專(zhuān)利名稱(chēng)：制備富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷提取物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中草藥提取領(lǐng)域，更確切地說(shuō)涉及一種以山楂葉提取物為原料制備高含量牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷提取物的方法。
背景技術(shù)：
山楂葉富含黃酮類(lèi)有效成分，對(duì)心腦血管疾病具有廣泛而確切的治療作用。山楂葉提取物中牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷含量較高，兩者結(jié)構(gòu)和極性相似，是山楂葉提取物的專(zhuān)屬性藥理活性成分。中國(guó)藥典2010年版一部中規(guī)定，將牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷作為山楂葉提取物的指紋圖譜特征指標(biāo)成分，規(guī)定山楂葉總黃酮提取物中的牡荊素鼠李糖苷需達(dá)到8. 8%以上。
朱曉新等報(bào)道，牡荊素鼠李糖苷可通過(guò)穩(wěn)定心肌細(xì)胞膜，減輕其損傷，調(diào)節(jié)PGs 的表達(dá)，降低心肌細(xì)胞搏動(dòng)頻率等機(jī)制保護(hù)心肌細(xì)胞缺氧再給氧性損傷{中國(guó)天然藥物， 2005，I (I)，45 49};目前，山楂葉總黃酮制劑已作為治療心血管藥物上市，國(guó)內(nèi)外對(duì)山楂葉黃酮類(lèi)的藥理活性及制劑研究還在不斷深入，希望從中再開(kāi)發(fā)新藥或保健食品，如牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷等為主要原料水解獲得的牡荊素作為中藥一類(lèi)新藥正在進(jìn)行開(kāi)發(fā)，開(kāi)發(fā)劑型為注射劑，處于申請(qǐng)臨床試驗(yàn)階段。牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖作為主要有效成分，其水溶性很好，較之其水解產(chǎn)物牡荊素的難溶性，開(kāi)發(fā)注射劑具有明顯優(yōu)勢(shì)。要進(jìn)行上述深入開(kāi)發(fā)與研究，需大量的、含高濃度牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的山楂葉提取物及牡荊素鼠李糖苷、牡荊素葡萄糖苷單體化合物。
然而，山楂葉提取物中組分復(fù)雜，包含多種黃酮類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)成分及未知雜質(zhì)，與牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷極性相近的成分很多，且牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷屬極性較大的成分，無(wú)論是對(duì)這兩個(gè)成分的分離或富集均存在很大困難，目前市售山楂葉提取物中的牡荊素鼠李糖苷均低于20%，牡荊素葡萄糖苷低于10%。
專(zhuān)利號(hào)為ZL03102024. O、名稱(chēng)為“一種用于治療心血管疾病的山楂葉注射劑”的發(fā)明專(zhuān)利，公開(kāi)了牡荊素鼠李糖苷的含量為30 50%的山楂葉提取物，其制備方法為山楂葉用乙醇提取，經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂處理，再用醋酸乙酯萃取，余液經(jīng)正丁醇萃取，正丁醇液回收溶劑后干燥而成。該方法存在制備方法復(fù)雜，需要同時(shí)使用大量的醋酸乙酯和正丁醇，成本較聞。發(fā)明內(nèi)容
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中山楂葉提取物牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷含量較低， 制備方法復(fù)雜，有機(jī)溶劑使用量大的問(wèn)題，本發(fā)明提供一種制備富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷提取物的方法。
本發(fā)明另一目的是提供富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的山楂葉提取物在制備藥物組合物、牡荊素鼠李糖苷單體、牡荊素葡萄糖苷單體或牡荊素中的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。
制備富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷提取物的方法，其中牡荊素鼠李糖苷的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為30% 55%，牡荊素葡萄糖苷的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為10% 35%，該制備方法包括以下步驟a.將山楂葉粗提取物的水溶液，過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱或聚酰胺柱，首先用水洗脫雜質(zhì)，然后用溶劑A洗脫雜質(zhì)，最后用含有碳酸氫鈉或碳酸氫鉀的溶劑A洗脫目標(biāo)成分并收集洗脫液；所述溶劑A為質(zhì)量百分比濃度為3% 30%的親水性有機(jī)溶劑的水溶液；b.將步驟a收集的洗脫液用酸調(diào)節(jié)pH至6 7.5，除去親水性有機(jī)溶劑，獲得無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液；C、將步驟b所述無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液用正丁醇或異丁醇萃取目標(biāo)成分，分取正丁醇或異丁醇層，回收溶劑，干燥后即得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物；或者將步驟b所述無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱或聚酰胺柱，用水洗脫鹽，然后用溶劑B 洗脫目標(biāo)成分并收集洗脫液，回收洗脫液，干燥后即得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物；所述溶劑B中親水性有機(jī)溶劑質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為30 100%，水的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為 O 70%。
所述山楂葉粗提取物為山楂葉水提取溶液、水提取濕浸膏、水提取干浸膏、醇提取濕浸膏或醇提取干浸膏；或它們進(jìn)一步經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂柱或聚酰胺柱純化后的總黃酮濕浸膏或總黃酮干浸膏。
所述親水性有機(jī)溶劑為乙醇、甲醇、正丙醇、異丙醇、丙酮、乙腈、四氫呋喃中的一種或兩種以上的混合溶劑。
步驟a中所述含有碳酸氫鈉的溶劑A中碳酸氫鈉的濃度為2 80g/L，所述含有碳酸氫鉀的溶劑A中碳酸氫鉀的濃度為2 250 g/L。
所述大孔吸附樹(shù)脂為非極性或弱極性的樹(shù)脂。
所述大孔吸附樹(shù)脂的型號(hào)為D101、AB-8、HPD-100、HPD-400和X-5。
上述方法所得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物在制備藥物組合物、牡荊素鼠李糖苷單體、牡荊素葡萄糖苷單體或牡荊素中的應(yīng)用。
本發(fā)明的有益效果I、因牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷同時(shí)含有7，4'兩個(gè)羥基，屬于酸性相對(duì)較強(qiáng)的黃酮，可與碳酸氫鈉或碳酸氫鉀成鹽，成鹽后極性增加。若采用大孔吸附樹(shù)脂或聚酰胺處理，先用水洗除雜質(zhì)、再用低濃度，3 30%的乙醇洗脫除雜質(zhì),最后可用低濃度,3 30%的乙醇，加入碳酸氫鈉或碳酸氫鉀，制成堿性溶液洗脫，牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷即可與碳酸氫鈉或碳酸氫鉀成鹽，極性變大，可被洗脫，而極性相近、無(wú)法成鹽的雜質(zhì)仍保留于大孔吸附樹(shù)脂或聚酰胺柱，故使目標(biāo)成分與雜質(zhì)達(dá)到了很好的分離，從而實(shí)現(xiàn)牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷高濃度的富集。實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，用碳酸氫鈉或碳酸氫鉀的水溶液無(wú)法直接將牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷從大孔吸附樹(shù)脂或聚酰胺柱洗脫，必須加入一定量的親水性有機(jī)溶劑，當(dāng)親水性有機(jī)溶劑質(zhì)量百分比大于3%時(shí)即可，但超過(guò)30%時(shí)，可同時(shí)將雜質(zhì)洗脫。該方法除雜效果好，產(chǎn)品純度高，所得提取物，牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷含量高，雜質(zhì)明顯簡(jiǎn)化，主要為少量酸性較強(qiáng)的黃酮類(lèi)雜質(zhì)；如將其進(jìn)一步采用色譜分離等方法制備牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷單體化合物，由于雜質(zhì)量少，易于結(jié)晶， 分離過(guò)程明顯簡(jiǎn)化。相對(duì)比，若從山楂葉粗提物或總黃酮作為起始原料制備該兩單體化合物，則提取分離步驟相當(dāng)復(fù)雜，雜質(zhì)干擾嚴(yán)重，難于分離。本發(fā)明的提取物也可作為酸水解制備牡荊素的原料應(yīng)用。酸水解后雜質(zhì)量少，易于處理。如，將所得提取物水液，酸水解后， 析出黃色固體，濾出固體用乙醇結(jié)晶與重結(jié)晶，即可獲得純度大于99%的牡荊素。
2、本發(fā)明采用的大孔吸附樹(shù)脂或聚酰胺為常用材料，可反復(fù)使用，所用有機(jī)溶劑可反復(fù)回收利用，制備成本較低；3、本發(fā)明工藝路線簡(jiǎn)化，易操作，比較容易實(shí)現(xiàn)從實(shí)驗(yàn)室小量制備到工業(yè)化批量生產(chǎn)的轉(zhuǎn)換。
4.本發(fā)明制備的富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的山楂葉提取物，其牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的含量很高，經(jīng)高效液相色譜儀檢測(cè)，牡荊素鼠李糖苷含量達(dá)309Γ55%，牡荊素葡萄糖苷含量達(dá)109Γ35%，可用于制備藥物組合物、牡荊素鼠李糖苷單體、牡荊素葡萄糖苷單體或牡荊素。
具體實(shí)施方式
以下是提供最佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但并非限制本發(fā)明。
本發(fā)明制備的富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物，采用高效液相色譜儀檢測(cè)牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的含量。具體條件為紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng) 330nm;C18-0DS柱；流動(dòng)相為四氫呋喃-甲醇-乙腈-乙酸-水(38 3 3 4 152);流速I(mǎi).Oml/min ;樣品進(jìn)樣濃度約O. lmg/ml，進(jìn)樣量為10 μ，采用外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。
下述各實(shí)施例中如果沒(méi)有特別說(shuō)明，濃度均指質(zhì)量百分比濃度。
下述實(shí)施例中使用的DlOl大孔吸附樹(shù)脂、Χ-5大孔吸附樹(shù)脂和ΑΒ-8大孔吸附樹(shù)脂生產(chǎn)商為南開(kāi)大學(xué)化工廠；HPD-100大孔吸附樹(shù)脂、和HPD-400大孔吸附樹(shù)脂生產(chǎn)商為滄州寶恩吸附材料科技有限公司；聚酰胺(30 60目)生產(chǎn)商為臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠。
實(shí)施例I取山楂葉1kg，加水煎煮2次，第I次加10倍量水，第2次6倍量水，每次I小時(shí),所得提取液過(guò)濾后，得到山楂葉粗提取物的水溶液，上聚酰胺柱吸附，先用10倍柱體積的水洗除雜質(zhì)。再用濃度為5%、10%和20%的乙醇水溶液依次洗脫雜質(zhì)，每次用量均為5倍柱體積。 繼以含有10g/L碳酸氫鈉的10%乙醇水溶液洗脫目標(biāo)成分，洗脫劑用量為10倍柱體積，收集洗脫液。
將洗脫液用鹽酸調(diào)節(jié)pH至7，回收乙醇至無(wú)醇味，獲得500ml無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液。
將無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液，用正丁醇萃取3次，每次萃取過(guò)程中正丁醇的用量為 500ml，分取正丁醇層，回收正丁醇，干燥，得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物9. 2g。經(jīng)高效液相檢測(cè)，其中牡荊素鼠李糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為44. 1%，牡荊素葡萄糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為21. 4%。
實(shí)施例2取山楂葉1kg，加60%乙醇水溶液回流提取2次，第I次加8倍量，第2次6倍量，每次 I小時(shí)，所得提取液過(guò)濾，回收乙醇至無(wú)醇味，用水稀釋得到山楂葉粗提取物的水溶液，上 DlOl大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，先用10倍柱體積的水洗除雜質(zhì)。再用5%、15%、30%的乙醇水溶液依次洗脫雜質(zhì)，每次乙醇水溶液用量為5倍柱體積。繼以含5g/L碳酸氫鉀的15%乙醇水溶液洗脫目標(biāo)成分，洗脫劑用量為8倍量柱體積，收集洗脫液。
將洗脫液用硫酸調(diào)節(jié)pH為6. 5，回收乙醇至無(wú)醇味，得到無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液。
將無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液用水稀釋為澄清水溶液，上DlOl大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，水洗至無(wú)硫酸鉀流出，然后用95%乙醇水溶液解吸附完全，收集洗脫液，除去乙醇并濃縮成稠膏，干燥，得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物9. Sg。經(jīng)高效液相檢測(cè)，其中牡荊素鼠李糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為48. 6%,牡荊素葡萄糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為23. 5%。
實(shí)施例3取市售山楂葉水提取物(經(jīng)高效液相檢測(cè)，其中牡荊素鼠李糖苷含量I. 6%，牡荊素葡萄糖苷含量O. 7%) 200g，溶于2000ml水，過(guò)濾，制成澄清的山楂葉粗提取物的水溶液，上AB-8 大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，先用10倍量柱體積的水洗除雜質(zhì)。配制混合溶劑，將正丙醇和乙醇按照體積比I :1混合。用5%混合溶劑的水溶液10倍柱體積、30%混合溶劑的水溶液5倍量柱體積依次洗脫雜質(zhì)。繼以含5g/L碳酸氫鈉的20%混合溶劑的水溶液洗脫目標(biāo)成分,洗脫劑用量為8倍量柱體積，收集堿性洗脫液。
用鹽酸調(diào)節(jié)洗脫液的pH為7，回收正丙醇和乙醇，得到體積為2000ml無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液。
將無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液上AB-8大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，用水洗至無(wú)氯化鈉流出，再用無(wú)水乙醇解吸完全，收集洗脫液，回收乙醇至稠浸膏，干燥，得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物6. 9g。經(jīng)高效液相檢測(cè),其中牡荊素鼠李糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為42. 9%,牡荊素葡萄糖苷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為含量18. 6%。
實(shí)施例4取市售山楂葉醇提取物(經(jīng)高效液相檢測(cè)，其中牡荊素鼠李糖苷含量3. 7%，牡荊素葡萄糖苷含量I. 5%) 200g，溶于3000ml水，過(guò)濾，制成澄清的山楂葉粗提取物的水溶液，上聚酰胺柱吸附，先用10倍量柱體積的水洗除雜質(zhì)，再用10倍柱體積10%甲醇水溶液、5倍量柱體積20%甲醇水溶液洗脫雜質(zhì)。繼以含50g/L碳酸氫鉀的10%甲醇水溶液洗脫目標(biāo)成分，洗脫劑用量為10倍量柱體積，收集洗脫液。
將收集的洗脫液，用鹽酸調(diào)節(jié)pH為7. 5，回收甲醇，得到2000ml無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液。
將無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液，上聚酰胺柱吸附，用水洗至無(wú)氯化鉀流出，再用80%的甲醇水溶液解吸，收集洗脫液，回收甲醇并濃縮至稠浸膏，干燥，得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物12. Sg。經(jīng)高效液相檢測(cè)，提取物中牡荊素鼠李糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 52. 2%，牡荊素葡萄糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20. 8%。
實(shí)施例5取市售山楂葉水提取物(經(jīng)高效液相檢測(cè),其中牡荊素鼠李糖苷含量1. 6 %,牡荊素葡萄糖苷含量O. 7%) 200g，溶于2000ml水，過(guò)濾，制成澄清的山楂葉粗提取物的水溶液，上 HPD-100大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，先用10倍量柱體積的水洗除雜質(zhì)，再用10%、20%、30%的丙酮水溶液各5倍量柱體積依次洗脫雜質(zhì)，繼以含150g/L碳酸氫鉀的5%丙酮水溶液洗脫目標(biāo)組分，洗脫劑用量為12倍量柱體積，收集堿性洗脫液。
將收集的洗脫液用醋酸調(diào)節(jié)pH=6，合并調(diào)節(jié)pH值后的洗脫液，回收丙酮，濃縮得到2000ml無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液。
將無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液上HPD-100大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，用水洗至無(wú)鉀鹽流出， 再用60%的丙酮水溶液解吸至流出液無(wú)色，收集洗脫液，回收丙酮至稠浸膏，干燥，得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物5. 5g。經(jīng)高效液相檢測(cè),提取物中牡荊素鼠李糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為47. 7%，牡荊素葡萄糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為20. 5%。
實(shí)施例6取市售山楂葉醇提取物(經(jīng)高效液相檢測(cè)，其中牡荊素鼠李糖苷含量3. 7%，牡荊素葡萄糖苷含量I. 5%) 200g，溶于3000ml水，過(guò)濾，制成澄清的山楂葉粗提取物的水溶液，上X_5 大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，先用10倍量柱體積的水洗除雜質(zhì)，再用5%異丙醇水溶液10倍柱體積、20%異丙醇水溶液5倍量柱體積洗脫雜質(zhì)。繼以含40g/L碳酸氫鈉的8%異丙醇水溶液洗脫目標(biāo)組分，洗脫劑用量為12倍量柱體積，收集堿性洗脫液。
將收集的堿性洗脫液用磷酸調(diào)節(jié)洗脫液pH=7. 5，回收異丙醇，濃縮得2000ml無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液。
將無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液，上聚酰胺柱吸附，用水洗脫至無(wú)鈉鹽流出，再用60%異丙醇水溶液解吸完全，收集洗脫液，回收異丙醇至稠浸膏，干燥，得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物14. 9g。經(jīng)高效液相檢測(cè)，提取物中牡荊素鼠李糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù) 43. 9%，牡荊素葡萄糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)17. 4%。
實(shí)施例7取市售山楂葉總黃酮提取物(經(jīng)高效液相檢測(cè)，其中牡荊素鼠李糖苷含量9. 2%，牡荊素葡萄糖苷含量5. 4%) 200g，溶于5000ml水，過(guò)濾，制成澄清的山楂葉粗提取物的水溶液，上聚酰胺柱吸附，先用10倍量柱體積的水洗除雜質(zhì),再用10%乙腈水溶液10倍柱體積、20%乙腈水溶液5倍量柱體積洗脫雜質(zhì)，繼以含20g/L碳酸氫鈉的10%乙腈水溶液洗脫目標(biāo)組分， 洗脫劑用量為10倍量柱體積，收集堿性洗脫液。
將收集的洗脫液用鹽酸調(diào)節(jié)pH=7，回收乙腈并濃縮至1000ml，得到無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液。
將無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液用異丁醇萃取2次，每次萃取過(guò)程中異丁醇的用量為 1500ml，合并異丁醇層并回收溶劑至稠浸膏，干燥，得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物31. 6g。經(jīng)高效液相檢測(cè)，提取物中牡荊素鼠李糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)51. 3%，牡荊素葡萄糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)29. 4%。
實(shí)施例8取市售山楂葉水提取物(經(jīng)高效液相檢測(cè),其中牡荊素鼠李糖苷含量1. 6 %,牡荊素葡萄糖苷含量O. 7%) 200g，溶于2000ml水，過(guò)濾，制成澄清的山楂葉粗提取物的水溶液，上 HPD-400大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，先用10倍量柱體積的水洗除雜質(zhì)。將甲醇、乙醇和異丙醇按照體積比I ;1 :1混合配制混合溶劑。用水洗脫后，再用5%混合溶劑水溶液10倍柱體積、 25%混合溶劑水溶液5倍量柱體積洗脫雜質(zhì)，繼以含30g/L碳酸氫鉀的10%混合溶劑水溶液洗脫目標(biāo)組分，洗脫劑用量為10倍量柱體積，收集堿性洗脫液。
將收集的堿性洗脫液用鹽酸調(diào)節(jié)pH=7，除去溶劑并濃縮至2000ml，獲得無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液。
將無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液，上聚酰胺柱吸附，用水洗至無(wú)氯化鉀流出，再用80%混合溶劑水溶液解吸完全，收集洗脫液，回收混合溶劑并濃縮成稠浸膏，干燥，得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物7. 6g。經(jīng)高效液相檢測(cè)，提取物中牡荊素鼠李糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)38. 8%，牡荊素葡萄糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)16. 1%。
實(shí)施例9取市售山楂葉總黃酮提取物(經(jīng)高效液相檢測(cè)，其中牡荊素鼠李糖苷含量9. 2%，牡荊素葡萄糖苷含量5. 4%) 200g，溶于5000ml水，過(guò)濾，制成澄清的山楂葉粗提取物的水溶液，上 AB-8大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，先用10倍量柱體積的水洗除雜質(zhì)，再用5%四氫呋喃水溶液10 倍柱體積、20%四氫呋喃水溶液5倍量柱體積洗脫雜質(zhì)。繼以含10g/L碳酸氫鈉的3%、5%、 10%四氫呋喃水溶液依次洗脫目標(biāo)組分,洗脫劑用量各為5倍量柱體積，收集堿性洗脫液。
將收集的洗脫液用鹽酸調(diào)節(jié)pH=7，回收四氫呋喃并濃縮至1000ml，獲得無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液。
將無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液用正丁醇萃取2次，每次正丁醇的用量為2000ml，回收正丁醇層、除去正丁醇至稠浸膏，干燥，得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物 32. 0g。經(jīng)高效液相檢測(cè)，提取物中牡荊素鼠李糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)49. 6%，牡荊素葡萄糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù) 28. 8%ο實(shí)施例10取市售山楂葉總黃酮提取物(經(jīng)高效液相檢測(cè)，其中牡荊素鼠李糖苷含量11. 2%，牡荊素葡萄糖苷含量5. 8 %) 100g，溶于3000ml水，過(guò)濾，制成澄清的山楂葉粗提取物的水溶液， 上DlOl大孔吸附樹(shù)脂柱吸附，先用10倍量柱體積的水洗除雜質(zhì)，再用5%乙醇水溶液10倍柱體積、25%乙醇水溶液5倍量柱體積洗脫雜質(zhì)。繼以含20g/L碳酸氫鉀的15%乙醇水溶液洗脫目標(biāo)組分，洗脫劑用量為10倍量柱體積，收集堿性的洗脫液。
將收集的洗脫液用鹽酸調(diào)節(jié)pH=7，回收乙醇并濃縮至1000ml，獲得無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液。
將無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液，用正丁醇萃取3次，每次萃取過(guò)程中正丁醇的用量為 1000ml，合并正丁醇層，除去有機(jī)溶劑得到稠浸膏，干燥，得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物18. 6g。經(jīng)高效液相檢測(cè)，提取物中牡荊素鼠李糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)52. 3%，牡荊素葡萄糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)26. 9%。
實(shí)施例11取實(shí)施例7制備的富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷提取物20g，其中牡荊素鼠李糖苷含量51.3%，牡荊素葡萄糖苷含量29.4%。用lkg20(T300目的硅膠分離，洗脫劑是體積比為100 : (I 20) : (O. 3 10)的醋酸乙酯、甲水醇和水混合溶劑，梯度洗脫。GF254硅膠薄層色譜檢測(cè)，展開(kāi)劑醋酸乙酯-甲醇-水(25 5 :3)，紫外光燈254nm下檢視。相同流份合并，濃縮，析晶，乙醇重結(jié)晶，得牡荊素鼠李糖苷3. 5g，純度95. 6%。牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷交叉混合組分再用600g20(T300目的硅膠按上述條件再分離，又獲得牡荊素鼠李糖苷I. 6g，純度96. 9%，牡荊素葡萄糖苷I. 9g，純度95. 3%。
相對(duì)比，取市售山楂葉總黃酮提取物(經(jīng)高效液相檢測(cè)，其中牡荊素鼠李糖苷含量11.2%，牡荊素葡萄糖苷含量5.8%) 20g，用lkg20(T300目硅膠，同上述色譜條件分離，第一次未分離出牡荊素鼠李糖苷或牡荊素葡萄糖苷純品，僅可達(dá)到初步分離除雜，獲得牡荊素鼠李糖苷或牡荊素葡萄糖苷混合物，且仍含有較多雜質(zhì)，將所得的牡荊素鼠李糖苷或牡荊素葡萄糖苷混合物再用lkg20(T300目硅膠，同上述色譜條件再分離一次，僅獲得220mg牡荊素鼠李糖苷，純度94. 4%，未分離獲得牡荊素葡萄糖苷純品。
實(shí)施例12取實(shí)施例10制備的富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的山楂葉提取物10g，其中牡荊素鼠李糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)為52. 3%，牡荊素葡萄糖苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)26. 9%，加入200ml濃度為5% 的鹽酸溶解，80°C水解2小時(shí)，析出黃色沉淀，濾出沉淀，水洗至洗出液呈中性，用乙醇加熱溶解后結(jié)晶并重結(jié)晶,得牡荊素3. 2g,純度為99. 2%。
權(quán)利要求
1.制備富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷提取物的方法，其中牡荊素鼠李糖苷的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為30% 55%，牡荊素葡萄糖苷的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為10% 35%，該制備方法包括以下步驟 a.將山楂葉粗提取物的水溶液，過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱或聚酰胺柱，首先用水洗脫雜質(zhì)，然后用溶劑A洗脫雜質(zhì)，最后用含有碳酸氫鈉或碳酸氫鉀的溶劑A洗脫目標(biāo)成分并收集洗脫液；所述溶劑A為質(zhì)量百分比濃度為3% 30%的親水性有機(jī)溶劑的水溶液； b.將步驟a收集的洗脫液用酸調(diào)節(jié)pH至6 7.5，除去親水性有機(jī)溶劑，獲得無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液； C、將步驟b所述無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液用正丁醇或異丁醇萃取目標(biāo)成分，分取正丁醇或異丁醇層，回收溶劑，干燥后即得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物；或者將步驟b所述無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱或聚酰胺柱，用水洗脫鹽，然后用溶劑B洗脫目標(biāo)成分并收集洗脫液，回收洗脫液，干燥后即得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物；所述溶劑B中親水性有機(jī)溶劑質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為30 100%，水的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)為O 70%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于所述山楂葉粗提取物為山楂葉水提取溶液、水提取濕浸膏、水提取干浸膏、醇提取濕浸膏或醇提取干浸膏；或它們進(jìn)一步經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂柱或聚酰胺柱純化后的總黃酮濕浸膏或總黃酮干浸膏。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述親水性有機(jī)溶劑為乙醇、甲醇、正丙醇、異丙醇、丙酮、乙腈、四氫呋喃中的一種或兩種以上的混合溶劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于步驟a中所述含有碳酸氫鈉的溶劑A中碳酸氫鈉的濃度為2 80g/L，所述含有碳酸氫鉀的溶劑A中碳酸氫鉀的濃度為2 250 g/L0
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述大孔吸附樹(shù)脂為非極性或弱極性的樹(shù)脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于所述大孔吸附樹(shù)脂的型號(hào)為D101、AB-8、HPD-100、HPD-400 和 X-5。
7.權(quán)利要求1、2、3、4、5或6所得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物在制備藥物組合物、牡荊素鼠李糖苷單體、牡荊素葡萄糖苷單體或牡荊素中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明提供制備富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷提取物的方法，涉及中草藥提取領(lǐng)域。該方法包括如下步驟將山楂葉粗提取物的水溶液，過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱或聚酰胺柱，用水洗、溶劑洗、含碳酸氫鈉或碳酸氫鉀的溶劑A洗脫目標(biāo)成分并收集洗脫液；將洗脫液調(diào)節(jié)pH至6～7.5，除去有機(jī)溶劑，獲得無(wú)有機(jī)溶劑的洗脫液，用正丁醇或異丁醇萃取目標(biāo)成分，回收溶劑，干燥；或者過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱或聚酰胺柱，用水洗脫鹽，然后用溶劑B洗脫目標(biāo)成分并收集洗脫液，回收洗脫液，干燥后即得富含牡荊素鼠李糖苷和牡荊素葡萄糖苷的提取物。采用上述方法得到的提取物中牡荊素鼠李糖苷為30%～55%，牡荊素葡萄糖苷為10%～35%。
文檔編號(hào)A61K31/7048GK102920727SQ20121044613
公開(kāi)日2013年2月13日 申請(qǐng)日期2012年11月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月9日
發(fā)明者石榮火, 陳文星, 嚴(yán)燕青, 葉華 申請(qǐng)人:蘇州衷中醫(yī)藥科技有限公司