組合物被用作抗生素。
一種食品添加劑，包括所述的G4噬菌體作為活性成分。
一種清潔劑或消毒劑，包括所述的G4噬菌體作為活性成分。
本發(fā)明的有益效果是基于G4噬菌體特異性裂解細(xì)菌的特性，可以殺死具有耐藥性的大腸埃希菌，同時(shí)能夠防止菌株進(jìn)化和耐藥毒株的產(chǎn)生，進(jìn)而能夠有效增加大腸埃希菌的致死率。


圖1是本發(fā)明G4噬菌體基因組的環(huán)化結(jié)構(gòu)圖2顯示本發(fā)明G4噬菌體感染大腸桿菌形成的噬菌斑；
圖3是本發(fā)明G4噬菌體顆粒電鏡圖。
具體實(shí)施方式
下面通過(guò)具體實(shí)施方式
結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
發(fā)明人利用現(xiàn)有G4 噬菌體基因([NCBI Reference Sequence NC_001420. 2])突變后得到本發(fā)明G4噬菌體基因，現(xiàn)有G4噬菌體基因的DNA序列如SEQ ID NO :2所示的第二序列，本發(fā)明G4噬菌體基因的DNA序列如SEQ ID NO :2所示的第一序列。第二序列的突變位點(diǎn)分別是位于第二序列從5’端起的第3016個(gè)核苷酸、第3328個(gè)核苷酸和第3358個(gè)核苷酸，其突變結(jié)果分別是由t突變?yōu)閍、由t突變?yōu)閏和由t突變?yōu)镃。
如圖1所示，第一序列具有EcoRl、Kpnl、Ncol限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)，該三個(gè)內(nèi)酶切位點(diǎn)分別對(duì)應(yīng)上述的第3328個(gè)、3358、3016個(gè)位點(diǎn)，該三個(gè)內(nèi)酶切位點(diǎn)的序列分別為 gaattc、ggtacc、ccatgg。合成得到的本發(fā)明G4卩遼菌體能夠感染大腸埃希菌(即大腸桿菌) 形成噬菌斑，該噬菌斑為類圓形透明斑及大片融合斑，如圖2所示。合成得到的本發(fā)明G4 噬菌體顆粒如圖3中箭頭所示，該顆粒的直徑約40nm。設(shè)計(jì)酶切位點(diǎn)的目的是為了區(qū)別于野生型，表示本發(fā)明是用人工化學(xué)合成的方法制造的，而不是克隆別人的或天然的。
本發(fā)明G4噬菌體具有如下應(yīng)用
I)人造G4噬菌體可以替代抗生素或與抗生素聯(lián)合使用治療人類大腸埃希菌感染性疾病。由此，可以以該G4噬菌體作為活性成分，制作出含有該活性成分的組合物，通過(guò)該組合物起到治療或預(yù)防大腸埃希菌引起的感染性疾病的作用，該組合物可以用作抗生素。
2)可以作為食品添加劑防控食品中的烈性大腸埃希菌污染。由此，可以以該G4噬菌體作為活性成分，制作出含有該活性成分的食品添加劑，通過(guò)該食品添加劑起到防止大腸埃希菌污染的作用。
3)在一定環(huán)境條件下，對(duì)水體、土壤、物體表面進(jìn)行大腸埃希菌病原菌的殺滅。由此，可以以該G4噬菌體作為 活性成分，制作出含有該活性成分的消毒劑或清潔劑，通過(guò)該消毒劑或清潔劑起到消殺大腸埃希菌病原菌的作用。
以上內(nèi)容是結(jié)合具體的實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實(shí)施只局限于這些說(shuō)明。對(duì)于本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡(jiǎn)單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
序列表<110>蔡志明楊銳林唐愛(ài)發(fā)劉宇辰韓永華葉藝旺段永剛<120>一種人丄合成的G4噬菌體及其應(yīng)用 <130〉DHC1110326<160>2<170>PatentIn version 3.3<210>I<211>5577<212>DNA<213>G4噬菌體突變基因序列<400>
權(quán)利要求
1.一種人工合成的G4噬菌體，其特征在于所述G4噬菌體的DNA序列為SEQ ID NO:1所示的第一序列。
2.如權(quán)利要求1所述的G4噬菌體，其特征在于所述第一序列由SEQID N0:2所示的第二序列突變而成，所述突變位點(diǎn)位于所述第二序列從5’端起的第3016個(gè)核苷酸、第3328個(gè)核苷酸、第3358個(gè)核苷酸，其突變結(jié)果分別為由t突變?yōu)閍、由t突變?yōu)镃、由t突變?yōu)镃。
3.—種權(quán)利要求1或2所述的G4噬菌體在治療大腸埃希菌引起的感染性疾病上的應(yīng)用。
4.一種權(quán)利要求1或2所述的G4噬菌體在防控食品中大腸埃希菌污染上的應(yīng)用。
5.一種權(quán)利要求1或2所述的G4噬菌體在消殺大腸埃希菌病原菌上的應(yīng)用。
6.一種組合物，其特征在于包括權(quán)利要求1或2所述的G4噬菌體作為活性成分。
7.如權(quán)利要求6所述的組合物，其特征在于所述組合物被用作抗生素。
8.一種食品添加劑，其特征在于包括權(quán)利要求1或2所述的G4噬菌體作為活性成分。
9.一種清潔劑或消毒劑，其特征在于包括權(quán)利要求1或2所述的G4噬菌體作為活性成分。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種人工合成的G4噬菌體及其應(yīng)用，所述G4噬菌體的DNA序列為SEQ ID NO1所示的第一序列。所述第一序列由SEQ ID NO2所示的第二序列突變而成，所述突變位點(diǎn)位于所述第二序列從5’端起的第3016個(gè)核苷酸、第3328個(gè)核苷酸、第3358個(gè)核苷酸，其突變結(jié)果分別為由t突變?yōu)閍、由t突變?yōu)閏、由t突變?yōu)閏?；贕4噬菌體特異性裂解細(xì)菌的特性，可以殺死具有耐藥性的大腸埃希菌，同時(shí)能夠防止菌株進(jìn)化和耐藥毒株的產(chǎn)生，進(jìn)而能夠有效增加大腸埃希菌的致死率。
文檔編號(hào)A61P1/00GK102994457SQ201110273749
公開(kāi)日2013年3月27日 申請(qǐng)日期2011年9月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月15日
發(fā)明者蔡志明, 楊銳林, 唐愛(ài)發(fā), 劉宇辰, 韓永華, 葉藝旺, 段永剛 申請(qǐng)人:蔡志明, 楊銳林, 唐愛(ài)發(fā), 劉宇辰, 韓永華, 葉藝旺, 段永剛