專利名稱：23-羥基白樺酸在制備治療或預(yù)防艾滋病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及23-羥基白樺酸在制備治療或預(yù)防艾滋病藥物中的用途。
背景技術(shù)：
已有文獻(xiàn)報道，白樺酸可選擇性地殺滅人黑色素瘤細(xì)胞[Nature Medicine, 1995; 1 (10) : 1645-1651];白樺酸及某些衍生物的抗癌活性已經(jīng) 通過用皮下植入小鼠肉瘤180細(xì)胞的裸鼠(JP 87， 301， 580)、其體外抑制 P338淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞的生長[PlantaMedica， 1988; 511-513]，特別 是通過抑制鳥氨酸脫羧酶發(fā)生作用(W0 95/04526)等得以證明。中國專利
(申請?zhí)枮?9813476.0)公開了新的白樺酸衍生物(對C-2， C-3， C_17， C-20 和/或C-29位進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾)對腫瘤細(xì)胞的抑制作用及其在治療臨床癌癥中 的應(yīng)用。Lee等(WO 95/04526)公開了白樺酸和二氫白樺酸?；苌锞哂?明顯的抗HIV活性。在對C廠0H、 d7-C00H和C2。-外亞甲基進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾后， 發(fā)現(xiàn)白樺酸和二氫白樺酸衍生物對急性感染H9淋巴細(xì)胞具有抗HIV活性，其 EC5。值分別小于1.7Xl(T5uM。
23-羥基白樺酸為來源于中藥白頭翁(Pulsatilla chinensis)中的五 環(huán)三萜類化合物，是中藥白頭翁的特征性成分，文獻(xiàn)[化學(xué)學(xué)報，1983; 41
(8): 739-745]中已經(jīng)公開了該化合物的結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)式為
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分子式為(:3晶804，類白色粉狀物，分子量472，易溶于氯仿、乙酸乙酯、 乙醇等有機(jī)溶劑。
本研究小組以前曾報道了23-羥基白樺酸體外和體內(nèi)抗黑色素瘤作用 [中國腫瘤臨床與康復(fù)，2000; 7(1): 5-7]，并對人白血病細(xì)胞K-562和HL-60、 鱗癌HeLa細(xì)胞[Planta Medica， 2002:68:183-186; Life Science, 2002 ; 72:1-9]及對人胃癌細(xì)胞SGC-7901、人卵巢癌細(xì)胞Vo[東南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué) 報)，2001; 20 (3): 141-144]具有明顯的抑制作用。但尚未見報道對其它 腫瘤細(xì)胞及愛滋病病毒的抑制活性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供23-羥基白樺酸的新用途，即23-羥基白樺酸在
制備治療或預(yù)防艾滋病藥物中的應(yīng)用。
所述治療或預(yù)防艾滋病的藥物是以23-羥基白樺酸作為活性成分的藥物
組合物。
本發(fā)明23-羥基白樺酸可作為活性成分與藥學(xué)上可接受的賦型劑一起用 于制備藥物組合物，該藥物組合物可以采用本領(lǐng)域的常規(guī)方法制備成各種劑 型，如膠囊、丸劑、片劑、口服液、顆粒劑、酊劑等口服給藥的劑型和注射 液等口服以外給藥劑型，如針劑等。根據(jù)劑型的不同，該藥物組合物使用的 賦型劑也不同，常用賦型劑包括稀釋劑、濕潤劑、潤滑劑、填充劑、防腐劑 等。其中稀釋劑為乳糖、淀粉、糊精、微晶纖維素、微粉硅膠等，濕潤劑為 水和50 85%不同濃度的乙醇。含有本發(fā)明23-羥基白樺酸的藥物組合物的 優(yōu)選劑型是口服劑，最好為膠囊。給藥劑量為20 400mg/人/次，每天1 3 次。
本發(fā)明涉及的23-羥基白樺酸是這樣得到的將白頭翁根粗粉用15 95
%的乙醇滲漉或回流提取，過濾，濾液回收至無醇味，然后再加水稀釋，過 濾，濾液加入鹽酸或硫酸調(diào)至pH1 3，加熱回流10分鐘 2小時，得沉淀物， 放冷，抽濾或過濾，水洗固體物至中型，低溫烘干，得粗品。粗品用乙酸乙
酯等有機(jī)溶劑進(jìn)行索氏提取，回收提取液至適量，放置，得類白色粉狀的23-
羥基白樺酸。
為了驗證本發(fā)明的有益效果，發(fā)明人作了一系列實(shí)驗 動物急性毒性試驗
(1) 口服給藥
健康雄性小鼠，體重18 25克，用23-羥基白樺酸水溶液(混懸)灌胃 5.0g/kg，連續(xù)一周，未見小鼠死亡。
(2) 注射給藥
健康雄性小鼠，體重18 25克，用23-羥基白樺酸水溶液進(jìn)行腹腔注射， 連續(xù)一周，觀察動物死亡情況。23-羥基白樺酸的LD50值為2. 13±0.65g/kg。 2、 23-羥基白樺酸對HIV病毒的抑制作用
將H9T淋巴細(xì)胞株在含有10X小牛血清的培養(yǎng)基中，在5%0)2、 37。C的 條件下連續(xù)培養(yǎng)。試驗樣品溶解于二甲亞砜中，配制成200、40、8和1. 6 Pg/ml 的不同濃度。取部分H9T淋巴細(xì)胞用愛滋病毒(HIV-1)進(jìn)行感染，達(dá)到104 感染單位/ml.另取等量的H9T淋巴細(xì)胞加入等量的培養(yǎng)基，測定細(xì)胞毒活性 (IC5。)。然后置于37'C和5^C0沖培養(yǎng)4小時，取出，分別洗滌3次，分別加 入24孔的平板上，加入不同濃度的試驗液，陰性對照組加入等量的培養(yǎng)液， 以AZT作陽性對照。然后把平板置于37匸和5%(]02中培養(yǎng)4天。收集去除細(xì)胞 后的上清夜作P24抗原檢測，通過測定HIV的殼蛋白的數(shù)量直接測定HIV的存 在，計算ECs。值。經(jīng)上述方法測定，23-羥基白樺酸的IC5。值為152^g/ml， EC5。 值為2.24 Pg/ml，治療指數(shù)TL (IC5。/EC5。)為67. 8。
從以上結(jié)果，可以得出本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于
(1) 、本發(fā)明對已知化合物23-羥基白樺酸發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓 了一個新的應(yīng)用領(lǐng)域。
(2) 、本發(fā)明的23-羥基白樺酸安全無毒，藥理作用強(qiáng)，預(yù)示著良好的
藥用前景。
(3)、本發(fā)明的物質(zhì)原料中藥白頭翁資源豐富、價廉，制備工藝簡單。 下面將描述本發(fā)明的實(shí)施例，但本發(fā)明的內(nèi)容完全部局限于此。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例l:稱取白頭翁根干燥粗粉1.0kg，用3000ml的15X乙醇滲漉，合 并乙醇滲漉液，減壓回收至無醇味，過濾，濾液用鹽酸調(diào)至pH2，加熱30分 鐘，得沉淀物，放冷，過濾，水洗，干燥，得粗品。粗品用乙酸乙酯索氏回 流，回流液濃縮至適量，放置，抽濾，得23-羥基白樺酸38.2g。
實(shí)施例2:稱取白頭翁根干燥粗粉1.0kg，用3000ml的60X乙醇滲漉，合 并乙醇滲漉液，減壓回收至無醇味，過濾，濾液用鹽酸調(diào)至pH2，加熱30分 鐘，得沉淀物，放冷，過濾，水洗，干燥，得粗品。粗品用乙酸乙酯索氏回 流，回流液濃縮至適量，放置，抽濾，得23-羥基白樺酸51.0g。
實(shí)施例3:稱取白頭翁根干燥粗粉1.0kg，用3000ml的95X乙醇滲漉，合 并提取液，減壓回收至無醇味，過濾，濾液用鹽酸調(diào)至pH2，加熱30分鐘， 得沉淀物，放冷，過濾，水洗，干燥，得粗品。粗品用乙酸乙酯索氏回流， 回流液濃縮至適量，放置，抽濾，得23-羥基白樺酸45.6g。
實(shí)施例4:取本發(fā)明的23-羥基白樺酸20mg和微粉硅膠280mg，充分混合
均勻，過篩，加入適量的硬脂酸鎂，混勻，用干法造粒機(jī)制粒，過篩，篩取 40-80目之間的顆粒，裝入膠囊，每粒裝0.3g。
實(shí)施例5:按照實(shí)施例4所述方法制備膠囊，不同的是使用400mg本發(fā)明 的23-羥基白樺酸、100mg微粉硅膠和適量的硬脂酸鎂，每粒膠囊裝0.5g。
實(shí)施例6:按本技術(shù)領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法制備23-羥基白樺酸的片 劑，其中所述片劑按實(shí)際需要制成含20-200mg的23-羥基白樺酸。取本發(fā)明 的23-羥基白樺酸150g、微粉硅膠420g、無水乳糖380g、氧化硅30g，混合30 分鐘后，再篩入200g硬脂酸鎂，繼續(xù)混勻，最后用12/32英寸標(biāo)準(zhǔn)凹沖壓成 片。
權(quán)利要求
1、23-羥基白樺酸在制備治療或預(yù)防艾滋病藥物中的應(yīng)用。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述治療或預(yù)防艾滋病的藥物是以23-羥基白樺酸作為活性成分的藥物組合物。
3、 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于所述23-羥基白樺酸作 為活性成分與藥學(xué)上可接受的賦型劑一起用于制備所述藥物組合物，該藥物 組合物采用本領(lǐng)域的常規(guī)方法制備成口服給藥的劑型或口服以外給藥劑型。
4、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述賦型劑包括稀釋劑、濕潤劑、潤滑劑、填充劑及防腐劑。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述稀釋劑為乳糖、淀粉、糊精、微晶纖維素或微粉硅膠，濕潤劑為水或體積濃度為50 85%的 乙醇。
6、 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于該藥物組合物制成膠囊 或片劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了23-羥基白樺酸的新用途，即23-羥基白樺酸在制備治療或預(yù)防艾滋病藥物中的應(yīng)用。所述治療或預(yù)防艾滋病的藥物是以23-羥基白樺酸作為活性成分的藥物組合物。23-羥基白樺酸安全無毒，藥理作用強(qiáng)，預(yù)示著良好的藥用前景，原料中藥白頭翁資源豐富、價廉，制備工藝簡單。
文檔編號A61K9/20GK101103987SQ200710130740
公開日2008年1月16日 申請日期2003年9月2日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月2日
發(fā)明者葉文才, 范春林, 趙守訓(xùn) 申請人:葉文才